庆大霉素耳中毒后豚鼠椭圆囊斑和耳蜗毛细胞损伤与再生的观察
作者：刘冰 李西秦 吴润身 王锦玲 刘顺利
单位：030001 太原 山西医科大学第二医院耳鼻咽喉科(刘冰、李西秦、吴润身)；第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科(王锦玲、刘顺利)
关键词：
中华耳鼻咽喉科杂志980316 哺乳类动物内耳毛细胞损伤后能否再生和修复受到广大学者的关注。我们采用扫描、透射电镜和听性脑干反应(ABR)对豚鼠椭圆囊斑和耳蜗毛细胞在庆大霉素损伤后的再生和修复能力进行了研究，报道如下。
一、材料和方法
1.实验动物：健康杂色2～5周龄豚鼠56只，雌雄不拘。随机分成实验组29只和年龄对照组27只，相同条件饲养。测试ABR后实验组肌注庆大霉素，每日注射200 mg/kg体重，连续10天。年龄对照组为空白对照。于停药后的第1天和第1、2、3、4周与对照组在测试ABR后同批处死，每批5～9只不等。
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2.标本制备：豚鼠断头，快速取出颞骨，打开听泡，2.5%戊二醛溶液(pH值7.4)4℃固定后，于解剖显微镜下去除前庭和半规管部分骨壳，取出椭圆囊，轻柔吹掉囊斑上的耳石及耳石膜，同时去掉耳蜗蜗壳、螺旋韧带、血管纹、前庭膜及盖膜，1%的锇酸后固定，逐级乙腈脱水，干燥，喷金膜，S-520扫描电镜观察。制成的椭圆囊斑标本使用1%锇酸后固定，逐级丙酮脱水，丙酮与812环氧树脂包埋，超薄切片，乙酸双氧铀和枸椽酸铅复染，JEM-2000EX透射电镜观察。
二、结果
1.ABR测试结果：以Ⅲ波出现的给声强度(dB SPL)为ABR阈值，停药后存活4周动物的平均反应阈(18.89±1.69 dB SPL，
±s,下同)显著高于对照组(9.63± 0.63 dB SPL，P<0.01)。
2.椭圆囊斑：扫描电镜观察见存活1天者微纹区静纤毛散乱、倒伏、缺失；表皮板轻度膨胀。存活1周者纤毛束广泛消失，仅周边部有少数残存，且粗细不均；微纹区毛细胞消失处的表皮板膨胀，呈不规则形。存活2、3周者，受损毛细胞表皮板基本呈圆形或椭圆形，其中央及周边微绒毛逐渐增多。存活4周者出现较完整的圆形或椭圆形的表皮板，但较成熟毛细胞的表皮板小，其周边有较多的微绒毛，部分表皮板排列小纤毛束(图1)，比成熟的纤毛束短细，包括静纤毛和一根粗长的动纤毛，静纤毛束高度基本相同，不呈典型阶梯方式排列，几乎布满细胞顶面，周围有支持细胞包绕，排列方式与成熟毛细胞一致。
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透射电镜观察：存活1天者上皮变薄，几乎看不到完整的Ⅰ型毛细胞，表皮板破裂，胞浆溢出，胞质出现大空泡及液化灶，线粒体等细胞器变性、消失，部分核固缩，细胞崩解、消失或仅留胞核，神经末梢结构不清。Ⅱ型毛细胞和支持细胞损伤轻微，仅在皮板下区出现空泡。存活3周者支持细胞及其核上移，其上部增宽并填充毛细胞缺损区，其表面可见微绒毛。线粒体等细胞器聚集在皮板下区，胞浆内布满小泡，有多泡体，与Ⅱ型毛细胞相似的细胞增多(图2)。存活4周者细胞结构部分发育基本完整，未发育成熟的皮板下有较多的基粒体，偶见中心粒。胞顶有小纤毛束，其内有密度相对较低的微丝，与胞体连接处有毛根，并进入皮板内，部分细胞基部有传入神经突触。
