介绍一种细胞石蜡包埋法
作者：吴惠茜 胡瑞德
单位：吴惠茜 胡瑞德(中山医科大学病理学教研室，广州 510080)
关键词：细胞；琼脂糖；石蜡包埋
临床与实验病理学杂志990335分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)03-0272-01
目前培养组织细胞和脱落细胞涂片常用的HE染色、特殊染色以及免疫组化染色存在着许多缺点。培养细胞和脱落细胞具有完整的细胞膜，虽经95%乙醇或丙酮固定，其细胞膜上的类脂质常不能充分溶解，影响了染料和抗体的渗透，细胞往往着色不良，结构不够清晰，免疫组化染色常造成假阴性的结果，有时难以确定阳性或阴性和判断阳性着色的部位。虽可用Triton X-100进行前处理以增加细胞膜的通透性，但其浓度、时间等不易掌握。用福尔马林固定后经梯度乙醇脱水和二甲苯处理的细胞石蜡包埋切片，可避免上述缺点，并且细胞集中、密度高、便于观察，所有的细胞都可被收集起来，提高了细胞的阳性检测率。下面介绍一种操作简便、结果满意的细胞石蜡包埋方法。
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1 材料与方法
1.1 材料 临床送检的脱落细胞，肺癌细胞株，琼脂糖、800型离心机(上海仪器厂)等。
1.2 方法 将用胰蛋白酶消化的培养细胞或送检的脱落细胞收集在锥形离心管内，用1 000 r/min速度离心5 min，弃上清液，加入适量的10%中性福尔马林，摇匀后将离心管斜放于4℃冰箱内，使细胞能与固定液充分接触，固定30～60 min后，离心弃上清液，PBS洗涤一次，留少许PBS(约100 μl)，以与细胞沉淀块混匀，便于吸取。取3%琼脂糖PBS液微波炉加热溶解后，吸取适量的琼脂糖滴于载玻片上，冷却至表面稍微凝固后用加样器吸取细胞注入琼脂糖内，即可见形成乳白色的细胞团。待完全凝固后，切去细胞团周边多余的琼脂，再按常规脱水、包埋、切片、染色。
2 结果
制备好的蜡块经过切片、染色后，可以见到HE染色细胞核和细胞浆着色好，结构清晰、染色鲜艳。免疫组化染色反应强，阳性部位易于辨别。
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3 讨论
培养细胞和脱落细胞的石蜡包埋切片，细胞经过梯度乙醇的脱水和二甲苯处理后细胞膜的类脂质得到充分的溶解，同时细胞被切片，有利于染料和免疫组化抗体的进入和渗透，使细胞的形态结构和免疫组化结果比涂片更清晰，与一般组织切片无异。用细胞涂片做免疫组化时，由于胸腹水带有红细胞和含有血浆，常会出现一些背景染色，使用石蜡包埋细胞方法可避免出现上述情况。
将细胞注入到载玻片上的琼脂糖内，操作简易，比将琼脂糖加入离心管内与细胞块混合的方法方便得多，可避免气泡形成，或琼脂糖在与细胞混合前受冷凝固等问题。要注意琼脂糖需要冷却且在没有凝固之前将细胞注入，温度过高细胞会受热变形，影响细胞的形态。琼脂糖过冷，接近凝固状态时则细胞难以注入。
从培养瓶中收集培养细胞做石蜡包埋切片时需经胰蛋白酶消化以及离心，这些都会影响细胞的形态，使细胞变圆、突起消失。为避免上述缺点，对计划用来进行细胞形态观察和免疫组化染色的培养细胞，在接种细胞前，不必将胰蛋白酶消化下来的细胞吹打分散，可将成团的细胞接种，以便细胞团形成较大的克隆，在适当的时候将它们挑出或刮出，经缓冲液洗涤后，即可固定、包埋切片。这样不仅能免除胰蛋白酶消化导致的形态改变，还可以观察到细胞间的相互关系，如鳞状细胞癌，甚至可以见到细胞间桥的结构。收取细胞的时间要适当，要在细胞生长旺盛又健康的状态下取出，避免细胞过度生长，引起大量凋亡或坏死，这样会见到大量细胞碎屑及变性的细胞。胰蛋白酶的消化虽对细胞形态有影响，但并不改变免疫组化染色的结果。离心会对细胞形态有些影响，因此离心机的速度不宜过高。
