国人Creutzfeldt-Jakob病临床、病理、免疫组化、PrP基因、14-3-3蛋白及动物传递 的研究
作者：林世和 赵节绪 江新梅 宋晓南 王为民 方莹莹 陶玉倩 徐惠琴 陈秀芸
单位：林世和 赵节绪 江新梅 宋晓南(长春白求恩医科大学第一临床学院 130021)；王为民(兰州医学院第二附属医院)；方莹莹 陶玉倩(中山医科大学第一医院)；徐惠琴(沈阳军区总医院)；陈秀芸(温州医学院)
关键词：Creutzfeldt-Jakob病；PrP基因；14-3-3蛋白
临床神经病学杂志000501 【摘要】 目的 探讨国人Creutzfeldt-Jakob 病(CJD)的临床、病理及免疫组化、PrP基因、14-3-3蛋 白及实验鼠传递结果。方法 统计24例CJD患者的临床资料，进行脑组织病理检查。其中10例脑切片作PrP免疫组化染色， 10例进行PrP基因表达，5例脑脊液行14-3-3蛋白检测，7例进行实验鼠传递。结果 (1)24例CJD中散发19例，可能为医源性3例，家族性1例，与Alzheimer病并存1例； (2)国人CJD急性、亚急性发病高达96%，急性发病者病程短，脑萎缩不明显；(3)脑组织石蜡 切片以PrP抗血清为第一抗体免疫组化染色，均呈突触型阳性；(4)14-3-3蛋白表达对CJD 的临床诊断有特异性；(5)活检脑组织对实验鼠传递成功。 结论 国人CJD发病过程和临床表现有若干特殊性，通过14-3-3蛋白表达，可早期确诊CJD，其 对早期发现CJD、减少医源性传播有重要意义。
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A study of Creutzfeldt-Jakob disease in Chinese on clinical aspects,pathologica l changes,immunohistochemistry,PrP gene,14-3-3 protein and animal transmission
Lin Shihe Zhao Jiexu Jiang Xinmei et al
(Department of Neurology, the F irst Clinical College of Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130021)
【Abstract】 Objective To investigate the clinical features, pathological changes,immunohistochemistry,expression of PrP gene,14-3-3 pro tein of Creutzfeldt-Jakob disease(CJD) in Chinese and result of experimental mo use transmission.Methods Clinical data and neuropathology of 24 patients with CJD were evaluated.Brain sections of 10 cases of them were gi ven immunostaining with antiserum to a synthetic polypetide of prion protein(PrP ).PrP gene was analysed in 10 cases,and 14-3-3 protein in CSF was detected in 5 cases,experimental mouse transmission was made in 7 patients with CJD.Results (1) 19 of 24 cases with sporadic CJD,3 cases with iatr og enic CJD,1 case with inherited CJD and 1 case with coexistence of Alzheimer dise ase and CJD were found.(2) The percentage of acute and subacute onset was hi gh up to 96%.The illness duration was shorter in acute onset patients and the br ain atrophy was not obvious.(3)The synaptic type positive of PrP antiserum was s hown as the first antibody immunostaining in paraffin sections in all cases.(4) 14-3-3 protein had specificity in 5 cases in cerebrospinal fluid with CJD.(5) Biopsy brain tissue was completed in experimental mouse transmission.Conclusion There were special characteristics in clinical aspec ts of CJD in Chinese.The detection of 14-3-3 protein could provide objective e vidence for early diagnosis of CJD,and prevent the iatrogenic transmission.
