呼吸道合胞病毒融合抑制活性单克隆抗体的鉴定及应用
作者：黄升海 史百芬 王明丽 张咏南 胡勇 毕克菊
单位：安徽医科大学微生物学教研室，合肥 230032
关键词：呼吸道合胞病毒(RSV)；单克隆抗体(McAb)；融合抑制试验；诊断
中国病毒学000106 摘 要：用杂交瘤技术制备了抗呼吸道合胞病毒(RSV-Long株)的单克隆抗体F3细胞株。经IFA及ELISA证明，F3株McAb对RSV抗原特异，具中和活性及融合抑制活性，其腹水中和效价和融合抑制效价分别为1∶128和1∶64。将F3株McAb与商售混合单抗试剂盒进行临床诊断比较，二者阳性符合率96.9%，阴性符合率100%。
分类号：R373.1 文献标识码：A
文章编号：1003-5125(2000)01-0034-05
, 百拇医药
Identification and Primary Application of Fusion-Inhibiting Active
Monoclonal Antibody of Respiratory Syncytial Virus
HUANG Sheng-hai, SHI Bai-fen, WANG Ming-li,ZHANG Yong-nan, HU Yong, BI Ke-ju
(Dept.of Microbiology, Anhui Medical University, Hefei 2300 32, China)
Abstract：Monoclonal antibody of F3 hybridoma cell strain against RSV specific antigen was prepared by hybridoma and tested by indirect immunofluor escence and ELISA. It has neutralizing and fusion-inhibiting activity. The neut ralizing titres and fusion-inhibiting titres of ascites of mice are 1∶128 and 1∶64 respectively. Clinical diagnosis by comparing McAb of F3 strain with fixed McAb of commerical kit show that the positive according rate are 96.9% and negative according rate are 100%. F3 hybridoma cell strain probably produces a monoclonal antibody against fusion-protein of RSV.
, 百拇医药
Key words：Respiratory syncytial virus; Monoclonal antibody; Fusion-inhibiting test; Clinical diagnosis▲
RSV是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染、特别是婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎的重要病 原[1]。目前对RSV感染尚无有效的防治措施，因此深入研究其结构与功能的关系 ，尤其是抗原性稳定的F蛋白(融合蛋白)的研究将更具实际意义。Beeler[2]和West[3]等分别探讨了各株F蛋白单克隆抗体(McAb)的不同生物学活性和结合位点之 间的关系，提出有些活性位点与三维结构相关，国内对此尚无报道，亦未见融合抑制试验。 本研究建立了一株抗RSV McAb，证明具融合抑制活性，用于检测RSV感染患儿鼻咽部抽吸样 本(NPA)的脱落细胞，初步结果证明与混合McAb效果相似，现报道如下。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 抗RSV McAb
用杂交瘤技术获得4株抗RSV McAb，选其中F3株进行3次连续克隆化及亚克隆培养，获得稳 定分泌抗RSV McAb细胞株。
1.2 病毒
RSV-Long株(A亚型)及R6武汉地方株(B亚型)均购自湖北省医学科学院病毒所，3株RSV分离株由本室自患儿咽拭子获得。
1.3 微量中和试验
将10倍系列稀释的F3株腹水分别与等量100TCID50RSV-Long株病毒悬液37℃作用1h，取上述病毒-抗体混悬液每孔0.2mL接种于Hep-2单层细胞中，每一稀释度做3孔，同时设立RSV-Long株及Hep-2细胞对照，24h后更换2%灭活牛血清的DMEM维持液。4d后病毒对照CPE达4+时记录结果。按Reed-Muench法计算中和效价。
, 百拇医药
1.4 融合抑制试验(微孔板法)
基本操作参照West[3]等的方法，将Hep-2细胞接种于40孔微孔培养板，长成单层后甩去营养液，用PBS洗二次。每孔接种100TCID50RSV-Long株病毒0.2mL,37℃1h，甩去上清，用PBS洗二次，然后加入2%灭活牛血清DMEM作2倍系列稀释的F3株腹水，每一稀释度均做复孔，并作相应的细胞和病毒对照。37℃36h后甩去上清，用10%醋酸-福尔马林固定细胞，再用0.1%结晶紫、20%甲醇染色[4]。两人同时观察结果，以细胞对照为1+，病毒对照为4+，合胞体产生2+的稀释度作为腹水的融合抑制效价。
