小鼠视网膜神经上皮层移植后诱发免疫排斥和赦免反应的观察
作者：彭清 刘舒娅 冯秀亮 张晓红
单位：彭清(山西医科大学第一医院 030001)；刘舒娅(山西医科大学第一医院 030001)；冯秀亮(太原化工厂职工医院)；张晓红(太原化工厂职工医院)
关键词：视网膜；移植；免疫排斥/赦免；小鼠
山西医药杂志000211 摘 要：：目的 观察眼内不同部位移植视网膜神经上皮层后诱发的免疫排斥/赦免反应。方法 将新生小鼠视网膜神经上皮层分离后移植到受鼠眼结膜下、玻璃体腔和视网膜下间隙，术后2、6、12、18、35 d用光镜观察移植物的存活/排斥情况。结果 位于结膜下移植物2 d内发生排斥反应，而位于玻璃体腔和视网膜下间隙的移植物不仅未被排斥，而且能进一步生长发育。结论 玻璃体腔和视网膜下间隙是免疫赦免区。
Observation on immune rejection and immune privilege elicited by neonatal neural retina grafting
, 百拇医药
Peng Qing,Liu Shuya,Fen Xiuliang,et al
(The First Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan，030001,China)
Abstract：Objective To observe the immune rejection/privilege reaction by neonatal neural retina grafting in different sites of the eye.Method Separate the neonatal neural retinae then transfer them to subconjunctival space (SCon),vitreous cavity (VC) and subretinal space.The conditions of grafts survival/rejection were observed on 2nd,6th,12th,18th,and 35th day after the operation by light microscopy.Result The data showed that grafts in VC and subretinal space not only averted themselves from any rejection but also attained further development.Conclusion The vitreous cavity and subretinal space are of immune privilege.
, 百拇医药
Key words：Retina; Transplantation; Immune rejection/privilege; Mice
视网膜移植可治疗许多因视网膜变性、炎症或外伤而导致的失明[1，2]，在视网膜移植中，供体的选择和移植部位免疫特性至关重要。从减低移植排斥反应的角度考虑，供体选用胚胎型组织优于成年组织，且不同移植部位可诱发不同的免疫反应，如移植到前房的同种抗原，不被排斥而是发生前房相关性免疫偏离(anterior chamber associated immune deviation,ACAID)[3，4]，说明前房在眼组织中是免疫赦免区。为了证实玻璃体腔和视网膜下间隙也是免疫赦免区，我们进行了以下实验，初获成功。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
, 百拇医药 动物为我院实验动物中心提供的封闭群昆明小鼠(KM)。供体为出生24 h内的新生小鼠，受体为8～12周龄的成年雌性小鼠，共60只，随机分为三组：Ⅰ组为结膜下移植组，Ⅱ组为玻璃体腔移植组，Ⅲ组为视网膜下间隙移植组，各20只鼠，分别在移植后2、6、12、18、35 d时各摘取4只眼球进行光镜检查。
1.2 视网膜分离及移植方法
1.2.1 视网膜下间隙移植方法：供体视网膜神经上皮层即视网膜内9层，不包括视网膜色素上皮层的分离，移植方法见文献[5]。
1.2.2 结膜下和玻璃体腔移植方法：与上述移植方法基本相同，只是移植时针尖分别位于颞上方结膜下和经扁平部进入的玻璃体腔中央部。
1.3 病理组织学检查
