YN-PTOL对O3衰老模型自由基损伤的保护作用
作者：陈友琴 胡新珉 刘鸿莲 幸浩洋
单位：华西医科大学 基础医学院物理教研室，四川 成都 610044
关键词：脂质过氧化物；臭氧；衰老；预处理
中国医学物理学杂志000120 摘要：本研究通过建立的臭氧(O3)致衰老的小鼠模型，采用改良硫代巴比妥酸荧光法，观察了云南花粉田七口服液(Yun Nan Pollen Tienchi Oral Liquid，简称YN-PTOL)预处理对血浆和心肌中脂质过氧化物(Lipid Peroxide, LPO)含量的影响。结果表明：预处理实验组LPO含量明显低于空白对照组和阳性对照组(P<0.05)，但空白对照组与阳性对照组相比，差别无显著性意义(P>0.05)。这表明：YN-PTOL预处理对O3致衰老小鼠模型的自由基损伤具有明显保护作用，是一种预防与治疗O3损伤的有效药物。
, 百拇医药
中图分类号： R977.9 文献标识码：A 文章编号：1005-202X(2000)01-0029-03
Protective effect of preconditioning with yunnan pollen tienchi oral liquid on free radical injury in mouse
CHEN You-qin, HU Xin-min, LIU Hong-liang, XI Huao-yan
(Department of Physics of Basic medical College, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610044 ,China)
Abstract: To determine whether preconditioning with YunNan Pollen Tienchi Oral Liquid (YN-PTOL) has protective effect, a model of aging was produced in mouse by inspiring an quantities Ozone (O3). Lipid peroxide (LPO) of plasma and myocardium was measured by the thinobarbituric acid (TBA) fluorescence spectrophotometry method. The result showed that the amount of LPO in the experimental group can be highly decreased than the blank group and the positive group(P<0.05), but no significant difference between the blank group and the positive group (P>0.05). The study indicated the preconlitioning with YN-PTOL protects the mouse from free radical injury.
, 百拇医药
Key words: lipid peroxide; ozone; aging; preconditioning
衰老的自由基学说[1]认为，随着增龄，自由基的产生与清除失衡，过剩的自由基可使细胞中的多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，不断地形成脂质过氧化物( Lipid Peroxide, LPO)，其分解产物则能引起细胞成分的损伤，最终导致衰老的发生。由于自然衰老的动物模型周期较长，要花费的时间与精力较多，因此，人们建立了自由基致衰老的动物模型，以便在短期内得到衰老动物，以供在对衰老的研究和抗衰老药物的研制中使用[2,3]。通过臭氧(O3)的一定量吸入可加速动物的衰老，得到动物的早衰模型[4,5]。O3致衰老的小鼠模型在动物行为学、形态学以及超氧化物歧化酶、单胺氧化酶活性、LPO含量水平已被有关学者检测并得以证实。在上述研究中，O3模型与自然衰老动物有着较好的相似。本研究旨在确定YN-PTOL预处理对O3致衰老模型自由基损伤是否具有保护作用。关于这方面的研究，国内外尚缺乏全面报道。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康雄性昆明种小白鼠(8～10周龄)32只，由华西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物和主要试剂
云南花粉田七口服液(主要成分为云南乔麦花粉、田七和蜂蜜。昆明宏达制药厂，批号：9808021)；四乙氧基丙烷(美国Fluka公司产品)；硫代巴比妥酸(上海试剂二厂)；其余试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器
成都肯格王公司DESP-04型臭氧发生器；日本岛津公司RF-5000型荧光分光光度计。
1.4 实验方法
, 百拇医药 1.4.1 臭氧饲养箱的制作(1.6×0.9×0.65)m2硬纸箱体，侧壁装电源开关，中央位置放置DESP-04型臭氧发生器，箱顶开直径20 cm通风器。O3箱内浓度为1.9 mg/m3。
