薄层扫描法测定穿心莲中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量
作者：顾利红 朱品业
单位：广州市药品检验所510160
关键词：穿心莲；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯
中草药000410摘 要 采用薄层扫描法测定了15 批穿心莲商品药材中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量，并进行了比较。结果脱水穿心莲内酯高于穿心莲内酯的占26.7%，穿心莲内酯高于脱水穿心莲内酯的占53.3%，两者含量差异在±10%以内的占20.0%。
Determination of Andrographolide and 14-Deoxy-11,12-Didehydroandrographolide in Common Andrographis
(Andrographis paniculata) by TLCS
, http://www.100md.com
Guangzhou Institute for Drug Control (Guangzhou 510160) Gu Lihong and Zhu Pinye
Abstract Contents of andrographolide (Ⅰ) and 14-deoxy-11, 12-didehydroandrographolide (Ⅱ), the two bicyclic diterpenoid lactones in fifteen batches of the crude herb Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees obtained from the market were determined by TLCS. The results showed that 26.7% of the samples were more rich in Ⅱ than Ⅰ, and 53.3% of the samples were more rich in Ⅰ than Ⅱ. The remaining 20.0% showed a difference within ±10%.
, http://www.100md.com
Key words Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees andrographolide 14-deoxy-11, 12-didehydroandrographolide
穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees 的干燥地上部分，其主要有效成分为穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯[1]等。我们在起草《中华人民共和国药典》1995年版“穿心莲”质量标准时，发现药材供试液薄层色谱中，荧光淬灭斑点以脱水穿心莲内酯为主，因此含量测定项选择脱水穿心莲内酯为测定指标。此后，在标准的执行过程中，陆续发现了一些问题。我们在原方法[2]的基础上对展开剂等进行了改进，对重新收集的15 批商品药材作了测定，并同时测定了穿心莲内酯的含量，为进一步完善穿心莲质量标准提供了可靠依据。
1 仪器、试药和材料
, http://www.100md.com
岛津CS-930 型薄层扫描仪，定量毛细管(美国)；硅胶GF254(中国青岛海洋化工集团公司出品)，穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯(中国药品生物制品检定所提供，均为含量测定用)，所用试剂均为分析纯。
共收集广东、广西、福建3 省的15 批商品药材，均经过鉴定。
2 方法与结果
2.1 分析条件
2.1.1 薄层扫描条件：双波长反射法线性扫描，狭缝宽度6 mm×0.4 mm，线性参数Sx=3。穿心莲内酯λS=228 nm，λR=370 nm；脱水穿心莲内酯λS=263 nm，λR=370 nm，两对照品在紫外光区域的光谱扫描图见图1。
2.1.2 薄层条件：《中华人民共和国药典》1995年版采用氯仿-丙酮(15∶7.5)为展开剂， 展开时斑点稍扩散，且有时拖尾，改用氯仿-醋酸乙酯-甲醇(8∶6∶0.8)为展开剂，穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯分离度好，斑点Rf值适中。用0.3%CMC-Na为粘合剂铺制硅胶GF254板(20 cm×10 cm)。
, 百拇医药
1-穿心莲内酯 2-脱水穿心莲内酯
图1 紫外光区域光谱扫描图
2.2 线性范围试验：取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品各5 mg，分别精密称定，置5 mL量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。分别精密吸取0.5，1，2，3，4，5 μL点样于同一硅胶GF254薄层板上，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下定位，按上述条件扫描测定，以斑点面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：
穿心莲内酯 Y=1 137.79+2 468.66Xr=0.996
脱水穿心莲内酯 Y=1 736.59+2 667.67Xr=0.998
结果表明两成分在0.5～5.0 μg范围内均呈良好线性关系。
, 百拇医药
2.3 稳定性试验：精密吸取混合对照液2 μL点样，依法展开、扫描，每隔一定时间测定一次斑点峰面积积分值，结果两者在4 h内稳定，RSD分别为1.63%和1.70%。
2.4 精密度试验：精密吸取混合对照液2 μL点样，共8 个点，展开，扫描，平均积分值分别为穿心莲内酯：6 626.05，RSD=2.27%(n=7)；脱水穿心莲内酯7 253.33，RSD=2.79%(n=7)。