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【Key words】 Creutzfeldt-Jakob disease PrP gene 14-3-3 pr otein
Creutzfeldt-Jakob 病(CJD)为可传递性神经系统变性疾病中的常见类型。由于其发病机理 不明、预后凶险和医源性传播，而受到人们的关注。疯牛病的发现与蔓延，对可能为人畜共 患的CJD，目前正成为新的研究热点[1，2]。1999年7月世界卫生组织与中国卫生部 曾在 北京专门召开了CJD研讨会。为探讨国人CJD的临床表现、病理所见、免疫组化、基因表达、 14-3-3蛋白测定以及实验动物传递等，10年来，CJD研究组对我国东北、西北、中南以及 华东地区的CJD病例进行研究，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 自1991年以来确诊的CJD 24例，男女各12例，年龄18～73岁，平均54.3岁 。地域分布：吉林省12例、甘肃省5例、广东省5例、辽宁省1例、浙江省1例。
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1.2 方法
1.2.1 组织病理 脑剖检3例，右侧额叶皮质活检21例。经石蜡包埋，HE、KB染色，光镜观 察。另份放入3.0%戊二醛固定，1.0%锇酸后固定，Epon 812包埋，超薄切片，铅铀双重染色 ，透射电镜观察。
1.2.2 免疫组化
1.2.2.1 CJD免疫组化方法 对10例CJD脑组织切片，应用改进的前处置法[3]，将切片置于0.3%双氧水甲醇中，再置于盛有1～3 mmol/L盐酸的不锈钢容器内，加温121 ℃ 2 0分钟。用Tris缓冲液充分水洗，加入朊蛋白(prion protein,PrP)抗血清(1:400)，4 ℃条 件下孵育，经TTB冲洗后按PAP法进行，以确认脑内朊蛋白。
1.2.2.2 Alzheimer病(AD)细胞免疫化学检查 对CJD与AD并存的病例，选用美国Stranberg er Mayer免疫细胞化学公司的第一抗体，其中SMI31为鼠抗人磷酸化神经单克隆抗体，M SI34为鼠抗人AD缠结与老年斑的单克隆抗体，按PAP法染色，以确认脑内Tau蛋白。
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1.2.3 PrP基因表达 10例确诊的CJD患者静脉血经肝素抗凝，提取DNA。以引物T-1和T-2 扩增PrP基因的阅读框架，用限制性内切酶NspⅠ、TthⅢⅠ、BsmAⅠ等 酶切，1.5%琼脂 糖凝胶电泳进行限制性片段长度多态性分析。另测非CJD痴呆20例、健康人17例，作为对照 组。
1.2.4 实验动物传递 对-70 ℃保存的5例活检脑组织及2例剖检脑组织，制成10%～15% 重量/容积匀浆，先后接种于368只昆明鼠脑内(含对照组74只)，观察期限为3年。所有 实验鼠均来自白求恩医科大学实验动物中心，并经国家检疫合格。
1.2.5 14-3-3蛋白检测 5例CJD脑脊液标本采用Western blotting方法分析[4] 。将50 μl脑脊液和10 μl样本缓冲液混合，煮沸5分钟。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰 胺凝胶电泳进行蛋白质分离，然后转膜到硝酸纤维素膜，分别加入抗14-3-3多克隆兔抗体 (1:500)和碱性磷酸酶结合的抗兔IgG抗体(1:1000),显色后照相进行抗14-3-3多克隆兔抗 体的免疫印迹分析。
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2 结 果
2.1 临床情况 本组经病理检查确诊的CJD 24例，其中1例CJD与AD并存[4]。 余 23 例中急性发病5例、亚急性17例、慢性1例。急性发病者病程明显短于亚急性和慢性起病者。 本组患者的临床表现、脑脊液、脑电图、CT与MRI检查结果见表1、2。
表1 23例*CJD患者的临床表现(例，%) 症状与体征
例数
症状与体征
例数
急性发病
5 (22)
肌阵挛
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20 (87)
亚急性发病
17(74)
共济失调
15 (65)
慢性发病
1 (4)
锥体束征
18 (78)
首发症状
延髓麻痹
4 (17)
精神障碍
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12 (52)
痴呆
23 (100)
行路不稳
6 (26)
去皮层或无动缄默
23 (100)
大发作
3 (13)
双目失明
1(4)
视物模糊
1 (4)
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多动
1 (4)
*另1例为CJD与AD并存，未统计在内e表2 23例CJD患者脑脊液、脑电图及MRI检查(例)
检查例数
异常数
脑脊液
22
蛋白轻度增高
2
14-3-3蛋白
5
5
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病毒PCR
5
0
脑电图
21
周期性同步放电
9
弥散性慢波
12
头部MRI
20
大脑灰质萎缩
8
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底节对称性T2高信号