1.5 F3株McAb的临床应用
将本室RSV分离阳性的3份患儿咽试子(NPS)抗原片保存于-20℃备用；另有9例RSV分离阴性NPS涂片(由省立医院儿科提供)；37例临床诊断RSV感染患儿NPA涂片(由蚌埠医学附院儿科潘家华主任惠赠)。以双盲法用F3株McAb和商售RSV混合McAb诊断试剂盒(购自北京解放军262医院)同时进行IFA检测，均做复片。以出现3个或3个以上荧光细胞判断为RSV感染阳性。比较二种试剂检测结果的符合率。
, 百拇医药
2 结果
2.1 F3株抗RSVMcAb的基本性状
经检测，F3株RSVMcAb为IgG1亚类。IFA及ELISA均证明其对RSV抗原(RSV-Long株、R6地方株、本室分离株)具有特异性，与麻疹病毒、腺病毒3型及7型抗原以及正常细胞均无反应。细胞培养上清及腹水效价ELISA分别为1∶16和1∶16384，IFA分别为1∶16和1∶10000。腹水中和效价为1∶128。
2.2 融合抑制试验
将2倍系列稀释的杂交瘤腹水分别加到已吸附RSV-Long株病毒的Hep-2单层细胞中，培养36h观察结果。Hep-2细胞对照为正常形态，排列紧密，偶见少数自然死亡细胞团，记为1+(图1a)；病毒对照孔细胞出现明显肿胀、变圆，排列稀疏，并有大片细胞融合之合胞体，记为4+(图1b)；1∶8～1∶32腹水各孔细胞与正常对照的细胞相比，见形态上稍有肿胀，并有变圆的细胞，排列也稍疏松，但未见细胞融合现象(图1c)；而1∶64腹水孔细胞无论从形态、肿胀程度、排列、合胞体形成来看均介于细胞对照与病毒对照之间，细胞病变强于1∶32腹水孔，而明显弱于病毒对照孔，但未见大片细胞融合，记为2+(图1d)。表明F3株腹水的融合抑制效价为1∶64，能有效地抑制已感染RSV细胞的融合，即受染细胞融合被抑制。重复实验3次结果一致。
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图1 F3株腹水的融合抑制试验
a)正常细胞对照；b)病毒对照；c)1∶32稀释的腹水；d)1∶64稀释的腹水。
Fig. 1 The detection of fusion-inhibiting with F3 strain ascites
a)control of normal cells; b)control of virus infective cells; c)1∶32 diluted a scites; d)1∶64 diluted ascites
2.3 临床诊断
F3株McAb与商售试剂盒同时检测49例临床标本，结果见表1。
, 百拇医药
表1 不同单抗检测临床标本的IFA阳性率
Table1 The detection of IFA positive rate of clinical specimens with dif ferent monoclonal antibodies 标本
Specimens
例数
Cases
IFA阳性率(%)(n)
IFA positive rate (%)(n)
F3株McAb
McAb of F3 strain
, 百拇医药
商售试剂盒
Kit in market
RSV分离(+)的NPS
3
100(3)
100(3)
NPS of positive isolated RSV
RSV分离(-)的NPS
9
22.2(2)
22.2(2)
NPS of negative isolated RSV
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临床诊断阳性的NPA
37
70(26)
73(27)
NPA of positive clinical diagnosis
商售RSV混合单抗试剂盒从49例临床标本中共检出32例阳性，F3株McAb检出31例阳性。商售试剂盒检出阴性的17例标本，F3株McAb检测亦均为阴性。阳性符合率96.9%，阴性符合率为100%。
3 讨论
RSV属副粘病毒科肺炎病毒属，其包膜上的F蛋白可引起RSV的融合病变，使受染细胞-细胞融合形成合胞体，也是重要的保护性抗原。国内尚未见RSV融合抑制试验的报道，国外报道亦少。我们制备了F3株McAb并摸索其融合抑制试验，证明F3株McAb有中和活性，融合抑制试验阳性，融合抑制效价高达1∶64。据报道抗G蛋白的McAb无中和病毒作用[5～7]，Walsh[8]报道一株抗G蛋白的McAb在补体存在情况下能中和病毒。本研究中F3株McAb在无补体存在下病毒中和效价为1∶128，且能有效地抑制已感染细胞的融合，我们认为该单抗为抗RSVF蛋白的McAb，原因为：①融合抑制是抗F抗体本身的作用。②F、G蛋白的空间位置很近，通过二硫键连接，抗F与F位点结合后，可能封闭了G蛋白的结合位点，使RSV不能吸附在邻近的细胞膜受体上，也不可能发生细胞融合，而是细胞融合抑制。RSVF蛋白的抗原性比较稳定，很少变异，而G蛋白则有较高的亚型特异性和高度的变异性，各株RSV的主要差异也存在于G蛋白上。F蛋白不易引起疫苗相关的免疫潜能病[9]，是有希望的疫苗候选成分，作为诊断试剂能广泛检出各株RSV，比抗其它多肽的McAb优越[10]。我们的临床标本检测结果亦证明这点，且能与RSV-Long株、R6地方株及不同分离株均起反应，亦证明F3株McAb为抗RSVF蛋白单抗。但我们进行了数次Western-blot试验，未能查出F3株McAb与相应结构蛋白的反应，可能与抗原纯化及SDS处理过程中破坏了构象依赖性的表位有关，有待进一步探讨。但在某些情况下用融合抑制活性加做其它试验鉴定McAb的性质有一定实用价值，而且简便。
