脑活素注射液细菌内毒素检查法初探
作者：许永军 许秀娟
单位：315300 浙江省慈溪人民医院
关键词：脑活素；检查，细菌内毒素；试验，干扰素
医药导报990549 脑活素注射液是一种制剂，本文通过实验考察脑活素注射液对细菌内毒素检查的干扰情况，证明其对细菌内毒素检查无干扰作用，可用于生产过程质控及代替成品热原检查。
1 实验材料
脑活素注射液：奥地利依比威药厂，规格：10ml/支，含肽2152mg，批号：702954，703967，704171。鲎试剂(TAL)：湛江中美生物有限公司，规格：0.25EU/支，0.5ml/支，批号：970124。细菌内毒素工作标准品(CES)：中国药品生物制品检定所，规格：60EU/支，批号9703。细菌内毒素检查用水(BETW，以下简称水)：湛江中美生物有限公司，规格：5ml/支，批号：970318。细菌内毒素检查用具一套，按规定除热原。
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2 实验方法与结果
2.1 TAL标示灵敏度(λb)复核试验 按《中国药典》(1995年版二部)细菌内毒素检查法操作结果：λb=0.25EU/ml，内毒素浓度(EU/ml)0.5(++++)，0.25(++++)，0.125(----)，0.06(----)；NC(--)；λc=0.25EU/ml。TAL(970124)，λc=0.25EU/ml。λc=λb，表明该批号TAL灵敏度符合规定。
2.2 脑活素注射液对细菌内毒素检查的干扰评价试验
2.2.1 样品内毒素理论限值的计算 本品厂商提供的最大人体剂量(M)为0.5ml/kg，细菌内毒素阈值(K)为5.0EU/kg，细菌内毒素理论限值(L)为：L=K/M=(5.0EU/kg)/(0.5ml/kg)=10EU/ml。
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2.2.2 样品稀释 以鲎试剂灵敏度0.5EU/ml为基准，计算出相应的最大有效稀释倍数：D=L/λ=(10EU/ml)/(0.5EU/ml)=20倍。以半最大有效稀释倍数(HD)为起始稀释倍数，用水进行等倍稀释，得样品的稀释液系列：1∶10，1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，记此系列溶液为Sw。
2.2.3 制备含2λ内毒素的系列稀释液 另制备一同样的稀释液系列溶液，并使每一份稀释液都含有2λ内毒素，记此系列溶液为SE。
2.2.4 建NSw管和PSE管并进行反应 选灵敏度λb为0.25EU/ml的TAL，分别与Sw和SE两个系列稀释液反应，依次记为NSw和PSE。试验重复两管。结果见表1，NSw管全部阴性，PSE管全部阳性。D10所对应的TAL灵敏度为λ=L/D=10(EU/ml)/10=1EU/ml。说明任何规格灵敏度的鲎试剂都可以做干扰试验，样品对鲎试剂凝集反应无抑制作用。
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表1 脑活素注射液干扰评价试验结果 项目
样品稀释倍数
10
20
40
80
160
NSw----------
PSE
++
++
++
++
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++
注：TAL批号970124；λb=0.25EU/ml2.3 干扰试验 选λb=0.25EU/ml的TAL，按《中国药典》(1995年版二部)细菌内毒素检查法规定进行干扰试验。
2.3.1 稀释内毒素 用水将内毒素稀释成2λb,λb，0.5λb,0.25λb浓度的系列内毒素溶液，即0.5，0.25，0.125，0.06EU/ml。
2.3.2 干扰试验及结果 取三批合格的脑活素注射液，分别作1∶40稀释(D)，用这些样品的稀释液分别复溶TAL，然后与系列内毒素溶液反应，另外以水复溶TAL与同样的内毒素溶液反应相比较，试验重复两管。结果见表2，样品(批号702954，703967，704171)以及水(批号970318)测得的鲎试剂灵敏度λ′c=λb=0.25EU/ml，表明供试品在该浓度下不干扰试验。
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表2 脑活素注射液1∶40稀释液的干扰试验结果 EU/ml TAL复溶液
内毒素溶液(EU/ml)
NC
λ′c
0.5
0.25
0.125
0.06
脑活素702954
++
++------
0.25
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脑活素703967
++
++------
0.25
脑活素704171
++
++------
0.25
注射用水
++
++------
0.25
注：TAL批号970124，λb=0.25EU/ml2.3.3 上述三样品以HD(1∶20)稀释作干扰试验，结果λ″c=λb=0.25EU/ml，表明供试品在HD时仍不干扰试验。见表3。
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表3 脑活素注射液1∶20稀释液的干扰试验结果 EU/ml TAL复溶液
内毒素溶液(EU/ml)
NC
λ′c
0.5
0.25
0.125
0.06
脑活素702954
++
++------
0.25
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脑活素703967
++
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0.25
脑活素704171
++
++------
0.25
注射用水
++
++------
0.25
注：TAL批号970124，λb=0.25EU/ml3 讨论
本文2.2.3及2.3.2的结果表明，脑活素注射液对TAL内毒素凝集反应无干扰，即选任一灵敏度的鲎试剂与相应的样品最大有效稀释(D)液进行试验，可以对脑活素注射液作内毒素限量检查。本文2.3.3的结果表明，脑活素注射液在较低的稀释倍数(HD)对内毒素凝集反应仍无干扰，提示细菌内毒素检查法在脑活素生产过程中的质控方面具有一定的实用价值。