2.5 重现性试验：取同一来源药材(样3)，分别取样测定，测得结果穿心莲内酯含量为0.78%，RSD=2.29%(n=6)；脱水穿心莲内酯含量为0.733%，RSD=0.97%(n=6)。
2.6 样品测定：取样品粗粉0.5 g，精密称定，加乙醇30 mL先冷浸30 min，再超声处理30 min，滤过，残渣用乙醇适量洗涤3 次，并入滤液，蒸干，残渣加无水乙醇适量使溶解，定量转移至5 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液2～4 μL，混合对照品溶液1 μL与3 μL点样，依法测定，结果以干燥品计算，见表1。
, 百拇医药
2.7 加样回收试验：精密称取同一来源样品0.25 g，准确加入一定量的穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯对照品，依法提取测定，计算回收率。穿心莲内酯为99.5%，RSD=2.5%(n=6)，脱水穿心莲内酯为99.8%，RSD=2.8%(n=6)。
表1 样品测定结果 编号
来源
收集时间
药材概况
穿心莲内酯
(%)
脱水穿心莲内酯
(%)
总量
, 百拇医药
(%)
1
广东英德
1998-03-02
有果
0.398
1.157
1.555
2
福建漳浦
1998-03-02
有果
1.090
, 百拇医药
0.496
1.586
3
广东饶平
1998-03-02
叶多约占50%
0.738
0.733
1.471
4
新会药检所
1997-12-18
梗多，色枯黄
, 百拇医药
0.424
0.322
0.746
5
白云山中药厂
1997-10
全株，无果
0.840
0.436
1.276
6
白云山中药厂
1997-12
, http://www.100md.com
大部分为叶，有果
2.209
1.117
3.326
7
广州药材公司
1997-12
全株，色枯黄
0.143
1.318
1.461
8
肇庆药检所
, 百拇医药
1997-12-05
梗多，色枯黄
0.540
0.309
0.849
9
韶关药检所
1997-12-04
梗多，果多，色枯黄
0.449
0.312
0.761
, http://www.100md.com 10
南宁饮片厂
1998-02-26
有果
0.453
0.306
0.759
11
南宁医药公司
1998-02-26
果极少
0.963
1.112
, http://www.100md.com
2.075
12
南宁医药公司
1998-02-26
全株，有果
1.138
0.994
2.132
13
南宁药材站
199-02-26
有果
0.591
, 百拇医药
0.634
1.225
14
广西药材站
1998-02-26
无果，色枯黄
0.574
0.479
1.053
15
汕头药厂
1996-08
少果
, 百拇医药
0.315
0.902
1.217
3 讨论
3.1 实验中发现相同点样浓度时，脱水穿心莲内酯的荧光淬灭斑点明显大于穿心莲内酯。测定结果表明15 批样品中，穿心莲内酯含量高于脱水穿心莲内酯的占53.3%，穿心莲内酯含量低于脱水穿心莲内酯的占26.7%，两者含量差异在±10%以内的占20.0%。药理研究表明穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯都有一定的抑菌、抗炎作用[3，4]，因而以两者的总量作为衡量穿心莲药材质量优劣的指标更为合理。
3.2 穿心莲药材的性状与其有效成分的含量有着直接联系，本次收集的样品中，大部分药材均呈墨绿色，而叶和枝、梗均呈枯黄色的药材，其穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯含量均偏低。
顾利红(女，副主任中药师)
参考文献
1，中国人民解放军广州军区药训队.中草药通讯，1974，5(1)：43
2，中华人民共和国药典.广州：广东科技出版社，1995：237
3，邓文龙，等.药学通报，1982，17(4)：3
5，孟正木，等.中草药通讯，1979，10(7)：6
(1999-03-22收稿), http://www.100md.com
单位：广州市药品检验所510160
关键词：穿心莲；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯
中草药000410摘 要 采用薄层扫描法测定了15 批穿心莲商品药材中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量，并进行了比较。结果脱水穿心莲内酯高于穿心莲内酯的占26.7%，穿心莲内酯高于脱水穿心莲内酯的占53.3%，两者含量差异在±10%以内的占20.0%。
Determination of Andrographolide and 14-Deoxy-11,12-Didehydroandrographolide in Common Andrographis
(Andrographis paniculata) by TLCS
, http://www.100md.com
Guangzhou Institute for Drug Control (Guangzhou 510160) Gu Lihong and Zhu Pinye
Abstract Contents of andrographolide (Ⅰ) and 14-deoxy-11, 12-didehydroandrographolide (Ⅱ), the two bicyclic diterpenoid lactones in fifteen batches of the crude herb Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees obtained from the market were determined by TLCS. The results showed that 26.7% of the samples were more rich in Ⅱ than Ⅰ, and 53.3% of the samples were more rich in Ⅰ than Ⅱ. The remaining 20.0% showed a difference within ±10%.