2
灰质局限性T2高信号
1
2.2 组织病理 所检查的标本软膜正常或轻度肥厚，大脑灰质以深层为主的海绵状变性， 有的互相融合。严重者白质也有类似改变，但程度较轻。节细胞脱落明显，残存者核固缩变 长 ，核仁不能看清。星形胶质细胞增生，其程度远较海绵状变性及神经细胞脱落为轻。有2例 能看到肥大的不整形的星形胶质细胞胞浆。无炎症反应。电镜观察见脑组织疏松呈海绵状， 神经细胞内线粒体肿胀，突触膜隙不清或肿胀，呈界膜样空泡变性。
2.3 免疫组织化学 10例右侧额叶皮质石蜡切片，以PrP抗血清为第一抗体的免疫组化染色 ，均呈突触型阳性。在CJD与AD并存病例，除发现PrP 外，还证实有Tau蛋白的存在。
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2.4 PrP基因分析 在10例CJD患者、20例非CJD痴呆及17例健康对照中各有1例密码子129等 位基因为甲硫氨酸/缬氨酸杂合子，其余各例均为密码子129等位基因甲硫氨酸纯合子，无12 9缬氨酸纯合子。
2.5 动物传递结果 368只传递鼠中有4例脑组织接种的32只鼠，于传递后381～543天发病。发病鼠表现体重减轻、行动迟缓及步行困难，组织学检查有脑海绵状改变，不 过其程度较人的海绵状改变轻，有9例发病鼠脑内发现PrP沉积。
2.6 14-3-3蛋白检测 5例CJD脑脊液标本均呈阳性反应。而18例伴有痴呆症状的神经系 统其他疾病患者(其中AD、帕金森综合征、橄榄-桥-小脑萎缩、肌阵挛癫痫各1例， 皮质下动脉硬化性脑病、一氧化碳中毒、慢性酒精中毒各3例，多发性脑梗死5例)的脑脊液 均为阴性。对38例不伴有痴呆症状的其他神经系统疾病的脑脊液样品进行检测，3例为一过 性阳性，均为单纯疱疹病毒性脑炎，第2次检测则为阴性。
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3 讨 论
3.1 CJD的临床表现 根据CJD的临床表现、病理所见和基因表达的不同，可分为散发性CJD 、遗传性CJD、医源性CJD和变异性CJD。本组散发性CJD 19例；3例在发病前1～4年接受颅脑 和眼部手术，推测可能为医源性CJD；家族性CJD 1例，其兄弟二人临床表现与经过相似。1 例因AD入院，晚期出现典型肌阵挛发作，脑病理检查既有AD改变，又有CJD改变，免疫组化 证实脑内既有Tau蛋白又有朊蛋白，属于AD与CJD并存。此种情况较为罕见，是继Brown,Powe rs (1991)，Muramoto(1992)之后，中国(1994)首次发现[4]。本组24例CJD中，除与AD 并存1例外，呈急性发病5例、亚急性发病17例、慢性发病1例。而西方大多数CJD起病徐缓， 逐渐发病[5]。我国急性亚急性起病者达96%。绝大多数CJD患者有肌阵挛癫痫，此 点与西方无任何不同，不过本组以癫痫大发作为首发症状者竟有3例(占13%)，而西方(含病 程中癫痫发作者)仅占8%[5]。本组平均病程9.58个月，与西方的90%1年内死亡 ，无明显不同。但是，急性发病者病程短，平均3.75个月，值得重视[6]。本组有 2例 年龄分别为60、34岁，于发病后6、10个月死亡，剖检证实脑萎缩并不明显。另有3例于发病 后2、6、12个月进行头部磁共振检查，除70岁者有轻度脑萎缩外，其他2例改变均不明显。
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3.2 CJD的MRI改变 1985年以前，曾有人报告MRI检查对CJD无诊断意义。1988年Gertz等 [12]报道1例55岁病人，病后9个月行头部MRI检查见底节区T2加权像上呈高信号 。剖检证实整个大脑皮质有海绵状变性、胶质增生和轻微神经细胞脱失，而尾状核、壳核、 苍白球及丘脑病变则重于大脑皮质。翌年，Pearl等[13]报告1例68岁病人，于发病 后6个月，即死前4个月接受头部MRI检查，双侧尾状核于T2加权像上呈均质高信号。但尾 状核轮廓正常。剖检证实双侧尾状核、壳核有明显的海绵状变性、胶质增生和神经细胞脱失 ，而苍白球、丘脑及大脑皮质病变相对轻[7]。双侧尾状核、壳核于T2加权像上 呈对称性均质高信号，很少波及苍白球，也不呈增强效应。这种征象对CJD临床诊断有重要 意义。Finkenstaedt报告德国确诊并经头部MRI检查的29例CJD，其中23例(79%)有改变。最 显著的特征是双侧尾状核、壳核于质子密度和T2加权像上呈对称性均质高信号，其中有7 例(24%)双侧苍白球、4例(14%)丘脑呈现类似改变。3例枕叶皮质、1例小脑皮质也有相似改 变，另有6例(21%)MRI无任何改变[8]。之所以如此，推测与病变时期和受累部位有 关。已知CJD的神经细胞脱失和胶质增生从时间上晚于海绵状变性，而MRI所见与神经细胞脱 失和胶质增生，较之海绵状变性更为密切。
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3.3 CJD的诊断 应用改进的前处置水解高压灭菌法以PrP抗血清为第一抗 体的免疫组化方法，对CJD的诊断敏感而特异，且不受病程长短的影响，非CJD痴呆不呈阳性 反应。本组CJD病程最短者3个月，长者7个月，均呈肯定的阳性反应。根据PrP在脑内的沉积 形式可分为突触型和斑块型[3]。本组CJD均呈突触型，至目前为止，尚未发现CJD 呈斑块型阳性者[9]。1996年Hsich等[14]建立了特异的免疫印迹分析方法检测脑脊液中 14-3-3蛋白并 作为CJD诊断的客观指标。1998年Zerr[10]最新评估了Western blot方法对14-3- 3蛋白质检测的价值，在7例非CJD阳性病例，初次脑脊液检测14-3-3蛋白为阳性，2周后实 施第2次脑脊液检测时，则为阴性。我们对5例CJD的14-3-3蛋白检测均呈阳性，而非CJD痴 呆患者18例均呈阴性，在38例不伴有痴呆的神经系统疾病患者中，除3例疱疹脑炎呈一过性 阳性外，亦均为阴性。可见，脑脊液14-3-3蛋白检测，对CJD的诊断具有强烈的支持和否 定作用[11]。
