雷公藤多甙与DC单抗对小鼠自身免疫性甲状腺炎作用的研究
作者：王胜军 许化溪 江淑芳 柳龙图 刘恭植o|@q&, 百拇医药
单位：王胜军、许化溪、柳龙图、刘恭植(镇江医学院免疫学研究室 镇江 212001)；江淑芳(南京81医院 南京 210002)o|@q&, 百拇医药
关键词：雷公藤多甙 树突状细胞单克隆抗体 自身免疫性甲状腺炎 小鼠o|@q&, 百拇医药
免疫学杂志990209摘 要 在建立小鼠自身免疫性甲状腺炎(AIT)的基础上，研究雷公藤多甙和树突状细胞(DC)单克隆抗体对诱导小鼠AIT的影响。结果表明，经雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用后，与未用药组相比，血清中TgAb水平、Tg刺激的淋巴细胞增殖能力、脾淋巴细胞产生TNF水平均显著降低(P<0.05)，其中以联合应用组尤为明显，病理学检查亦与之相符。提示雷公藤多甙、DC单抗的应用对小鼠AIT的发生具有抑制作用。o|@q&, 百拇医药
中图号 R392.11o|@q&, 百拇医药
EFFECTS OF TRIPTERYGIUM WILFORDII POLYGLYCOSI-DIUMo|@q&, 百拇医药
AND ANTI-DENDRITIC CELL McAb ON AUTOIMMUNEo|@q&, 百拇医药
THYROIDITIS IN MOUSEo|@q&, 百拇医药
Wang Shengjun，Xu Huaxi，Jiang Shufang，Liu Longtu，Liu Gongzhio|@q&, 百拇医药
(Department of Immunology，Zhenjiang Medical College，Zhenjiang 212001)o|@q&, 百拇医药
Abstract In this paper，the autoimmune thyroiditis(AIT)of mice was used as an experimental model，and the effects of tripterygium wilfordii polyglycosidium(TWP)and anti-DC McAb on AIT were studied.The results showed that the levels of thyroglobulin antibody，the proliferation of lymphocytes stimulated by thyroglobulin and the levels of tumor necrosis factor were significantly decreased in the TWP or anti-DC McAb group，(P<0.05)especially in the TWP administered Anti-DC McAb group.Pathologic observation also proved these results .It was suggested that TWP and anti-DC McAb had immunosuppressive effect on AIT.
Key words Tripterygium wilfordii polyglycosidium，Anti-Dendritic cell McAb，Autoimmune thyroiditis，Micej3z0, http://www.100md.com
自身免疫性甲状腺炎(AIT)是临床上一种常见的器官特异性自身免疫性疾病，其甲状腺主要表现为慢性淋巴细胞浸润性炎症[1，2]，雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Polyglyco-sidium，TWP)作为一种免疫抑制剂已初步应用于类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的治疗[3]，我们以前的工作[4]也提示树突状细胞(DC)单克隆抗体对正常大鼠有免疫抑制作用。本文在建立小鼠AIT的基础上，观察雷公藤多甙与DC单抗在抑制小鼠AIT发生中的作用，探讨二者对AIT治疗的可能性。j3z0, http://www.100md.com
1 材料和方法j3z0, http://www.100md.com
1.1 试剂 雷公藤多甙片(江苏省泰州制药厂)，DC单克隆抗体(33D1，美国Rockfeller大学Steinman教授惠赠)；RPMI1640培养基(Gibco公司)；HRP-羊抗小鼠IgG(华美生物工程公司)；MTT(Fluka公司)；ConA(Sigma公司)，其余均为国产分析纯试剂。j3z0, http://www.100md.com
1.2 动物 CBA小鼠，雌性，体重20g左右，中科院实验动物中心引进。j3z0, http://www.100md.com