1.4.2 小鼠的分组与处理 将实验用小白鼠按随机化原则分为四组。A组为YN-PTOL预处理试验组；B组为空白对照组；C组为阳性对照组(正常自然衰老小鼠)。A组为口服液0.5 ml/只/日；B组为0.5 ml(10%的白糖水)/只/日。将A、B、两组连续灌胃10天后放入臭氧饲养箱进行24小时O3污染20天，同时继续灌胃。C组常规饲养12个月。将受试小白鼠进行双眼球摘除取血后，迅速脱臼处死动物，打开胸腔，分离出心脏，用生理盐水反复洗涤，滤纸吸干表面水分，称重，用生理盐水在冰浴中制成10%匀浆。血浆和心肌中过氧化脂质含量按张秀明[6]等的改良硫代巴比妥酸荧光法测定。
, 百拇医药 1.5 统计学处理
本实验数据以平均值(标准差(
±SD)表示，采用两样本均数比较的t检验，所有处理显著性水准均取单侧α=0.05。
2 结果
2.1 预处理对小鼠血浆中LPO含量的影响
实验结果见表1
Table 1 LPO level in plasma of different groups (±SD) Group
n
LPO(μmol/l)
, 百拇医药
A
8
4.917±0.795*
B
8
6.953±0.944**
C
8
7.112±1.131***
*compared with B: P<0.05 ** compared with C: P>0.05 *** compared with A: P<0.052.2 对小鼠心脏组织中LPO含量的影响
, 百拇医药
实验结果见表2
Table 2 LPO level in myocardium of different groups (±SD) Group
n
LPO(μmol/l)
Group
n
LPO[μmol/l 匀浆(10%)]
A
8
5.313±0.846*
, 百拇医药
B
8
7.662±0.553**
C
8
8.009±1.084***
*compared with B: P<0.05 ** compared with C: P>0.05 *** compared with A: P<0.05
由表中结果可知，预先灌胃YN-POTL试验组LPO含量与空白对照组和阳性对照组相比，差别有显著性意义，而空白对照组和阳性对照组LPO含量均值无显著差别。
3 讨论
, 百拇医药
由O3所诱发的衰老模型能较好地模拟自由基损伤生物大分子而导致机体的衰老。O3在体内诱导产生的氧自由基，具有很高的反应活性，可使细胞中的多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，它以链式和链式支链反应的形式不断地形成LPO。LPO的生成和过剩，还能使细胞膜的脂质成分发生变化，进一步导致细胞膜内酶与蛋白质变性，加重了细胞结构和功能破坏。这种自由基导致脂质过氧化反应的非组织特异性，使得体内重要生命器管如心、脑、肝、肾等受损严重，进一步导致机体整体或局部生理功能的严重障碍，从而导致衰老[7]。
本实验观察到小鼠受到O3污染后，可引起体内自由基代谢紊乱，LPO含量增高，进一步证实O3致衰老模型与自然衰老动物有着良好的相似，与自由基密切相关，在衰老研究中具有一定的应用价值。结果表明：在将小鼠置于O3饲养箱之前，预先给予YN-PTOL，增强了内源性氧自由基清除系统的功能[8,9]，减少氧自由基作用于膜脂质生成的LPO，减轻了氧自由基对心肌的损伤。进一步证明了本室以前的研究结果，即YN-PTOL中含有丰富的抗氧化剂和自由基清除剂，YN-POTL对自由基清除作用的加强，实际上不仅抑制阻断了LPO的产生，使其含量下降，而且也起着良好的预防机体早衰的保健作用。
, 百拇医药
作者简介：陈友琴(1963年生)，女(白族)，云南省大理市人，大理医学院讲师 导师：胡新珉 研究方向：自由基与衰老
参考文献：
[1]Harman D. Free radical theory of aging[J]. the "free radial" dieases, Age. 1984,7:111.
[2]陈勒.抗衰老研究实验方法[M].北京:中国医药科技出版社,1996.
[3]苗明三.实验动物和动物实验技术[M].北京:中国医药科技出版社,1997.
[4]郭擎铮.一种快速衰老模型[C].1986年北京病理学会年会论文集,1986,8.
[5]Dailey PS. Ozonation in organic chemistry[M]. New York: Academic Press, 1978, 1:21.
, http://www.100md.com
[6]张秀明，严丽娟，柴建开,等.改良硫代巴比妥酸荧光法测定血清过氧化脂质[J].生物化学与生物物理进展,1996,23(2):175.
[7]Lestaro B. Free radical, athersclerosis, aging, and related dysmetabolic pathology: Pathological and clinical aspects[J], Eur J Cancer. Prev. 1997,3:6 suppl I: 531-6.
[8]Halliwell B. Gutteridge JMC. Lipid peroxidation, oxygen radical, cell damage, and antioxidant therapy[J]. Lancet, 1985,1:1396-7.
[9]Burce N. Oxidants, antioxidants, and the degenerative dieases of aging[J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993,90:7915-7922.
