肝病患者血清肿瘤坏死因子-α、Ⅳ型胶原测定
作者：郑素军 葛松华 李丽平 张 秀
单位：郑素军 葛松华 李丽平 张秀(安阳地区医院消化内科 安阳 455000)
关键词：肿瘤坏死因子；胶原；肝纤维化
河南医科大学学报990232 摘要 目的：探讨监测肝纤维化程度敏感的血清学指标。方法：采用ELISA双抗体夹心法，对40名正常人及125例肝病患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-a)、Ⅳ型胶原含量进行了测定。结果：慢性迁延性肝炎(慢迁肝)组、慢性活动性肝炎(慢活肝)组、肝硬化组血清TNF-α、Ⅳ型胶原分别显著高于正常对照组和急性黄疸性肝炎(急黄肝)组(均P<0.01)，其中肝硬化组较慢迁肝组、慢活肝组又显著升高(P<0.01)，而急黄肝组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：随肝纤维化进展，血清TNF-α、Ⅳ型胶原水平均呈上升趋势，验证了肝纤维化程度与Ⅳ型胶原间定量关系，且发现TNF-α可能为反映肝纤维化程度的又一个良好指标。
, http://www.100md.com
中图分类号 R575.1
肝纤维化是各型肝病发展为肝硬化的必经途径，其定量测定对于判断病情、监测疗效及估价预后有重要意义，尤其早期肝纤维化诊断为目前研究热点之一。血清Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)与肝纤维化程度有关[1，2]，且Ⅳ-C在反映早期肝纤维化方面有独到之处[3]。作者采用ELISA双抗体夹心法定量测定病毒性肝炎患者血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅳ-C含量，进一步研究肝纤维化进展中Ⅳ-C水平变化，并探讨TNF-α含量与肝纤维化程度关系。
1 对象与方法
1.1 对象
1.1.1 肝病组：根据1990年上海全国病毒性肝炎学术会议修订诊断标准，选择1996年10月～1998年7月间住院患者125例。其中急性黄疸性肝炎(急黄肝)25例(男15例，女10例，年龄16～65岁，平均40.4岁)；慢性迁延性肝炎(慢迁肝)30例(男18例，女12例，年龄24～63岁，平均43.6岁)；慢性活动性肝炎(慢活肝)35例(男21例，女14例，年龄27～64岁，平均45.2岁)；肝炎后肝硬化(肝硬化)35例(男23例，女12例，年龄28～68岁，平均46.4岁。肝硬化代偿期27例，失代偿期8例)。急黄肝组中除2例为甲肝外，余23例及全部慢迁肝组、慢活肝组、肝硬化组均为乙型肝炎病毒感染。
, 百拇医药
1.1.2 正常对照组：30例，选自社会自愿及本院医护人员(男24例，女16例，年龄18～70岁，平均42.7岁)。
各组间年龄、性别分布差异均无显著性，且受试者均无合并慢阻肺、矽肺、肾病、糖尿病、休克等疾病或并发症。
1.2 方法
所有研究对象均于清晨空腹抽取肘静脉血4ml，均分注入两个普通塑料管中，离心5min(2000r/min)后，分别取上层血清0.4ml置-20℃冰箱备检。采用ELISA双抗体夹心法测定血TNF-α、Ⅳ-C含量。
血清TNF-α酶联免疫监测盒购自北京邦定生物化学公司；Ⅳ-C测定盒购自北京东郊九龙山北京化学试剂研究所。酶标仪为第四军医大学与国营华东电子管厂联合研制DG3022A型。测定波长TNF-α组为492nm，Ⅳ-C组为450nm。严格按照试剂盒说明书操作。
, http://www.100md.com
1.3 统计学处理 数据以
±s表示，显著性检验采用t检验。
2 结果
2.1 各型肝病患者血清TNF-α、Ⅳ-C水平比较 见表1。
表1 各型肝病患者及健康人血清TNF-a、Ⅳ-C水平比较 组别
n
ρ(TNF-α)/ng.L-1
ρ(Ⅳ-C)/mg.L-1
对照组
, 百拇医药
40
64.3±38.0
76±32
急黄肝组
25
79.5±34.0
89±37
慢迁肝组
30
148.2±45.0*
200±100*
慢活肝组
, 百拇医药
35
190.0±70.0*
308±89*
肝硬化组
35
405.6±110.0△＃
479±220△＃
* 与对照组比较，P<0.01；△与急黄肝组比较，P<0.01；
＃ 与慢迁肝组、慢活肝组分别比较，均为P<0.01
3 讨论
, 百拇医药
肝纤维化机制为：肝炎病毒及免疫损伤激活了巨噬/星状细胞(也称Kuffer细胞)及血小板等，使其分泌TNF-α，转化生长因子(TGF-α、β)，血小板衍生的生长因子(PDGF)等细胞因子，此类因子作用于静息状态的储脂细胞(Ito细胞)，使其活化为肌成纤维细胞，使合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原增多，并沉积于细胞外。以上过程反复发生，大量胶原沉积，肝纤维化形成[4]。同时血清中TNF-α及Ⅳ-C含量升高。