1.3 小鼠自身免疫性甲状腺炎(AIT)模型的建立 参见文献[5，6]。简言之，取小鼠甲状腺球蛋白(Tg)与福氏完全佐剂充分混合，注射小鼠足垫部，间隔两周注射其背部皮下，再间隔两周重复一次，于第12周时检测小鼠血清中TgAb水平，并将小鼠甲状腺作病理学检查，观察甲状腺中淋巴细胞浸润情况。j3z0, http://www.100md.com
1.4 动物分组 ①正常对照组，未作任何处理；②AIT模型组；③TWP处理组，先给小鼠TWP片溶液灌胃，剂量为30mg/(kg.d)，连续10d，再按上述方法建立AIT模型；④DC单抗(33D1)组，先给小鼠尾静脉注射33D1，剂量0.1ml，连续5d，再按上述方法建立AIT模型；⑤TWP+33D1组，按③方法灌胃，同时尾静脉注射33D1，连续5d，再按上述方法建立AIT模型。j3z0, http://www.100md.com
1.5 血清TgAb水平测定 采用常规间接ELISA法，结果以OD490表示。
1.6 病理学检查 取小鼠甲状腺组织，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜检查。ue, http://www.100md.com
1.7 TNF的诱生及测定 常规分离脾淋巴细胞，加入细胞培养板中(细胞浓度1×107)，同时加入ConA(5μg/ml)培养48h后收集上清；TNF的检测参见文献[7]。ue, http://www.100md.com
1.8 Tg刺激的淋巴细胞增殖试验 参见文献[6]。ue, http://www.100md.com
2 结果ue, http://www.100md.com
2.1 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用对小鼠血清中TgAb水平的影响 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用组的小鼠血清中TgAb水平均明显低于AIT组，其中以联合应用组最为明显(见表1)。ue, http://www.100md.com
2.2 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用对TNF的影响 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用组的小鼠，其TNF水平也明显低于AIT组(见表1)。ue, http://www.100md.com
2.3 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用对Tg刺激的淋巴细胞增殖试验的影响 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用组的小鼠，其Tg刺激的淋巴细胞增殖能力均显著低于AIT组，雷公藤多甙及联合应用组的下降水平又较DC单抗组明显(见表1)。ue, http://www.100md.com
表1 各组小鼠TgAb、TNF水平及Tg刺激的淋巴细胞增殖能力ue, http://www.100md.com
Tab 1 The levels of TgAb，TNF and the proliferation of lymphocyte by Tg in different group Groupue, http://www.100md.com
TgAbue, http://www.100md.com
TNFue, http://www.100md.com
Tg stimulated lymphocyteue, http://www.100md.com
proliferation responseue, http://www.100md.com
controlue, http://www.100md.com
0.22±0.04ue, http://www.100md.com
26.91±3.12
0.34±0.06wp-&8, 百拇医药
AITwp-&8, 百拇医药
1.07±0.07wp-&8, 百拇医药
44.86±3.80wp-&8, 百拇医药
0.67±0.05wp-&8, 百拇医药
TWPwp-&8, 百拇医药
0.61±0.05a，bwp-&8, 百拇医药
34.39±1.67awp-&8, 百拇医药
0.46±0.05awp-&8, 百拇医药
33D1wp-&8, 百拇医药
0.68±0.06a，bwp-&8, 百拇医药
33.27±3.77awp-&8, 百拇医药
0.57±0.08a，bwp-&8, 百拇医药
TWP+33D1wp-&8, 百拇医药
0.41±0.06awp-&8, 百拇医药
30.09±3.13awp-&8, 百拇医药
0.42±0.04awp-&8, 百拇医药
note：n＝5； acompared with AIT：P<0.05； bcompared with TWP+33D1：P<0.05wp-&8, 百拇医药
2.4 病理学检查 AIT组小鼠甲状腺，镜下可见甲状腺滤泡萎缩，同时有少量淋巴细胞浸润；而雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用的小鼠，其甲状腺滤泡基本正常，仅偶见淋巴细胞浸润；正常组小鼠未见上述病理变化。wp-&8, 百拇医药
