醋酸甲羟孕酮对恶性肿瘤诱导血管形成的抑制作用
作者：谢守珍 顾美皎 程冀平 姚茂湘 曹亚莉
单位：
关键词：
中华妇产科杂志980222
(本文彩图在文章后)
1971年，Folkman[1]提出肿瘤的生 长依赖于血管形成，血管形成后肿瘤迅速增长和转移。本研究旨在探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)抑制妇科恶性肿瘤诱导的血管生成作用及其机理，并分析其与临床预后的关系。
一、材料与方法
1.材料及其来源：肿瘤标本取自1995年11月至1996年12月30日妇科及外科手术切除组织，其中卵巢恶性肿瘤11例(浆液性囊腺癌5例；粘液性囊腺癌3例；内胚窦瘤、无性细胞瘤、颗粒细胞瘤各1例)，子宫内膜腺癌9例，乳腺导管浸润性癌10例，均经同一位病理学专家复查确诊。每一样本分成2份，各用于组织学和血管形成分析。将用于血管形成分析的样本浸于含0.5%庆大霉素的等渗盐水中，3小时内种植至兔角膜。卵巢恶性肿瘤、子宫内膜癌按FIGO标准，乳腺癌按UICC标准分期，其中卵巢恶性肿瘤I期4例，Ⅱ～IV期7例；子宫内膜癌I期5例，Ⅱ～IⅡ期4例；乳腺癌I期6例，Ⅱ～IV期4例。
, 百拇医药
2.实验方法：(1)实验动物：日本雌性白兔，出生6周，体重2.5～3.0kg，由武汉总医院实验中心提供，共90只；(2)血管形成实验技术：参考Gimbrone法[2]，将参照Langer等[3]方法制备的聚乙烯醇酯膜，内含MPA 200μg(实验组)或不含MPA(对照组)，放置兔眼角膜袋基底部，然后两组均置入1.5mm3肿瘤组织。每例肿瘤组织种植3只兔的6只角膜，每只兔的左眼为实验组，右眼为对照组。
3.血管形成的观察：种植后每天肉眼观察并记录角膜缘血管形成情况，凡移植局部合并炎症或丢失了肿瘤组织的角膜不进入分析。种植后10天，将兔麻醉后在Olympus荧光眼底摄像机下实体照相。然后切下角膜固定在10%甲醛液中，角膜矢状切开，石蜡包埋，作3μm厚切片，采用苏木精伊红染色，光镜下照相。
4.血管形成分级及活性分析：参照Ishiwata法[4]。血管形成的判断标准为0级：没有新生血管；I级：新生血管自角膜缘长出；Ⅱ级：新生血管长入角膜袋。血管形成活性分为(-)～(+++)4个等级：(-)表示仅I级血管，并少于25%；(+)表示Ⅱ级血管10%～20%或I级血管25%～80% ；(++)表示Ⅱ级血管20%～50%或I级血管>80%；(+++)表示Ⅱ级血管>50%。
, 百拇医药
5.统计学方法：χ2检验及等级相关分析。
二、结果
1.恶性肿瘤组织诱导角膜血管形成和MPA对血管形成抑制作用的比较：30例肿瘤组织在实验组或对照组各应获得90只角膜，最后可评价角膜种植数对照组为82只(除外5只炎症，3只组织丢失)，实验组为83只(除外2只炎症，5只组织丢失)。结果提示，对照组的角膜新生血管形成率高达87.8%(72/82)，而实验组仅14.5%(12/83)，两组比较，差异有极显著性(P<0.01)。3种肿瘤组织各自的组间比较，差异也有极显著性(P<0.01)。见附表。
附表 MPA对3种肿瘤组织诱导血管形成的抑制作用 类别
角膜种植
(只数)
, 百拇医药
可评价角膜
(只数)
角膜血管形成
P值
只数
百分比(%)
卵巢恶性肿瘤
对照组
33
30
27
90.0
<0.01
, 百拇医药
实验组
33
31
4
12.9
子宫内膜癌
对照组
27
25
22
88.0
<0.01
实验组
, 百拇医药
27
24
3
12.5
乳腺癌
对照组
30
27
23
85.2
<0.01
实验组
30
, 百拇医药 28
5
17.9
合计
对照组
90
82
72
87.8
<0.01
实验组
90
83
12
, 百拇医药
14.5
从附表可见，不论对照组或实验组，3种肿瘤组织诱导新生血管形成率差异均无显著性(P>0.05)。对照组卵巢恶性肿瘤血管形成活性为(+++)，即Ⅱ级血管形成率60.0%(18/30)；子宫内膜癌血管形成活性为(++)，即Ⅱ级血管形成率24.0%(6/25)；乳腺癌血管形成活性为(++)，即Ⅱ级血管形成率25.9%(7/27)。3种肿瘤组织诱导血管形成活性以卵巢恶性肿瘤最强，其次为乳腺癌和子宫内膜癌。实验组只有12例血管形成，且仅为I级，全部Ⅱ级血管形成均受到抑制，即血管形成活性均为(-)。无论对照组或实验组的兔角膜血管形成或被抑制，光镜下均可见瘤细胞生存(图1，2)。