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本课题由国家自然科学基金(39770274)及国家卫生部(94-1-218)资助
参 考 文 献
1，Collinge J, Sidle KCL, Meads J, et al. Molecular analysis of prion strin varia tion and the etiology of new variant'CJD. Nature, 1996,383:683
2，Castellani R, Parchi P, Stahl J, et al. Early pathologic and biochemical chang es in Creutzfeldt-Jakob disease: Study of brain biopsies. Neurol, 1996,46:1690
3，Kitamoto T, Muramoto T, Mori S, et al. Abnormal isoform of prion protein accumulates in follicular dendritic cells in mice wit Creutzfeldt-Jakob diseas e. Virology, 1991,65:6292
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4，Lin SH, Zhao JX, Jiang XM, et al. Coexistence of Creutzfeldt-Jakob disease an d Alzheimer disease in the same patient. Chin Med J,1998,111:756
5，Brown P, Cathala F, Castaigne P, et al. Creutzfeldt-Jakob disease:Clinical an alysis of consecutive series of 230 neuropathologically vertified cases. Ann Ne urol,1986,20:597
6，林世和，赵节绪，江新梅，等.国人Creutzfeldt-Jakob 病的若干特殊性.中华神经科杂志 ，1998，31：330
7，Barboriak DP, Provenzale JM, Boyko OB. MR diagnosis Creutzfeldt-Jakob disease: Significance of high signal intrnsity of the basal ganglia. Am J Roentgenol，199 4,162:137
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8，Finkenstaedt M, Szudra A,Zerr I, et al. MR imaging of Creutzfeldt-Jakob disease .Radiology,1996,199:793
9，林世和，江新梅，赵节绪，等.异常PrP脑内沉积对朊蛋白病临床与病理的影响. 中华神 经科杂志，1999，32：338
10，Zerr I, Bodemer M, Gefeller, et al. Detection of 14-3-3protein in the cereb rospinal fluid supports the diagnosis of Creutzfeldt-Jakob disease. Ann Neuro l,1998,43:32
11，宋晓南，林世和，江新梅，等.脑脊液14-3-3蛋白对Creutzfeldt-Jakob病的诊断意 义. 中华神经科杂志，1999，32：208
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12，Gertz HJ, Henkes H, Cerros-Navarro J. Creutzfeldt-Jakob disease:Correlati on of MRI and neuropathologic findings. Neurology,1988,38:1481
13，Pearl GS, Anderson RE. Creutzfeldt-Jakob disease:high caudate singnal on m agnetic resonance imaging. South Hed J, 1989,82:1177
14，Hsich G, Kenney K, Gibbs CJ,et al. The 14-3-3 brain protein in cerebrospin al fluid as a marker for transmissible spongiform encephalopathies. N Engl J Med ,1996, 335:924