3 讨论wp-&8, 百拇医药
现有研究表明雷公藤多甙具有一定的免疫抑制作用，且已初步应用于移植排斥反应、自身免疫性疾病的防治，本研究在应用雷公藤的同时，加入少量树突状细胞单抗，旨在观察中西医结合的免疫抑制效应，为进一步应用于自身免疫性甲状腺炎的临床治疗提供理论依据。自身免疫性甲状腺炎的典型表现为甲状腺出现淋巴细胞浸润，甲状腺滤泡萎缩，血清中TgAb水平显著升高。本试验结果显示，经雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用的小鼠，血清中TgAb水平较AIT组小鼠有显著下降，甲状腺中仅偶见淋巴细胞浸润，无其它病理改变，且联合应用较单独应用效果明显，这表明雷公藤多甙、DC单抗联合应用对抑制AIT的发生有较好的效果，至于二者是否具有相似的临床防治效果，还有待进一步研究和临床验证。4i, 百拇医药
多数学者认为AIT的发生与T细胞功能失衡有关[2，8]，Tg刺激的淋巴细胞试验结果提示，AIT小鼠体内存在大量的针对特异性自身抗原(Tg)的T细胞，这类T细胞是产生自身免疫的重要因素。Okayasu等[9]用致敏活化的T细胞转移给正常小鼠，结果引起AIT的相似症状，进一步说明T细胞尤其是活化的自身反应T细胞在AIT中起着重要作用。经雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用的小鼠，Tg刺激的淋巴细胞增殖能力显著降低，提示雷公藤多甙、DC单抗的应用很可能是通过抑制自身反应T细胞而发挥作用。4i, 百拇医药
活化的T细胞可产生多种细胞因子，介导攻击甲状腺滤泡，引起免疫病理损伤[8]。TNF在炎症反应中是引起局部组织损伤的重要因子之一，它能够促进局部组织MHCⅡ类分子异常表达和其它炎症因子的释放。本文结果显示，AIT小鼠脾淋巴细胞分泌TNF的能力显著高于正常小鼠，但应用雷公藤多甙、DC单抗后，TNF水平明显降低，表明雷公藤、DC单抗对TNF等炎症因子的释放有一定的抑制作用。因此，从本实验结果来看，应用雷公藤多甙、DC单抗，尤其是联合应用对抑制小鼠AIT的发生有较好的效果，有关临床应用将作进一步的研究。4i, 百拇医药
* 江苏省教委资助项目4i, 百拇医药
作者简介 第一作者：男，30岁，在职硕士，讲师4i, 百拇医药
参考文献4i, 百拇医药
1 Misaki T，Konisni J，Nakashima T，et al.Immunohistological phenotyping of thyroid infilitrating lymphocyte in Graves′ disease and Hashimoto′s thyroiditis.Clin Exp Immunol，1985，60：104
2 Ahmann AJ，Burman KD.The role of T lymphocyte in autoimmune thyroid disease.Endocrinol Metab Clin North Am，1987，16：2875, http://www.100md.com
3 陶学濂，孙 瑛，董 怡，等.雷公藤多甙治疗类风湿关节炎的双盲研究.中华内科杂志，1987，26：3995, http://www.100md.com
4 潘志超，许化溪，刘恭植，等.大鼠树突状细胞单抗生物学特性的实验研究.免疫学杂志，1994，10：945, http://www.100md.com
5 王胜军，许化溪，潘志超，等.小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的初步研究.镇江医学院学报，1997，7：75, http://www.100md.com
6 王胜军，许化溪，刘恭植，等.实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠细胞免疫状态的研究.上海免疫学杂志，1998，18：355, http://www.100md.com
7 章卫平，曹雪涛.WEHI164-C1细胞株检测TNF的MTS/PMS比色法的建立.免疫学杂志，1994，10：2635, http://www.100md.com
8 Utiger RD.The pathogenesis of autoimmune thyroid di-sease.N Eng J Med，1991，325：2785, http://www.100md.com
9 Okayasu I.Transfer of experimental autoimmune thyroiditis to normal syngeneic mice by injection of mouse thyroglobulin-sensitized T lymphocytes after activation with concanavalin A.Clin Immunol Immunopathol，1985，36：1015, http://www.100md.com