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Key words Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees andrographolide 14-deoxy-11, 12-didehydroandrographolide
穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees 的干燥地上部分，其主要有效成分为穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯[1]等。我们在起草《中华人民共和国药典》1995年版“穿心莲”质量标准时，发现药材供试液薄层色谱中，荧光淬灭斑点以脱水穿心莲内酯为主，因此含量测定项选择脱水穿心莲内酯为测定指标。此后，在标准的执行过程中，陆续发现了一些问题。我们在原方法[2]的基础上对展开剂等进行了改进，对重新收集的15 批商品药材作了测定，并同时测定了穿心莲内酯的含量，为进一步完善穿心莲质量标准提供了可靠依据。
1 仪器、试药和材料
, http://www.100md.com
岛津CS-930 型薄层扫描仪，定量毛细管(美国)；硅胶GF254(中国青岛海洋化工集团公司出品)，穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯(中国药品生物制品检定所提供，均为含量测定用)，所用试剂均为分析纯。
共收集广东、广西、福建3 省的15 批商品药材，均经过鉴定。
2 方法与结果
2.1 分析条件
2.1.1 薄层扫描条件：双波长反射法线性扫描，狭缝宽度6 mm×0.4 mm，线性参数Sx=3。穿心莲内酯λS=228 nm，λR=370 nm；脱水穿心莲内酯λS=263 nm，λR=370 nm，两对照品在紫外光区域的光谱扫描图见图1。
2.1.2 薄层条件：《中华人民共和国药典》1995年版采用氯仿-丙酮(15∶7.5)为展开剂， 展开时斑点稍扩散，且有时拖尾，改用氯仿-醋酸乙酯-甲醇(8∶6∶0.8)为展开剂，穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯分离度好，斑点Rf值适中。用0.3%CMC-Na为粘合剂铺制硅胶GF254板(20 cm×10 cm)。
, 百拇医药
1-穿心莲内酯 2-脱水穿心莲内酯
图1 紫外光区域光谱扫描图
2.2 线性范围试验：取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品各5 mg，分别精密称定，置5 mL量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。分别精密吸取0.5，1，2，3，4，5 μL点样于同一硅胶GF254薄层板上，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下定位，按上述条件扫描测定，以斑点面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：
穿心莲内酯 Y=1 137.79+2 468.66Xr=0.996
脱水穿心莲内酯 Y=1 736.59+2 667.67Xr=0.998
结果表明两成分在0.5～5.0 μg范围内均呈良好线性关系。
, 百拇医药
2.3 稳定性试验：精密吸取混合对照液2 μL点样，依法展开、扫描，每隔一定时间测定一次斑点峰面积积分值，结果两者在4 h内稳定，RSD分别为1.63%和1.70%。
2.4 精密度试验：精密吸取混合对照液2 μL点样，共8 个点，展开，扫描，平均积分值分别为穿心莲内酯：6 626.05，RSD=2.27%(n=7)；脱水穿心莲内酯7 253.33，RSD=2.79%(n=7)。
2.5 重现性试验：取同一来源药材(样3)，分别取样测定，测得结果穿心莲内酯含量为0.78%，RSD=2.29%(n=6)；脱水穿心莲内酯含量为0.733%，RSD=0.97%(n=6)。
