虫草多糖体外对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响
作者：金涌 李俊 樊美珍 张运芳 李常玉 徐叔云
单位：金涌 李俊 张运芳 李常玉 徐叔云(安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230032)；樊美珍(安徽农业大学，合肥 230034)
关键词：冬虫夏草；药理学；多糖类；药理学；关节炎；佐剂性；免疫学
安徽医科大学学报000106 摘要 目的 观察虫草多糖体外对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响。方法 采用佐剂性关节炎大鼠(AA)的免疫细胞体外给药培养并检测一些免疫指标(ConA增殖反应、IL-1、IL-2)。结果 虫草多糖(10、100 mg.L-1)既对AA大鼠过低的ConA增殖反应有明显的促进作用，又对AA大鼠低下的IL-2产生有明显的促进作用。但5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)对AA大鼠过高的IL-1产生无明显影响。结论 虫草多糖可能具有免疫增强作用。
, 百拇医药
中图分类号 R-332；R977.7；R684.3
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0020-02
Effect of cordyceps polysaccharides on immune
function in adjuvant arthritis rats in vitro
Jin Yong，Li Jun， Fan Meizheng et al
(Institute of Clinical Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective To observe effect of cordyceps polysaccharides (CP) on immune function in adjuvant arthritis (AA) rats in vitro. Methods Using immune cells culture in vitro in AA rats with CP in order to detect the change of ConA-induced splenocyte proliferation、 IL-1 and IL-2 synthesis. Results CP (10、100 mg.L-1) could not only enhance the reduced ConA-induced splenocyte proliferation, but also improve the decreased IL-2 synthesis in AA rats. But five concentrations (0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1) of CP could not reduce the elevated IL-1 production of peritoneal macrophages (PMФs). Conclusion CP may have immuno-enhanced function.
, 百拇医药
MeSH cordycepes sinensis/pharmacology; polysaccharides/pharmacology; Arthritis, adjuvant/immunology
虫草多糖是从安徽产虫草中提取的有效成分，虫草与冬虫夏草同科。作为滋补品虫草早已用于临床。本实验采用体外给药方法，观察虫草多糖对佐剂性关节炎大鼠(AA)免疫异常细胞的影响。为将虫草多糖开发成新药提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 药物 虫草多糖，系安徽省产古尼虫草小孢变种(Cordyceps gunnii var minor nov)，经水提醇沉法提取并多次精制而得，多糖含量97%，安徽农业大学提供；二甲苯，安徽蚌埠化学试剂厂产品；ConA、LPS为美国Sigma公司产品；RPMI-1640培养液，美国Cibco产品；[3H]-TdR:中国科学院上海原子能产品。
, http://www.100md.com
1.2 仪器 Napco-6100型细胞培养箱，美国杜邦公司产品。FJ-2107型液体闪烁计数仪，西安262厂生产。GL20A高速冷冻离心机，湖南离心机厂生产。
1.3 动物 Sprague-Dawlay(SD)大鼠，♂，体重180 g±20 g；C57BL/6J小鼠♂，体重18 g±2 g，以上动物购自安徽医科大学动物实验中心(皖医实动准字002)。
1.4 方法
1.4.1 模型制备〔1〕 将灭活的卡介苗加入无菌的液状石蜡中，乳化制成Freund完全佐剂。卡介苗的浓度为10 g.L-1，于每鼠右后足跖皮内注射Freund完全佐剂0.1 ml致炎，第27天处死大鼠。
