几种材料盖髓后牙髓中酶学成分变化的实验研究
作者：詹福良 阎丽华 张光和 薛 明
单位：中国医科大学口腔医学院，辽宁 沈阳 110002
关键词：盖髓剂；酶组织化学；纤维粘连蛋白；羟基磷灰石
牙体牙髓牙周病学杂志990208 摘要 目的：从牙髓中酶学成分的变化探讨盖髓材料的效果。方法：用活体猫牙做直接盖髓，不同时期取材做酶的组织细胞化学研究。结果：不同材料对酶的影响不同，纤维粘连蛋白(Fibronectin, FN)与羟基磷灰石(Hydroxylapatite, HAP)复合材料对三种酶活性均有促进作用。结论：从酶学成分变化角度，FN加HAP复合盖髓材料是较理想的盖髓剂。
中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0112-02
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999,9(2)：112]
, 百拇医药
The experimental study of enzyme histochemistry in
pulp after pulp capped with various materials
Zhan Fuliang, Yan Lihua, Zhang Guanghe et al
School of Stomatology, China Medical Universitry, Shenyang 110002
Abstract Aim：To study the effect of various capping agents on 3 enzymes. Methods: Cat teeth were used for direct pulp capping experiment. Enzyme histochemistry was observed. Results:Fibronectin compounded with hydro- xylapatite could promote the activity of all 3 enzymes. Conclusions: Fibronectin compounded with hydroxylapatite was a successful pulp capping agent.
, 百拇医药
Key words pulp capping agent； enzyme histochemistry； fibronectin； hydroxylapatite
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(2):112]
盖髓术是保存牙髓的重要方法。已有多种盖髓材料盖髓的实验研究和临床观察报道[1]，但一般限于组织病理学和疗效的观察。本研究目的是从牙髓中几种酶学成分变化角度，探讨盖髓材料的效果。
1 材料和方法
1.1 实验动物、主要材料和试剂
实验动物、材料和分组：参见薛明等研究[2]。
, 百拇医药
主要试剂：柠檬酸铅(Sigma，USA)，浓度5g/L；硝酸钴(沈阳试剂一厂)，浓度20g/L；β-甘油磷酸钠(德国Merck产品)，浓度30g/L；ATP-2Na盐(Sigma，USA)。
1.2 方法
盖髓操作方法同薛明等研究[2]。
牙髓中碱性磷酸酶(ALPase)和三磷酸腺苷酶(ATPase)的酶细胞化学检测参见Mayahara和Ogawa方法[3]。酸性磷酸酶(ACPase)的酶细胞化学检测参见钙钴法[4]。
2 结果
盖髓后1周，光镜下可见三种酶均呈阳性反应，不同盖髓材料间酶活性无明显差异(图1)。
, 百拇医药 盖髓后2周，氢氧化钙(CH)组ATPase和ACPase与1周时比较无明显变化，ALPase活性较1周时弱(图2)。纤维粘连蛋白(FN)组、羟基磷灰石(HAP)组、FN加CH组、FN加HAP组三种酶与1周时比较无明显变化。
图1 FN组，术后1周，ACPase阳性反应 ×400
图2 CH组，术后2周，ALPase活性比1周时弱×400
盖髓后5周，CH组的ALPase活性较2周时明显增高，ATPase和ACPase活性无明显改变(图3)。HAP组的ATPase活性比2周前增强，ALPase和ACPase活性无明显变化。FN组的ATPase和ACPase活性较强，ALPase活性无明显变化。FN+CH组的ATPase和ALPase活性较强，ACPase无明显变化。FN+HAP组的ATPase、ACPase和ALPase活性均有不同程度增高(图4)。
, 百拇医药
图3 CH组, 术后5周，ALPase活性比2周时增高×400
图4 FN+HAP组，术后5周，ATPase活性增高×400
3 讨论
盖髓术是保存活髓的重要方法，目前公认的盖髓材料是氢氧化钙制剂和羟基磷灰石。氢氧化钙盖髓剂主要是由于其高pH值使表层坏死同时促进ALPase的活性，进而促进修复性牙本质的形成[5]。羟基磷灰石具有良好的生物相容性，可为组织的修复提供支架，但本身并不能诱导成牙本质细胞的分化。学者们正致力于找到一种能综合不同盖髓材料优点的复合盖髓材料，并对其进行组织病理学研究和临床疗效观察[6]。
牙髓的酶细胞化学是牙髓生物学的重要组成部分，不同材料对牙髓的影响，均可从牙髓中酶学成分的变化反映出来，组织学上盖髓的成功应与组织中酶细胞化学的变化是一致的，我们的实验也说明了这一点。牙髓中有多种酶参与了牙本质的形成，ALPase、ACPase、ATPase是牙髓中最能体现细胞代谢活动的三种水解酶。ATPase在矿化开始时活性增加，可能与牙髓中Ca2+的运送有关[7]。ALPase可促进成牙本质细胞分化，进而影响组织的矿化。有研究表明，ACPase在成牙本质细胞开始产生牙本质时活性增强[8]。