收稿日期：1999-06-05, http://www.100md.com
单位：华西医科大学 基础医学院物理教研室，四川 成都 610044
关键词：脂质过氧化物；臭氧；衰老；预处理
中国医学物理学杂志000120 摘要：本研究通过建立的臭氧(O3)致衰老的小鼠模型，采用改良硫代巴比妥酸荧光法，观察了云南花粉田七口服液(Yun Nan Pollen Tienchi Oral Liquid，简称YN-PTOL)预处理对血浆和心肌中脂质过氧化物(Lipid Peroxide, LPO)含量的影响。结果表明：预处理实验组LPO含量明显低于空白对照组和阳性对照组(P<0.05)，但空白对照组与阳性对照组相比，差别无显著性意义(P>0.05)。这表明：YN-PTOL预处理对O3致衰老小鼠模型的自由基损伤具有明显保护作用，是一种预防与治疗O3损伤的有效药物。
, 百拇医药
中图分类号： R977.9 文献标识码：A 文章编号：1005-202X(2000)01-0029-03
Protective effect of preconditioning with yunnan pollen tienchi oral liquid on free radical injury in mouse
CHEN You-qin, HU Xin-min, LIU Hong-liang, XI Huao-yan
(Department of Physics of Basic medical College, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610044 ,China)
Abstract: To determine whether preconditioning with YunNan Pollen Tienchi Oral Liquid (YN-PTOL) has protective effect, a model of aging was produced in mouse by inspiring an quantities Ozone (O3). Lipid peroxide (LPO) of plasma and myocardium was measured by the thinobarbituric acid (TBA) fluorescence spectrophotometry method. The result showed that the amount of LPO in the experimental group can be highly decreased than the blank group and the positive group(P<0.05), but no significant difference between the blank group and the positive group (P>0.05). The study indicated the preconlitioning with YN-PTOL protects the mouse from free radical injury.
, 百拇医药
Key words: lipid peroxide; ozone; aging; preconditioning
衰老的自由基学说[1]认为，随着增龄，自由基的产生与清除失衡，过剩的自由基可使细胞中的多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，不断地形成脂质过氧化物( Lipid Peroxide, LPO)，其分解产物则能引起细胞成分的损伤，最终导致衰老的发生。由于自然衰老的动物模型周期较长，要花费的时间与精力较多，因此，人们建立了自由基致衰老的动物模型，以便在短期内得到衰老动物，以供在对衰老的研究和抗衰老药物的研制中使用[2,3]。通过臭氧(O3)的一定量吸入可加速动物的衰老，得到动物的早衰模型[4,5]。O3致衰老的小鼠模型在动物行为学、形态学以及超氧化物歧化酶、单胺氧化酶活性、LPO含量水平已被有关学者检测并得以证实。在上述研究中，O3模型与自然衰老动物有着较好的相似。本研究旨在确定YN-PTOL预处理对O3致衰老模型自由基损伤是否具有保护作用。关于这方面的研究，国内外尚缺乏全面报道。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康雄性昆明种小白鼠(8～10周龄)32只，由华西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物和主要试剂
云南花粉田七口服液(主要成分为云南乔麦花粉、田七和蜂蜜。昆明宏达制药厂，批号：9808021)；四乙氧基丙烷(美国Fluka公司产品)；硫代巴比妥酸(上海试剂二厂)；其余试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器
成都肯格王公司DESP-04型臭氧发生器；日本岛津公司RF-5000型荧光分光光度计。
1.4 实验方法
, 百拇医药 1.4.1 臭氧饲养箱的制作(1.6×0.9×0.65)m2硬纸箱体，侧壁装电源开关，中央位置放置DESP-04型臭氧发生器，箱顶开直径20 cm通风器。O3箱内浓度为1.9 mg/m3。
