佛手多糖对环磷酰胺造模小鼠巨噬细胞的影响
作者：黄玲 邝枣园 张敏 李苑
单位：黄玲(广州中医药大学热带医学研究所，广州 510405)；邝枣园(广州中医药大学基础医学院，广州 510405)；张敏 李苑(广东省药物研究所，广州 510180)
关键词：佛手/药理学；多糖类/药理学；巨噬细胞/药物作用；白细胞介素6/免疫学；小鼠
广州中医药大学学报000115摘要：为研究佛手多糖的免疫调节作用，用环磷酰胺造成免疫低下小鼠动物模型，取小鼠巨噬细胞加脂多糖和不同浓度佛手多糖，测定巨噬细胞内外白细胞介素6(IL-6)的水平。IL-6的检测采用放射免疫法。结果：佛手多糖浓度在4g/L、2g/L时可提高巨噬细胞外低下的IL-6水平，对巨噬细胞内IL-6无影响。结论：佛手多糖可协同脂多糖增加巨噬细胞分泌IL-6。
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1007-3213(2000)01-0058-03
Effect of Fructus Citri Sarcodactylis Polysaccharide on IL-6 in Macrophages of Cyclophosphamide-Treated Mice
HUANG Lin
(Tropical Medicine Institute,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
KUANG Zaoyuan
(Preclinical Medicine School,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
, 百拇医药
ZHANG Min,LI Yuan
(Guangdong Institute of Materia Medica,Guangzhou 510180,China)
Abstract:To study the immunoregulatory action of Fructus Citri Sarcodactylis polysaccharide(FCSP),cyclophoshamide-treated mice were used as the immunosuppressive model,and the levels of IL-6 inside and outside the macrophages after added with lipopolysaccharide and FCSP were detected by radioimmunoassay.The results showed that FCSP(4mg/L,2mg/L)can significantly increase IL-6 outside the macrophage,but cannot affect IL-6 inside the macrophage.It is indicated that FCSP can increase the secretion of IL-6 in macrophages and may promote both humoral immunity and cellular immunity.
, http://www.100md.com
Key words:CITRUS SARCODACTYLIS/pharmacology；POLYSACCHARIDES/pharmacology;MACROPHAGES/drug effects;INTERLEUKIN-6/immunology；MICE
佛手为芸香科常绿小乔木或灌木植物佛手的干燥果实。主要功效为舒肝理气，和中化痰。药理实验显示其具有解痉、降压、平喘等作用[1]。我们先前的体内实验研究表明：佛手多糖对免疫抑制小鼠的体液免疫和细胞免疫都有明显的改善作用[2]。本研究观察了佛手多糖体外作用对环磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬细胞分泌细胞因子的影响。
1 实验材料
1.1 药物及试剂盒
佛手多糖(Fructus Citri Sarcodactylis Polysacharide,FCSP)为广佛手的水提取物，紫红色，结晶状，用完全培养液配成所需浓度；脂多糖：大肠杆菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS B026:B6),Sigma产品，批号：38F-4060；环磷酰胺(CY)，批号：971207，上海第二制药厂生产；左旋咪唑(Levamisole),批号：930630，完全培养液配成所需浓度，60℃加热，维持16h消毒；白细胞介素6(IL-6)药盒，解放军总医院提供，批号：9903。
