手针刺激大鼠“肾俞”穴对下丘脑室旁核功能状态的影响
作者：陈泽斌 熊迎春 吴昌清 袁尚荣
单位：湖北中医学院解剖教研室 430061
关键词：手针；肾俞穴；下丘脑室旁核；c-fos；动物实验
湖北中医学院学报/990119
摘要 目的 为探讨PVN与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学证据。方法 以大鼠为对象，采用免疫细胞化学ABC法，探讨了手针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的c-fos在PVN中的表达。结果 PVN中FLN密度值组间、组内差异显著(P<0.01)，手针组>对照组>空白组；手针组对侧>同侧。结论 手针刺激右“肾俞”穴对PVN神经元具有激活作用；PVN神经元对同一方法刺激单侧“肾俞”穴的这种反应上的两侧差异，可能是导致“肾俞”穴针刺效应同侧与对侧差异的重要环节之一。
中国图书分类号 R224.1
, 百拇医药
Effect of acupuncturing Shenshuon Point PVN in Rats
Chen Zebin, et al
Dept. of Anatomy, HuBei TCM, 430061
Abstract:By observing the expressions of c-fos gene in PVN,the effect of acupuncturing“Shenshu”on PVN of rats was studied with immunocytochemical way of ABC. The results showed that the densities of FLN in PVN had significantly differences between different groups(P<0.01);the acupuncture group>control group>blank group,non-acupuncture side >acupuncture side.The results indicated that acupuncturing“Shenshu”can activate the neuron in PVN and PVN plays an certain role in the affectwing of acupuncturing “Shenshu”.
, http://www.100md.com
研究显示，针刺“肾俞”穴具有影响机体下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴功能，影响肾的泌尿功能等多方面的效应，提示神经体液因素在这一效应中的重要作用[1，2]，而作为神经—内分泌系统关键中枢核团之一的下丘脑室旁核(Hypothalanic Paraventricular nucleus, PVN，下同)对针刺“肾俞”穴反应如何却未见报道。为此，本文采用免疫细胞化学技术，着重观察了手针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的c-fos在PVN中的表达，并对PVN及其各部分c-fos阳性神经元(Fos like immunoreactive neuron,FLN,下同)密度进行了比较，拟探讨手针刺激大鼠“肾俞”穴对PVN功能状态的影响，并为进一步探讨PVN与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学依据。
1 材料和方法
1.1 材料
Wistar大鼠15只，重量220～250g，雌雄不限。随机分成三组：手针组，对照组，空白组。每组5只。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 动物准备
于实验前两周一次性购进，置于避强光、安静和温暖的环境中饲养，室温为18-25°C。于实验前4日将准备实验动物集中喂养，并作适用性训练，训练过程中严禁粗暴和惊扰。
1.2.2 取穴、麻醉和穴位刺激
参照华兴邦的大鼠穴位图谱[3]，于第二腰椎棘突下右侧旁开7mm取右“肾俞”穴，直刺8mm。采用甲氧氟烷吸入加1%戊巴比妥钠腹腔注射的复合麻醉方式。手针组：麻醉加手针；对照组：只麻醉，不刺激；空白组：不麻醉，不刺激。手针参照蔡乃真的方法，手捻针刺激10分钟，留针20分钟，运针频率控制在4次/秒，捻针幅度360°左右，中等强度[4]。每次实验各组均取一只同时进行。