, 百拇医药
从RSV被发现至今，人们一直在探索一种快速、敏感、特异的早期诊断方法。由于病毒分离、血清学方法、电镜及PCR技术等对RSV感染的诊断并非尽如人意，而McAb的应用为RSV早期诊断开辟了广阔的前景。学者们相继开展了McAb免疫荧光法、免疫酶法、放免法等多方面的研究，与传统多克隆抗体检测病毒抗原方法相比，McAb检测临床标本，特异性与敏感性均较高[5，11，12]。文献报道，在整个RSV感染过程中融合蛋白在鼻咽分泌物中都有很高的滴度，而糖蛋白等其它蛋白含量较低且很难检测到[13]；将McAb用于已知阳性鼻咽分泌物中RSV多肽的检测，亦发现仅抗融合蛋白的McAb能完全检出RSV，而抗其它多肽McAb则较不敏感[10]，因而认为作为诊断试剂，抗融合蛋白的McAb不可缺少。理论上讲，将几种蛋白单抗混合应用能提高诊断的敏感性，本株McAb为抗RSVF蛋白单抗，和商售试剂盒(混合单抗)比较，共检测49例临床标本，阳性符合率96.9%，阴性符合率100%，几乎与混合单抗检测结果没有差别。因此该株McAb有希望应用于临床标本诊断，且更加简便，制备工作量小。但尚待增加标本例数作进一步分析。■
, http://www.100md.com
基金项目：本课题为安徽省教委资助项目(95JL0079)
作者简介：黄升海，男，30岁，硕士，讲师，主要研究方向病毒学
参考文献：
[1]Selwyn BJ. The epidemiology of acute respiratory tract infection in young children: Comparison of findings from several developing countries[J ].J Infect Dis, 1990, 12:870～888
[2]Beeler JA, Coelingh KW. Neutralization epitopes of the Fglycoprotein of respiratory syncytial virus: Effect of mutation upon funsion function[J]. J V irol, 1989,63(7):2942～2950
, 百拇医药
[3]West WH, Lounsbach GR, Bourgeois C et al. Biological activity, binding site and affinity of monoclonal antibodies to the fusion protein of respira tory syncytial virus [J]. J Gen Virol, 1993,75(10):2813～2819
[4]Schinazi RF, Andere PH. D.Different in vitro effects of dual combinations of anti-herpes simplex virus compounds [J]. The America Journal of Medicine, 1982,73(IA):40～47
[5]Routledge EG, McQuillin J, Samson AcR et al. The development of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and their use in diagnosis by immunofluorescence [J]. J Med Virol, 1985,15:305～320
, http://www.100md.com
[6]Fernie BF, Cote PJ, Genin JL. Classification of hybridomas to respiratory syncytial virus glycoprotein [J]. Proc Sec Exp Biol Med, 1982,171:266～271
[7]Anderson LJ, Hierholzer JC, Stone YO et al. Identification of epitopes on respiratory syncytial virus proteins by competitive binding immunoassay [J ]. J Clin Microb, 1986,23(3):475～480
[8]Walsh EE, Hruska J. Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus protein: Identification of the fusion protein[J]. J Virol, 1983,47(1):171～177