在解剖显微镜下摘取移植后不同时刻点和不同日龄新生小鼠眼球，立刻置于混合固定液中[5]，24 h后移入10%中性甲醛中，48 h后制片按常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜检查。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 位于结膜下移植物：在移植后2 d内可见移植物呈圆形、椭圆形或斑块状，边界非常清楚，之后移植物变扁平，境界模糊，体积逐渐缩小，2周后移植物就不能看到，整个过程中未见有任何炎症反应。光镜检查，未见移植部位形成花环结构或细胞层状排列，偶见少量炎症细胞浸润。
2.2 位于玻璃体腔和视网膜下间隙的移植物：移植后2 d散瞳可见玻璃体腔内移植物缩小，大部分靠近视网膜内界膜，移植成功率为100%(20/20眼数)，而视网膜下间隙移植成功率为40%(8/20眼数)，其余50%(10/20只眼)的移植物位于视网膜内层组织，还有2只眼球发生肉芽肿性炎症反应10%(2/20只眼数)。光镜检查可见存活的移植物在玻璃体腔、视网膜下间隙及视网膜内层组织中均形成花环结构，花环的中央由感光细胞的内外节组成，其外围由新生小鼠视网膜祖细胞的核层环绕。所有标本均未见有淋巴细胞或其他炎症细胞浸润。
3 讨 论
, 百拇医药
在眼内不同部位移植可形成不同的免疫反应，这与移植物的组织相容性抗原表达及移植部位有密切关系。我们采用出生24 h内的新生小鼠作为供体是基于以下考虑：①新生小鼠视网膜的移植抗原即主要组织相容性Ⅰ类抗原(MHC-Ⅰ)表达较弱[6]，可减低排斥反应的机率；②新生小鼠的视网膜未发育完善，在出生3 d内视网膜中只有祖细胞层和神经节细胞层，依其在受体内继续分化发育的特征，可作为判断移植物存活的良好依据。
本实验表明，新生小鼠的视网膜神经上皮层移植到结膜下很快就被排斥掉，同时有少量炎症细胞的浸润，说明结膜下组织不是一个免疫赦免区，不允许移植物存活；而位于玻璃体腔和视网膜下间隙的移植物在观察期内不仅能够存活而且能进一步生长发育，形成花环结构，花环中央是由感光细胞内外节组成，花环外围是由祖细胞核层组成，提示未发育完善的神经上皮层在受体组织中得到进一步发育而无明显排斥反应发生。
另有2只眼球出现严重破坏，发生肉芽肿性反应。推测其原因可能是发生免疫排斥反应的同时也出现自身免疫反应，因为在特定条件下具有免疫赦免特征的组织可被摧毁而诱发移植排斥及自身免疫等反应。从这2只眼球的病理来看，不仅移植物被排斥掉同时受体组织也被彻底摧毁，因而我们考虑，同时发生了自身免疫反应，可能是在排斥反应的过程中眼内组织特异性抗原释放的结果。
, 百拇医药
总之，本实验表明，眼内结膜下组织是免疫排斥区，而玻璃体腔和视网膜下间隙是免疫赦免区，可允许移植物存活并生长发育。至于移植物的形态改变、功能重建、有否正常传导等均有待于进一步的研究来证实。
作者简介：彭清，女，1965年9月生，主治医师，山西医科大学第一医院，030001
参考文献：
1，Yamamoto S,Du J,Gouras P,et al.Retinal pigment epithelial transplants and retinal function in RCS rats.Invest Ophthalmol Vis Sci,1993,34:3068-3075
2，彭清，任佩贤，刘舒娅.小鼠光性损伤后视网膜神经上皮层移植的初步探讨.中华眼科杂志，1999，35：265-267
, 百拇医药
3，Jiang LQ,Streilein JW.Immunity and immune privilege elicited by autoantigens expressed on syngeneic neonatal neural retina grafts.Current Eye Research,1992,11:697-709
4，任佩贤.前房相关性免疫偏离与葡萄膜炎防治的展望.中华眼底病杂志，1995，11：56-58
5，任佩贤.彭清，刘舒娅.小鼠视网膜神经上皮层同种异体移植的初步观察.中华眼底病杂志，1996，12：236-238
6，Wang HM,Kaplan HJ,Chan WC，et al.The distribution and ontogeny of MHC antigens in murine ocular tissue.Invest Ophthalmol Vis Sci,1987,28:1383-1385
