溃疡性结肠炎异位表达PS2蛋白的检测及意义
作者：侯恒 马存根 元新娥 范宇涛 田秀娟
单位：侯恒(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；马存根(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；元新娥(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；范宇涛(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；田秀娟(大同市第五人民医院)
关键词：PS2蛋白；溃疡性结肠炎
山西医药杂志000203 摘 要：目的 探讨PS2蛋白在溃疡性结肠炎组织中异位表达的意义。方法 用免疫组织化学法检测了30例溃疡性结肠炎和28名正常人结肠组织中PS2和CEA的表达。结果 显示30例溃疡性结肠炎PS2蛋白阳性的7例，阳性率23.3%，PS2只在伴有不典型增生的溃疡性结肠炎中表达；而CEA阳性的22例，阳性率73.3%。28名正常人结肠组织中PS2阳性的1例，CEA阳性的2例。结论 PS2蛋白在溃疡性结肠炎组织中的异位表达可作为溃疡性结肠炎的病情观察指标。
, 百拇医药
Study on ectopic expression of PS2 protein in the tissue of ulcerative colitis
Hou Heng Ma Cungen Yuan Xin′e et al.
(Affiliated Hospital of Datong Medical College,Datong,037008,China)
Abstract：Objective To elucidate the significance of expression of PS2 protein in the tissue of ulcerative colitis.Method PS2 and CEA protein expression in the tissues from 30 patients with ulcerative colitis and 28 normal controls were measured by immunohistochemical method.Results It was found that PS2 was positive in 7 of the 30 (23.3%) patients with ulcerative colitis.CEA was positive in 22 of the 30 (73.3%).PS2 was expressed only in the patients with ulcerative colitis with atypical hyperplasia.Conclusion The PS2 protein may be expressed ectopically in the tissue of ulcerative colitis.Detecting the PS2 protein expression in the colonic mucosa can be used as a marker for observing the progression of ulcerative colitis.
, 百拇医药
Key words：PS2 protein； Ulcerative colitis
PS2蛋白属于三叶草肽家族成员之一，又名PS2三叶草蛋白，PS2仅在正常胃粘膜上皮细胞和某些肿瘤组织中异位表达，在正常结肠上皮细胞不表达[1，2]。溃疡性结肠炎约有3%～5%的病人发生癌变，癌变又不易被肠镜和钡灌肠造影所发现，加之腹泻等症状不具特异性，使诊断更为困难[3]。鉴于目前溃疡性结肠炎癌变的诊断和预后估计尚无特异性较高的组织学指标。为此，本文研究了溃疡性结肠炎和正常结肠粘膜组织中PS2蛋白和CEA的表达，以期了解PS2蛋白在溃疡性结肠炎组织中异位表达的意义及临床价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
, http://www.100md.com
肠镜下病理活检及手术标本，查存档资料，凡样本采集前用过激素治疗的标本不入选，溃疡性结肠炎收集1995年1月至1998年6月的标本，所有标本均为病理确诊。溃疡性结肠炎共30例，其中男14例，女16例，年龄18～68岁，平均年龄39.9岁。正常对照组为结肠镜检和病理检查均正常的乙状结肠标本，共28名，其中男21名，女7名，年龄24～58岁，平均年龄40.6岁。
1.2 方法
1.2.1 试剂来源：鼠抗人PS2单抗、过氧化物酶标记的抗鼠IgG单抗、SABC试剂、AEC检测试剂和多聚赖氨酸均购于武汉博士德生物工程公司；鼠抗人CEA单抗，过氧化物酶标记抗鼠IgG单抗和DAB检测试剂购于北京中山生物试剂公司。
1.2.2 玻片制备：玻片先用稀盐酸浸泡24 h后洗净、晾干，用多聚赖氨酸处理，晾干备用。石蜡包埋组织切片厚度为3～5 μm，组织片经常规脱蜡至水后进行微波抗原修复。