1.4.2 ConA诱导大鼠脾淋巴细胞增殖〔2〕 按本所常规方法，采用ConA(3 mg.L-1)诱导大鼠脾淋巴细胞增殖并检测。
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1.4.3 IL-2的产生与检测〔3〕 按本所常规方法采用ConA(3 mg.L-1)诱导大鼠脾细胞产生IL-2，并用小鼠活化脾细胞增殖检测其活性。
1.4.4 IL-1的产生与检测〔4〕 按本所常规方法，采用LPS(5 mg.L-1)诱导大鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1，并用小鼠胸腺细胞增殖法检测其活性。
1.4.5 浓度设置 虫草多糖设5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)。
1.5 统计学处理 结果均以
±s表示，两样本均数比较采用t检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 虫草多糖对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖反应的影响 如表1所示，虫草多糖(10、100 mg.L-1)对AA大鼠低下的ConA增殖反应有明显的促进作用。
表1 虫草多糖对AA大鼠ConA增殖反应的影响(±s,n=5) 组别
剂量
(mg.L-1)
ConA增殖反应
(cmp×103)
正常大鼠
, http://www.100md.com
—
10.28±0.54
AA大鼠
—
6.38±0.46**
AA+虫草多糖
100
8.09±0.24＃＃
10
7.51±0.38＃＃
1
6.93±0.36
, http://www.100md.com
0.1
6.60±0.25
0.01
6.45±0.18
与正常对照组比较，**P<0.01；与AA组比较＃＃P<0.01
2.2 虫草多糖对IL-2产生的影响 如表2所示，虫草多糖(10、100 mg.L-1)对AA大鼠过低的IL-2产生有明显的促进作用。
2.3 虫草多糖对IL-1产生的影响 如表3所示，5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)的虫草多糖对AA大鼠过高的IL-1产生无明显影响。
, http://www.100md.com
表2 虫草多糖对AA大鼠IL-2产生的影响(±s,n=5) 组别
剂量
(mg.L-1)
IL-2
(cpm×103)
正常大鼠
-
9.07±0.15
AA大鼠
-
, 百拇医药
5.26±0.29**
AA+虫草多糖
100
6.23±0.34＃＃
10
5.90±0.17＃＃
1
5.23±0.29
0.1
5.31±0.32
0.01
, http://www.100md.com 5.22±0.24
与正常组比较，**P<0.01；与AA组比较，＃＃P<0.01表3 虫草多糖对AA大鼠IL-1产生的影响(±s,n=5) 组别
剂量
(mg.L-1)
IL-1
(cpm×103)
正常大鼠
-
4.66±0.25
, 百拇医药
AA大鼠
-
9.13±0.32**
AA+虫草多糖
100
9.09±0.33
10
9.08±0.35
1
9.15±0.40
0.1
9.06±0.32
, 百拇医药
0.01
9.10±0.30
与正常组比较，**P<0.013 讨论
体外实验结果表明，虫草多糖(10、100 mg.L-1)既对AA大鼠低下的ConA增殖反应有明显的促进作用，又对AA大鼠过低的IL-2产生有明显的促进作用，而5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)的虫草多糖对AA大鼠过高的IL-1产生无明显影响。提示虫草多糖较高浓度下可能具有免疫增强或调节作用。这与虫草的滋补、强壮作用是一致的，对将虫草多糖确定为虫草的有效部位并开发成新药有一定的参考价值。但由于体内和体外是两种不同的环境，而体内实验更具说服力，体外实验的结果应得到体内实验的检验。因此，对虫草多糖的免疫调节作用，我们将进一步在整体和其他免疫模型上进行进一步研究。
, http://www.100md.com
作者简介：金 涌，男，30岁，硕士，讲师；
徐叔云，男，68岁，教授，博士生导师
参考文献
1，於传斌.免疫性炎症模型.见徐叔云等主编.药理实验方法学.北京：北京人民卫生出版社，1991：723～25
2，Yamamoto I, Ohemori H，Sesano M et al. ConA-induced proliferative respone of splenocytes from arthritic rat. Drugs Exptl Clin Res, 1982;8(1):5～9
3，丁桂凤，席宏丽，邓玉兰 等. 用活化小鼠脾细胞测定IL-2. 上海免疫学杂志，1988；8(1)：64～70
4，梁君山，魏 伟，周爱武等. 白细胞介素-1的检测及白芍总甙对其影响. 中国药理学通报，1989；5(4)：354
1999-10-29收稿，1999-12-22修回, 百拇医药