3.耳蜗：扫描电镜观察见存活1天者底回及第2回3排外毛细胞和支持细胞均有损伤，表现为静纤毛倒伏、消失，静纤毛脱落的毛细胞表皮板水肿，支持细胞变形，微绒毛消失，内毛细胞静纤毛水肿、倒伏。存活1～3周者，损伤向顶部扩展，在静纤毛脱落的毛细胞顶面可见稀疏的微绒毛。存活4周者微绒毛密集，但不规则，未发现不成熟的小纤毛束。
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4.不同时间处死的对照组动物，椭圆囊斑和耳蜗均为正常形态。
三、讨论
一般认为恒温动物内耳毛细胞死亡后即丧失再生能力，引起永久性听力和平衡功能障碍。但近年来的研究认为鸟类内耳胚胎终止分裂后，再损伤仍可产生新毛细胞，哺乳类动物和鸟类的前庭在结构和功能上相似，故哺乳类动物的前庭器毛细胞损伤后也有可能再生。本研究的结果与李胜利等[1]和Forge等[2]的结果一致。支持细胞向毛细胞缺损区扩展等现象表明支持细胞参与受损毛细胞的再生和修复。皮板下区的细胞器等表明新毛细胞的生物氧化功能、蛋白合成和代谢功能及自唑功能旺盛。皮板位置的基粒体和中心粒表明新毛细胞有再生纤毛的能力。
存活4周豚鼠的耳蜗静纤毛脱落的毛细胞顶面未发现成形的小纤毛，且反应阈未恢复，耳蜗毛细胞受损后能否再生，有待进一步的研究。
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参考文献
1李胜利，朱宏亮，张全忠，等.氨基糖甙类抗生素损害鸡耳蜗后前庭感觉毛细胞再生及耳石体修复.中华耳鼻咽喉科杂志，1994，8:103-105.
2Forge A,Lin Li,Corwin JT,et al.Ultrastructural evidence for hair cell regeneration in the mammalian inner ear. Science,1993,259:1616-1619.
(收稿：1997-10-23 修回：1998-02-02), 百拇医药
单位：030001 太原 山西医科大学第二医院耳鼻咽喉科(刘冰、李西秦、吴润身)；第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科(王锦玲、刘顺利)
关键词：
中华耳鼻咽喉科杂志980316 哺乳类动物内耳毛细胞损伤后能否再生和修复受到广大学者的关注。我们采用扫描、透射电镜和听性脑干反应(ABR)对豚鼠椭圆囊斑和耳蜗毛细胞在庆大霉素损伤后的再生和修复能力进行了研究，报道如下。
一、材料和方法
1.实验动物：健康杂色2～5周龄豚鼠56只，雌雄不拘。随机分成实验组29只和年龄对照组27只，相同条件饲养。测试ABR后实验组肌注庆大霉素，每日注射200 mg/kg体重，连续10天。年龄对照组为空白对照。于停药后的第1天和第1、2、3、4周与对照组在测试ABR后同批处死，每批5～9只不等。
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2.标本制备：豚鼠断头，快速取出颞骨，打开听泡，2.5%戊二醛溶液(pH值7.4)4℃固定后，于解剖显微镜下去除前庭和半规管部分骨壳，取出椭圆囊，轻柔吹掉囊斑上的耳石及耳石膜，同时去掉耳蜗蜗壳、螺旋韧带、血管纹、前庭膜及盖膜，1%的锇酸后固定，逐级乙腈脱水，干燥，喷金膜，S-520扫描电镜观察。制成的椭圆囊斑标本使用1%锇酸后固定，逐级丙酮脱水，丙酮与812环氧树脂包埋，超薄切片，乙酸双氧铀和枸椽酸铅复染，JEM-2000EX透射电镜观察。
二、结果
1.ABR测试结果：以Ⅲ波出现的给声强度(dB SPL)为ABR阈值，停药后存活4周动物的平均反应阈(18.89±1.69 dB SPL，