, 百拇医药
FN是高分子糖蛋白，牙髓组织中富含这种物质，它参与了成牙本质细胞的分化，牙髓修复过程中有FN的表达，外源性FN做为盖髓材料可促进牙髓组织中硬组织的沉积[9～10]。不同的盖髓材料虽然在组织学上均表现为硬组织的形成，但对三种酶的影响是不同的。HAP盖髓5周后组织中ATPase活性增高，表明此时组织新陈代谢加快，修复能力增强；FN与CH复合制剂盖髓5周后ACPase无明显改变，可能是由于CH的高pH值抑制了该酶的活性。我们的实验表明：FN与HAP复合剂盖髓5周后三种酶活性均有不同程度增高，说明FN和HAP可起协同作用。从酶细胞化学角度，说明该复合制剂较理想，这与其它学者的组织学研究是一致的[6]。
牙髓组织的修复是多因素复杂的作用机制，只有综合考虑这些因素，运用多种手段评价材料对牙髓组织的影响，才能全面评价材料的应用效果，并筛选出较理想的盖髓材料。
参考文献
, 百拇医药
1 杨贵英. 评价活髓保存材料生物学效应的方法. 国外医学口腔医学分册，1998，25(3)：137
2 薛明，王贤福，詹福良. 纤维粘接蛋白盖髓效果的实验观察. 牙体牙髓牙周病学杂志，1997，7(4)：240
3 朴英杰. 组织细胞化学技术. 广州：中山大学出版社，1991. 134, 49
4 陈啸海 主编. 组织化学手册. 北京：人民卫生出版社，1982.136
5 Fisher FJ, McCabe JF. Calcium hydroxide base materials. Br dent J, 1978,144:341
6 汪平，史俊南，郝建军. 狗牙髓腔中植入纤维粘连蛋白复合羟磷灰石的实验研究. 牙体牙髓牙周病学杂志，1997，7(4)：243
, http://www.100md.com
7 Le Bell Y. Ca2+and Mg2+ activated ATP hydrolysis in human tooth pulp. J Dent Res, 1981,60:128
8 Larmas L, Larmas M. A histochemical study of various dehydrogenases in human tooth ontogeny. Arch Oral Biol, 1976,21:371
9 Seux D, Couble ML, Hartmann DL et al. Odontoblast likecyto differentiation of human pulp cell in vitro in the presence of calcium hydroxide containing cement. Arch Oral Biol, 1991,36:117
10 Tziafas D. Pangiotakopoulos N, Komnenou A. Immunolocalization of fibronectin during the early response of dog dental pulp to demineralize dentine or calcium hydroxide-containing cement. Arch Oral Biol, 1995,40:23
收稿日期：1998-9-25, 百拇医药
单位：中国医科大学口腔医学院，辽宁 沈阳 110002
关键词：盖髓剂；酶组织化学；纤维粘连蛋白；羟基磷灰石
牙体牙髓牙周病学杂志990208 摘要 目的：从牙髓中酶学成分的变化探讨盖髓材料的效果。方法：用活体猫牙做直接盖髓，不同时期取材做酶的组织细胞化学研究。结果：不同材料对酶的影响不同，纤维粘连蛋白(Fibronectin, FN)与羟基磷灰石(Hydroxylapatite, HAP)复合材料对三种酶活性均有促进作用。结论：从酶学成分变化角度，FN加HAP复合盖髓材料是较理想的盖髓剂。
中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0112-02
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999,9(2)：112]
, 百拇医药
The experimental study of enzyme histochemistry in
pulp after pulp capped with various materials
Zhan Fuliang, Yan Lihua, Zhang Guanghe et al
School of Stomatology, China Medical Universitry, Shenyang 110002
Abstract Aim：To study the effect of various capping agents on 3 enzymes. Methods: Cat teeth were used for direct pulp capping experiment. Enzyme histochemistry was observed. Results:Fibronectin compounded with hydro- xylapatite could promote the activity of all 3 enzymes. Conclusions: Fibronectin compounded with hydroxylapatite was a successful pulp capping agent.