, 百拇医药
1.2.3 PS2和CEA蛋白表达的检测：PS2和CEA蛋白表达的检测严格按照试剂说明书介绍的方法进行。即石蜡切片，常规脱蜡梯度酒精至水→3%过氧化氢浸泡15 min，消除内源性过氧化物酶的活性→蒸馏水洗2 min×3次→微波修复抗原(370 W，8～10 min)→抗原修复液，室温10 min→蒸馏水洗2 min×3次→滴加正常山羊血清，室温10 min→倾去血清，加入一抗，37 ℃孵育1～2 h→PBS洗5 min×3次→滴加生物素标记二抗，37 ℃孵育1～2 h→PBS洗5 min×3次→DAB或AEC显色5～20 min→苏木素复染，脱水，透明，封片。显微镜观察。
1.2.4 免疫组化对照：阳性对照用已知PS2表达阳性标本作对照(厂家提供)；阴性对照用PBS液代替一抗、二抗、分别作阴性对照。
1.2.5 结果判断：AEC染色的PS2组织片显红色，凡细胞染成红色，每高倍视野阳性细胞数大于10%，强度高于本底色者为阳性；CEA为DAB染色，凡染成棕黄色，强度高于本底色和每高倍视野阳性细胞数大于10%的为阳性片。
, 百拇医药
1.3 统计学分析
直接计算出PS2和CEA的敏感性。
2 结 果
2.1 PS2和CEA在溃疡性结肠炎和正常结肠粘膜表达情况，见表1。在溃疡性结肠炎中PS2表达的阳性率为23.3%，而CEA在溃疡性结肠炎组织中表达的阳性率高达73.3%。7例PS2阳性者CEA也均为阳性。
表1 PS2蛋白和CEA蛋白在不同组织中表达情况 组别
例
数
PS2
, 百拇医药
CEA
阳性
阴性
阳性
阴性
溃疡性结肠炎组
30
7
23
22
8
正常结肠组
28
, 百拇医药 1
27
2
26
2.2 PS2蛋白主要在细胞浆内表达，染色显细胞浆型和核周围型，主要分布在粘膜上皮细胞，以粘膜肠腔侧为主；CEA显色以细胞浆细胞膜型的分布为主。溃疡性结肠炎以极化型分布为主。
3 讨 论
PS2三叶草蛋白在正常胃粘膜上皮细胞中表达和分泌，它具有增加粘液聚集度，从而增强胃粘膜表面粘液屏障的功能。在溃疡的修复过程中表达较高，PS2的表达有利于损伤周边粘膜细胞的移动，加速损伤的修复作用[4，5]。胃粘膜细胞癌变时，PS2蛋白的表达消失，说明PS2蛋白对胃粘膜具有保护作用和加速组织损伤修复的功能。由于它在胃癌组织中不存在，有人认为PS2是一种抑癌蛋白。而在其他肿瘤组织中的异位表达，使其所处抑癌蛋白的地位有所动摇[6，7]。本文结果表明，在正常的结肠粘膜组织中PS2蛋白不表达，伴不典型增生的溃疡性结肠炎组织中PS2蛋白表达，这一结果与Lefebvre和Hauser等[2，4]的研究结果有相同之处，PS2不在胃粘膜之外的正常组织中表达。本文所发现的PS2蛋白只在溃疡性结肠炎伴不典型增生者的组织中表达，提示PS2蛋白可能参与了结肠粘膜细胞癌变的过程，其机制尚待进一步探讨。
, 百拇医药
PS2在正常结肠粘膜和不伴有异常增生的溃疡性结肠炎组织中不表达[8]。提示可作为溃疡性结肠炎患者的组织学检测指标，并作为观察疗效的指标。若能如此，为溃疡性结肠炎的追踪观察提供检测标志物。因此，对上述组织进行了癌胚抗原(CEA)的组织化学检测，结果发现，CEA在溃疡性结肠炎中的阳性率也相当高，高达73.3%。PS2的阳性率仅23.3%，并都在伴有不同程度不典型增生的患者中表达。尽管CEA在溃疡性结肠炎中的表达率相当高，但由于其不具特异性，绝大多数内脏恶性肿瘤都可出现阳性，因此无助于溃疡性结肠炎的诊断和预后估计。虽然PS2表达率较低，但都在伴有不典型增生的溃疡性结肠炎中表达，提示PS2可作为溃疡性结肠炎的病情观察指标。若溃疡性结肠炎病人PS2阳性说明有癌变倾向。本文结果显示，7例PS2阳性的溃疡性结肠炎病人，CEA均为阳性。提示同时检测CEA和PS2更有助于溃疡性结肠炎病情和预后的判断。若二者均阳性要高度警惕癌变，应严密观察或早期手术治疗。
, http://www.100md.com
总之，PS2蛋白在结肠组织中异位表达，可作为溃疡性结肠炎的病情观察指标，用于追踪观察溃疡性结肠炎病变是否有癌变倾向。但能否作为癌前病变的标志，尚待进一步临床研究。
基金项目：山西省归国留学人员科研基金资助〔晋教计财(1997)93号〕
作者简介：侯恒，男，1949年9月生，副教授，大同医学高等专科学校附属医院，037008
参考文献：
1，Hanby AM,Poulson R,Singh S,et al.Spasmolytic polypeptide is a major antral peptide:distribution of the trefoil peptides human spasmolytic polypeptide and PS2 in the stomach.Gastroenterology,1993,105:1110-1116
, 百拇医药
2，Lefebvre O,Wolf C,Kedinger M,et al.The mouse one P-domain (PS2) and two P-domain (mSP) gene exhibit distinct patterns of expression.J Cell Biol,1993,122:191-198