, 百拇医药
[9]Srikiatkhachorn A, Braciale JJ. Virus-specific memory and effector T lym phocytes exhibit different cytokine responses to antigens during experimental murine respiratory syncytial virus infection[J]. J Virol, 1997,71(1):678～685
[10]Hendry RM, Godfrey E, Anderson. LJ et al. Quantification of r espiratory syncytial virus polypeptide in nasal secretions by monoclonal antibod ies[J].J Gen Virol, 1985,66:1705～1714
[11]Pothier P, Nicolas JC, Maur S et al. Monoclonal antibodies against respiratory syncytial virus and their use for rapid detection of virus in nasoph aryngeal secretions [J]. J Clin Microbiol, 1985, 21(2):286～287
, http://www.100md.com
[12]Kim HW, Wyatt RG, Fernie BF et al. Respiratory syncytial virus detection by immunofluorescence in nasal secretions with monoclonal antibodies agains tselected surface and internal proteins[J]. J Clin Microbiol, 1983,18:1399～1404
[13]顾方舟，曹逸云，董德祥等译.病毒、立克次体及衣原体疾病诊断技术[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993.
收稿日期：1999-02-01
修稿日期：1999-05-05, 百拇医药
单位：安徽医科大学微生物学教研室，合肥 230032
关键词：呼吸道合胞病毒(RSV)；单克隆抗体(McAb)；融合抑制试验；诊断
中国病毒学000106 摘 要：用杂交瘤技术制备了抗呼吸道合胞病毒(RSV-Long株)的单克隆抗体F3细胞株。经IFA及ELISA证明，F3株McAb对RSV抗原特异，具中和活性及融合抑制活性，其腹水中和效价和融合抑制效价分别为1∶128和1∶64。将F3株McAb与商售混合单抗试剂盒进行临床诊断比较，二者阳性符合率96.9%，阴性符合率100%。
分类号：R373.1 文献标识码：A
文章编号：1003-5125(2000)01-0034-05
, 百拇医药
Identification and Primary Application of Fusion-Inhibiting Active
Monoclonal Antibody of Respiratory Syncytial Virus
HUANG Sheng-hai, SHI Bai-fen, WANG Ming-li,ZHANG Yong-nan, HU Yong, BI Ke-ju
(Dept.of Microbiology, Anhui Medical University, Hefei 2300 32, China)
Abstract：Monoclonal antibody of F3 hybridoma cell strain against RSV specific antigen was prepared by hybridoma and tested by indirect immunofluor escence and ELISA. It has neutralizing and fusion-inhibiting activity. The neut ralizing titres and fusion-inhibiting titres of ascites of mice are 1∶128 and 1∶64 respectively. Clinical diagnosis by comparing McAb of F3 strain with fixed McAb of commerical kit show that the positive according rate are 96.9% and negative according rate are 100%. F3 hybridoma cell strain probably produces a monoclonal antibody against fusion-protein of RSV.