由以上机制知，TNF-α产生早于Ⅳ-C的产生，且TNF-α在肝纤维化过程中起重要作用。国外报道慢性肝病患者肝组织内TNF-α的mRNA与Ⅰ型前胶原mRNA表达平行相关，在血吸虫病肝纤维化研究中，发现TNF-α与肝纤维化程度有关[5]。作者采用ELISA双抗体夹心法测定各型肝病血清中TNF-α及Ⅳ-C，结果急黄肝组较正常对照组血清TNF-α、Ⅳ-C差异均无显著性(P>0.05)，与急黄肝尚无肝纤维化有关。慢迁肝组、慢活肝组、肝硬化组TNF-α、Ⅳ-C分别显著高于正常对照组和急黄肝组(均P<0.01)；其中肝硬化组较慢迁肝组、慢活肝组又显著升高(P<0.01)。提示随着病毒性肝炎肝纤维化进展，血清TNF-α、Ⅳ-C均呈上升趋势。从而进一步验证了肝纤维化程度与Ⅳ-C定量间关系，并发现血清TNF-α水平可能为监测肝纤维程度，尤其早期肝纤维化的又一良好指标。而血清TNF-α与Ⅳ-C间相关关系尚需进一步研究。肝病患者血清TNF-α、Ⅳ-C的监测，易操作、创伤小、不需特殊昂贵仪器，患者易接受，对临床应用有较广阔的前景。
, 百拇医药
参考文献
[1] Murawaki I,KutaY,Koda M,et al. Comparision of serum 7s fragment of type Ⅳ collagen and serum central triple-helix of type Ⅳ collagen for assessment of liver fibrosis in patients with chronic viral liver disease. J Hepatol,1996,24(2):148
[2] 蔡伊梅，诸葛传德，彭星亮.病毒性肝炎患者Ⅳ型胶原的变化.中华传染病杂志，1994，12(3)：173
[3] 纪徐维.Ⅳ型胶原与慢性肝病.国外医学.消化疾病分册，1996，16(2)：70
[4] 翟为溶.肝炎时纤维化机制.见：叶维法主编.肝炎学大典.天津：天津科学技术出版社，1996.437
[5] 蔡卫民，丁利明.细胞因子与肝炎和肝硬变.见：池肇春，叶维法主编.新编实用肝病学.北京：中国医药科技出版社，1994.175, 百拇医药
单位：郑素军 葛松华 李丽平 张秀(安阳地区医院消化内科 安阳 455000)
关键词：肿瘤坏死因子；胶原；肝纤维化
河南医科大学学报990232 摘要 目的：探讨监测肝纤维化程度敏感的血清学指标。方法：采用ELISA双抗体夹心法，对40名正常人及125例肝病患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-a)、Ⅳ型胶原含量进行了测定。结果：慢性迁延性肝炎(慢迁肝)组、慢性活动性肝炎(慢活肝)组、肝硬化组血清TNF-α、Ⅳ型胶原分别显著高于正常对照组和急性黄疸性肝炎(急黄肝)组(均P<0.01)，其中肝硬化组较慢迁肝组、慢活肝组又显著升高(P<0.01)，而急黄肝组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：随肝纤维化进展，血清TNF-α、Ⅳ型胶原水平均呈上升趋势，验证了肝纤维化程度与Ⅳ型胶原间定量关系，且发现TNF-α可能为反映肝纤维化程度的又一个良好指标。
, http://www.100md.com
中图分类号 R575.1
肝纤维化是各型肝病发展为肝硬化的必经途径，其定量测定对于判断病情、监测疗效及估价预后有重要意义，尤其早期肝纤维化诊断为目前研究热点之一。血清Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)与肝纤维化程度有关[1，2]，且Ⅳ-C在反映早期肝纤维化方面有独到之处[3]。作者采用ELISA双抗体夹心法定量测定病毒性肝炎患者血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅳ-C含量，进一步研究肝纤维化进展中Ⅳ-C水平变化，并探讨TNF-α含量与肝纤维化程度关系。
1 对象与方法
1.1 对象
1.1.1 肝病组：根据1990年上海全国病毒性肝炎学术会议修订诊断标准，选择1996年10月～1998年7月间住院患者125例。其中急性黄疸性肝炎(急黄肝)25例(男15例，女10例，年龄16～65岁，平均40.4岁)；慢性迁延性肝炎(慢迁肝)30例(男18例，女12例，年龄24～63岁，平均43.6岁)；慢性活动性肝炎(慢活肝)35例(男21例，女14例，年龄27～64岁，平均45.2岁)；肝炎后肝硬化(肝硬化)35例(男23例，女12例，年龄28～68岁，平均46.4岁。肝硬化代偿期27例，失代偿期8例)。急黄肝组中除2例为甲肝外，余23例及全部慢迁肝组、慢活肝组、肝硬化组均为乙型肝炎病毒感染。