2.6 样品测定：取样品粗粉0.5 g，精密称定，加乙醇30 mL先冷浸30 min，再超声处理30 min，滤过，残渣用乙醇适量洗涤3 次，并入滤液，蒸干，残渣加无水乙醇适量使溶解，定量转移至5 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液2～4 μL，混合对照品溶液1 μL与3 μL点样，依法测定，结果以干燥品计算，见表1。
, 百拇医药
2.7 加样回收试验：精密称取同一来源样品0.25 g，准确加入一定量的穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯对照品，依法提取测定，计算回收率。穿心莲内酯为99.5%，RSD=2.5%(n=6)，脱水穿心莲内酯为99.8%，RSD=2.8%(n=6)。
表1 样品测定结果 编号
来源
收集时间
药材概况
穿心莲内酯
(%)
脱水穿心莲内酯
(%)
总量
, 百拇医药
(%)
1
广东英德
1998-03-02
有果
0.398
1.157
1.555
2
福建漳浦
1998-03-02
有果
1.090
, 百拇医药
0.496
1.586
3
广东饶平
1998-03-02
叶多约占50%
0.738
0.733
1.471
4
新会药检所
1997-12-18
梗多，色枯黄
, 百拇医药
0.424
0.322
0.746
5
白云山中药厂
1997-10
全株，无果
0.840
0.436
1.276
6
白云山中药厂
1997-12
, http://www.100md.com
大部分为叶，有果
2.209
1.117
3.326
7
广州药材公司
1997-12
全株，色枯黄
0.143
1.318
1.461
8
肇庆药检所
, 百拇医药
1997-12-05
梗多，色枯黄
0.540
0.309
0.849
9
韶关药检所
1997-12-04
梗多，果多，色枯黄
0.449
0.312
0.761
, http://www.100md.com 10
南宁饮片厂
1998-02-26
有果
0.453
0.306
0.759
11
南宁医药公司
1998-02-26
果极少
0.963
1.112
, http://www.100md.com
2.075
12
南宁医药公司
1998-02-26
全株，有果
1.138
0.994
2.132
13
南宁药材站
199-02-26
有果
0.591
, 百拇医药
0.634
1.225
14
广西药材站
1998-02-26
无果，色枯黄
0.574
0.479
1.053
15
汕头药厂
1996-08
少果
, 百拇医药
0.315
0.902
1.217
3 讨论
3.1 实验中发现相同点样浓度时，脱水穿心莲内酯的荧光淬灭斑点明显大于穿心莲内酯。测定结果表明15 批样品中，穿心莲内酯含量高于脱水穿心莲内酯的占53.3%，穿心莲内酯含量低于脱水穿心莲内酯的占26.7%，两者含量差异在±10%以内的占20.0%。药理研究表明穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯都有一定的抑菌、抗炎作用[3，4]，因而以两者的总量作为衡量穿心莲药材质量优劣的指标更为合理。
3.2 穿心莲药材的性状与其有效成分的含量有着直接联系，本次收集的样品中，大部分药材均呈墨绿色，而叶和枝、梗均呈枯黄色的药材，其穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯含量均偏低。
顾利红(女，副主任中药师)
参考文献
1，中国人民解放军广州军区药训队.中草药通讯，1974，5(1)：43
2，中华人民共和国药典.广州：广东科技出版社，1995：237
3，邓文龙，等.药学通报，1982，17(4)：3
5，孟正木，等.中草药通讯，1979，10(7)：6
(1999-03-22收稿), http://www.100md.com