1.2.3 材料制备
, 百拇医药
从刺激开始计2小时，各动物在戊巴比妥钠深麻下，开胸作经左心室4°C4%多聚甲醛(PB配制，PH7.4)灌注固定，灌毕即取脑，4°C后固定过夜，入含30%蔗糖的PB内4°C沉底，用恒冷箱冰冻切片机(美国AO产)作连续冠状切片，片厚40um，切片隔一留一分二套，收集于0.01mol/L磷酸缓冲液内(PBS，PH 7.4，下同)。
1.2.4 免疫组织化学反应
取切片一套，进行抗FOS免疫细胞化学ABC法反应。切片依次入下列步骤：0.3%H2O2甲醇溶液室温30min、含0.1%Triton X-100的正常羊血清(1∶50)30min、入兔抗c-fos(Santa Cruz,Inc.1∶1000)4°C，48h、生物素化羊抗兔IgG(Sigma，1∶500)室温3h、ABC液(Sigma,1∶500)室温 3h、葡萄糖氧化酶—DAB—硫酸镍胺法呈色。以上各步后均用PBS液充分漂洗3×10min。常规贴片、干燥、透明、封片。
, 百拇医药
1.2.5 观察、记数和数据处理
记数方法：参照Paxinos(1986)鼠脑定位图谱，以Bregma-1.80mm平面为基准，取该平面片及其前、后邻近片各一张，共三张进行计数。400倍镜下，采用上海第三光学仪器厂C5型0.5网形目镜尺(实际划刻面积为5mm×5mm，400倍镜下划刻面积为156.25?m2)进行，记数与任一测点外上角和测线(横线)上缘交叉的FLN(核着色均匀、深染、边界清晰)。每片于PVN各部相应处取二视野，分别计数，取均值即为该片该部的FLN密度值。将三片的相应值累加取均值，依此即得该鼠一侧PVN各部、一侧PVN和双侧PVN的FLN密度值。终值单位为：个/156.25?m2。照相时取同一批次的切片进行。
1.2.6 对照实验
用正常山羊血清(1∶50)替代一抗，余同前，以检测上述免疫细胞化学染色的特异性，结果均为阴性。
, 百拇医药
2 实验结果
2.1 镜下观察
Fos阳性细胞表达呈现在细胞核上，呈深蓝色，胞浆未着色，核为圆形或卵圆形，背景基本无色。
2.2 FLN在PVN及其各部(双侧)的表达密度及其组间两两比较(见表1)。
表1 FLN在PVN及其各部(双侧)的表达密度及组间两两比较 单位：个/156.25
m2 组别
n
PaV
PaMP
PaLM
, 百拇医药
PaDC
PVN
手针组
5
12.38±0.41
16.34±0.53
8.75±0.84
13.30±0.50
12.75±0.31
对照组
5
8.55±0.16
, 百拇医药
14.13±1.13
6.51±0.30
5.54±0.21
8.71±0.19
空白组
5
2.42±0.84
4.05±0.25
1.59±0.22
1.88±0.29
2.43±0.30
*
, 百拇医药
*
*
*
*
注：F检验P<0.01，*组间比较P<0.01。PaV：室旁核腹侧部。PaMP：室旁核内侧小细胞。.PaLM：室旁核外侧大细胞部。PaDC：室旁核背侧小帽。
由表中可以看出，FLN在各组PVN及其各部双侧(指两侧合并的平均密度)的密度存在差异。在F检验(P<0.01)基础上进行的Q检验，显示彼此间差异显著(P<0.01)。说明麻醉刺激对PVN神经元具有影响；但手针组刺激对PVN神经元的激活作用是在麻醉刺激基础上的进一步加强，且对PVN各部分神经元均具有激活作用。
2.3 FLN 在PVN及其各部(单侧)的分布密度及组内同侧、对侧比较(见表2)表2 FLN在PVN及其各部(单侧)的表达密度及组内同侧、对侧比较 单位：个/156.25m2 组 别
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n
侧别
PaV
PaMP
PaLM
PaDC
PVN
手针组
5
同侧
10.17±0.43*
15.92±0.74
7.83±0.43*
, 百拇医药
13.08±0.57
11.75±0.38*
对侧
14.59±0.42
16.75±0.32
10.17±0.43
13.50±0.43
13.75±0.24
对照组
5
同侧
8.73±0.54
, 百拇医药
14.25±0.88
6.59±0.42
5.58±0.57
8.79±0.10
对侧
8.58±0.57
14.00±1.47
6.42±0.57
5.50±0.43
8.63±0.41
空白组
5
, 百拇医药
同侧
2.45±0.83
4.25±0.32
1.50±0.43