3，邓长生，主编.炎症性肠病.北京：人民卫生出版社，1995.257-263
4，Hauser F,Hoffmann W.xP1 and xP4 P-domain peptides expression in Xenopus laevis stomach mucosa.J Biol Chem,1991,266:21306-21309
5，Rio MC，Chambon P.The PS2 gene,mRNA and protein:a potential marker for human breast cancer.Cancer Cells,1990,2:269-274
, 百拇医药
6，Rio MC,Chenard MP,Wolf C,et al.Induction of PS2 and hSP gene as markers of mucosal ulceration of the digestive tract.Gastroenterology,1991,100:375-379
7，Wright NA,Poulson R,Stamp GW,et al.Epidermal growth factor (EGF/URD) induces expression of regulatory peptides in damaged human gastrointestinal tissue.J Pathol,1990,162:279-284
8，Ribieras S,Tomasetto C，Rio MC.PS2/TFF1 trefoil factor,from basic research to clinical applications.Biochem Biophys Acta,1998,1378:61-77
收稿日期：1999-12-06, 百拇医药
单位：侯恒(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；马存根(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；元新娥(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；范宇涛(大同医学高等专科学校附属医院 037008)；田秀娟(大同市第五人民医院)
关键词：PS2蛋白；溃疡性结肠炎
山西医药杂志000203 摘 要：目的 探讨PS2蛋白在溃疡性结肠炎组织中异位表达的意义。方法 用免疫组织化学法检测了30例溃疡性结肠炎和28名正常人结肠组织中PS2和CEA的表达。结果 显示30例溃疡性结肠炎PS2蛋白阳性的7例，阳性率23.3%，PS2只在伴有不典型增生的溃疡性结肠炎中表达；而CEA阳性的22例，阳性率73.3%。28名正常人结肠组织中PS2阳性的1例，CEA阳性的2例。结论 PS2蛋白在溃疡性结肠炎组织中的异位表达可作为溃疡性结肠炎的病情观察指标。
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Study on ectopic expression of PS2 protein in the tissue of ulcerative colitis
Hou Heng Ma Cungen Yuan Xin′e et al.
(Affiliated Hospital of Datong Medical College,Datong,037008,China)
Abstract：Objective To elucidate the significance of expression of PS2 protein in the tissue of ulcerative colitis.Method PS2 and CEA protein expression in the tissues from 30 patients with ulcerative colitis and 28 normal controls were measured by immunohistochemical method.Results It was found that PS2 was positive in 7 of the 30 (23.3%) patients with ulcerative colitis.CEA was positive in 22 of the 30 (73.3%).PS2 was expressed only in the patients with ulcerative colitis with atypical hyperplasia.Conclusion The PS2 protein may be expressed ectopically in the tissue of ulcerative colitis.Detecting the PS2 protein expression in the colonic mucosa can be used as a marker for observing the progression of ulcerative colitis.
