净血宁口服液中人参总皂甙含量测定的研究周向阳
作者：林梅兰 范志军
单位：永安药业有限责任公司
关键词：
海峡药学990334 净血宁口服液是一种保健调脂药品。本品以绞股蓝、黄芪、白术、淫羊藿、决明子、泽泻、、丹参等为原料，经水提、酒沉浓缩而成。具有益气消痰、健脾补肾，祛湿化瘀的功效，适用于高血脂症。绞股蓝系君药，其主要成分为人参皂甙，能与香草醛、高氯酸溶液反应显色，据此，我们建立了测定净血宁口服液中人参总皂甙含量的方法。本法稳定，重现性好，切实可行，现介绍于下。
1 仪器与试剂 分光光度计(751G 上海分析仪器厂)；所用试剂；均为分析纯
样品：永安药业有限责任公司生产；对照品：绞股蓝含有70余种皂甙[1]，它们均具有与人参皂甙相似的四环三萜基本结构，其中5种与人参皂甙Rb1、Rb2、Rb3、Rd及F2相同，因此，选定以人参皂甙Rb1为对照品，测定制剂中总皂甙含量，作为控制制剂质量的重要指标。人参皂甙Rb1对照品由中国药品生物制品检定所提供。
, 百拇医药
2 提取条件的选定 选择提取条件时，以经水饱和的正丁醇为溶剂，对不同提取次数和溶剂体积进行比较。(见表1、2)说明提取3次，相对提取率已达94%；提取3次含量为0.556%提取5次含量为0.564%，结果相近。所以本文择定提取3次，提取溶剂体积为50ml。
表1 提取率试验(n=2) 提次次数
1
2
3
4
5
每次提取率
(%)
73.0
, 百拇医药
13.1
7.8
3.8
2.2
累计提取率
(%)
73.0
86.1
93.9
97.7
99.9
表2 不同体积溶液提取的比较(n=3) 溶剂体积(ml)
, 百拇医药 25
50
75
含量(%)
0.512
0.556
0.548
3 呈色条件及测定波长的选择 绞股蓝皂甙与香草醛、高氯酸(或硫酸)混合可产生紫色反应。曾用香草醛与77%硫酸混合进行显色，结果发现样品在500～600nm波长范围内无最大吸收。后改用香草醛与高氯酸混合显色，对照品溶液与供试品溶液在550±10nm波长范围内有最大吸收。由于供试品所含皂甙成分复杂，影响因素较多，且吸收峰较为平缓，所以最大吸收波长有一定范围，与单一成分的对照品溶液吸收波长有些距离。根据上述实验结果及相关资料及标准，所以选择550nm波长作为测定波长。
, 百拇医药
4 标准曲线的制备 精密称取人参皂甙Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，摇匀，精密量取0、50、100、150、200、250μl，置水浴上蒸干，分别各加新鲜配制的5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15min。取出，迅速移入冰水中冷却2min，精密加冰醋酸5ml，摇匀，以相应试剂为空白，立即在550nm波长处分别用分光光度计测定吸收度。以吸收度为纵坐标，对照品量为横坐标绘制标准曲线。计算回归方程，Y＝2.033X+0.0244，r＝0.9998，表明皂甙在0.0348～0.695mg范围内呈良好的线性关系。
5 重现性试验 取制剂按样品测定项下的方法测定5次(同一批号)，结果(见表3)，表明该法重现性较好，RSD<3%。
表3 重现性试验结果(n＝5) 实验号
吸收度
, 百拇医药
RSD(%)
1
0.683
2
0.692
3
0.675
2.2
4
0.665
5
0.655
6 显色稳定性试验 取对照品溶液，呈色后在不同时间内测定，以考察显色稳定性(见表4)。试验表明随着时间的延长，吸收度呈缓慢下降。因此，正文规定显色后放入冰水中冷却2min，加冰醋酸后，立即进行测定，以减少误差。表4 显色稳定性试验 时间(min)
, 百拇医药
0
2
5
10
15
20
30
45
60
90
120
吸收度
0.288
0.286
, 百拇医药
0.282
0.278
0.273
0.269
0.262
0.255
0.242
0.228
0.217
7 空白试验 除以0.2ml的正丁醇代替样品外，其他按样品测定项下的方法测定，试剂空白吸收度均为0.03(n＝5)。由于试剂空白吸收度较小，可用冰醋酸溶液代替试剂空白，所以正文不规定用试剂空白校正。