收稿2000-04-06
修回2000-06-02, 百拇医药
单位：林世和 赵节绪 江新梅 宋晓南(长春白求恩医科大学第一临床学院 130021)；王为民(兰州医学院第二附属医院)；方莹莹 陶玉倩(中山医科大学第一医院)；徐惠琴(沈阳军区总医院)；陈秀芸(温州医学院)
关键词：Creutzfeldt-Jakob病；PrP基因；14-3-3蛋白
临床神经病学杂志000501 【摘要】 目的 探讨国人Creutzfeldt-Jakob 病(CJD)的临床、病理及免疫组化、PrP基因、14-3-3蛋 白及实验鼠传递结果。方法 统计24例CJD患者的临床资料，进行脑组织病理检查。其中10例脑切片作PrP免疫组化染色， 10例进行PrP基因表达，5例脑脊液行14-3-3蛋白检测，7例进行实验鼠传递。结果 (1)24例CJD中散发19例，可能为医源性3例，家族性1例，与Alzheimer病并存1例； (2)国人CJD急性、亚急性发病高达96%，急性发病者病程短，脑萎缩不明显；(3)脑组织石蜡 切片以PrP抗血清为第一抗体免疫组化染色，均呈突触型阳性；(4)14-3-3蛋白表达对CJD 的临床诊断有特异性；(5)活检脑组织对实验鼠传递成功。 结论 国人CJD发病过程和临床表现有若干特殊性，通过14-3-3蛋白表达，可早期确诊CJD，其 对早期发现CJD、减少医源性传播有重要意义。
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A study of Creutzfeldt-Jakob disease in Chinese on clinical aspects,pathologica l changes,immunohistochemistry,PrP gene,14-3-3 protein and animal transmission
Lin Shihe Zhao Jiexu Jiang Xinmei et al
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【Abstract】 Objective To investigate the clinical features, pathological changes,immunohistochemistry,expression of PrP gene,14-3-3 pro tein of Creutzfeldt-Jakob disease(CJD) in Chinese and result of experimental mo use transmission.Methods Clinical data and neuropathology of 24 patients with CJD were evaluated.Brain sections of 10 cases of them were gi ven immunostaining with antiserum to a synthetic polypetide of prion protein(PrP ).PrP gene was analysed in 10 cases,and 14-3-3 protein in CSF was detected in 5 cases,experimental mouse transmission was made in 7 patients with CJD.Results (1) 19 of 24 cases with sporadic CJD,3 cases with iatr og enic CJD,1 case with inherited CJD and 1 case with coexistence of Alzheimer dise ase and CJD were found.(2) The percentage of acute and subacute onset was hi gh up to 96%.The illness duration was shorter in acute onset patients and the br ain atrophy was not obvious.(3)The synaptic type positive of PrP antiserum was s hown as the first antibody immunostaining in paraffin sections in all cases.(4) 14-3-3 protein had specificity in 5 cases in cerebrospinal fluid with CJD.(5) Biopsy brain tissue was completed in experimental mouse transmission.Conclusion There were special characteristics in clinical aspec ts of CJD in Chinese.The detection of 14-3-3 protein could provide objective e vidence for early diagnosis of CJD,and prevent the iatrogenic transmission.