, 百拇医药
Key words pulp capping agent； enzyme histochemistry； fibronectin； hydroxylapatite
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(2):112]
盖髓术是保存牙髓的重要方法。已有多种盖髓材料盖髓的实验研究和临床观察报道[1]，但一般限于组织病理学和疗效的观察。本研究目的是从牙髓中几种酶学成分变化角度，探讨盖髓材料的效果。
1 材料和方法
1.1 实验动物、主要材料和试剂
实验动物、材料和分组：参见薛明等研究[2]。
, 百拇医药
主要试剂：柠檬酸铅(Sigma，USA)，浓度5g/L；硝酸钴(沈阳试剂一厂)，浓度20g/L；β-甘油磷酸钠(德国Merck产品)，浓度30g/L；ATP-2Na盐(Sigma，USA)。
1.2 方法
盖髓操作方法同薛明等研究[2]。
牙髓中碱性磷酸酶(ALPase)和三磷酸腺苷酶(ATPase)的酶细胞化学检测参见Mayahara和Ogawa方法[3]。酸性磷酸酶(ACPase)的酶细胞化学检测参见钙钴法[4]。
2 结果
盖髓后1周，光镜下可见三种酶均呈阳性反应，不同盖髓材料间酶活性无明显差异(图1)。
, 百拇医药 盖髓后2周，氢氧化钙(CH)组ATPase和ACPase与1周时比较无明显变化，ALPase活性较1周时弱(图2)。纤维粘连蛋白(FN)组、羟基磷灰石(HAP)组、FN加CH组、FN加HAP组三种酶与1周时比较无明显变化。
图1 FN组，术后1周，ACPase阳性反应 ×400
图2 CH组，术后2周，ALPase活性比1周时弱×400
盖髓后5周，CH组的ALPase活性较2周时明显增高，ATPase和ACPase活性无明显改变(图3)。HAP组的ATPase活性比2周前增强，ALPase和ACPase活性无明显变化。FN组的ATPase和ACPase活性较强，ALPase活性无明显变化。FN+CH组的ATPase和ALPase活性较强，ACPase无明显变化。FN+HAP组的ATPase、ACPase和ALPase活性均有不同程度增高(图4)。
, 百拇医药
图3 CH组, 术后5周，ALPase活性比2周时增高×400
图4 FN+HAP组，术后5周，ATPase活性增高×400
3 讨论
盖髓术是保存活髓的重要方法，目前公认的盖髓材料是氢氧化钙制剂和羟基磷灰石。氢氧化钙盖髓剂主要是由于其高pH值使表层坏死同时促进ALPase的活性，进而促进修复性牙本质的形成[5]。羟基磷灰石具有良好的生物相容性，可为组织的修复提供支架，但本身并不能诱导成牙本质细胞的分化。学者们正致力于找到一种能综合不同盖髓材料优点的复合盖髓材料，并对其进行组织病理学研究和临床疗效观察[6]。
牙髓的酶细胞化学是牙髓生物学的重要组成部分，不同材料对牙髓的影响，均可从牙髓中酶学成分的变化反映出来，组织学上盖髓的成功应与组织中酶细胞化学的变化是一致的，我们的实验也说明了这一点。牙髓中有多种酶参与了牙本质的形成，ALPase、ACPase、ATPase是牙髓中最能体现细胞代谢活动的三种水解酶。ATPase在矿化开始时活性增加，可能与牙髓中Ca2+的运送有关[7]。ALPase可促进成牙本质细胞分化，进而影响组织的矿化。有研究表明，ACPase在成牙本质细胞开始产生牙本质时活性增强[8]。
, 百拇医药
FN是高分子糖蛋白，牙髓组织中富含这种物质，它参与了成牙本质细胞的分化，牙髓修复过程中有FN的表达，外源性FN做为盖髓材料可促进牙髓组织中硬组织的沉积[9～10]。不同的盖髓材料虽然在组织学上均表现为硬组织的形成，但对三种酶的影响是不同的。HAP盖髓5周后组织中ATPase活性增高，表明此时组织新陈代谢加快，修复能力增强；FN与CH复合制剂盖髓5周后ACPase无明显改变，可能是由于CH的高pH值抑制了该酶的活性。我们的实验表明：FN与HAP复合剂盖髓5周后三种酶活性均有不同程度增高，说明FN和HAP可起协同作用。从酶细胞化学角度，说明该复合制剂较理想，这与其它学者的组织学研究是一致的[6]。
牙髓组织的修复是多因素复杂的作用机制，只有综合考虑这些因素，运用多种手段评价材料对牙髓组织的影响，才能全面评价材料的应用效果，并筛选出较理想的盖髓材料。
参考文献
, 百拇医药
1 杨贵英. 评价活髓保存材料生物学效应的方法. 国外医学口腔医学分册，1998，25(3)：137
2 薛明，王贤福，詹福良. 纤维粘接蛋白盖髓效果的实验观察. 牙体牙髓牙周病学杂志，1997，7(4)：240
3 朴英杰. 组织细胞化学技术. 广州：中山大学出版社，1991. 134, 49
4 陈啸海 主编. 组织化学手册. 北京：人民卫生出版社，1982.136
5 Fisher FJ, McCabe JF. Calcium hydroxide base materials. Br dent J, 1978,144:341
6 汪平，史俊南，郝建军. 狗牙髓腔中植入纤维粘连蛋白复合羟磷灰石的实验研究. 牙体牙髓牙周病学杂志，1997，7(4)：243
, http://www.100md.com
7 Le Bell Y. Ca2+and Mg2+ activated ATP hydrolysis in human tooth pulp. J Dent Res, 1981,60:128
8 Larmas L, Larmas M. A histochemical study of various dehydrogenases in human tooth ontogeny. Arch Oral Biol, 1976,21:371
9 Seux D, Couble ML, Hartmann DL et al. Odontoblast likecyto differentiation of human pulp cell in vitro in the presence of calcium hydroxide containing cement. Arch Oral Biol, 1991,36:117
10 Tziafas D. Pangiotakopoulos N, Komnenou A. Immunolocalization of fibronectin during the early response of dog dental pulp to demineralize dentine or calcium hydroxide-containing cement. Arch Oral Biol, 1995,40:23
收稿日期：1998-9-25, 百拇医药