2.00±0.27
2.50±0.24
对侧
2.59±0.92
3.83±0.43
1.67±0.27
2.00±0.27
2.44±0.37
, 百拇医药
注：*与对侧比较P<0.01
由表中可以看出，FLN在各组PVN及其各部的密度值是不一致的。手针组对侧显著高于同侧(P<0.01)，主要表现在PaV，PaLM两部分，对照组和空白组同侧、对侧间无差异(P>0.05)。以上说明：手针组刺激激活了PVN双侧各部神经元，但以对侧更为明显，重点表现在对侧PaV和PaLM两部分。麻醉刺激不导致两侧差异。
2.4 各组PLN照片见72页图片。
3 讨论
3.1 c-fos癌基因的诱导和显示是一种反映神经通路的新方法，是神经元被激活的标志[5]，国内少数学者将这一方法用于针刺研究[6]。本研究在实施过程中，采取多项措施以防止非特异性应激反应的发生，并设立实验对照组和空白对照组，使得能从实验结果中有效分离出非特异性刺激所致的应激反应。结果显示针刺“肾俞”穴所致PVN中FLN密度值的组间差异、组内同侧、对侧差异十分显著，甚至在同一侧PVN的不同部分差异也非常明显。因此提示：(1)手针刺激右“肾俞”穴对PVN神经元具有激活作用，PVN参与了“肾俞”穴的针刺效应过程；(2)PVN神经元对同一方法刺激单侧“肾俞”穴的这种反应上的两侧差异，可能是导致“肾俞”穴针刺效应同侧、对侧差异的重要环节之一。
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3.2 关于“肾俞”穴针刺效应机理，国内外已有一些研究报道，虽各自的研究方法和着重点不同，但结果基本一致，即神经-内分泌系统在针刺效应中具有极其重要的作用[1，2，4]。神经生物学研究揭示，PVN是神经体液调节的关键部位之一，它既具有神经内分泌的功能，又参与植物神经的控制，在实现交感—肾上腺髓质和下丘脑—垂体—肾上腺皮质两大系统的整合中起着重要作用。神经电生理学研究显示，电刺激PVN可引起ACTH的分泌，PVN参与调节肾交感神经节前神经元的传出活动[7]，参与肾神经传入所引起的升血ACTH效应等等[8]。
鉴于本实验研究的结果证明PVN参与了“肾俞”穴的针刺效应，因而可以设想：“肾俞”穴的针刺信息，在触发以背根节和交感神经节为中心的中枢外反射通路和脊髓低级中枢反射通路的同时可经背根节和脊髓的两次整合，上行(直接或间接)入PVN，并使其神经元激活，被激活的PVN神经元一方面由其投射到正中隆起的纤维分泌CRF和AVP，引起垂体前叶ACTH和β—EP的分泌，进而影响下丘脑—垂体—肾上腺皮质系统，调节机体内分泌水平；经其室旁核—脊髓路径，通过释放CRE和AVP，影响交感—肾上腺髓质系统，调节机体内脏运动的交感传出；另一方面其大神经分泌细胞分泌的VP，经垂体束到达垂体后叶释放入血，调节机体的水液代谢等。这一设想与现有的关于“肾俞”穴针刺效应的结论基本相符。其具体细节有待进一步研究、证实。
, 百拇医药
3.3 针灸医学十分注重临证时选穴方法，如《灵枢*缪刺》和《灵枢
官针》都提到缪刺和巨刺，均有：“右取左，左取右”。《素问阴阳应象大论》也说：“故善用针者……以右治左，以左治右”。本研究以手针刺激右“肾俞”穴，导致了下丘脑室旁核功能状态的同侧、对侧差异，亦即给予“肾俞”穴的同一刺激对室旁核的影响“左、右”不同。因为双侧下丘脑室旁核不同的兴奋程度，势必会导致其对机体器官功能“左、右”影响的差异。所以，本研究结果，实际上为巨刺、缪刺“右取左，左取右，以左治右，以右治左”的刺穴方法和针刺效应的表达提供了直接的神经形态学证据。
参 考 文 献
1.中村克彦.针治疗の肾生理学的作用への影响.医学のゐヰり，昭和59年，128(1)∶27～28
, 百拇医药
2.赵相杰.针刺对注入地塞米松的大鼠之中枢5-HT和肾上腺皮质系统的影响.中国针灸，1982，(5)∶28～30
3.华兴帮.大白鼠穴位图谱的研制.实验动物与动物实验，1991，(1)∶1～3
4.蔡乃真.针刺家兔“肾俞”穴利尿利钠作用的研究.上海针灸杂志，1993，12(4)∶169～171
5.孙遐等.c-fos癌基因的诱导和显示.生理科学进展，1991，22(4)∶299～303
6.周敬修等.颧骼 穴针刺和尾部痛刺激后c-fos蛋白在5-HT神经元中的表达.上海医科大学学报，1993，20(1)∶66～68
7.秦素丽等.兔室旁核一脊髓径路对血量扩张引起肾交感神经活动抑制的作用.生理学报，1994，46(3)∶217～225