, 百拇医药
Key words：Respiratory syncytial virus; Monoclonal antibody; Fusion-inhibiting test; Clinical diagnosis▲
RSV是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染、特别是婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎的重要病 原[1]。目前对RSV感染尚无有效的防治措施，因此深入研究其结构与功能的关系 ，尤其是抗原性稳定的F蛋白(融合蛋白)的研究将更具实际意义。Beeler[2]和West[3]等分别探讨了各株F蛋白单克隆抗体(McAb)的不同生物学活性和结合位点之 间的关系，提出有些活性位点与三维结构相关，国内对此尚无报道，亦未见融合抑制试验。 本研究建立了一株抗RSV McAb，证明具融合抑制活性，用于检测RSV感染患儿鼻咽部抽吸样 本(NPA)的脱落细胞，初步结果证明与混合McAb效果相似，现报道如下。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 抗RSV McAb
用杂交瘤技术获得4株抗RSV McAb，选其中F3株进行3次连续克隆化及亚克隆培养，获得稳 定分泌抗RSV McAb细胞株。
1.2 病毒
RSV-Long株(A亚型)及R6武汉地方株(B亚型)均购自湖北省医学科学院病毒所，3株RSV分离株由本室自患儿咽拭子获得。
1.3 微量中和试验
将10倍系列稀释的F3株腹水分别与等量100TCID50RSV-Long株病毒悬液37℃作用1h，取上述病毒-抗体混悬液每孔0.2mL接种于Hep-2单层细胞中，每一稀释度做3孔，同时设立RSV-Long株及Hep-2细胞对照，24h后更换2%灭活牛血清的DMEM维持液。4d后病毒对照CPE达4+时记录结果。按Reed-Muench法计算中和效价。
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1.4 融合抑制试验(微孔板法)
基本操作参照West[3]等的方法，将Hep-2细胞接种于40孔微孔培养板，长成单层后甩去营养液，用PBS洗二次。每孔接种100TCID50RSV-Long株病毒0.2mL,37℃1h，甩去上清，用PBS洗二次，然后加入2%灭活牛血清DMEM作2倍系列稀释的F3株腹水，每一稀释度均做复孔，并作相应的细胞和病毒对照。37℃36h后甩去上清，用10%醋酸-福尔马林固定细胞，再用0.1%结晶紫、20%甲醇染色[4]。两人同时观察结果，以细胞对照为1+，病毒对照为4+，合胞体产生2+的稀释度作为腹水的融合抑制效价。
1.5 F3株McAb的临床应用
将本室RSV分离阳性的3份患儿咽试子(NPS)抗原片保存于-20℃备用；另有9例RSV分离阴性NPS涂片(由省立医院儿科提供)；37例临床诊断RSV感染患儿NPA涂片(由蚌埠医学附院儿科潘家华主任惠赠)。以双盲法用F3株McAb和商售RSV混合McAb诊断试剂盒(购自北京解放军262医院)同时进行IFA检测，均做复片。以出现3个或3个以上荧光细胞判断为RSV感染阳性。比较二种试剂检测结果的符合率。
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2 结果
2.1 F3株抗RSVMcAb的基本性状
经检测，F3株RSVMcAb为IgG1亚类。IFA及ELISA均证明其对RSV抗原(RSV-Long株、R6地方株、本室分离株)具有特异性，与麻疹病毒、腺病毒3型及7型抗原以及正常细胞均无反应。细胞培养上清及腹水效价ELISA分别为1∶16和1∶16384，IFA分别为1∶16和1∶10000。腹水中和效价为1∶128。
2.2 融合抑制试验
将2倍系列稀释的杂交瘤腹水分别加到已吸附RSV-Long株病毒的Hep-2单层细胞中，培养36h观察结果。Hep-2细胞对照为正常形态，排列紧密，偶见少数自然死亡细胞团，记为1+(图1a)；病毒对照孔细胞出现明显肿胀、变圆，排列稀疏，并有大片细胞融合之合胞体，记为4+(图1b)；1∶8～1∶32腹水各孔细胞与正常对照的细胞相比，见形态上稍有肿胀，并有变圆的细胞，排列也稍疏松，但未见细胞融合现象(图1c)；而1∶64腹水孔细胞无论从形态、肿胀程度、排列、合胞体形成来看均介于细胞对照与病毒对照之间，细胞病变强于1∶32腹水孔，而明显弱于病毒对照孔，但未见大片细胞融合，记为2+(图1d)。表明F3株腹水的融合抑制效价为1∶64，能有效地抑制已感染RSV细胞的融合，即受染细胞融合被抑制。重复实验3次结果一致。
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图1 F3株腹水的融合抑制试验
a)正常细胞对照；b)病毒对照；c)1∶32稀释的腹水；d)1∶64稀释的腹水。
Fig. 1 The detection of fusion-inhibiting with F3 strain ascites