1.4.2 小鼠的分组与处理 将实验用小白鼠按随机化原则分为四组。A组为YN-PTOL预处理试验组；B组为空白对照组；C组为阳性对照组(正常自然衰老小鼠)。A组为口服液0.5 ml/只/日；B组为0.5 ml(10%的白糖水)/只/日。将A、B、两组连续灌胃10天后放入臭氧饲养箱进行24小时O3污染20天，同时继续灌胃。C组常规饲养12个月。将受试小白鼠进行双眼球摘除取血后，迅速脱臼处死动物，打开胸腔，分离出心脏，用生理盐水反复洗涤，滤纸吸干表面水分，称重，用生理盐水在冰浴中制成10%匀浆。血浆和心肌中过氧化脂质含量按张秀明[6]等的改良硫代巴比妥酸荧光法测定。
, 百拇医药 1.5 统计学处理
本实验数据以平均值(标准差(
±SD)表示，采用两样本均数比较的t检验，所有处理显著性水准均取单侧α=0.05。2 结果
2.1 预处理对小鼠血浆中LPO含量的影响
实验结果见表1
Table 1 LPO level in plasma of different groups (
±SD) Groupn
LPO(μmol/l)
, 百拇医药
A
8
4.917±0.795*
B
8
6.953±0.944**
C
8
7.112±1.131***
*compared with B: P<0.05 ** compared with C: P>0.05 *** compared with A: P<0.052.2 对小鼠心脏组织中LPO含量的影响
, 百拇医药
实验结果见表2
Table 2 LPO level in myocardium of different groups (
±SD) Groupn
LPO(μmol/l)
Group
n
LPO[μmol/l 匀浆(10%)]
A
8
5.313±0.846*
, 百拇医药
B
8
7.662±0.553**
C
8
8.009±1.084***
*compared with B: P<0.05 ** compared with C: P>0.05 *** compared with A: P<0.05
由表中结果可知，预先灌胃YN-POTL试验组LPO含量与空白对照组和阳性对照组相比，差别有显著性意义，而空白对照组和阳性对照组LPO含量均值无显著差别。
3 讨论
, 百拇医药
由O3所诱发的衰老模型能较好地模拟自由基损伤生物大分子而导致机体的衰老。O3在体内诱导产生的氧自由基，具有很高的反应活性，可使细胞中的多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，它以链式和链式支链反应的形式不断地形成LPO。LPO的生成和过剩，还能使细胞膜的脂质成分发生变化，进一步导致细胞膜内酶与蛋白质变性，加重了细胞结构和功能破坏。这种自由基导致脂质过氧化反应的非组织特异性，使得体内重要生命器管如心、脑、肝、肾等受损严重，进一步导致机体整体或局部生理功能的严重障碍，从而导致衰老[7]。
本实验观察到小鼠受到O3污染后，可引起体内自由基代谢紊乱，LPO含量增高，进一步证实O3致衰老模型与自然衰老动物有着良好的相似，与自由基密切相关，在衰老研究中具有一定的应用价值。结果表明：在将小鼠置于O3饲养箱之前，预先给予YN-PTOL，增强了内源性氧自由基清除系统的功能[8,9]，减少氧自由基作用于膜脂质生成的LPO，减轻了氧自由基对心肌的损伤。进一步证明了本室以前的研究结果，即YN-PTOL中含有丰富的抗氧化剂和自由基清除剂，YN-POTL对自由基清除作用的加强，实际上不仅抑制阻断了LPO的产生，使其含量下降，而且也起着良好的预防机体早衰的保健作用。
, 百拇医药
作者简介：陈友琴(1963年生)，女(白族)，云南省大理市人，大理医学院讲师 导师：胡新珉 研究方向：自由基与衰老
参考文献：
[1]Harman D. Free radical theory of aging[J]. the "free radial" dieases, Age. 1984,7:111.
[2]陈勒.抗衰老研究实验方法[M].北京:中国医药科技出版社,1996.
[3]苗明三.实验动物和动物实验技术[M].北京:中国医药科技出版社,1997.
[4]郭擎铮.一种快速衰老模型[C].1986年北京病理学会年会论文集,1986,8.
[5]Dailey PS. Ozonation in organic chemistry[M]. New York: Academic Press, 1978, 1:21.
, http://www.100md.com
[6]张秀明，严丽娟，柴建开,等.改良硫代巴比妥酸荧光法测定血清过氧化脂质[J].生物化学与生物物理进展,1996,23(2):175.
[7]Lestaro B. Free radical, athersclerosis, aging, and related dysmetabolic pathology: Pathological and clinical aspects[J], Eur J Cancer. Prev. 1997,3:6 suppl I: 531-6.
[8]Halliwell B. Gutteridge JMC. Lipid peroxidation, oxygen radical, cell damage, and antioxidant therapy[J]. Lancet, 1985,1:1396-7.
[9]Burce N. Oxidants, antioxidants, and the degenerative dieases of aging[J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993,90:7915-7922.
收稿日期：1999-06-05, http://www.100md.com