单位：金涌 李俊 张运芳 李常玉 徐叔云(安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230032)；樊美珍(安徽农业大学，合肥 230034)
关键词：冬虫夏草；药理学；多糖类；药理学；关节炎；佐剂性；免疫学
安徽医科大学学报000106 摘要 目的 观察虫草多糖体外对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响。方法 采用佐剂性关节炎大鼠(AA)的免疫细胞体外给药培养并检测一些免疫指标(ConA增殖反应、IL-1、IL-2)。结果 虫草多糖(10、100 mg.L-1)既对AA大鼠过低的ConA增殖反应有明显的促进作用，又对AA大鼠低下的IL-2产生有明显的促进作用。但5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)对AA大鼠过高的IL-1产生无明显影响。结论 虫草多糖可能具有免疫增强作用。
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中图分类号 R-332；R977.7；R684.3
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0020-02
Effect of cordyceps polysaccharides on immune
function in adjuvant arthritis rats in vitro
Jin Yong，Li Jun， Fan Meizheng et al
(Institute of Clinical Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective To observe effect of cordyceps polysaccharides (CP) on immune function in adjuvant arthritis (AA) rats in vitro. Methods Using immune cells culture in vitro in AA rats with CP in order to detect the change of ConA-induced splenocyte proliferation、 IL-1 and IL-2 synthesis. Results CP (10、100 mg.L-1) could not only enhance the reduced ConA-induced splenocyte proliferation, but also improve the decreased IL-2 synthesis in AA rats. But five concentrations (0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1) of CP could not reduce the elevated IL-1 production of peritoneal macrophages (PMФs). Conclusion CP may have immuno-enhanced function.
, 百拇医药
MeSH cordycepes sinensis/pharmacology; polysaccharides/pharmacology; Arthritis, adjuvant/immunology
虫草多糖是从安徽产虫草中提取的有效成分，虫草与冬虫夏草同科。作为滋补品虫草早已用于临床。本实验采用体外给药方法，观察虫草多糖对佐剂性关节炎大鼠(AA)免疫异常细胞的影响。为将虫草多糖开发成新药提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 药物 虫草多糖，系安徽省产古尼虫草小孢变种(Cordyceps gunnii var minor nov)，经水提醇沉法提取并多次精制而得，多糖含量97%，安徽农业大学提供；二甲苯，安徽蚌埠化学试剂厂产品；ConA、LPS为美国Sigma公司产品；RPMI-1640培养液，美国Cibco产品；[3H]-TdR:中国科学院上海原子能产品。
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1.2 仪器 Napco-6100型细胞培养箱，美国杜邦公司产品。FJ-2107型液体闪烁计数仪，西安262厂生产。GL20A高速冷冻离心机，湖南离心机厂生产。
1.3 动物 Sprague-Dawlay(SD)大鼠，♂，体重180 g±20 g；C57BL/6J小鼠♂，体重18 g±2 g，以上动物购自安徽医科大学动物实验中心(皖医实动准字002)。
1.4 方法
1.4.1 模型制备〔1〕 将灭活的卡介苗加入无菌的液状石蜡中，乳化制成Freund完全佐剂。卡介苗的浓度为10 g.L-1，于每鼠右后足跖皮内注射Freund完全佐剂0.1 ml致炎，第27天处死大鼠。
1.4.2 ConA诱导大鼠脾淋巴细胞增殖〔2〕 按本所常规方法，采用ConA(3 mg.L-1)诱导大鼠脾淋巴细胞增殖并检测。