a)control of normal cells; b)control of virus infective cells; c)1∶32 diluted a scites; d)1∶64 diluted ascites
2.3 临床诊断
F3株McAb与商售试剂盒同时检测49例临床标本，结果见表1。
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表1 不同单抗检测临床标本的IFA阳性率
Table1 The detection of IFA positive rate of clinical specimens with dif ferent monoclonal antibodies 标本
Specimens
例数
Cases
IFA阳性率(%)(n)
IFA positive rate (%)(n)
F3株McAb
McAb of F3 strain
, 百拇医药
商售试剂盒
Kit in market
RSV分离(+)的NPS
3
100(3)
100(3)
NPS of positive isolated RSV
RSV分离(-)的NPS
9
22.2(2)
22.2(2)
NPS of negative isolated RSV
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临床诊断阳性的NPA
37
70(26)
73(27)
NPA of positive clinical diagnosis
商售RSV混合单抗试剂盒从49例临床标本中共检出32例阳性，F3株McAb检出31例阳性。商售试剂盒检出阴性的17例标本，F3株McAb检测亦均为阴性。阳性符合率96.9%，阴性符合率为100%。
3 讨论
RSV属副粘病毒科肺炎病毒属，其包膜上的F蛋白可引起RSV的融合病变，使受染细胞-细胞融合形成合胞体，也是重要的保护性抗原。国内尚未见RSV融合抑制试验的报道，国外报道亦少。我们制备了F3株McAb并摸索其融合抑制试验，证明F3株McAb有中和活性，融合抑制试验阳性，融合抑制效价高达1∶64。据报道抗G蛋白的McAb无中和病毒作用[5～7]，Walsh[8]报道一株抗G蛋白的McAb在补体存在情况下能中和病毒。本研究中F3株McAb在无补体存在下病毒中和效价为1∶128，且能有效地抑制已感染细胞的融合，我们认为该单抗为抗RSVF蛋白的McAb，原因为：①融合抑制是抗F抗体本身的作用。②F、G蛋白的空间位置很近，通过二硫键连接，抗F与F位点结合后，可能封闭了G蛋白的结合位点，使RSV不能吸附在邻近的细胞膜受体上，也不可能发生细胞融合，而是细胞融合抑制。RSVF蛋白的抗原性比较稳定，很少变异，而G蛋白则有较高的亚型特异性和高度的变异性，各株RSV的主要差异也存在于G蛋白上。F蛋白不易引起疫苗相关的免疫潜能病[9]，是有希望的疫苗候选成分，作为诊断试剂能广泛检出各株RSV，比抗其它多肽的McAb优越[10]。我们的临床标本检测结果亦证明这点，且能与RSV-Long株、R6地方株及不同分离株均起反应，亦证明F3株McAb为抗RSVF蛋白单抗。但我们进行了数次Western-blot试验，未能查出F3株McAb与相应结构蛋白的反应，可能与抗原纯化及SDS处理过程中破坏了构象依赖性的表位有关，有待进一步探讨。但在某些情况下用融合抑制活性加做其它试验鉴定McAb的性质有一定实用价值，而且简便。
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从RSV被发现至今，人们一直在探索一种快速、敏感、特异的早期诊断方法。由于病毒分离、血清学方法、电镜及PCR技术等对RSV感染的诊断并非尽如人意，而McAb的应用为RSV早期诊断开辟了广阔的前景。学者们相继开展了McAb免疫荧光法、免疫酶法、放免法等多方面的研究，与传统多克隆抗体检测病毒抗原方法相比，McAb检测临床标本，特异性与敏感性均较高[5，11，12]。文献报道，在整个RSV感染过程中融合蛋白在鼻咽分泌物中都有很高的滴度，而糖蛋白等其它蛋白含量较低且很难检测到[13]；将McAb用于已知阳性鼻咽分泌物中RSV多肽的检测，亦发现仅抗融合蛋白的McAb能完全检出RSV，而抗其它多肽McAb则较不敏感[10]，因而认为作为诊断试剂，抗融合蛋白的McAb不可缺少。理论上讲，将几种蛋白单抗混合应用能提高诊断的敏感性，本株McAb为抗RSVF蛋白单抗，和商售试剂盒(混合单抗)比较，共检测49例临床标本，阳性符合率96.9%，阴性符合率100%，几乎与混合单抗检测结果没有差别。因此该株McAb有希望应用于临床标本诊断，且更加简便，制备工作量小。但尚待增加标本例数作进一步分析。■
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基金项目：本课题为安徽省教委资助项目(95JL0079)
作者简介：黄升海，男，30岁，硕士，讲师，主要研究方向病毒学
参考文献：