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1.2 动物
NIH小鼠43只，雌、雄各半，18～22g，广东省医学实验动物中心提供。
1.3 仪器
BECKMAN DP5500型γ计数仪。
2 实验方法
2.1 分组、 造模及给药方法
取NIH小鼠43只，随机分为模型组，佛手多糖高、中、低剂量组，左旋咪唑 阳性对照组各8只，正常对照组7只。正常组灌胃蒸馏水0.5mL连续6d，其他各组均腹腔注射CY10mg/kg连续6d，造成免疫低下小鼠动物模型，第7天取各组小鼠腹腔巨噬细胞，调细胞浓度为2×109/L，佛手多糖高、中、低剂量组细胞分别加佛手多糖4g/L、2g/L、1g/L；模型组不给药。阳性对照组加左旋咪唑终浓度为2.5g/L。各组再加20ng/L LPS，培养48h，收集上清，则为细胞外液IL-6标本。每孔再加0.5mL完全培养液，冻融3次，收集培养液，则为细胞内IL-6标本。
, 百拇医药
2.2 IL-6测定
IL-6的测定采用放射免疫法。
3 结果
表1显示，模型组细胞内外液IL-6浓度均降低，佛手多糖高、中剂量组及阳性对照组均可使细胞外IL-6水平提高，但各组对细胞内IL-6浓度无影响。
表1 佛手多糖对巨噬细胞内外IL-6
浓度(ρ)的影响(
) 组 别
N/只
ρ细胞外/(μg.L-1)
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ρ细胞内/(μg.L-1)
佛手多糖(高剂量)
8
11.93±6.51*
2.09±0.81
佛手多糖(中剂量)
8
5.66±4.35*
1.71±0.41
佛手多糖(低剂量)
, http://www.100md.com
7#
2.39±1.55
1.53±0.23
阳性对照组
7#
10.35±3.08*
1.59±0.25
正常对照组
7
6.49±3.87
4.23±0.18
, http://www.100md.com 模型组
6#
1.60±0.12△
1.55±0.21△
△与正常组比较P<0.05；*与模型组比较P<0.05；#免疫低下小鼠造模过程中出现动物死亡
4 讨论
IL-6[3]原称B细胞刺激因子、B细胞分化因子等，主要由单核/巨噬细胞、T细胞、B细胞、成纤维细胞、内皮细胞等产生。它具有广泛的作用：可影响B细胞的增殖分化，是诱导B细胞分泌Ig的必需因子之一，直接影响成熟B细胞产生IgM、IgG、IgA；IL-6尚可促进植物血凝素(PHA)或刀豆球蛋白(ConA)激活的CD4+和CD8+T细胞增殖生长；IL-6还可影响粒细胞、巨噬细胞的分化过程，增强血细胞分化，促进其集落形成；此外，IL-6可直接或间接增强自然杀伤细胞(NK)及细胞毒性T细胞(CTL)的杀瘤活性。
, 百拇医药
大量药理和临床研究表明，多糖类化合物具有免疫调节作用，目前已从300多种天然产物中分离提取出多糖类化合物，其中以中药中提取的水溶性多糖成分作用最为重要，体内与体外实验均证明它们对体液免疫和细胞免疫的不同环节具有促进作用，而对正常细胞没有毒性，在抗肿瘤和病毒的临床治疗中显示出广阔的应用前景[4]。广佛手属理气类药物，是广东省四大南药之一，极易溶于水[5]，且临床运用广泛，具有一定的开发价值。我们先前的研究表明[2]：佛手多糖可明显提高环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，促进溶血素和溶血空斑的形成以及淋巴细胞转化，并明显提高血中T淋巴细胞比率。本研究证实佛手多糖体外实验可提高免疫低下小鼠巨噬细胞产生IL-6的水平，表明它对体液免疫与细胞免疫的促进作用可能与增强巨噬细胞分泌IL-6有关。多糖体外实验与体内实验的关系有待今后进一步研究。
本实验显示佛手多糖对细胞内IL-6未见变化。中药提取物对细胞内细胞因子无影响也有类似的报道[6]，其原因有待进一步探讨。
, http://www.100md.com
基金项目：广东省中医药管理局资助课题，编号97273
作者简介：黄玲，女，1963年出生，主治医师，硕士；
参考文献：
[1]江苏新医学院主编.中药大辞典(上册)[M].上海：上海人民出版社，1986.1141
[2]黄玲，张敏.佛手多糖对小鼠免疫功能的影响[J].河北中西医结合杂志，1999，8(6)：872
[3]毕爱华主编.医学免疫学[M].北京：人民军医出版社，1995.71
[4]田庚元，冯宇澄，林颖.植物多糖的研究进展[J].中国中药杂志，1995，520(7)：441
[5]黄玲.广佛手水溶性化学成分研究[J].时珍国医国药研究，1999，6：406
[6]章灵华，黄艺，钱玉昆，等.去氧萍蓬草碱在体外对免疫功能的影响[J].中国医学科学院学报，1995，17(5)：343
收稿日期：1999-06-01, http://www.100md.com