8.詹昌德等.室旁核在刺激肾神经传入纤维对血浆皮质醇浓度影响中的作用.生理学报，1993，45(3)∶305～309
作者简介：陈泽斌，男，1964年生，讲师。
收稿日期：1999-02-10, http://www.100md.com
单位：湖北中医学院解剖教研室 430061
关键词：手针；肾俞穴；下丘脑室旁核；c-fos；动物实验
湖北中医学院学报/990119
摘要 目的 为探讨PVN与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学证据。方法 以大鼠为对象，采用免疫细胞化学ABC法，探讨了手针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的c-fos在PVN中的表达。结果 PVN中FLN密度值组间、组内差异显著(P<0.01)，手针组>对照组>空白组；手针组对侧>同侧。结论 手针刺激右“肾俞”穴对PVN神经元具有激活作用；PVN神经元对同一方法刺激单侧“肾俞”穴的这种反应上的两侧差异，可能是导致“肾俞”穴针刺效应同侧与对侧差异的重要环节之一。
中国图书分类号 R224.1
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Effect of acupuncturing Shenshuon Point PVN in Rats
Chen Zebin, et al
Dept. of Anatomy, HuBei TCM, 430061
Abstract:By observing the expressions of c-fos gene in PVN,the effect of acupuncturing“Shenshu”on PVN of rats was studied with immunocytochemical way of ABC. The results showed that the densities of FLN in PVN had significantly differences between different groups(P<0.01);the acupuncture group>control group>blank group,non-acupuncture side >acupuncture side.The results indicated that acupuncturing“Shenshu”can activate the neuron in PVN and PVN plays an certain role in the affectwing of acupuncturing “Shenshu”.
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研究显示，针刺“肾俞”穴具有影响机体下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴功能，影响肾的泌尿功能等多方面的效应，提示神经体液因素在这一效应中的重要作用[1，2]，而作为神经—内分泌系统关键中枢核团之一的下丘脑室旁核(Hypothalanic Paraventricular nucleus, PVN，下同)对针刺“肾俞”穴反应如何却未见报道。为此，本文采用免疫细胞化学技术，着重观察了手针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的c-fos在PVN中的表达，并对PVN及其各部分c-fos阳性神经元(Fos like immunoreactive neuron,FLN,下同)密度进行了比较，拟探讨手针刺激大鼠“肾俞”穴对PVN功能状态的影响，并为进一步探讨PVN与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学依据。
1 材料和方法
1.1 材料
Wistar大鼠15只，重量220～250g，雌雄不限。随机分成三组：手针组，对照组，空白组。每组5只。
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1.2 方法
1.2.1 动物准备
于实验前两周一次性购进，置于避强光、安静和温暖的环境中饲养，室温为18-25°C。于实验前4日将准备实验动物集中喂养，并作适用性训练，训练过程中严禁粗暴和惊扰。
1.2.2 取穴、麻醉和穴位刺激