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1.4.3 IL-2的产生与检测〔3〕 按本所常规方法采用ConA(3 mg.L-1)诱导大鼠脾细胞产生IL-2，并用小鼠活化脾细胞增殖检测其活性。
1.4.4 IL-1的产生与检测〔4〕 按本所常规方法，采用LPS(5 mg.L-1)诱导大鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1，并用小鼠胸腺细胞增殖法检测其活性。
1.4.5 浓度设置 虫草多糖设5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)。
1.5 统计学处理 结果均以
±s表示，两样本均数比较采用t检验。, 百拇医药
2 结果
2.1 虫草多糖对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖反应的影响 如表1所示，虫草多糖(10、100 mg.L-1)对AA大鼠低下的ConA增殖反应有明显的促进作用。
表1 虫草多糖对AA大鼠ConA增殖反应的影响(
±s,n=5) 组别剂量
(mg.L-1)
ConA增殖反应
(cmp×103)
正常大鼠
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—
10.28±0.54
AA大鼠
—
6.38±0.46**
AA+虫草多糖
100
8.09±0.24＃＃
10
7.51±0.38＃＃
1
6.93±0.36
, http://www.100md.com
0.1
6.60±0.25
0.01
6.45±0.18
与正常对照组比较，**P<0.01；与AA组比较＃＃P<0.01
2.2 虫草多糖对IL-2产生的影响 如表2所示，虫草多糖(10、100 mg.L-1)对AA大鼠过低的IL-2产生有明显的促进作用。
2.3 虫草多糖对IL-1产生的影响 如表3所示，5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)的虫草多糖对AA大鼠过高的IL-1产生无明显影响。
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表2 虫草多糖对AA大鼠IL-2产生的影响(
±s,n=5) 组别剂量
(mg.L-1)
IL-2
(cpm×103)
正常大鼠
-
9.07±0.15
AA大鼠
-
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5.26±0.29**
AA+虫草多糖
100
6.23±0.34＃＃
10
5.90±0.17＃＃
1
5.23±0.29
0.1
5.31±0.32
0.01
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与正常组比较，**P<0.01；与AA组比较，＃＃P<0.01表3 虫草多糖对AA大鼠IL-1产生的影响(
±s,n=5) 组别剂量
(mg.L-1)
IL-1
(cpm×103)
正常大鼠
-
4.66±0.25
, 百拇医药
AA大鼠
-
9.13±0.32**
AA+虫草多糖
100
9.09±0.33
10
9.08±0.35
1
9.15±0.40
0.1
9.06±0.32
, 百拇医药
0.01
9.10±0.30
与正常组比较，**P<0.013 讨论
体外实验结果表明，虫草多糖(10、100 mg.L-1)既对AA大鼠低下的ConA增殖反应有明显的促进作用，又对AA大鼠过低的IL-2产生有明显的促进作用，而5个浓度(0.01、0.1、1、10、100 mg.L-1)的虫草多糖对AA大鼠过高的IL-1产生无明显影响。提示虫草多糖较高浓度下可能具有免疫增强或调节作用。这与虫草的滋补、强壮作用是一致的，对将虫草多糖确定为虫草的有效部位并开发成新药有一定的参考价值。但由于体内和体外是两种不同的环境，而体内实验更具说服力，体外实验的结果应得到体内实验的检验。因此，对虫草多糖的免疫调节作用，我们将进一步在整体和其他免疫模型上进行进一步研究。
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作者简介：金 涌，男，30岁，硕士，讲师；
徐叔云，男，68岁，教授，博士生导师
参考文献
1，於传斌.免疫性炎症模型.见徐叔云等主编.药理实验方法学.北京：北京人民卫生出版社，1991：723～25
2，Yamamoto I, Ohemori H，Sesano M et al. ConA-induced proliferative respone of splenocytes from arthritic rat. Drugs Exptl Clin Res, 1982;8(1):5～9
3，丁桂凤，席宏丽，邓玉兰 等. 用活化小鼠脾细胞测定IL-2. 上海免疫学杂志，1988；8(1)：64～70
4，梁君山，魏 伟，周爱武等. 白细胞介素-1的检测及白芍总甙对其影响. 中国药理学通报，1989；5(4)：354
1999-10-29收稿，1999-12-22修回, 百拇医药