, 百拇医药 8 回收率测定 采用加样品回收法测定回收率，精密称取不同量的Rb1对照品，加入已知含量的样品中，按样品测定项下的方法测定(见表5)。试验表明本法回收率较高，方法可行。
表5 回收率测定(n＝5) 实验号
样品中总
皂甙量
(mg)
添加人
参皂甙
Rb1量(mg)
测定总
皂甙量
, 百拇医药
(mg)
回收率
(%)
平 均
回收率
(%)
RSD
(%)
1
30.6
13.7
43.8
96.4
, http://www.100md.com
2
30.6
21.4
51.9
99.5
3
28.4
28.9
55.6
94.1
97.9
3.0
4
, http://www.100md.com
28.4
40.5
67.9
97.5
5
26.7
55.8
83.5
91.8
9 样品测定 精密量取本品10ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇溶液提取3次(20、15、10ml)，合并正丁醇溶液。用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml。弃去水层，正丁醇溶液置水浴上蒸干。残渣用甲醇转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取200μl，照标准曲线制备法项下的方法，自“置水浴上蒸干”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂甙Rb1的含量(见表6)。
, http://www.100md.com
表6 5批样品的含量测定 批 号
总皂甙含量(n＝3)(%)
RSD(%)
980601
0.52
1.5
980602
0.58
2.7
980603
0.56
2.0
980401
0.61
2.1
980501
0.48
1.6
参考文献
1 李纯等：绞股蓝总皂甙含量测定方法的研究 南京大学学报1993；36(10)∶37, 百拇医药
单位：永安药业有限责任公司
关键词：
海峡药学990334 净血宁口服液是一种保健调脂药品。本品以绞股蓝、黄芪、白术、淫羊藿、决明子、泽泻、、丹参等为原料，经水提、酒沉浓缩而成。具有益气消痰、健脾补肾，祛湿化瘀的功效，适用于高血脂症。绞股蓝系君药，其主要成分为人参皂甙，能与香草醛、高氯酸溶液反应显色，据此，我们建立了测定净血宁口服液中人参总皂甙含量的方法。本法稳定，重现性好，切实可行，现介绍于下。
1 仪器与试剂 分光光度计(751G 上海分析仪器厂)；所用试剂；均为分析纯
样品：永安药业有限责任公司生产；对照品：绞股蓝含有70余种皂甙[1]，它们均具有与人参皂甙相似的四环三萜基本结构，其中5种与人参皂甙Rb1、Rb2、Rb3、Rd及F2相同，因此，选定以人参皂甙Rb1为对照品，测定制剂中总皂甙含量，作为控制制剂质量的重要指标。人参皂甙Rb1对照品由中国药品生物制品检定所提供。
, 百拇医药
2 提取条件的选定 选择提取条件时，以经水饱和的正丁醇为溶剂，对不同提取次数和溶剂体积进行比较。(见表1、2)说明提取3次，相对提取率已达94%；提取3次含量为0.556%提取5次含量为0.564%，结果相近。所以本文择定提取3次，提取溶剂体积为50ml。
表1 提取率试验(n=2) 提次次数
1
2
3
4
5
每次提取率
(%)
73.0
, 百拇医药
13.1
7.8
3.8
2.2
累计提取率
(%)
73.0
86.1
93.9
97.7
99.9
表2 不同体积溶液提取的比较(n=3) 溶剂体积(ml)
, 百拇医药 25
50
75
含量(%)
0.512
0.556
0.548
3 呈色条件及测定波长的选择 绞股蓝皂甙与香草醛、高氯酸(或硫酸)混合可产生紫色反应。曾用香草醛与77%硫酸混合进行显色，结果发现样品在500～600nm波长范围内无最大吸收。后改用香草醛与高氯酸混合显色，对照品溶液与供试品溶液在550±10nm波长范围内有最大吸收。由于供试品所含皂甙成分复杂，影响因素较多，且吸收峰较为平缓，所以最大吸收波长有一定范围，与单一成分的对照品溶液吸收波长有些距离。根据上述实验结果及相关资料及标准，所以选择550nm波长作为测定波长。