, 百拇医药
1.1.2 正常对照组：30例，选自社会自愿及本院医护人员(男24例，女16例，年龄18～70岁，平均42.7岁)。
各组间年龄、性别分布差异均无显著性，且受试者均无合并慢阻肺、矽肺、肾病、糖尿病、休克等疾病或并发症。
1.2 方法
所有研究对象均于清晨空腹抽取肘静脉血4ml，均分注入两个普通塑料管中，离心5min(2000r/min)后，分别取上层血清0.4ml置-20℃冰箱备检。采用ELISA双抗体夹心法测定血TNF-α、Ⅳ-C含量。
血清TNF-α酶联免疫监测盒购自北京邦定生物化学公司；Ⅳ-C测定盒购自北京东郊九龙山北京化学试剂研究所。酶标仪为第四军医大学与国营华东电子管厂联合研制DG3022A型。测定波长TNF-α组为492nm，Ⅳ-C组为450nm。严格按照试剂盒说明书操作。
, http://www.100md.com
1.3 统计学处理 数据以
±s表示，显著性检验采用t检验。2 结果
2.1 各型肝病患者血清TNF-α、Ⅳ-C水平比较 见表1。
表1 各型肝病患者及健康人血清TNF-a、Ⅳ-C水平比较 组别
n
ρ(TNF-α)/ng.L-1
ρ(Ⅳ-C)/mg.L-1
对照组
, 百拇医药
40
64.3±38.0
76±32
急黄肝组
25
79.5±34.0
89±37
慢迁肝组
30
148.2±45.0*
200±100*
慢活肝组
, 百拇医药
35
190.0±70.0*
308±89*
肝硬化组
35
405.6±110.0△＃
479±220△＃
* 与对照组比较，P<0.01；△与急黄肝组比较，P<0.01；
＃ 与慢迁肝组、慢活肝组分别比较，均为P<0.01
3 讨论
, 百拇医药
肝纤维化机制为：肝炎病毒及免疫损伤激活了巨噬/星状细胞(也称Kuffer细胞)及血小板等，使其分泌TNF-α，转化生长因子(TGF-α、β)，血小板衍生的生长因子(PDGF)等细胞因子，此类因子作用于静息状态的储脂细胞(Ito细胞)，使其活化为肌成纤维细胞，使合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原增多，并沉积于细胞外。以上过程反复发生，大量胶原沉积，肝纤维化形成[4]。同时血清中TNF-α及Ⅳ-C含量升高。
由以上机制知，TNF-α产生早于Ⅳ-C的产生，且TNF-α在肝纤维化过程中起重要作用。国外报道慢性肝病患者肝组织内TNF-α的mRNA与Ⅰ型前胶原mRNA表达平行相关，在血吸虫病肝纤维化研究中，发现TNF-α与肝纤维化程度有关[5]。作者采用ELISA双抗体夹心法测定各型肝病血清中TNF-α及Ⅳ-C，结果急黄肝组较正常对照组血清TNF-α、Ⅳ-C差异均无显著性(P>0.05)，与急黄肝尚无肝纤维化有关。慢迁肝组、慢活肝组、肝硬化组TNF-α、Ⅳ-C分别显著高于正常对照组和急黄肝组(均P<0.01)；其中肝硬化组较慢迁肝组、慢活肝组又显著升高(P<0.01)。提示随着病毒性肝炎肝纤维化进展，血清TNF-α、Ⅳ-C均呈上升趋势。从而进一步验证了肝纤维化程度与Ⅳ-C定量间关系，并发现血清TNF-α水平可能为监测肝纤维程度，尤其早期肝纤维化的又一良好指标。而血清TNF-α与Ⅳ-C间相关关系尚需进一步研究。肝病患者血清TNF-α、Ⅳ-C的监测，易操作、创伤小、不需特殊昂贵仪器，患者易接受，对临床应用有较广阔的前景。
, 百拇医药
参考文献
[1] Murawaki I,KutaY,Koda M,et al. Comparision of serum 7s fragment of type Ⅳ collagen and serum central triple-helix of type Ⅳ collagen for assessment of liver fibrosis in patients with chronic viral liver disease. J Hepatol,1996,24(2):148
[2] 蔡伊梅，诸葛传德，彭星亮.病毒性肝炎患者Ⅳ型胶原的变化.中华传染病杂志，1994，12(3)：173
[3] 纪徐维.Ⅳ型胶原与慢性肝病.国外医学.消化疾病分册，1996，16(2)：70
[4] 翟为溶.肝炎时纤维化机制.见：叶维法主编.肝炎学大典.天津：天津科学技术出版社，1996.437
[5] 蔡卫民，丁利明.细胞因子与肝炎和肝硬变.见：池肇春，叶维法主编.新编实用肝病学.北京：中国医药科技出版社，1994.175, 百拇医药