收稿日期：1999-08-30, 百拇医药
单位：彭清(山西医科大学第一医院 030001)；刘舒娅(山西医科大学第一医院 030001)；冯秀亮(太原化工厂职工医院)；张晓红(太原化工厂职工医院)
关键词：视网膜；移植；免疫排斥/赦免；小鼠
山西医药杂志000211 摘 要：：目的 观察眼内不同部位移植视网膜神经上皮层后诱发的免疫排斥/赦免反应。方法 将新生小鼠视网膜神经上皮层分离后移植到受鼠眼结膜下、玻璃体腔和视网膜下间隙，术后2、6、12、18、35 d用光镜观察移植物的存活/排斥情况。结果 位于结膜下移植物2 d内发生排斥反应，而位于玻璃体腔和视网膜下间隙的移植物不仅未被排斥，而且能进一步生长发育。结论 玻璃体腔和视网膜下间隙是免疫赦免区。
Observation on immune rejection and immune privilege elicited by neonatal neural retina grafting
, 百拇医药
Peng Qing,Liu Shuya,Fen Xiuliang,et al
(The First Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan，030001,China)
Abstract：Objective To observe the immune rejection/privilege reaction by neonatal neural retina grafting in different sites of the eye.Method Separate the neonatal neural retinae then transfer them to subconjunctival space (SCon),vitreous cavity (VC) and subretinal space.The conditions of grafts survival/rejection were observed on 2nd,6th,12th,18th,and 35th day after the operation by light microscopy.Result The data showed that grafts in VC and subretinal space not only averted themselves from any rejection but also attained further development.Conclusion The vitreous cavity and subretinal space are of immune privilege.
, 百拇医药
Key words：Retina; Transplantation; Immune rejection/privilege; Mice
视网膜移植可治疗许多因视网膜变性、炎症或外伤而导致的失明[1，2]，在视网膜移植中，供体的选择和移植部位免疫特性至关重要。从减低移植排斥反应的角度考虑，供体选用胚胎型组织优于成年组织，且不同移植部位可诱发不同的免疫反应，如移植到前房的同种抗原，不被排斥而是发生前房相关性免疫偏离(anterior chamber associated immune deviation,ACAID)[3，4]，说明前房在眼组织中是免疫赦免区。为了证实玻璃体腔和视网膜下间隙也是免疫赦免区，我们进行了以下实验，初获成功。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
, 百拇医药 动物为我院实验动物中心提供的封闭群昆明小鼠(KM)。供体为出生24 h内的新生小鼠，受体为8～12周龄的成年雌性小鼠，共60只，随机分为三组：Ⅰ组为结膜下移植组，Ⅱ组为玻璃体腔移植组，Ⅲ组为视网膜下间隙移植组，各20只鼠，分别在移植后2、6、12、18、35 d时各摘取4只眼球进行光镜检查。
1.2 视网膜分离及移植方法
1.2.1 视网膜下间隙移植方法：供体视网膜神经上皮层即视网膜内9层，不包括视网膜色素上皮层的分离，移植方法见文献[5]。
1.2.2 结膜下和玻璃体腔移植方法：与上述移植方法基本相同，只是移植时针尖分别位于颞上方结膜下和经扁平部进入的玻璃体腔中央部。
1.3 病理组织学检查