, 百拇医药
4 标准曲线的制备 精密称取人参皂甙Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，摇匀，精密量取0、50、100、150、200、250μl，置水浴上蒸干，分别各加新鲜配制的5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15min。取出，迅速移入冰水中冷却2min，精密加冰醋酸5ml，摇匀，以相应试剂为空白，立即在550nm波长处分别用分光光度计测定吸收度。以吸收度为纵坐标，对照品量为横坐标绘制标准曲线。计算回归方程，Y＝2.033X+0.0244，r＝0.9998，表明皂甙在0.0348～0.695mg范围内呈良好的线性关系。
5 重现性试验 取制剂按样品测定项下的方法测定5次(同一批号)，结果(见表3)，表明该法重现性较好，RSD<3%。
表3 重现性试验结果(n＝5) 实验号
吸收度
, 百拇医药
RSD(%)
1
0.683
2
0.692
3
0.675
2.2
4
0.665
5
0.655
6 显色稳定性试验 取对照品溶液，呈色后在不同时间内测定，以考察显色稳定性(见表4)。试验表明随着时间的延长，吸收度呈缓慢下降。因此，正文规定显色后放入冰水中冷却2min，加冰醋酸后，立即进行测定，以减少误差。表4 显色稳定性试验 时间(min)
, 百拇医药
0
2
5
10
15
20
30
45
60
90
120
吸收度
0.288
0.286
, 百拇医药
0.282
0.278
0.273
0.269
0.262
0.255
0.242
0.228
0.217
7 空白试验 除以0.2ml的正丁醇代替样品外，其他按样品测定项下的方法测定，试剂空白吸收度均为0.03(n＝5)。由于试剂空白吸收度较小，可用冰醋酸溶液代替试剂空白，所以正文不规定用试剂空白校正。
, 百拇医药 8 回收率测定 采用加样品回收法测定回收率，精密称取不同量的Rb1对照品，加入已知含量的样品中，按样品测定项下的方法测定(见表5)。试验表明本法回收率较高，方法可行。
表5 回收率测定(n＝5) 实验号
样品中总
皂甙量
(mg)
添加人
参皂甙
Rb1量(mg)
测定总
皂甙量
, 百拇医药
(mg)
回收率
(%)
平 均
回收率
(%)
RSD
(%)
1
30.6
13.7
43.8
96.4
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2
30.6
21.4
51.9
99.5
3
28.4
28.9
55.6
94.1
97.9
3.0
4
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28.4
40.5
67.9
97.5
5
26.7
55.8
83.5
91.8
9 样品测定 精密量取本品10ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇溶液提取3次(20、15、10ml)，合并正丁醇溶液。用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml。弃去水层，正丁醇溶液置水浴上蒸干。残渣用甲醇转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取200μl，照标准曲线制备法项下的方法，自“置水浴上蒸干”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂甙Rb1的含量(见表6)。
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表6 5批样品的含量测定 批 号
总皂甙含量(n＝3)(%)
RSD(%)
980601
0.52
1.5
980602
0.58
2.7
980603
0.56
2.0
980401
0.61
2.1
980501
0.48
1.6
参考文献
1 李纯等：绞股蓝总皂甙含量测定方法的研究 南京大学学报1993；36(10)∶37, 百拇医药