山莨菪碱对异烟肼和利福平肝毒性的保护作用
作者：王建刚 王淑英 吴银萍 郑海燕 王学廷 路西明
单位：(河南洛阳医学高等专科学校药理学教研室，洛阳 471003)
关键词：山莨菪碱；肝保护；异烟肼；利福平；肝毒性
中国药理学通报990431 文献标识码 A 文章编号 1001-1978(1999)04-0382-02
中国图书分类号 R 52; R 975.5； R 978.3
Protective effect of anisodamine on hepatic toxic injury induced by combining isoniazid with rifampicin in mice
WANG Jian-Gang, WANG Shu-Ying, WU Yin-Ping，ZHENG Hai-Yan, WANG Xue-Ting, LU Xi-Ming
, 百拇医药
(Dept of Pharmacology, Luoyang Medical College, Luoyang 471003)
KEY WORDS anisodamine; protective effect on liver; isoniazid; r ifampicin; hepatic toxic injury
异烟肼和利福平联合用药效果良好，二者为目前结核病短程疗法所必需。但异烟肼和利福平合用肝毒性明显增加。山莨菪碱有保肝作用且有其与抗结核药物联用可降低肝损害的临床报道[1]。本实验就山莨菪碱对异烟肼和利福平肝毒性的保护作用及其机制予以探讨。
1 材料和方法
1.1 动物与用药 昆明种小鼠 50只，♀♂各半，购自河南医科大学实验动物中心，体重(21.3±1.8) g，随机分为5组：Ⅰ组(生理盐水对照组)：生理盐水ip， 0.01ml.g-1，每天1次连用5 d；Ⅱ组(肝损伤组)：异烟肼+利福平，异烟肼(广州明兴制药厂，批号：971221-14)，利福平(武汉制药厂，批号：970403)，异烟肼和利福平分别用生理盐水配制为4g.L -1和1g.L-1溶液，均以0.01ml.g-1, ip,每日1次，利福平连用5d，异烟肼于d4、d5 ip1次；Ⅲ组(山莨菪碱小剂量组)：在Ⅱ组用药的基础上，再加用0. 25g.L-1山莨菪碱(江苏省泰兴制药厂，批号：971011)，ip, 0.01ml.g-1 ，连用5d；Ⅳ组(山莨菪碱中剂量组)：在Ⅱ组用药的基础上，ip 0.5g.L-1 山莨菪碱0.01 ml.g-1，连用5d；Ⅴ组(山莨菪碱大剂量组)：在Ⅱ组用药的基础上，ip 1g.L-1山莨菪碱0.01ml.g-1，连用5d。全部动物于d 6称体重，断头取血，剖腹取肝洗净揩干称重。
, 百拇医药
1.2 肝指数及形态学观察及血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定 肝指数=肝重(mg)/处死前体重(g)。取肝左叶，立即用福尔马林溶液固定2wk，常规切片，HE染色。用赖氏法测定血清ALT活性。
1.3 肝匀浆MDA、微粒体细胞色素P450含量、线粒体Ca2+ ATP酶活性测定 准确取肝0.3 g,加3ml生理盐水，用电动细胞匀浆机制成体积分数为10%肝匀浆，用硫代巴比妥酸法测定MDA[2]。取肝0.5g，用0.25mol.L-1蔗糖-Tris-HCl缓冲液(pH=7.4)用电动匀浆机制成体积分数为20%肝匀浆，用差速离心法提取肝线粒体和钙沉淀法制备微粒体。然后测定线粒体Ca 2+-ATP酶活力和微粒体细胞色素P450含量[3]。
1.4 统计学处理 两组间显著性检验用t检验
, 百拇医药
2 结果
2.1 山莨菪碱对肝指数、血清ALT和肝病理性改变的影响 肝指数和血清ALT结果见表1。在光学显微镜下观察，异烟肼和利福平组的小鼠大多都有肝细胞水泡样变性，有些还可见坏死，而山莨菪碱组各组损害程度明显减轻。
Tab 1 Effect of anisodamine on liver index and
serum ALT in mice (
±s, n=10) Group
Liver index
Serum ALT/U
Ⅰ
, http://www.100md.com
5.67±0.55*
30.6±7.3*
Ⅱ
6.27±0.38
47.7±9.4
Ⅲ
6.26±0.59
36.6±5.9*
Ⅳ
6.14±0.48
34.6±2.7**
, 百拇医药
Ⅴ
6.06±0.32
30.9±7.7**
Compared Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ with Ⅱ，*P<0.05
2.2 山莨菪碱对小鼠肝匀浆MDA、P450、Ca2+-ATP酶活性的影响 见表2。
Tab 2 Effect of anisodamine on malondialdehyde (MDA),cytochrome P450 and Ca2+-ATPase activity in liver
homogenate in mice (±s, n=10) Group
, 百拇医药
MDA