在解剖显微镜下摘取移植后不同时刻点和不同日龄新生小鼠眼球，立刻置于混合固定液中[5]，24 h后移入10%中性甲醛中，48 h后制片按常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜检查。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 位于结膜下移植物：在移植后2 d内可见移植物呈圆形、椭圆形或斑块状，边界非常清楚，之后移植物变扁平，境界模糊，体积逐渐缩小，2周后移植物就不能看到，整个过程中未见有任何炎症反应。光镜检查，未见移植部位形成花环结构或细胞层状排列，偶见少量炎症细胞浸润。
2.2 位于玻璃体腔和视网膜下间隙的移植物：移植后2 d散瞳可见玻璃体腔内移植物缩小，大部分靠近视网膜内界膜，移植成功率为100%(20/20眼数)，而视网膜下间隙移植成功率为40%(8/20眼数)，其余50%(10/20只眼)的移植物位于视网膜内层组织，还有2只眼球发生肉芽肿性炎症反应10%(2/20只眼数)。光镜检查可见存活的移植物在玻璃体腔、视网膜下间隙及视网膜内层组织中均形成花环结构，花环的中央由感光细胞的内外节组成，其外围由新生小鼠视网膜祖细胞的核层环绕。所有标本均未见有淋巴细胞或其他炎症细胞浸润。
3 讨 论
, 百拇医药
在眼内不同部位移植可形成不同的免疫反应，这与移植物的组织相容性抗原表达及移植部位有密切关系。我们采用出生24 h内的新生小鼠作为供体是基于以下考虑：①新生小鼠视网膜的移植抗原即主要组织相容性Ⅰ类抗原(MHC-Ⅰ)表达较弱[6]，可减低排斥反应的机率；②新生小鼠的视网膜未发育完善，在出生3 d内视网膜中只有祖细胞层和神经节细胞层，依其在受体内继续分化发育的特征，可作为判断移植物存活的良好依据。
本实验表明，新生小鼠的视网膜神经上皮层移植到结膜下很快就被排斥掉，同时有少量炎症细胞的浸润，说明结膜下组织不是一个免疫赦免区，不允许移植物存活；而位于玻璃体腔和视网膜下间隙的移植物在观察期内不仅能够存活而且能进一步生长发育，形成花环结构，花环中央是由感光细胞内外节组成，花环外围是由祖细胞核层组成，提示未发育完善的神经上皮层在受体组织中得到进一步发育而无明显排斥反应发生。
另有2只眼球出现严重破坏，发生肉芽肿性反应。推测其原因可能是发生免疫排斥反应的同时也出现自身免疫反应，因为在特定条件下具有免疫赦免特征的组织可被摧毁而诱发移植排斥及自身免疫等反应。从这2只眼球的病理来看，不仅移植物被排斥掉同时受体组织也被彻底摧毁，因而我们考虑，同时发生了自身免疫反应，可能是在排斥反应的过程中眼内组织特异性抗原释放的结果。
, 百拇医药
总之，本实验表明，眼内结膜下组织是免疫排斥区，而玻璃体腔和视网膜下间隙是免疫赦免区，可允许移植物存活并生长发育。至于移植物的形态改变、功能重建、有否正常传导等均有待于进一步的研究来证实。
作者简介：彭清，女，1965年9月生，主治医师，山西医科大学第一医院，030001
参考文献：
1，Yamamoto S,Du J,Gouras P,et al.Retinal pigment epithelial transplants and retinal function in RCS rats.Invest Ophthalmol Vis Sci,1993,34:3068-3075
2，彭清，任佩贤，刘舒娅.小鼠光性损伤后视网膜神经上皮层移植的初步探讨.中华眼科杂志，1999，35：265-267
, 百拇医药
3，Jiang LQ,Streilein JW.Immunity and immune privilege elicited by autoantigens expressed on syngeneic neonatal neural retina grafts.Current Eye Research,1992,11:697-709
4，任佩贤.前房相关性免疫偏离与葡萄膜炎防治的展望.中华眼底病杂志，1995，11：56-58
5，任佩贤.彭清，刘舒娅.小鼠视网膜神经上皮层同种异体移植的初步观察.中华眼底病杂志，1996，12：236-238
6，Wang HM,Kaplan HJ,Chan WC，et al.The distribution and ontogeny of MHC antigens in murine ocular tissue.Invest Ophthalmol Vis Sci,1987,28:1383-1385
收稿日期：1999-08-30, 百拇医药