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Key words：PS2 protein； Ulcerative colitis
PS2蛋白属于三叶草肽家族成员之一，又名PS2三叶草蛋白，PS2仅在正常胃粘膜上皮细胞和某些肿瘤组织中异位表达，在正常结肠上皮细胞不表达[1，2]。溃疡性结肠炎约有3%～5%的病人发生癌变，癌变又不易被肠镜和钡灌肠造影所发现，加之腹泻等症状不具特异性，使诊断更为困难[3]。鉴于目前溃疡性结肠炎癌变的诊断和预后估计尚无特异性较高的组织学指标。为此，本文研究了溃疡性结肠炎和正常结肠粘膜组织中PS2蛋白和CEA的表达，以期了解PS2蛋白在溃疡性结肠炎组织中异位表达的意义及临床价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
, http://www.100md.com
肠镜下病理活检及手术标本，查存档资料，凡样本采集前用过激素治疗的标本不入选，溃疡性结肠炎收集1995年1月至1998年6月的标本，所有标本均为病理确诊。溃疡性结肠炎共30例，其中男14例，女16例，年龄18～68岁，平均年龄39.9岁。正常对照组为结肠镜检和病理检查均正常的乙状结肠标本，共28名，其中男21名，女7名，年龄24～58岁，平均年龄40.6岁。
1.2 方法
1.2.1 试剂来源：鼠抗人PS2单抗、过氧化物酶标记的抗鼠IgG单抗、SABC试剂、AEC检测试剂和多聚赖氨酸均购于武汉博士德生物工程公司；鼠抗人CEA单抗，过氧化物酶标记抗鼠IgG单抗和DAB检测试剂购于北京中山生物试剂公司。
1.2.2 玻片制备：玻片先用稀盐酸浸泡24 h后洗净、晾干，用多聚赖氨酸处理，晾干备用。石蜡包埋组织切片厚度为3～5 μm，组织片经常规脱蜡至水后进行微波抗原修复。
, 百拇医药
1.2.3 PS2和CEA蛋白表达的检测：PS2和CEA蛋白表达的检测严格按照试剂说明书介绍的方法进行。即石蜡切片，常规脱蜡梯度酒精至水→3%过氧化氢浸泡15 min，消除内源性过氧化物酶的活性→蒸馏水洗2 min×3次→微波修复抗原(370 W，8～10 min)→抗原修复液，室温10 min→蒸馏水洗2 min×3次→滴加正常山羊血清，室温10 min→倾去血清，加入一抗，37 ℃孵育1～2 h→PBS洗5 min×3次→滴加生物素标记二抗，37 ℃孵育1～2 h→PBS洗5 min×3次→DAB或AEC显色5～20 min→苏木素复染，脱水，透明，封片。显微镜观察。
1.2.4 免疫组化对照：阳性对照用已知PS2表达阳性标本作对照(厂家提供)；阴性对照用PBS液代替一抗、二抗、分别作阴性对照。
1.2.5 结果判断：AEC染色的PS2组织片显红色，凡细胞染成红色，每高倍视野阳性细胞数大于10%，强度高于本底色者为阳性；CEA为DAB染色，凡染成棕黄色，强度高于本底色和每高倍视野阳性细胞数大于10%的为阳性片。
, 百拇医药
1.3 统计学分析
直接计算出PS2和CEA的敏感性。
2 结 果
2.1 PS2和CEA在溃疡性结肠炎和正常结肠粘膜表达情况，见表1。在溃疡性结肠炎中PS2表达的阳性率为23.3%，而CEA在溃疡性结肠炎组织中表达的阳性率高达73.3%。7例PS2阳性者CEA也均为阳性。
表1 PS2蛋白和CEA蛋白在不同组织中表达情况 组别
例
数
PS2
, 百拇医药
CEA
阳性
阴性
阳性
阴性
溃疡性结肠炎组
30
7
23
22
8
正常结肠组
28
, 百拇医药 1
27
2
26
2.2 PS2蛋白主要在细胞浆内表达，染色显细胞浆型和核周围型，主要分布在粘膜上皮细胞，以粘膜肠腔侧为主；CEA显色以细胞浆细胞膜型的分布为主。溃疡性结肠炎以极化型分布为主。
3 讨 论
PS2三叶草蛋白在正常胃粘膜上皮细胞中表达和分泌，它具有增加粘液聚集度，从而增强胃粘膜表面粘液屏障的功能。在溃疡的修复过程中表达较高，PS2的表达有利于损伤周边粘膜细胞的移动，加速损伤的修复作用[4，5]。胃粘膜细胞癌变时，PS2蛋白的表达消失，说明PS2蛋白对胃粘膜具有保护作用和加速组织损伤修复的功能。由于它在胃癌组织中不存在，有人认为PS2是一种抑癌蛋白。而在其他肿瘤组织中的异位表达，使其所处抑癌蛋白的地位有所动摇[6，7]。本文结果表明，在正常的结肠粘膜组织中PS2蛋白不表达，伴不典型增生的溃疡性结肠炎组织中PS2蛋白表达，这一结果与Lefebvre和Hauser等[2，4]的研究结果有相同之处，PS2不在胃粘膜之外的正常组织中表达。本文所发现的PS2蛋白只在溃疡性结肠炎伴不典型增生者的组织中表达，提示PS2蛋白可能参与了结肠粘膜细胞癌变的过程，其机制尚待进一步探讨。