参照华兴邦的大鼠穴位图谱[3]，于第二腰椎棘突下右侧旁开7mm取右“肾俞”穴，直刺8mm。采用甲氧氟烷吸入加1%戊巴比妥钠腹腔注射的复合麻醉方式。手针组：麻醉加手针；对照组：只麻醉，不刺激；空白组：不麻醉，不刺激。手针参照蔡乃真的方法，手捻针刺激10分钟，留针20分钟，运针频率控制在4次/秒，捻针幅度360°左右，中等强度[4]。每次实验各组均取一只同时进行。
1.2.3 材料制备
, 百拇医药
从刺激开始计2小时，各动物在戊巴比妥钠深麻下，开胸作经左心室4°C4%多聚甲醛(PB配制，PH7.4)灌注固定，灌毕即取脑，4°C后固定过夜，入含30%蔗糖的PB内4°C沉底，用恒冷箱冰冻切片机(美国AO产)作连续冠状切片，片厚40um，切片隔一留一分二套，收集于0.01mol/L磷酸缓冲液内(PBS，PH 7.4，下同)。
1.2.4 免疫组织化学反应
取切片一套，进行抗FOS免疫细胞化学ABC法反应。切片依次入下列步骤：0.3%H2O2甲醇溶液室温30min、含0.1%Triton X-100的正常羊血清(1∶50)30min、入兔抗c-fos(Santa Cruz,Inc.1∶1000)4°C，48h、生物素化羊抗兔IgG(Sigma，1∶500)室温3h、ABC液(Sigma,1∶500)室温 3h、葡萄糖氧化酶—DAB—硫酸镍胺法呈色。以上各步后均用PBS液充分漂洗3×10min。常规贴片、干燥、透明、封片。
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1.2.5 观察、记数和数据处理
记数方法：参照Paxinos(1986)鼠脑定位图谱，以Bregma-1.80mm平面为基准，取该平面片及其前、后邻近片各一张，共三张进行计数。400倍镜下，采用上海第三光学仪器厂C5型0.5网形目镜尺(实际划刻面积为5mm×5mm，400倍镜下划刻面积为156.25?m2)进行，记数与任一测点外上角和测线(横线)上缘交叉的FLN(核着色均匀、深染、边界清晰)。每片于PVN各部相应处取二视野，分别计数，取均值即为该片该部的FLN密度值。将三片的相应值累加取均值，依此即得该鼠一侧PVN各部、一侧PVN和双侧PVN的FLN密度值。终值单位为：个/156.25?m2。照相时取同一批次的切片进行。
1.2.6 对照实验
用正常山羊血清(1∶50)替代一抗，余同前，以检测上述免疫细胞化学染色的特异性，结果均为阴性。
, 百拇医药
2 实验结果
2.1 镜下观察
Fos阳性细胞表达呈现在细胞核上，呈深蓝色，胞浆未着色，核为圆形或卵圆形，背景基本无色。
2.2 FLN在PVN及其各部(双侧)的表达密度及其组间两两比较(见表1)。
表1 FLN在PVN及其各部(双侧)的表达密度及组间两两比较 单位：个/156.25
m2 组别n
PaV
PaMP
PaLM
, 百拇医药
PaDC
PVN
手针组
5
12.38±0.41
16.34±0.53
8.75±0.84
13.30±0.50
12.75±0.31
对照组
5
8.55±0.16
, 百拇医药
14.13±1.13
6.51±0.30
5.54±0.21
8.71±0.19
空白组
5
2.42±0.84
4.05±0.25
1.59±0.22
1.88±0.29
2.43±0.30
*
, 百拇医药
*
*
*
*
注：F检验P<0.01，*组间比较P<0.01。PaV：室旁核腹侧部。PaMP：室旁核内侧小细胞。.PaLM：室旁核外侧大细胞部。PaDC：室旁核背侧小帽。
由表中可以看出，FLN在各组PVN及其各部双侧(指两侧合并的平均密度)的密度存在差异。在F检验(P<0.01)基础上进行的Q检验，显示彼此间差异显著(P<0.01)。说明麻醉刺激对PVN神经元具有影响；但手针组刺激对PVN神经元的激活作用是在麻醉刺激基础上的进一步加强，且对PVN各部分神经元均具有激活作用。
2.3 FLN 在PVN及其各部(单侧)的分布密度及组内同侧、对侧比较(见表2)表2 FLN在PVN及其各部(单侧)的表达密度及组内同侧、对侧比较 单位：个/156.25
m2 组 别, http://www.100md.com
n
侧别
PaV
PaMP
PaLM
PaDC
PVN
手针组
5
同侧
10.17±0.43*
15.92±0.74
7.83±0.43*
, 百拇医药
13.08±0.57
11.75±0.38*
对侧
14.59±0.42
16.75±0.32
10.17±0.43
13.50±0.43
13.75±0.24
对照组
5
同侧
8.73±0.54
