高效液相色谱法同时测定肝得宁-Ⅱ号丸中五味子甲素和五味子乙素的含量
作者：刘峰群 贺承山 李正明 何守文 吴素体
单位：刘峰群(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；贺承山(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；李正明(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；何守文(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；吴素体(中国人民解放军第302医院，北京 100039)
关键词：高效液相色谱法；五味子甲素；五味子乙素；含量测定▲
摘 要摘 要：目的：建立肝得宁-Ⅱ号丸中五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法。方法：高效液相色谱法，Kromasil C18分析柱，甲醇-四氢呋喃-水(76∶4∶20)为流动相，检测波长254 nm。结果：五味子甲素回归方程为Y=2470.730X-1.293，r=0.9999(n=5)，线性范围0.1477～1.1816 μg，平均回收率为97.64%，RSD 1.41%；五味子乙素回归方程Y=1762.327X+0.348，r=0.9997(n=5)，线性范围0.0811～0.6448 μg，平均回收率96.14%，RSD 0.90%。结论：方法简便、快速、准确，可作为该制剂的定量方法。
, http://www.100md.com
肝得宁-Ⅱ号丸是本院自制制剂，为五味子、女贞子、连翘、败酱草4味药材经粉碎后加炼蜜机制而成的蜜丸，临床用于急、慢性肝炎的治疗，效果满意。方中君药五味子主要含五味子甲素和五味子乙素，有明显促进肝糖元生成、降低转氨酶、保护肝细胞等作用，故其含量可作为控制本制剂质量的指标。为此，本文研究建立了高效液相色谱法同时测定肝得宁-Ⅱ号丸中五味子甲素和五味子乙素含量的方法。
1 仪器、材料与试药
高效液相色谱仪：惠普HP 1050-DAD系统。
五味子甲素和五味子乙素对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)；四氢呋喃、氯仿(分析纯)；五味子药材(市售)；肝得宁-Ⅱ号丸由本院药学部制备。
2 色谱条件
Kromasil C18分析柱4.6 mm×250 mm；流动相甲醇-四氢呋喃-水(76∶4∶20)；流速1.0 ml.min-1；检测波长254 nm；柱温30 ℃。
, http://www.100md.com
3 实验方法
3.1 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的五味子甲素对照品14.77 mg,加甲醇使溶解，定容至25 ml。另精密称取减压干燥至恒重的五味子乙素对照品8.11 mg,加甲醇使溶解，定容至25 ml。
精密量取上述两种溶液各1 ml，加甲醇定容10 ml，制成五味子甲素和五味子乙素的混合溶液。
3.2 样品溶液的制备 取肝得宁-Ⅱ号丸约1 g，精密称定，加硅藻土少量研细，置索氏提取器中，加氯仿回流提取4 h，挥干氯仿，残渣加甲醇定容至10 ml量瓶中，摇匀，作为样品溶液。
分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，色谱图见图1，图2；以外标法计算样品中五味子甲素和五味子乙素的含量。
, http://www.100md.com
图1 五味子甲素、五味子乙素
混合对照品HPLC图谱
1.五味子甲素 2.五味子乙素(图2同)
图2 样品HPLC图谱
3.3 空白对照溶液的制备与测定 按处方量制备不含五味子药材的阴性样品，按样品溶液制备方法制备阴性对照溶液。进样10 μl，记录色谱图，见图3，结果无干扰。
, http://www.100md.com
图3 阴性对照品HPLC图谱
3.4 线性关系考察 准确吸取对照品混合溶液2.5，5.0，10.0，15.0，20.0 μl依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，五味子甲素、五味子乙素进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为：五味子甲素Y=2470.730X-1.293,r=0.9999(n=5)，线性范围0.1477～1.1816 μg；五味子乙素Y=1762.327X+0.348,r=0.9997(n=5),线性范围0.0811～0.6488 μg。
3.5 精密度试验 准确吸取对照品混合溶液10 μl，重复进样6次，五味子甲素和五味子乙素峰面积积分值的RSD分别为0.81%，1.12%。
3.6 重现性试验 按3.2项下测定方法，对批号971110样品重复测定5次，结果五味子甲素平均含量660.21 μg.g-1，RSD 0.83%；五味子乙素平均含量282.59 μg.g-1，RSD 1.42%。
, 百拇医药
3.7 稳定性试验 取批号971110样品溶液，在0，0.5，1，2，4，8 h分别进样10 μl，记录峰面积，结果6次进样五味子甲素和五味子乙素峰面积RSD分别为1.21%和1.89%(n=6)，说明样品溶液较稳定。
3.8 加样回收率 取已测定含量的样品约0.5 g，精密称定，加入对照品混合溶液适量，按3.2项下样品溶液的制备法制备并测定，计算回收率，结果见表1，表2。
表1 样品中五味子甲素回收率试验结果