2.3种恶性肿瘤组织Ⅱ级血管形成与临床分期的关系：3种恶性肿瘤中临床分期为I期者15例，应获得角膜数45只，可评价角膜数40只，仅1例2只兔角膜Ⅱ级血管形成；而临床分期Ⅱ期及Ⅱ期以上者15例，同样获得角膜数45只，可评价角膜数42只，结果为29只兔角膜Ⅱ级血管形成，根据统计学等级相关分析，Ⅱ级血管形成与临床分期间存在正相关，差异有极显著性(rs=0.09，P<0.001)，即分期越晚，Ⅱ级血管形成越多。
, 百拇医药
三、讨论
1.MPA抗血管生成作用及其机理：研究证实，血管抑制剂在试管内对肿瘤细胞无抑制作用，而在生物体内却能抑制其生长，此制剂在体内通过抑制肿瘤血管形成而达到抑制肿瘤生长的作用。Grum等[5]报道17α-羟孕酮是一种抗血管生成的类固醇药。本研究采用的MPA(17α-羟基-6α甲基孕酮)具有很强的抗血管生成作用，本研究结果提示，对照组的血管形成率高达87.8%，而实验组仅14.5%；血管形成活性在对照组为(+++)或(++) ，而实验组为(-)。提示此药抗肿瘤作用是通过抑制肿瘤新生血管形成而实现的。可以预期血管形成抑制药与化疗药物配伍治疗恶性肿瘤将会取得显著的协同作用。已证明，MPA在试管内有抑制子宫内膜癌血管生成因子的活力， 及抑制血管内皮细胞产生的血管活性物质的作用。也有研究提示，MPA抑制血管形成与子宫内膜癌细胞内孕酮受体、细胞学分级无关[6]。实验证实，肿瘤细胞存活是角膜血管形成和维持的必需前提，本研究肿瘤组织内不加 MPA，可见肿瘤细胞存活及新生血管形成，而加有MPA也可见肿瘤细胞存活，但无新生血管形成，其机理可能是通过抑制肿瘤分泌的血管生成因子，或直接作用于血管内皮细胞实现的，而不是直接杀伤癌细胞所致。
, http://www.100md.com
2.妇科恶性肿瘤的血管形成与预后的关系：文献报道，在宫颈癌中，新生血管计数显著增多者预后差，并可作为肿瘤术后复发的一种独立预后因素[7]。本组恶性肿瘤患者，II级血管形成与临床分期间存在正相关(P<0.001)。故认为血管形成分级有可能作为判断临床预后指标之一。
参考文献
1Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. N Eng J Med, 1971, 285:1182-1186.
2Gimbrone MA Jr, Cotran RS, Leapman SB, et al. Tumor growth and neovascula- rization: an experimental model using the rabbit cornea. J Natl Cancer Inst, 1974, 52:413-427.
, 百拇医药
3Langer R , Folkman J. Polymers for the sustained release of proteins and other macromolecules. Nature, 1976, 263:797-800.
4Ishiwata I, Ishiwata C, Soma M, et al. Tumor angiogenic activity of gynecologic tumor cell lines on the chorioallantoic membrane. Gynecol Oncol, 1988, 29:87-93.
5Grum R, Szabo S, Folkma J. A new class of steroids inhibits angiogenesis in the pre- sence of heparin or a heparin fragment. Science, 1985, 203:1375-1378.
, http://www.100md.com
6Jikihara H, Terada N, Yamamoto R, et al. Inhibitory effect of medroxyproges- terone acetate on angiogenesis induced by human endometrial cancer. Am J Obstet Gynecol, 1992, 167:207-211.
7Doreen L, Wiggins MD, Cornelius O, et al. Tumor angiogensis as a prognostic factor in cervical carcinoma. Gynecol Oncol, 1995, 56:353-356.