±s,下同)显著高于对照组(9.63± 0.63 dB SPL，P<0.01)。2.椭圆囊斑：扫描电镜观察见存活1天者微纹区静纤毛散乱、倒伏、缺失；表皮板轻度膨胀。存活1周者纤毛束广泛消失，仅周边部有少数残存，且粗细不均；微纹区毛细胞消失处的表皮板膨胀，呈不规则形。存活2、3周者，受损毛细胞表皮板基本呈圆形或椭圆形，其中央及周边微绒毛逐渐增多。存活4周者出现较完整的圆形或椭圆形的表皮板，但较成熟毛细胞的表皮板小，其周边有较多的微绒毛，部分表皮板排列小纤毛束(图1)，比成熟的纤毛束短细，包括静纤毛和一根粗长的动纤毛，静纤毛束高度基本相同，不呈典型阶梯方式排列，几乎布满细胞顶面，周围有支持细胞包绕，排列方式与成熟毛细胞一致。
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透射电镜观察：存活1天者上皮变薄，几乎看不到完整的Ⅰ型毛细胞，表皮板破裂，胞浆溢出，胞质出现大空泡及液化灶，线粒体等细胞器变性、消失，部分核固缩，细胞崩解、消失或仅留胞核，神经末梢结构不清。Ⅱ型毛细胞和支持细胞损伤轻微，仅在皮板下区出现空泡。存活3周者支持细胞及其核上移，其上部增宽并填充毛细胞缺损区，其表面可见微绒毛。线粒体等细胞器聚集在皮板下区，胞浆内布满小泡，有多泡体，与Ⅱ型毛细胞相似的细胞增多(图2)。存活4周者细胞结构部分发育基本完整，未发育成熟的皮板下有较多的基粒体，偶见中心粒。胞顶有小纤毛束，其内有密度相对较低的微丝，与胞体连接处有毛根，并进入皮板内，部分细胞基部有传入神经突触。
3.耳蜗：扫描电镜观察见存活1天者底回及第2回3排外毛细胞和支持细胞均有损伤，表现为静纤毛倒伏、消失，静纤毛脱落的毛细胞表皮板水肿，支持细胞变形，微绒毛消失，内毛细胞静纤毛水肿、倒伏。存活1～3周者，损伤向顶部扩展，在静纤毛脱落的毛细胞顶面可见稀疏的微绒毛。存活4周者微绒毛密集，但不规则，未发现不成熟的小纤毛束。
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4.不同时间处死的对照组动物，椭圆囊斑和耳蜗均为正常形态。
三、讨论
一般认为恒温动物内耳毛细胞死亡后即丧失再生能力，引起永久性听力和平衡功能障碍。但近年来的研究认为鸟类内耳胚胎终止分裂后，再损伤仍可产生新毛细胞，哺乳类动物和鸟类的前庭在结构和功能上相似，故哺乳类动物的前庭器毛细胞损伤后也有可能再生。本研究的结果与李胜利等[1]和Forge等[2]的结果一致。支持细胞向毛细胞缺损区扩展等现象表明支持细胞参与受损毛细胞的再生和修复。皮板下区的细胞器等表明新毛细胞的生物氧化功能、蛋白合成和代谢功能及自唑功能旺盛。皮板位置的基粒体和中心粒表明新毛细胞有再生纤毛的能力。
存活4周豚鼠的耳蜗静纤毛脱落的毛细胞顶面未发现成形的小纤毛，且反应阈未恢复，耳蜗毛细胞受损后能否再生，有待进一步的研究。
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参考文献
1李胜利，朱宏亮，张全忠，等.氨基糖甙类抗生素损害鸡耳蜗后前庭感觉毛细胞再生及耳石体修复.中华耳鼻咽喉科杂志，1994，8:103-105.
2Forge A,Lin Li,Corwin JT,et al.Ultrastructural evidence for hair cell regeneration in the mammalian inner ear. Science,1993,259:1616-1619.
(收稿：1997-10-23 修回：1998-02-02), 百拇医药