(1998-06-24收稿；1998-10-19修回)(王胜军 许化溪 江淑芳 柳龙图 刘恭植)
单位：王胜军、许化溪、柳龙图、刘恭植(镇江医学院免疫学研究室 镇江 212001)；江淑芳(南京81医院 南京 210002)o|@q&, 百拇医药
关键词：雷公藤多甙 树突状细胞单克隆抗体 自身免疫性甲状腺炎 小鼠o|@q&, 百拇医药
免疫学杂志990209摘 要 在建立小鼠自身免疫性甲状腺炎(AIT)的基础上，研究雷公藤多甙和树突状细胞(DC)单克隆抗体对诱导小鼠AIT的影响。结果表明，经雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用后，与未用药组相比，血清中TgAb水平、Tg刺激的淋巴细胞增殖能力、脾淋巴细胞产生TNF水平均显著降低(P<0.05)，其中以联合应用组尤为明显，病理学检查亦与之相符。提示雷公藤多甙、DC单抗的应用对小鼠AIT的发生具有抑制作用。o|@q&, 百拇医药
中图号 R392.11o|@q&, 百拇医药
EFFECTS OF TRIPTERYGIUM WILFORDII POLYGLYCOSI-DIUMo|@q&, 百拇医药
AND ANTI-DENDRITIC CELL McAb ON AUTOIMMUNEo|@q&, 百拇医药
THYROIDITIS IN MOUSEo|@q&, 百拇医药
Wang Shengjun，Xu Huaxi，Jiang Shufang，Liu Longtu，Liu Gongzhio|@q&, 百拇医药
(Department of Immunology，Zhenjiang Medical College，Zhenjiang 212001)o|@q&, 百拇医药
Abstract In this paper，the autoimmune thyroiditis(AIT)of mice was used as an experimental model，and the effects of tripterygium wilfordii polyglycosidium(TWP)and anti-DC McAb on AIT were studied.The results showed that the levels of thyroglobulin antibody，the proliferation of lymphocytes stimulated by thyroglobulin and the levels of tumor necrosis factor were significantly decreased in the TWP or anti-DC McAb group，(P<0.05)especially in the TWP administered Anti-DC McAb group.Pathologic observation also proved these results .It was suggested that TWP and anti-DC McAb had immunosuppressive effect on AIT.
Key words Tripterygium wilfordii polyglycosidium，Anti-Dendritic cell McAb，Autoimmune thyroiditis，Micej3z0, http://www.100md.com
自身免疫性甲状腺炎(AIT)是临床上一种常见的器官特异性自身免疫性疾病，其甲状腺主要表现为慢性淋巴细胞浸润性炎症[1，2]，雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Polyglyco-sidium，TWP)作为一种免疫抑制剂已初步应用于类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的治疗[3]，我们以前的工作[4]也提示树突状细胞(DC)单克隆抗体对正常大鼠有免疫抑制作用。本文在建立小鼠AIT的基础上，观察雷公藤多甙与DC单抗在抑制小鼠AIT发生中的作用，探讨二者对AIT治疗的可能性。j3z0, http://www.100md.com
1 材料和方法j3z0, http://www.100md.com
1.1 试剂 雷公藤多甙片(江苏省泰州制药厂)，DC单克隆抗体(33D1，美国Rockfeller大学Steinman教授惠赠)；RPMI1640培养基(Gibco公司)；HRP-羊抗小鼠IgG(华美生物工程公司)；MTT(Fluka公司)；ConA(Sigma公司)，其余均为国产分析纯试剂。j3z0, http://www.100md.com
1.2 动物 CBA小鼠，雌性，体重20g左右，中科院实验动物中心引进。j3z0, http://www.100md.com