(收稿：1997-03-04 修回：1997-12-08)
, 百拇医药
单位：
关键词：
中华妇产科杂志980222
(本文彩图在文章后)
1971年，Folkman[1]提出肿瘤的生 长依赖于血管形成，血管形成后肿瘤迅速增长和转移。本研究旨在探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)抑制妇科恶性肿瘤诱导的血管生成作用及其机理，并分析其与临床预后的关系。
一、材料与方法
1.材料及其来源：肿瘤标本取自1995年11月至1996年12月30日妇科及外科手术切除组织，其中卵巢恶性肿瘤11例(浆液性囊腺癌5例；粘液性囊腺癌3例；内胚窦瘤、无性细胞瘤、颗粒细胞瘤各1例)，子宫内膜腺癌9例，乳腺导管浸润性癌10例，均经同一位病理学专家复查确诊。每一样本分成2份，各用于组织学和血管形成分析。将用于血管形成分析的样本浸于含0.5%庆大霉素的等渗盐水中，3小时内种植至兔角膜。卵巢恶性肿瘤、子宫内膜癌按FIGO标准，乳腺癌按UICC标准分期，其中卵巢恶性肿瘤I期4例，Ⅱ～IV期7例；子宫内膜癌I期5例，Ⅱ～IⅡ期4例；乳腺癌I期6例，Ⅱ～IV期4例。
, 百拇医药
2.实验方法：(1)实验动物：日本雌性白兔，出生6周，体重2.5～3.0kg，由武汉总医院实验中心提供，共90只；(2)血管形成实验技术：参考Gimbrone法[2]，将参照Langer等[3]方法制备的聚乙烯醇酯膜，内含MPA 200μg(实验组)或不含MPA(对照组)，放置兔眼角膜袋基底部，然后两组均置入1.5mm3肿瘤组织。每例肿瘤组织种植3只兔的6只角膜，每只兔的左眼为实验组，右眼为对照组。
3.血管形成的观察：种植后每天肉眼观察并记录角膜缘血管形成情况，凡移植局部合并炎症或丢失了肿瘤组织的角膜不进入分析。种植后10天，将兔麻醉后在Olympus荧光眼底摄像机下实体照相。然后切下角膜固定在10%甲醛液中，角膜矢状切开，石蜡包埋，作3μm厚切片，采用苏木精伊红染色，光镜下照相。
4.血管形成分级及活性分析：参照Ishiwata法[4]。血管形成的判断标准为0级：没有新生血管；I级：新生血管自角膜缘长出；Ⅱ级：新生血管长入角膜袋。血管形成活性分为(-)～(+++)4个等级：(-)表示仅I级血管，并少于25%；(+)表示Ⅱ级血管10%～20%或I级血管25%～80% ；(++)表示Ⅱ级血管20%～50%或I级血管>80%；(+++)表示Ⅱ级血管>50%。
, 百拇医药
5.统计学方法：χ2检验及等级相关分析。
二、结果
1.恶性肿瘤组织诱导角膜血管形成和MPA对血管形成抑制作用的比较：30例肿瘤组织在实验组或对照组各应获得90只角膜，最后可评价角膜种植数对照组为82只(除外5只炎症，3只组织丢失)，实验组为83只(除外2只炎症，5只组织丢失)。结果提示，对照组的角膜新生血管形成率高达87.8%(72/82)，而实验组仅14.5%(12/83)，两组比较，差异有极显著性(P<0.01)。3种肿瘤组织各自的组间比较，差异也有极显著性(P<0.01)。见附表。
附表 MPA对3种肿瘤组织诱导血管形成的抑制作用 类别
角膜种植
(只数)
, 百拇医药
可评价角膜
(只数)
角膜血管形成
P值
只数
百分比(%)
卵巢恶性肿瘤
对照组
33
30
27
90.0
<0.01
, 百拇医药
实验组
33
31
4
12.9
子宫内膜癌
对照组
27
25
22
88.0
<0.01
实验组
, 百拇医药
27
24
3
12.5
乳腺癌
对照组
30
27
23
85.2
<0.01
实验组
30
, 百拇医药 28
5
17.9
合计
对照组
90
82
72
87.8
<0.01
实验组
90
83
12
, 百拇医药
14.5
从附表可见，不论对照组或实验组，3种肿瘤组织诱导新生血管形成率差异均无显著性(P>0.05)。对照组卵巢恶性肿瘤血管形成活性为(+++)，即Ⅱ级血管形成率60.0%(18/30)；子宫内膜癌血管形成活性为(++)，即Ⅱ级血管形成率24.0%(6/25)；乳腺癌血管形成活性为(++)，即Ⅱ级血管形成率25.9%(7/27)。3种肿瘤组织诱导血管形成活性以卵巢恶性肿瘤最强，其次为乳腺癌和子宫内膜癌。实验组只有12例血管形成，且仅为I级，全部Ⅱ级血管形成均受到抑制，即血管形成活性均为(-)。无论对照组或实验组的兔角膜血管形成或被抑制，光镜下均可见瘤细胞生存(图1，2)。