(1998-12-08 收稿), 百拇医药
单位：315300 浙江省慈溪人民医院
关键词：脑活素；检查，细菌内毒素；试验，干扰素
医药导报990549 脑活素注射液是一种制剂，本文通过实验考察脑活素注射液对细菌内毒素检查的干扰情况，证明其对细菌内毒素检查无干扰作用，可用于生产过程质控及代替成品热原检查。
1 实验材料
脑活素注射液：奥地利依比威药厂，规格：10ml/支，含肽2152mg，批号：702954，703967，704171。鲎试剂(TAL)：湛江中美生物有限公司，规格：0.25EU/支，0.5ml/支，批号：970124。细菌内毒素工作标准品(CES)：中国药品生物制品检定所，规格：60EU/支，批号9703。细菌内毒素检查用水(BETW，以下简称水)：湛江中美生物有限公司，规格：5ml/支，批号：970318。细菌内毒素检查用具一套，按规定除热原。
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2 实验方法与结果
2.1 TAL标示灵敏度(λb)复核试验 按《中国药典》(1995年版二部)细菌内毒素检查法操作结果：λb=0.25EU/ml，内毒素浓度(EU/ml)0.5(++++)，0.25(++++)，0.125(----)，0.06(----)；NC(--)；λc=0.25EU/ml。TAL(970124)，λc=0.25EU/ml。λc=λb，表明该批号TAL灵敏度符合规定。
2.2 脑活素注射液对细菌内毒素检查的干扰评价试验
2.2.1 样品内毒素理论限值的计算 本品厂商提供的最大人体剂量(M)为0.5ml/kg，细菌内毒素阈值(K)为5.0EU/kg，细菌内毒素理论限值(L)为：L=K/M=(5.0EU/kg)/(0.5ml/kg)=10EU/ml。
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2.2.2 样品稀释 以鲎试剂灵敏度0.5EU/ml为基准，计算出相应的最大有效稀释倍数：D=L/λ=(10EU/ml)/(0.5EU/ml)=20倍。以半最大有效稀释倍数(HD)为起始稀释倍数，用水进行等倍稀释，得样品的稀释液系列：1∶10，1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，记此系列溶液为Sw。
2.2.3 制备含2λ内毒素的系列稀释液 另制备一同样的稀释液系列溶液，并使每一份稀释液都含有2λ内毒素，记此系列溶液为SE。
2.2.4 建NSw管和PSE管并进行反应 选灵敏度λb为0.25EU/ml的TAL，分别与Sw和SE两个系列稀释液反应，依次记为NSw和PSE。试验重复两管。结果见表1，NSw管全部阴性，PSE管全部阳性。D10所对应的TAL灵敏度为λ=L/D=10(EU/ml)/10=1EU/ml。说明任何规格灵敏度的鲎试剂都可以做干扰试验，样品对鲎试剂凝集反应无抑制作用。
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表1 脑活素注射液干扰评价试验结果 项目
样品稀释倍数
10
20
40
80
160
NSw----------
PSE
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注：TAL批号970124；λb=0.25EU/ml2.3 干扰试验 选λb=0.25EU/ml的TAL，按《中国药典》(1995年版二部)细菌内毒素检查法规定进行干扰试验。
2.3.1 稀释内毒素 用水将内毒素稀释成2λb,λb，0.5λb,0.25λb浓度的系列内毒素溶液，即0.5，0.25，0.125，0.06EU/ml。
2.3.2 干扰试验及结果 取三批合格的脑活素注射液，分别作1∶40稀释(D)，用这些样品的稀释液分别复溶TAL，然后与系列内毒素溶液反应，另外以水复溶TAL与同样的内毒素溶液反应相比较，试验重复两管。结果见表2，样品(批号702954，703967，704171)以及水(批号970318)测得的鲎试剂灵敏度λ′c=λb=0.25EU/ml，表明供试品在该浓度下不干扰试验。
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表2 脑活素注射液1∶40稀释液的干扰试验结果 EU/ml TAL复溶液
内毒素溶液(EU/ml)
NC
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0.5
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脑活素702954
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脑活素704171
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注射用水
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注：TAL批号970124，λb=0.25EU/ml2.3.3 上述三样品以HD(1∶20)稀释作干扰试验，结果λ″c=λb=0.25EU/ml，表明供试品在HD时仍不干扰试验。见表3。
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表3 脑活素注射液1∶20稀释液的干扰试验结果 EU/ml TAL复溶液
内毒素溶液(EU/ml)
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脑活素704171
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注：TAL批号970124，λb=0.25EU/ml3 讨论
本文2.2.3及2.3.2的结果表明，脑活素注射液对TAL内毒素凝集反应无干扰，即选任一灵敏度的鲎试剂与相应的样品最大有效稀释(D)液进行试验，可以对脑活素注射液作内毒素限量检查。本文2.3.3的结果表明，脑活素注射液在较低的稀释倍数(HD)对内毒素凝集反应仍无干扰，提示细菌内毒素检查法在脑活素生产过程中的质控方面具有一定的实用价值。
(1998-12-08 收稿), 百拇医药