单位：黄玲(广州中医药大学热带医学研究所，广州 510405)；邝枣园(广州中医药大学基础医学院，广州 510405)；张敏 李苑(广东省药物研究所，广州 510180)
关键词：佛手/药理学；多糖类/药理学；巨噬细胞/药物作用；白细胞介素6/免疫学；小鼠
广州中医药大学学报000115摘要：为研究佛手多糖的免疫调节作用，用环磷酰胺造成免疫低下小鼠动物模型，取小鼠巨噬细胞加脂多糖和不同浓度佛手多糖，测定巨噬细胞内外白细胞介素6(IL-6)的水平。IL-6的检测采用放射免疫法。结果：佛手多糖浓度在4g/L、2g/L时可提高巨噬细胞外低下的IL-6水平，对巨噬细胞内IL-6无影响。结论：佛手多糖可协同脂多糖增加巨噬细胞分泌IL-6。
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1007-3213(2000)01-0058-03
Effect of Fructus Citri Sarcodactylis Polysaccharide on IL-6 in Macrophages of Cyclophosphamide-Treated Mice
HUANG Lin
(Tropical Medicine Institute,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
KUANG Zaoyuan
(Preclinical Medicine School,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
, 百拇医药
ZHANG Min,LI Yuan
(Guangdong Institute of Materia Medica,Guangzhou 510180,China)
Abstract:To study the immunoregulatory action of Fructus Citri Sarcodactylis polysaccharide(FCSP),cyclophoshamide-treated mice were used as the immunosuppressive model,and the levels of IL-6 inside and outside the macrophages after added with lipopolysaccharide and FCSP were detected by radioimmunoassay.The results showed that FCSP(4mg/L,2mg/L)can significantly increase IL-6 outside the macrophage,but cannot affect IL-6 inside the macrophage.It is indicated that FCSP can increase the secretion of IL-6 in macrophages and may promote both humoral immunity and cellular immunity.
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Key words:CITRUS SARCODACTYLIS/pharmacology；POLYSACCHARIDES/pharmacology;MACROPHAGES/drug effects;INTERLEUKIN-6/immunology；MICE
佛手为芸香科常绿小乔木或灌木植物佛手的干燥果实。主要功效为舒肝理气，和中化痰。药理实验显示其具有解痉、降压、平喘等作用[1]。我们先前的体内实验研究表明：佛手多糖对免疫抑制小鼠的体液免疫和细胞免疫都有明显的改善作用[2]。本研究观察了佛手多糖体外作用对环磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬细胞分泌细胞因子的影响。
1 实验材料
1.1 药物及试剂盒
佛手多糖(Fructus Citri Sarcodactylis Polysacharide,FCSP)为广佛手的水提取物，紫红色，结晶状，用完全培养液配成所需浓度；脂多糖：大肠杆菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS B026:B6),Sigma产品，批号：38F-4060；环磷酰胺(CY)，批号：971207，上海第二制药厂生产；左旋咪唑(Levamisole),批号：930630，完全培养液配成所需浓度，60℃加热，维持16h消毒；白细胞介素6(IL-6)药盒，解放军总医院提供，批号：9903。
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1.2 动物