, 百拇医药
14.25±0.88
6.59±0.42
5.58±0.57
8.79±0.10
对侧
8.58±0.57
14.00±1.47
6.42±0.57
5.50±0.43
8.63±0.41
空白组
5
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同侧
2.45±0.83
4.25±0.32
1.50±0.43
2.00±0.27
2.50±0.24
对侧
2.59±0.92
3.83±0.43
1.67±0.27
2.00±0.27
2.44±0.37
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注：*与对侧比较P<0.01
由表中可以看出，FLN在各组PVN及其各部的密度值是不一致的。手针组对侧显著高于同侧(P<0.01)，主要表现在PaV，PaLM两部分，对照组和空白组同侧、对侧间无差异(P>0.05)。以上说明：手针组刺激激活了PVN双侧各部神经元，但以对侧更为明显，重点表现在对侧PaV和PaLM两部分。麻醉刺激不导致两侧差异。
2.4 各组PLN照片见72页图片。
3 讨论
3.1 c-fos癌基因的诱导和显示是一种反映神经通路的新方法，是神经元被激活的标志[5]，国内少数学者将这一方法用于针刺研究[6]。本研究在实施过程中，采取多项措施以防止非特异性应激反应的发生，并设立实验对照组和空白对照组，使得能从实验结果中有效分离出非特异性刺激所致的应激反应。结果显示针刺“肾俞”穴所致PVN中FLN密度值的组间差异、组内同侧、对侧差异十分显著，甚至在同一侧PVN的不同部分差异也非常明显。因此提示：(1)手针刺激右“肾俞”穴对PVN神经元具有激活作用，PVN参与了“肾俞”穴的针刺效应过程；(2)PVN神经元对同一方法刺激单侧“肾俞”穴的这种反应上的两侧差异，可能是导致“肾俞”穴针刺效应同侧、对侧差异的重要环节之一。
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3.2 关于“肾俞”穴针刺效应机理，国内外已有一些研究报道，虽各自的研究方法和着重点不同，但结果基本一致，即神经-内分泌系统在针刺效应中具有极其重要的作用[1，2，4]。神经生物学研究揭示，PVN是神经体液调节的关键部位之一，它既具有神经内分泌的功能，又参与植物神经的控制，在实现交感—肾上腺髓质和下丘脑—垂体—肾上腺皮质两大系统的整合中起着重要作用。神经电生理学研究显示，电刺激PVN可引起ACTH的分泌，PVN参与调节肾交感神经节前神经元的传出活动[7]，参与肾神经传入所引起的升血ACTH效应等等[8]。
鉴于本实验研究的结果证明PVN参与了“肾俞”穴的针刺效应，因而可以设想：“肾俞”穴的针刺信息，在触发以背根节和交感神经节为中心的中枢外反射通路和脊髓低级中枢反射通路的同时可经背根节和脊髓的两次整合，上行(直接或间接)入PVN，并使其神经元激活，被激活的PVN神经元一方面由其投射到正中隆起的纤维分泌CRF和AVP，引起垂体前叶ACTH和β—EP的分泌，进而影响下丘脑—垂体—肾上腺皮质系统，调节机体内分泌水平；经其室旁核—脊髓路径，通过释放CRE和AVP，影响交感—肾上腺髓质系统，调节机体内脏运动的交感传出；另一方面其大神经分泌细胞分泌的VP，经垂体束到达垂体后叶释放入血，调节机体的水液代谢等。这一设想与现有的关于“肾俞”穴针刺效应的结论基本相符。其具体细节有待进一步研究、证实。
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3.3 针灸医学十分注重临证时选穴方法，如《灵枢*缪刺》和《灵枢
官针》都提到缪刺和巨刺，均有：“右取左，左取右”。《素问阴阳应象大论》也说：“故善用针者……以右治左，以左治右”。本研究以手针刺激右“肾俞”穴，导致了下丘脑室旁核功能状态的同侧、对侧差异，亦即给予“肾俞”穴的同一刺激对室旁核的影响“左、右”不同。因为双侧下丘脑室旁核不同的兴奋程度，势必会导致其对机体器官功能“左、右”影响的差异。所以，本研究结果，实际上为巨刺、缪刺“右取左，左取右，以左治右，以右治左”的刺穴方法和针刺效应的表达提供了直接的神经形态学证据。参 考 文 献
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作者简介：陈泽斌，男，1964年生，讲师。
收稿日期：1999-02-10, http://www.100md.com