1.3 小鼠自身免疫性甲状腺炎(AIT)模型的建立 参见文献[5，6]。简言之，取小鼠甲状腺球蛋白(Tg)与福氏完全佐剂充分混合，注射小鼠足垫部，间隔两周注射其背部皮下，再间隔两周重复一次，于第12周时检测小鼠血清中TgAb水平，并将小鼠甲状腺作病理学检查，观察甲状腺中淋巴细胞浸润情况。j3z0, http://www.100md.com
1.4 动物分组 ①正常对照组，未作任何处理；②AIT模型组；③TWP处理组，先给小鼠TWP片溶液灌胃，剂量为30mg/(kg.d)，连续10d，再按上述方法建立AIT模型；④DC单抗(33D1)组，先给小鼠尾静脉注射33D1，剂量0.1ml，连续5d，再按上述方法建立AIT模型；⑤TWP+33D1组，按③方法灌胃，同时尾静脉注射33D1，连续5d，再按上述方法建立AIT模型。j3z0, http://www.100md.com
1.5 血清TgAb水平测定 采用常规间接ELISA法，结果以OD490表示。
1.6 病理学检查 取小鼠甲状腺组织，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜检查。ue, http://www.100md.com
1.7 TNF的诱生及测定 常规分离脾淋巴细胞，加入细胞培养板中(细胞浓度1×107)，同时加入ConA(5μg/ml)培养48h后收集上清；TNF的检测参见文献[7]。ue, http://www.100md.com
1.8 Tg刺激的淋巴细胞增殖试验 参见文献[6]。ue, http://www.100md.com
2 结果ue, http://www.100md.com
2.1 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用对小鼠血清中TgAb水平的影响 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用组的小鼠血清中TgAb水平均明显低于AIT组，其中以联合应用组最为明显(见表1)。ue, http://www.100md.com
2.2 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用对TNF的影响 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用组的小鼠，其TNF水平也明显低于AIT组(见表1)。ue, http://www.100md.com
2.3 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用对Tg刺激的淋巴细胞增殖试验的影响 雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用组的小鼠，其Tg刺激的淋巴细胞增殖能力均显著低于AIT组，雷公藤多甙及联合应用组的下降水平又较DC单抗组明显(见表1)。ue, http://www.100md.com
表1 各组小鼠TgAb、TNF水平及Tg刺激的淋巴细胞增殖能力ue, http://www.100md.com
Tab 1 The levels of TgAb，TNF and the proliferation of lymphocyte by Tg in different group Groupue, http://www.100md.com
TgAbue, http://www.100md.com
TNFue, http://www.100md.com
Tg stimulated lymphocyteue, http://www.100md.com
proliferation responseue, http://www.100md.com
controlue, http://www.100md.com
0.22±0.04ue, http://www.100md.com
26.91±3.12
0.34±0.06wp-&8, 百拇医药
AITwp-&8, 百拇医药
1.07±0.07wp-&8, 百拇医药
44.86±3.80wp-&8, 百拇医药
0.67±0.05wp-&8, 百拇医药
TWPwp-&8, 百拇医药
0.61±0.05a，bwp-&8, 百拇医药
34.39±1.67awp-&8, 百拇医药
0.46±0.05awp-&8, 百拇医药
33D1wp-&8, 百拇医药
0.68±0.06a，bwp-&8, 百拇医药
33.27±3.77awp-&8, 百拇医药
0.57±0.08a，bwp-&8, 百拇医药
TWP+33D1wp-&8, 百拇医药
0.41±0.06awp-&8, 百拇医药
30.09±3.13awp-&8, 百拇医药
0.42±0.04awp-&8, 百拇医药
note：n＝5； acompared with AIT：P<0.05； bcompared with TWP+33D1：P<0.05wp-&8, 百拇医药
2.4 病理学检查 AIT组小鼠甲状腺，镜下可见甲状腺滤泡萎缩，同时有少量淋巴细胞浸润；而雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用的小鼠，其甲状腺滤泡基本正常，仅偶见淋巴细胞浸润；正常组小鼠未见上述病理变化。wp-&8, 百拇医药