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【Key words】 Creutzfeldt-Jakob disease PrP gene 14-3-3 pr otein
Creutzfeldt-Jakob 病(CJD)为可传递性神经系统变性疾病中的常见类型。由于其发病机理 不明、预后凶险和医源性传播，而受到人们的关注。疯牛病的发现与蔓延，对可能为人畜共 患的CJD，目前正成为新的研究热点[1，2]。1999年7月世界卫生组织与中国卫生部 曾在 北京专门召开了CJD研讨会。为探讨国人CJD的临床表现、病理所见、免疫组化、基因表达、 14-3-3蛋白测定以及实验动物传递等，10年来，CJD研究组对我国东北、西北、中南以及 华东地区的CJD病例进行研究，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 自1991年以来确诊的CJD 24例，男女各12例，年龄18～73岁，平均54.3岁 。地域分布：吉林省12例、甘肃省5例、广东省5例、辽宁省1例、浙江省1例。
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1.2 方法
1.2.1 组织病理 脑剖检3例，右侧额叶皮质活检21例。经石蜡包埋，HE、KB染色，光镜观 察。另份放入3.0%戊二醛固定，1.0%锇酸后固定，Epon 812包埋，超薄切片，铅铀双重染色 ，透射电镜观察。
1.2.2 免疫组化
1.2.2.1 CJD免疫组化方法 对10例CJD脑组织切片，应用改进的前处置法[3]，将切片置于0.3%双氧水甲醇中，再置于盛有1～3 mmol/L盐酸的不锈钢容器内，加温121 ℃ 2 0分钟。用Tris缓冲液充分水洗，加入朊蛋白(prion protein,PrP)抗血清(1:400)，4 ℃条 件下孵育，经TTB冲洗后按PAP法进行，以确认脑内朊蛋白。
1.2.2.2 Alzheimer病(AD)细胞免疫化学检查 对CJD与AD并存的病例，选用美国Stranberg er Mayer免疫细胞化学公司的第一抗体，其中SMI31为鼠抗人磷酸化神经单克隆抗体，M SI34为鼠抗人AD缠结与老年斑的单克隆抗体，按PAP法染色，以确认脑内Tau蛋白。
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1.2.3 PrP基因表达 10例确诊的CJD患者静脉血经肝素抗凝，提取DNA。以引物T-1和T-2 扩增PrP基因的阅读框架，用限制性内切酶NspⅠ、TthⅢⅠ、BsmAⅠ等 酶切，1.5%琼脂 糖凝胶电泳进行限制性片段长度多态性分析。另测非CJD痴呆20例、健康人17例，作为对照 组。
1.2.4 实验动物传递 对-70 ℃保存的5例活检脑组织及2例剖检脑组织，制成10%～15% 重量/容积匀浆，先后接种于368只昆明鼠脑内(含对照组74只)，观察期限为3年。所有 实验鼠均来自白求恩医科大学实验动物中心，并经国家检疫合格。
1.2.5 14-3-3蛋白检测 5例CJD脑脊液标本采用Western blotting方法分析[4] 。将50 μl脑脊液和10 μl样本缓冲液混合，煮沸5分钟。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰 胺凝胶电泳进行蛋白质分离，然后转膜到硝酸纤维素膜，分别加入抗14-3-3多克隆兔抗体 (1:500)和碱性磷酸酶结合的抗兔IgG抗体(1:1000),显色后照相进行抗14-3-3多克隆兔抗 体的免疫印迹分析。
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2 结 果
2.1 临床情况 本组经病理检查确诊的CJD 24例，其中1例CJD与AD并存[4]。 余 23 例中急性发病5例、亚急性17例、慢性1例。急性发病者病程明显短于亚急性和慢性起病者。 本组患者的临床表现、脑脊液、脑电图、CT与MRI检查结果见表1、2。
表1 23例*CJD患者的临床表现(例，%) 症状与体征
例数
症状与体征
例数
急性发病
5 (22)
肌阵挛
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20 (87)
亚急性发病
17(74)
共济失调
15 (65)
慢性发病
1 (4)
锥体束征
18 (78)
首发症状
延髓麻痹
4 (17)
精神障碍
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12 (52)
痴呆
23 (100)
行路不稳
6 (26)
去皮层或无动缄默
23 (100)
大发作
3 (13)
双目失明
1(4)
视物模糊
1 (4)
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多动
1 (4)
*另1例为CJD与AD并存，未统计在内e表2 23例CJD患者脑脊液、脑电图及MRI检查(例)
检查例数
异常数
脑脊液
22
蛋白轻度增高
2
14-3-3蛋白
5
5
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病毒PCR
5
0
脑电图
21
周期性同步放电
9
弥散性慢波
12
头部MRI
20
大脑灰质萎缩
8
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底节对称性T2高信号