/nmol.g-1
Cytoc hrome P450
/μmol.g-1 Pro
Ca2+-ATPase activity
/mmol.g-1
Pro.h-1
Ⅰ
158.0±57.9*
, 百拇医药
5.89±2 .17*
21.57±3.77*
Ⅱ
210.9±57.4
7.57±1.90
16.95 ±4.34
Ⅲ
189.9±58.5
6.87±1.42
24.09±4.80**
Ⅳ
, 百拇医药
142.6±23.9**
6.72±1.33
25.41±4.00**
Ⅴ
116.3±40.8**
6.06±0.96*
27.80±7.30**
Compared Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ with Ⅱ，*P<0.05, **P<0.013 讨论
异烟肼和利福平肝损害的机制为利福平诱导了肝药酶，从而加速了异烟肼的代谢，其代谢物具有脂质过氧化作用，引起细胞膜及线粒体膜的脂质过氧化，线粒体膜的Ca2+-ATP酶活性降低，细胞内及线粒体内Ca2+过多，致使细胞变性甚至坏死；山莨菪碱的自由基清除作用，以及继发的线粒体膜的Ca2+-ATP酶保护作用，是肝保护作用的药理学基础[4～6]。
, 百拇医药
*河南省教委自然科学基金资助课题，No 920827
作者简介：王建刚，男，38岁，硕士，副教授
参考文献
1 程建风，程修山，许义杵，李 辉.单用抗结核药与并用山莨菪碱致肝损害的临床对照试验.药物流行病学杂志，1995；4 (3)：151～2
2 Okawa H, Ohishi N, Yaji K. Assay for lipid peroxides in animal tissue s by thiobarbituric acid reaction. Anal Biochem, 1979;95(2): 351
3 徐叔云，卞如濂，陈 修主编.药理学实验方法学，第2版，北京：人民卫生出版社，488～90
4 张仁亮，王振钺，李 端，程务本.利福平对大鼠异烟肼及其代谢物乙酰肼药物动力学的影响.中国药理学报，1992；13(6)：494～6
5 Sarma GR. Rifampicin-induced release of hydrazine from isoniazid. Am Rev Respir Dis, 1986;133:1072
6 丁长海，陈敏珠，魏 伟，徐叔云.抗氧自由基药物研究进展.中国药理学通报，1992；8(5)：321～5
1998-09-02收稿，1998-10-26修回, 百拇医药
单位：(河南洛阳医学高等专科学校药理学教研室，洛阳 471003)
关键词：山莨菪碱；肝保护；异烟肼；利福平；肝毒性
中国药理学通报990431 文献标识码 A 文章编号 1001-1978(1999)04-0382-02
中国图书分类号 R 52; R 975.5； R 978.3
Protective effect of anisodamine on hepatic toxic injury induced by combining isoniazid with rifampicin in mice
WANG Jian-Gang, WANG Shu-Ying, WU Yin-Ping，ZHENG Hai-Yan, WANG Xue-Ting, LU Xi-Ming
, 百拇医药
(Dept of Pharmacology, Luoyang Medical College, Luoyang 471003)
KEY WORDS anisodamine; protective effect on liver; isoniazid; r ifampicin; hepatic toxic injury
异烟肼和利福平联合用药效果良好，二者为目前结核病短程疗法所必需。但异烟肼和利福平合用肝毒性明显增加。山莨菪碱有保肝作用且有其与抗结核药物联用可降低肝损害的临床报道[1]。本实验就山莨菪碱对异烟肼和利福平肝毒性的保护作用及其机制予以探讨。
1 材料和方法
1.1 动物与用药 昆明种小鼠 50只，♀♂各半，购自河南医科大学实验动物中心，体重(21.3±1.8) g，随机分为5组：Ⅰ组(生理盐水对照组)：生理盐水ip， 0.01ml.g-1，每天1次连用5 d；Ⅱ组(肝损伤组)：异烟肼+利福平，异烟肼(广州明兴制药厂，批号：971221-14)，利福平(武汉制药厂，批号：970403)，异烟肼和利福平分别用生理盐水配制为4g.L -1和1g.L-1溶液，均以0.01ml.g-1, ip,每日1次，利福平连用5d，异烟肼于d4、d5 ip1次；Ⅲ组(山莨菪碱小剂量组)：在Ⅱ组用药的基础上，再加用0. 25g.L-1山莨菪碱(江苏省泰兴制药厂，批号：971011)，ip, 0.01ml.g-1 ，连用5d；Ⅳ组(山莨菪碱中剂量组)：在Ⅱ组用药的基础上，ip 0.5g.L-1 山莨菪碱0.01 ml.g-1，连用5d；Ⅴ组(山莨菪碱大剂量组)：在Ⅱ组用药的基础上，ip 1g.L-1山莨菪碱0.01ml.g-1，连用5d。全部动物于d 6称体重，断头取血，剖腹取肝洗净揩干称重。