称样量/g
相当五味子甲素量/μg
加入五味子甲素量/μg
测得量/μg
回收率/%
, 百拇医药
平均回收率/%
RSD/%
0.5023
331.6
652.11
98.6
0.5001
330.2
653.78
99.6
0.4958
327.3
324.9
, http://www.100md.com
641.03
96.5
97.64
1.41
0.4992
329.5
640.94
95.8
0.4987
329.3
647.30
97.9
0.5021
, http://www.100md.com
331.5
648.01
97.4
表2 样品中五味子乙素回收率试验结果
称样量/g
相当五味子乙素量/μg
加入五味子乙素量/μg
测得量/μg
回收率/%
平均回收率/%
RSD/%
0.5023
, http://www.100md.com
141.9
281.86
95.85
0.5001
141.3
282.54
96.74
0.4958
140.1
146.0
279.70
95.62
96.14
, http://www.100md.com
0.90
0.4992
141.1
283.04
97.25
0.4987
140.9
279.42
94.87
0.5021
141.9
282.82
96.54
, 百拇医药
4 样品测定
精密吸取样品溶液10 μl，按上述色谱条件测定，4批样品中五味子甲素和五味子乙素的含量测定结果见表3。
表3 4批样品五味子甲素、五味子乙素含量测定结果 μg.g-1
批号
五味子甲素
五味子乙素
971107
923.5
367.0
971110
, 百拇医药 660.2
282.6
971111
600.0
226.4
971118
732.6
312.4
5 讨论 本品为复方中药丸剂，本研究对样品的提取条件进行了氯仿回流提取4 h、超声30 min等的考察，结果表明超声30 min提取的五味子甲素、五味子乙素含量仅约相当于氯仿回流提取量的66.7%。以甲醇-水[1]或乙腈-甲醇-水[2]作为流动相，五味子乙素均达不到基线分离，改用甲醇-四氢呋喃-水满足了实验要求。
, http://www.100md.com
基金项目：国家中医药管理局科研基金资助项目(95A3312)
参考文献：
[1]Yongxin Zhu,Kedong Yan,Jianmin Wu, et al.Assay of Lignans of Schizandra chinensis in Sheng Mai San by High-performance Liguid Chromatography.J Chromatogr,1988,438(2):447
[2]张永煜，郭允珍，中岛薰，等.不同产地五味子中木脂素类成分的高效液相色谱法测定.药物分析杂志，1990，10(3)：146
收稿日期：1998-12-22, 百拇医药
单位：刘峰群(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；贺承山(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；李正明(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；何守文(中国人民解放军第302医院，北京 100039)；吴素体(中国人民解放军第302医院，北京 100039)
关键词：高效液相色谱法；五味子甲素；五味子乙素；含量测定▲
摘 要摘 要：目的：建立肝得宁-Ⅱ号丸中五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法。方法：高效液相色谱法，Kromasil C18分析柱，甲醇-四氢呋喃-水(76∶4∶20)为流动相，检测波长254 nm。结果：五味子甲素回归方程为Y=2470.730X-1.293，r=0.9999(n=5)，线性范围0.1477～1.1816 μg，平均回收率为97.64%，RSD 1.41%；五味子乙素回归方程Y=1762.327X+0.348，r=0.9997(n=5)，线性范围0.0811～0.6448 μg，平均回收率96.14%，RSD 0.90%。结论：方法简便、快速、准确，可作为该制剂的定量方法。
, http://www.100md.com
肝得宁-Ⅱ号丸是本院自制制剂，为五味子、女贞子、连翘、败酱草4味药材经粉碎后加炼蜜机制而成的蜜丸，临床用于急、慢性肝炎的治疗，效果满意。方中君药五味子主要含五味子甲素和五味子乙素，有明显促进肝糖元生成、降低转氨酶、保护肝细胞等作用，故其含量可作为控制本制剂质量的指标。为此，本文研究建立了高效液相色谱法同时测定肝得宁-Ⅱ号丸中五味子甲素和五味子乙素含量的方法。
1 仪器、材料与试药
高效液相色谱仪：惠普HP 1050-DAD系统。
五味子甲素和五味子乙素对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)；四氢呋喃、氯仿(分析纯)；五味子药材(市售)；肝得宁-Ⅱ号丸由本院药学部制备。
2 色谱条件
Kromasil C18分析柱4.6 mm×250 mm；流动相甲醇-四氢呋喃-水(76∶4∶20)；流速1.0 ml.min-1；检测波长254 nm；柱温30 ℃。
, http://www.100md.com
3 实验方法
3.1 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的五味子甲素对照品14.77 mg,加甲醇使溶解，定容至25 ml。另精密称取减压干燥至恒重的五味子乙素对照品8.11 mg,加甲醇使溶解，定容至25 ml。