2.3种恶性肿瘤组织Ⅱ级血管形成与临床分期的关系：3种恶性肿瘤中临床分期为I期者15例，应获得角膜数45只，可评价角膜数40只，仅1例2只兔角膜Ⅱ级血管形成；而临床分期Ⅱ期及Ⅱ期以上者15例，同样获得角膜数45只，可评价角膜数42只，结果为29只兔角膜Ⅱ级血管形成，根据统计学等级相关分析，Ⅱ级血管形成与临床分期间存在正相关，差异有极显著性(rs=0.09，P<0.001)，即分期越晚，Ⅱ级血管形成越多。
, 百拇医药
三、讨论
1.MPA抗血管生成作用及其机理：研究证实，血管抑制剂在试管内对肿瘤细胞无抑制作用，而在生物体内却能抑制其生长，此制剂在体内通过抑制肿瘤血管形成而达到抑制肿瘤生长的作用。Grum等[5]报道17α-羟孕酮是一种抗血管生成的类固醇药。本研究采用的MPA(17α-羟基-6α甲基孕酮)具有很强的抗血管生成作用，本研究结果提示，对照组的血管形成率高达87.8%，而实验组仅14.5%；血管形成活性在对照组为(+++)或(++) ，而实验组为(-)。提示此药抗肿瘤作用是通过抑制肿瘤新生血管形成而实现的。可以预期血管形成抑制药与化疗药物配伍治疗恶性肿瘤将会取得显著的协同作用。已证明，MPA在试管内有抑制子宫内膜癌血管生成因子的活力， 及抑制血管内皮细胞产生的血管活性物质的作用。也有研究提示，MPA抑制血管形成与子宫内膜癌细胞内孕酮受体、细胞学分级无关[6]。实验证实，肿瘤细胞存活是角膜血管形成和维持的必需前提，本研究肿瘤组织内不加 MPA，可见肿瘤细胞存活及新生血管形成，而加有MPA也可见肿瘤细胞存活，但无新生血管形成，其机理可能是通过抑制肿瘤分泌的血管生成因子，或直接作用于血管内皮细胞实现的，而不是直接杀伤癌细胞所致。
, http://www.100md.com
2.妇科恶性肿瘤的血管形成与预后的关系：文献报道，在宫颈癌中，新生血管计数显著增多者预后差，并可作为肿瘤术后复发的一种独立预后因素[7]。本组恶性肿瘤患者，II级血管形成与临床分期间存在正相关(P<0.001)。故认为血管形成分级有可能作为判断临床预后指标之一。
参考文献
1Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. N Eng J Med, 1971, 285:1182-1186.
2Gimbrone MA Jr, Cotran RS, Leapman SB, et al. Tumor growth and neovascula- rization: an experimental model using the rabbit cornea. J Natl Cancer Inst, 1974, 52:413-427.
, 百拇医药
3Langer R , Folkman J. Polymers for the sustained release of proteins and other macromolecules. Nature, 1976, 263:797-800.
4Ishiwata I, Ishiwata C, Soma M, et al. Tumor angiogenic activity of gynecologic tumor cell lines on the chorioallantoic membrane. Gynecol Oncol, 1988, 29:87-93.
5Grum R, Szabo S, Folkma J. A new class of steroids inhibits angiogenesis in the pre- sence of heparin or a heparin fragment. Science, 1985, 203:1375-1378.
, http://www.100md.com
6Jikihara H, Terada N, Yamamoto R, et al. Inhibitory effect of medroxyproges- terone acetate on angiogenesis induced by human endometrial cancer. Am J Obstet Gynecol, 1992, 167:207-211.
7Doreen L, Wiggins MD, Cornelius O, et al. Tumor angiogensis as a prognostic factor in cervical carcinoma. Gynecol Oncol, 1995, 56:353-356.
(收稿：1997-03-04 修回：1997-12-08)
, 百拇医药