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PS2在正常结肠粘膜和不伴有异常增生的溃疡性结肠炎组织中不表达[8]。提示可作为溃疡性结肠炎患者的组织学检测指标，并作为观察疗效的指标。若能如此，为溃疡性结肠炎的追踪观察提供检测标志物。因此，对上述组织进行了癌胚抗原(CEA)的组织化学检测，结果发现，CEA在溃疡性结肠炎中的阳性率也相当高，高达73.3%。PS2的阳性率仅23.3%，并都在伴有不同程度不典型增生的患者中表达。尽管CEA在溃疡性结肠炎中的表达率相当高，但由于其不具特异性，绝大多数内脏恶性肿瘤都可出现阳性，因此无助于溃疡性结肠炎的诊断和预后估计。虽然PS2表达率较低，但都在伴有不典型增生的溃疡性结肠炎中表达，提示PS2可作为溃疡性结肠炎的病情观察指标。若溃疡性结肠炎病人PS2阳性说明有癌变倾向。本文结果显示，7例PS2阳性的溃疡性结肠炎病人，CEA均为阳性。提示同时检测CEA和PS2更有助于溃疡性结肠炎病情和预后的判断。若二者均阳性要高度警惕癌变，应严密观察或早期手术治疗。
, http://www.100md.com
总之，PS2蛋白在结肠组织中异位表达，可作为溃疡性结肠炎的病情观察指标，用于追踪观察溃疡性结肠炎病变是否有癌变倾向。但能否作为癌前病变的标志，尚待进一步临床研究。
基金项目：山西省归国留学人员科研基金资助〔晋教计财(1997)93号〕
作者简介：侯恒，男，1949年9月生，副教授，大同医学高等专科学校附属医院，037008
参考文献：
1，Hanby AM,Poulson R,Singh S,et al.Spasmolytic polypeptide is a major antral peptide:distribution of the trefoil peptides human spasmolytic polypeptide and PS2 in the stomach.Gastroenterology,1993,105:1110-1116
, 百拇医药
2，Lefebvre O,Wolf C,Kedinger M,et al.The mouse one P-domain (PS2) and two P-domain (mSP) gene exhibit distinct patterns of expression.J Cell Biol,1993,122:191-198
3，邓长生，主编.炎症性肠病.北京：人民卫生出版社，1995.257-263
4，Hauser F,Hoffmann W.xP1 and xP4 P-domain peptides expression in Xenopus laevis stomach mucosa.J Biol Chem,1991,266:21306-21309
5，Rio MC，Chambon P.The PS2 gene,mRNA and protein:a potential marker for human breast cancer.Cancer Cells,1990,2:269-274
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6，Rio MC,Chenard MP,Wolf C,et al.Induction of PS2 and hSP gene as markers of mucosal ulceration of the digestive tract.Gastroenterology,1991,100:375-379
7，Wright NA,Poulson R,Stamp GW,et al.Epidermal growth factor (EGF/URD) induces expression of regulatory peptides in damaged human gastrointestinal tissue.J Pathol,1990,162:279-284
8，Ribieras S,Tomasetto C，Rio MC.PS2/TFF1 trefoil factor,from basic research to clinical applications.Biochem Biophys Acta,1998,1378:61-77
收稿日期：1999-12-06, 百拇医药