NIH小鼠43只，雌、雄各半，18～22g，广东省医学实验动物中心提供。
1.3 仪器
BECKMAN DP5500型γ计数仪。
2 实验方法
2.1 分组、 造模及给药方法
取NIH小鼠43只，随机分为模型组，佛手多糖高、中、低剂量组，左旋咪唑 阳性对照组各8只，正常对照组7只。正常组灌胃蒸馏水0.5mL连续6d，其他各组均腹腔注射CY10mg/kg连续6d，造成免疫低下小鼠动物模型，第7天取各组小鼠腹腔巨噬细胞，调细胞浓度为2×109/L，佛手多糖高、中、低剂量组细胞分别加佛手多糖4g/L、2g/L、1g/L；模型组不给药。阳性对照组加左旋咪唑终浓度为2.5g/L。各组再加20ng/L LPS，培养48h，收集上清，则为细胞外液IL-6标本。每孔再加0.5mL完全培养液，冻融3次，收集培养液，则为细胞内IL-6标本。
, 百拇医药
2.2 IL-6测定
IL-6的测定采用放射免疫法。
3 结果
表1显示，模型组细胞内外液IL-6浓度均降低，佛手多糖高、中剂量组及阳性对照组均可使细胞外IL-6水平提高，但各组对细胞内IL-6浓度无影响。
表1 佛手多糖对巨噬细胞内外IL-6
浓度(ρ)的影响(
) 组 别N/只
ρ细胞外/(μg.L-1)
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ρ细胞内/(μg.L-1)
佛手多糖(高剂量)
8
11.93±6.51*
2.09±0.81
佛手多糖(中剂量)
8
5.66±4.35*
1.71±0.41
佛手多糖(低剂量)
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7#
2.39±1.55
1.53±0.23
阳性对照组
7#
10.35±3.08*
1.59±0.25
正常对照组
7
6.49±3.87
4.23±0.18
, http://www.100md.com 模型组
6#
1.60±0.12△
1.55±0.21△
△与正常组比较P<0.05；*与模型组比较P<0.05；#免疫低下小鼠造模过程中出现动物死亡
4 讨论
IL-6[3]原称B细胞刺激因子、B细胞分化因子等，主要由单核/巨噬细胞、T细胞、B细胞、成纤维细胞、内皮细胞等产生。它具有广泛的作用：可影响B细胞的增殖分化，是诱导B细胞分泌Ig的必需因子之一，直接影响成熟B细胞产生IgM、IgG、IgA；IL-6尚可促进植物血凝素(PHA)或刀豆球蛋白(ConA)激活的CD4+和CD8+T细胞增殖生长；IL-6还可影响粒细胞、巨噬细胞的分化过程，增强血细胞分化，促进其集落形成；此外，IL-6可直接或间接增强自然杀伤细胞(NK)及细胞毒性T细胞(CTL)的杀瘤活性。
, 百拇医药
大量药理和临床研究表明，多糖类化合物具有免疫调节作用，目前已从300多种天然产物中分离提取出多糖类化合物，其中以中药中提取的水溶性多糖成分作用最为重要，体内与体外实验均证明它们对体液免疫和细胞免疫的不同环节具有促进作用，而对正常细胞没有毒性，在抗肿瘤和病毒的临床治疗中显示出广阔的应用前景[4]。广佛手属理气类药物，是广东省四大南药之一，极易溶于水[5]，且临床运用广泛，具有一定的开发价值。我们先前的研究表明[2]：佛手多糖可明显提高环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，促进溶血素和溶血空斑的形成以及淋巴细胞转化，并明显提高血中T淋巴细胞比率。本研究证实佛手多糖体外实验可提高免疫低下小鼠巨噬细胞产生IL-6的水平，表明它对体液免疫与细胞免疫的促进作用可能与增强巨噬细胞分泌IL-6有关。多糖体外实验与体内实验的关系有待今后进一步研究。
本实验显示佛手多糖对细胞内IL-6未见变化。中药提取物对细胞内细胞因子无影响也有类似的报道[6]，其原因有待进一步探讨。
, http://www.100md.com
基金项目：广东省中医药管理局资助课题，编号97273
作者简介：黄玲，女，1963年出生，主治医师，硕士；
参考文献：
[1]江苏新医学院主编.中药大辞典(上册)[M].上海：上海人民出版社，1986.1141
[2]黄玲，张敏.佛手多糖对小鼠免疫功能的影响[J].河北中西医结合杂志，1999，8(6)：872
[3]毕爱华主编.医学免疫学[M].北京：人民军医出版社，1995.71
[4]田庚元，冯宇澄，林颖.植物多糖的研究进展[J].中国中药杂志，1995，520(7)：441
[5]黄玲.广佛手水溶性化学成分研究[J].时珍国医国药研究，1999，6：406
[6]章灵华，黄艺，钱玉昆，等.去氧萍蓬草碱在体外对免疫功能的影响[J].中国医学科学院学报，1995，17(5)：343
收稿日期：1999-06-01, http://www.100md.com