2
灰质局限性T2高信号
1
2.2 组织病理 所检查的标本软膜正常或轻度肥厚，大脑灰质以深层为主的海绵状变性， 有的互相融合。严重者白质也有类似改变，但程度较轻。节细胞脱落明显，残存者核固缩变 长 ，核仁不能看清。星形胶质细胞增生，其程度远较海绵状变性及神经细胞脱落为轻。有2例 能看到肥大的不整形的星形胶质细胞胞浆。无炎症反应。电镜观察见脑组织疏松呈海绵状， 神经细胞内线粒体肿胀，突触膜隙不清或肿胀，呈界膜样空泡变性。
2.3 免疫组织化学 10例右侧额叶皮质石蜡切片，以PrP抗血清为第一抗体的免疫组化染色 ，均呈突触型阳性。在CJD与AD并存病例，除发现PrP 外，还证实有Tau蛋白的存在。
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2.4 PrP基因分析 在10例CJD患者、20例非CJD痴呆及17例健康对照中各有1例密码子129等 位基因为甲硫氨酸/缬氨酸杂合子，其余各例均为密码子129等位基因甲硫氨酸纯合子，无12 9缬氨酸纯合子。
2.5 动物传递结果 368只传递鼠中有4例脑组织接种的32只鼠，于传递后381～543天发病。发病鼠表现体重减轻、行动迟缓及步行困难，组织学检查有脑海绵状改变，不 过其程度较人的海绵状改变轻，有9例发病鼠脑内发现PrP沉积。
2.6 14-3-3蛋白检测 5例CJD脑脊液标本均呈阳性反应。而18例伴有痴呆症状的神经系 统其他疾病患者(其中AD、帕金森综合征、橄榄-桥-小脑萎缩、肌阵挛癫痫各1例， 皮质下动脉硬化性脑病、一氧化碳中毒、慢性酒精中毒各3例，多发性脑梗死5例)的脑脊液 均为阴性。对38例不伴有痴呆症状的其他神经系统疾病的脑脊液样品进行检测，3例为一过 性阳性，均为单纯疱疹病毒性脑炎，第2次检测则为阴性。
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3 讨 论
3.1 CJD的临床表现 根据CJD的临床表现、病理所见和基因表达的不同，可分为散发性CJD 、遗传性CJD、医源性CJD和变异性CJD。本组散发性CJD 19例；3例在发病前1～4年接受颅脑 和眼部手术，推测可能为医源性CJD；家族性CJD 1例，其兄弟二人临床表现与经过相似。1 例因AD入院，晚期出现典型肌阵挛发作，脑病理检查既有AD改变，又有CJD改变，免疫组化 证实脑内既有Tau蛋白又有朊蛋白，属于AD与CJD并存。此种情况较为罕见，是继Brown,Powe rs (1991)，Muramoto(1992)之后，中国(1994)首次发现[4]。本组24例CJD中，除与AD 并存1例外，呈急性发病5例、亚急性发病17例、慢性发病1例。而西方大多数CJD起病徐缓， 逐渐发病[5]。我国急性亚急性起病者达96%。绝大多数CJD患者有肌阵挛癫痫，此 点与西方无任何不同，不过本组以癫痫大发作为首发症状者竟有3例(占13%)，而西方(含病 程中癫痫发作者)仅占8%[5]。本组平均病程9.58个月，与西方的90%1年内死亡 ，无明显不同。但是，急性发病者病程短，平均3.75个月，值得重视[6]。本组有 2例 年龄分别为60、34岁，于发病后6、10个月死亡，剖检证实脑萎缩并不明显。另有3例于发病 后2、6、12个月进行头部磁共振检查，除70岁者有轻度脑萎缩外，其他2例改变均不明显。
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3.2 CJD的MRI改变 1985年以前，曾有人报告MRI检查对CJD无诊断意义。1988年Gertz等 [12]报道1例55岁病人，病后9个月行头部MRI检查见底节区T2加权像上呈高信号 。剖检证实整个大脑皮质有海绵状变性、胶质增生和轻微神经细胞脱失，而尾状核、壳核、 苍白球及丘脑病变则重于大脑皮质。翌年，Pearl等[13]报告1例68岁病人，于发病 后6个月，即死前4个月接受头部MRI检查，双侧尾状核于T2加权像上呈均质高信号。但尾 状核轮廓正常。剖检证实双侧尾状核、壳核有明显的海绵状变性、胶质增生和神经细胞脱失 ，而苍白球、丘脑及大脑皮质病变相对轻[7]。双侧尾状核、壳核于T2加权像上 呈对称性均质高信号，很少波及苍白球，也不呈增强效应。这种征象对CJD临床诊断有重要 意义。Finkenstaedt报告德国确诊并经头部MRI检查的29例CJD，其中23例(79%)有改变。最 显著的特征是双侧尾状核、壳核于质子密度和T2加权像上呈对称性均质高信号，其中有7 例(24%)双侧苍白球、4例(14%)丘脑呈现类似改变。3例枕叶皮质、1例小脑皮质也有相似改 变，另有6例(21%)MRI无任何改变[8]。之所以如此，推测与病变时期和受累部位有 关。已知CJD的神经细胞脱失和胶质增生从时间上晚于海绵状变性，而MRI所见与神经细胞脱 失和胶质增生，较之海绵状变性更为密切。
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3.3 CJD的诊断 应用改进的前处置水解高压灭菌法以PrP抗血清为第一抗 体的免疫组化方法，对CJD的诊断敏感而特异，且不受病程长短的影响，非CJD痴呆不呈阳性 反应。本组CJD病程最短者3个月，长者7个月，均呈肯定的阳性反应。根据PrP在脑内的沉积 形式可分为突触型和斑块型[3]。本组CJD均呈突触型，至目前为止，尚未发现CJD 呈斑块型阳性者[9]。1996年Hsich等[14]建立了特异的免疫印迹分析方法检测脑脊液中 14-3-3蛋白并 作为CJD诊断的客观指标。1998年Zerr[10]最新评估了Western blot方法对14-3- 3蛋白质检测的价值，在7例非CJD阳性病例，初次脑脊液检测14-3-3蛋白为阳性，2周后实 施第2次脑脊液检测时，则为阴性。我们对5例CJD的14-3-3蛋白检测均呈阳性，而非CJD痴 呆患者18例均呈阴性，在38例不伴有痴呆的神经系统疾病患者中，除3例疱疹脑炎呈一过性 阳性外，亦均为阴性。可见，脑脊液14-3-3蛋白检测，对CJD的诊断具有强烈的支持和否 定作用[11]。