[1]Selwyn BJ. The epidemiology of acute respiratory tract infection in young children: Comparison of findings from several developing countries[J ].J Infect Dis, 1990, 12:870～888
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[3]West WH, Lounsbach GR, Bourgeois C et al. Biological activity, binding site and affinity of monoclonal antibodies to the fusion protein of respira tory syncytial virus [J]. J Gen Virol, 1993,75(10):2813～2819
[4]Schinazi RF, Andere PH. D.Different in vitro effects of dual combinations of anti-herpes simplex virus compounds [J]. The America Journal of Medicine, 1982,73(IA):40～47
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[6]Fernie BF, Cote PJ, Genin JL. Classification of hybridomas to respiratory syncytial virus glycoprotein [J]. Proc Sec Exp Biol Med, 1982,171:266～271
[7]Anderson LJ, Hierholzer JC, Stone YO et al. Identification of epitopes on respiratory syncytial virus proteins by competitive binding immunoassay [J ]. J Clin Microb, 1986,23(3):475～480
[8]Walsh EE, Hruska J. Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus protein: Identification of the fusion protein[J]. J Virol, 1983,47(1):171～177
, 百拇医药
[9]Srikiatkhachorn A, Braciale JJ. Virus-specific memory and effector T lym phocytes exhibit different cytokine responses to antigens during experimental murine respiratory syncytial virus infection[J]. J Virol, 1997,71(1):678～685
[10]Hendry RM, Godfrey E, Anderson. LJ et al. Quantification of r espiratory syncytial virus polypeptide in nasal secretions by monoclonal antibod ies[J].J Gen Virol, 1985,66:1705～1714
[11]Pothier P, Nicolas JC, Maur S et al. Monoclonal antibodies against respiratory syncytial virus and their use for rapid detection of virus in nasoph aryngeal secretions [J]. J Clin Microbiol, 1985, 21(2):286～287
, http://www.100md.com
[12]Kim HW, Wyatt RG, Fernie BF et al. Respiratory syncytial virus detection by immunofluorescence in nasal secretions with monoclonal antibodies agains tselected surface and internal proteins[J]. J Clin Microbiol, 1983,18:1399～1404
[13]顾方舟，曹逸云，董德祥等译.病毒、立克次体及衣原体疾病诊断技术[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993.
收稿日期：1999-02-01
修稿日期：1999-05-05, 百拇医药