3 讨论wp-&8, 百拇医药
现有研究表明雷公藤多甙具有一定的免疫抑制作用，且已初步应用于移植排斥反应、自身免疫性疾病的防治，本研究在应用雷公藤的同时，加入少量树突状细胞单抗，旨在观察中西医结合的免疫抑制效应，为进一步应用于自身免疫性甲状腺炎的临床治疗提供理论依据。自身免疫性甲状腺炎的典型表现为甲状腺出现淋巴细胞浸润，甲状腺滤泡萎缩，血清中TgAb水平显著升高。本试验结果显示，经雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用的小鼠，血清中TgAb水平较AIT组小鼠有显著下降，甲状腺中仅偶见淋巴细胞浸润，无其它病理改变，且联合应用较单独应用效果明显，这表明雷公藤多甙、DC单抗联合应用对抑制AIT的发生有较好的效果，至于二者是否具有相似的临床防治效果，还有待进一步研究和临床验证。4i, 百拇医药
多数学者认为AIT的发生与T细胞功能失衡有关[2，8]，Tg刺激的淋巴细胞试验结果提示，AIT小鼠体内存在大量的针对特异性自身抗原(Tg)的T细胞，这类T细胞是产生自身免疫的重要因素。Okayasu等[9]用致敏活化的T细胞转移给正常小鼠，结果引起AIT的相似症状，进一步说明T细胞尤其是活化的自身反应T细胞在AIT中起着重要作用。经雷公藤多甙、DC单抗单独及联合应用的小鼠，Tg刺激的淋巴细胞增殖能力显著降低，提示雷公藤多甙、DC单抗的应用很可能是通过抑制自身反应T细胞而发挥作用。4i, 百拇医药
活化的T细胞可产生多种细胞因子，介导攻击甲状腺滤泡，引起免疫病理损伤[8]。TNF在炎症反应中是引起局部组织损伤的重要因子之一，它能够促进局部组织MHCⅡ类分子异常表达和其它炎症因子的释放。本文结果显示，AIT小鼠脾淋巴细胞分泌TNF的能力显著高于正常小鼠，但应用雷公藤多甙、DC单抗后，TNF水平明显降低，表明雷公藤、DC单抗对TNF等炎症因子的释放有一定的抑制作用。因此，从本实验结果来看，应用雷公藤多甙、DC单抗，尤其是联合应用对抑制小鼠AIT的发生有较好的效果，有关临床应用将作进一步的研究。4i, 百拇医药
* 江苏省教委资助项目4i, 百拇医药
作者简介 第一作者：男，30岁，在职硕士，讲师4i, 百拇医药
参考文献4i, 百拇医药
1 Misaki T，Konisni J，Nakashima T，et al.Immunohistological phenotyping of thyroid infilitrating lymphocyte in Graves′ disease and Hashimoto′s thyroiditis.Clin Exp Immunol，1985，60：104
2 Ahmann AJ，Burman KD.The role of T lymphocyte in autoimmune thyroid disease.Endocrinol Metab Clin North Am，1987，16：2875, http://www.100md.com
3 陶学濂，孙 瑛，董 怡，等.雷公藤多甙治疗类风湿关节炎的双盲研究.中华内科杂志，1987，26：3995, http://www.100md.com
4 潘志超，许化溪，刘恭植，等.大鼠树突状细胞单抗生物学特性的实验研究.免疫学杂志，1994，10：945, http://www.100md.com
5 王胜军，许化溪，潘志超，等.小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的初步研究.镇江医学院学报，1997，7：75, http://www.100md.com
6 王胜军，许化溪，刘恭植，等.实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠细胞免疫状态的研究.上海免疫学杂志，1998，18：355, http://www.100md.com
7 章卫平，曹雪涛.WEHI164-C1细胞株检测TNF的MTS/PMS比色法的建立.免疫学杂志，1994，10：2635, http://www.100md.com
8 Utiger RD.The pathogenesis of autoimmune thyroid di-sease.N Eng J Med，1991，325：2785, http://www.100md.com
9 Okayasu I.Transfer of experimental autoimmune thyroiditis to normal syngeneic mice by injection of mouse thyroglobulin-sensitized T lymphocytes after activation with concanavalin A.Clin Immunol Immunopathol，1985，36：1015, http://www.100md.com
(1998-06-24收稿；1998-10-19修回)(王胜军 许化溪 江淑芳 柳龙图 刘恭植)