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本课题由国家自然科学基金(39770274)及国家卫生部(94-1-218)资助
参 考 文 献
1，Collinge J, Sidle KCL, Meads J, et al. Molecular analysis of prion strin varia tion and the etiology of new variant'CJD. Nature, 1996,383:683
2，Castellani R, Parchi P, Stahl J, et al. Early pathologic and biochemical chang es in Creutzfeldt-Jakob disease: Study of brain biopsies. Neurol, 1996,46:1690
3，Kitamoto T, Muramoto T, Mori S, et al. Abnormal isoform of prion protein accumulates in follicular dendritic cells in mice wit Creutzfeldt-Jakob diseas e. Virology, 1991,65:6292
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4，Lin SH, Zhao JX, Jiang XM, et al. Coexistence of Creutzfeldt-Jakob disease an d Alzheimer disease in the same patient. Chin Med J,1998,111:756
5，Brown P, Cathala F, Castaigne P, et al. Creutzfeldt-Jakob disease:Clinical an alysis of consecutive series of 230 neuropathologically vertified cases. Ann Ne urol,1986,20:597
6，林世和，赵节绪，江新梅，等.国人Creutzfeldt-Jakob 病的若干特殊性.中华神经科杂志 ，1998，31：330
7，Barboriak DP, Provenzale JM, Boyko OB. MR diagnosis Creutzfeldt-Jakob disease: Significance of high signal intrnsity of the basal ganglia. Am J Roentgenol，199 4,162:137
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8，Finkenstaedt M, Szudra A,Zerr I, et al. MR imaging of Creutzfeldt-Jakob disease .Radiology,1996,199:793
9，林世和，江新梅，赵节绪，等.异常PrP脑内沉积对朊蛋白病临床与病理的影响. 中华神 经科杂志，1999，32：338
10，Zerr I, Bodemer M, Gefeller, et al. Detection of 14-3-3protein in the cereb rospinal fluid supports the diagnosis of Creutzfeldt-Jakob disease. Ann Neuro l,1998,43:32
11，宋晓南，林世和，江新梅，等.脑脊液14-3-3蛋白对Creutzfeldt-Jakob病的诊断意 义. 中华神经科杂志，1999，32：208
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12，Gertz HJ, Henkes H, Cerros-Navarro J. Creutzfeldt-Jakob disease:Correlati on of MRI and neuropathologic findings. Neurology,1988,38:1481
13，Pearl GS, Anderson RE. Creutzfeldt-Jakob disease:high caudate singnal on m agnetic resonance imaging. South Hed J, 1989,82:1177
14，Hsich G, Kenney K, Gibbs CJ,et al. The 14-3-3 brain protein in cerebrospin al fluid as a marker for transmissible spongiform encephalopathies. N Engl J Med ,1996, 335:924
收稿2000-04-06
修回2000-06-02, 百拇医药