, 百拇医药
1.2 肝指数及形态学观察及血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定 肝指数=肝重(mg)/处死前体重(g)。取肝左叶，立即用福尔马林溶液固定2wk，常规切片，HE染色。用赖氏法测定血清ALT活性。
1.3 肝匀浆MDA、微粒体细胞色素P450含量、线粒体Ca2+ ATP酶活性测定 准确取肝0.3 g,加3ml生理盐水，用电动细胞匀浆机制成体积分数为10%肝匀浆，用硫代巴比妥酸法测定MDA[2]。取肝0.5g，用0.25mol.L-1蔗糖-Tris-HCl缓冲液(pH=7.4)用电动匀浆机制成体积分数为20%肝匀浆，用差速离心法提取肝线粒体和钙沉淀法制备微粒体。然后测定线粒体Ca 2+-ATP酶活力和微粒体细胞色素P450含量[3]。
1.4 统计学处理 两组间显著性检验用t检验
, 百拇医药
2 结果
2.1 山莨菪碱对肝指数、血清ALT和肝病理性改变的影响 肝指数和血清ALT结果见表1。在光学显微镜下观察，异烟肼和利福平组的小鼠大多都有肝细胞水泡样变性，有些还可见坏死，而山莨菪碱组各组损害程度明显减轻。
Tab 1 Effect of anisodamine on liver index and
serum ALT in mice (
±s, n=10) GroupLiver index
Serum ALT/U
Ⅰ
, http://www.100md.com
5.67±0.55*
30.6±7.3*
Ⅱ
6.27±0.38
47.7±9.4
Ⅲ
6.26±0.59
36.6±5.9*
Ⅳ
6.14±0.48
34.6±2.7**
, 百拇医药
Ⅴ
6.06±0.32
30.9±7.7**
Compared Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ with Ⅱ，*P<0.05
2.2 山莨菪碱对小鼠肝匀浆MDA、P450、Ca2+-ATP酶活性的影响 见表2。
Tab 2 Effect of anisodamine on malondialdehyde (MDA),cytochrome P450 and Ca2+-ATPase activity in liver
homogenate in mice (
±s, n=10) Group, 百拇医药
MDA
/nmol.g-1
Cytoc hrome P450
/μmol.g-1 Pro
Ca2+-ATPase activity
/mmol.g-1
Pro.h-1
Ⅰ
158.0±57.9*
, 百拇医药
5.89±2 .17*
21.57±3.77*
Ⅱ
210.9±57.4
7.57±1.90
16.95 ±4.34
Ⅲ
189.9±58.5
6.87±1.42
24.09±4.80**
Ⅳ
, 百拇医药
142.6±23.9**
6.72±1.33
25.41±4.00**
Ⅴ
116.3±40.8**
6.06±0.96*
27.80±7.30**
Compared Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ with Ⅱ，*P<0.05, **P<0.013 讨论
异烟肼和利福平肝损害的机制为利福平诱导了肝药酶，从而加速了异烟肼的代谢，其代谢物具有脂质过氧化作用，引起细胞膜及线粒体膜的脂质过氧化，线粒体膜的Ca2+-ATP酶活性降低，细胞内及线粒体内Ca2+过多，致使细胞变性甚至坏死；山莨菪碱的自由基清除作用，以及继发的线粒体膜的Ca2+-ATP酶保护作用，是肝保护作用的药理学基础[4～6]。
, 百拇医药
*河南省教委自然科学基金资助课题，No 920827
作者简介：王建刚，男，38岁，硕士，副教授
参考文献
1 程建风，程修山，许义杵，李 辉.单用抗结核药与并用山莨菪碱致肝损害的临床对照试验.药物流行病学杂志，1995；4 (3)：151～2
2 Okawa H, Ohishi N, Yaji K. Assay for lipid peroxides in animal tissue s by thiobarbituric acid reaction. Anal Biochem, 1979;95(2): 351
3 徐叔云，卞如濂，陈 修主编.药理学实验方法学，第2版，北京：人民卫生出版社，488～90
4 张仁亮，王振钺，李 端，程务本.利福平对大鼠异烟肼及其代谢物乙酰肼药物动力学的影响.中国药理学报，1992；13(6)：494～6
5 Sarma GR. Rifampicin-induced release of hydrazine from isoniazid. Am Rev Respir Dis, 1986;133:1072
6 丁长海，陈敏珠，魏 伟，徐叔云.抗氧自由基药物研究进展.中国药理学通报，1992；8(5)：321～5
1998-09-02收稿，1998-10-26修回, 百拇医药