精密量取上述两种溶液各1 ml，加甲醇定容10 ml，制成五味子甲素和五味子乙素的混合溶液。
3.2 样品溶液的制备 取肝得宁-Ⅱ号丸约1 g，精密称定，加硅藻土少量研细，置索氏提取器中，加氯仿回流提取4 h，挥干氯仿，残渣加甲醇定容至10 ml量瓶中，摇匀，作为样品溶液。
分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，色谱图见图1，图2；以外标法计算样品中五味子甲素和五味子乙素的含量。
, http://www.100md.com
图1 五味子甲素、五味子乙素
混合对照品HPLC图谱
1.五味子甲素 2.五味子乙素(图2同)
图2 样品HPLC图谱
3.3 空白对照溶液的制备与测定 按处方量制备不含五味子药材的阴性样品，按样品溶液制备方法制备阴性对照溶液。进样10 μl，记录色谱图，见图3，结果无干扰。
, http://www.100md.com
图3 阴性对照品HPLC图谱
3.4 线性关系考察 准确吸取对照品混合溶液2.5，5.0，10.0，15.0，20.0 μl依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，五味子甲素、五味子乙素进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为：五味子甲素Y=2470.730X-1.293,r=0.9999(n=5)，线性范围0.1477～1.1816 μg；五味子乙素Y=1762.327X+0.348,r=0.9997(n=5),线性范围0.0811～0.6488 μg。
3.5 精密度试验 准确吸取对照品混合溶液10 μl，重复进样6次，五味子甲素和五味子乙素峰面积积分值的RSD分别为0.81%，1.12%。
3.6 重现性试验 按3.2项下测定方法，对批号971110样品重复测定5次，结果五味子甲素平均含量660.21 μg.g-1，RSD 0.83%；五味子乙素平均含量282.59 μg.g-1，RSD 1.42%。
, 百拇医药
3.7 稳定性试验 取批号971110样品溶液，在0，0.5，1，2，4，8 h分别进样10 μl，记录峰面积，结果6次进样五味子甲素和五味子乙素峰面积RSD分别为1.21%和1.89%(n=6)，说明样品溶液较稳定。
3.8 加样回收率 取已测定含量的样品约0.5 g，精密称定，加入对照品混合溶液适量，按3.2项下样品溶液的制备法制备并测定，计算回收率，结果见表1，表2。
表1 样品中五味子甲素回收率试验结果
称样量/g
相当五味子甲素量/μg
加入五味子甲素量/μg
测得量/μg
回收率/%
, 百拇医药
平均回收率/%
RSD/%
0.5023
331.6
652.11
98.6
0.5001
330.2
653.78
99.6
0.4958
327.3
324.9
, http://www.100md.com
641.03
96.5
97.64
1.41
0.4992
329.5
640.94
95.8
0.4987
329.3
647.30
97.9
0.5021
, http://www.100md.com
331.5
648.01
97.4
表2 样品中五味子乙素回收率试验结果
称样量/g
相当五味子乙素量/μg
加入五味子乙素量/μg
测得量/μg
回收率/%
平均回收率/%
RSD/%
0.5023
, http://www.100md.com
141.9
281.86
95.85
0.5001
141.3
282.54
96.74
0.4958
140.1
146.0
279.70
95.62
96.14
, http://www.100md.com
0.90
0.4992
141.1
283.04
97.25
0.4987
140.9
279.42
94.87
0.5021
141.9
282.82
96.54
, 百拇医药
4 样品测定
精密吸取样品溶液10 μl，按上述色谱条件测定，4批样品中五味子甲素和五味子乙素的含量测定结果见表3。
表3 4批样品五味子甲素、五味子乙素含量测定结果 μg.g-1
批号
五味子甲素
五味子乙素
971107
923.5
367.0
971110
, 百拇医药 660.2
282.6
971111
600.0
226.4
971118
732.6
312.4
5 讨论 本品为复方中药丸剂，本研究对样品的提取条件进行了氯仿回流提取4 h、超声30 min等的考察，结果表明超声30 min提取的五味子甲素、五味子乙素含量仅约相当于氯仿回流提取量的66.7%。以甲醇-水[1]或乙腈-甲醇-水[2]作为流动相，五味子乙素均达不到基线分离，改用甲醇-四氢呋喃-水满足了实验要求。
, http://www.100md.com
基金项目：国家中医药管理局科研基金资助项目(95A3312)
参考文献：
[1]Yongxin Zhu,Kedong Yan,Jianmin Wu, et al.Assay of Lignans of Schizandra chinensis in Sheng Mai San by High-performance Liguid Chromatography.J Chromatogr,1988,438(2):447
[2]张永煜，郭允珍，中岛薰，等.不同产地五味子中木脂素类成分的高效液相色谱法测定.药物分析杂志，1990，10(3)：146
收稿日期：1998-12-22, 百拇医药