作者简介：吴惠茜，女，43岁，主管技师
收稿日期：1999-03-20, 百拇医药
单位：吴惠茜 胡瑞德(中山医科大学病理学教研室，广州 510080)
关键词：细胞；琼脂糖；石蜡包埋
临床与实验病理学杂志990335分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)03-0272-01
目前培养组织细胞和脱落细胞涂片常用的HE染色、特殊染色以及免疫组化染色存在着许多缺点。培养细胞和脱落细胞具有完整的细胞膜，虽经95%乙醇或丙酮固定，其细胞膜上的类脂质常不能充分溶解，影响了染料和抗体的渗透，细胞往往着色不良，结构不够清晰，免疫组化染色常造成假阴性的结果，有时难以确定阳性或阴性和判断阳性着色的部位。虽可用Triton X-100进行前处理以增加细胞膜的通透性，但其浓度、时间等不易掌握。用福尔马林固定后经梯度乙醇脱水和二甲苯处理的细胞石蜡包埋切片，可避免上述缺点，并且细胞集中、密度高、便于观察，所有的细胞都可被收集起来，提高了细胞的阳性检测率。下面介绍一种操作简便、结果满意的细胞石蜡包埋方法。
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1 材料与方法
1.1 材料 临床送检的脱落细胞，肺癌细胞株，琼脂糖、800型离心机(上海仪器厂)等。
1.2 方法 将用胰蛋白酶消化的培养细胞或送检的脱落细胞收集在锥形离心管内，用1 000 r/min速度离心5 min，弃上清液，加入适量的10%中性福尔马林，摇匀后将离心管斜放于4℃冰箱内，使细胞能与固定液充分接触，固定30～60 min后，离心弃上清液，PBS洗涤一次，留少许PBS(约100 μl)，以与细胞沉淀块混匀，便于吸取。取3%琼脂糖PBS液微波炉加热溶解后，吸取适量的琼脂糖滴于载玻片上，冷却至表面稍微凝固后用加样器吸取细胞注入琼脂糖内，即可见形成乳白色的细胞团。待完全凝固后，切去细胞团周边多余的琼脂，再按常规脱水、包埋、切片、染色。
2 结果
制备好的蜡块经过切片、染色后，可以见到HE染色细胞核和细胞浆着色好，结构清晰、染色鲜艳。免疫组化染色反应强，阳性部位易于辨别。
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3 讨论
培养细胞和脱落细胞的石蜡包埋切片，细胞经过梯度乙醇的脱水和二甲苯处理后细胞膜的类脂质得到充分的溶解，同时细胞被切片，有利于染料和免疫组化抗体的进入和渗透，使细胞的形态结构和免疫组化结果比涂片更清晰，与一般组织切片无异。用细胞涂片做免疫组化时，由于胸腹水带有红细胞和含有血浆，常会出现一些背景染色，使用石蜡包埋细胞方法可避免出现上述情况。
将细胞注入到载玻片上的琼脂糖内，操作简易，比将琼脂糖加入离心管内与细胞块混合的方法方便得多，可避免气泡形成，或琼脂糖在与细胞混合前受冷凝固等问题。要注意琼脂糖需要冷却且在没有凝固之前将细胞注入，温度过高细胞会受热变形，影响细胞的形态。琼脂糖过冷，接近凝固状态时则细胞难以注入。
从培养瓶中收集培养细胞做石蜡包埋切片时需经胰蛋白酶消化以及离心，这些都会影响细胞的形态，使细胞变圆、突起消失。为避免上述缺点，对计划用来进行细胞形态观察和免疫组化染色的培养细胞，在接种细胞前，不必将胰蛋白酶消化下来的细胞吹打分散，可将成团的细胞接种，以便细胞团形成较大的克隆，在适当的时候将它们挑出或刮出，经缓冲液洗涤后，即可固定、包埋切片。这样不仅能免除胰蛋白酶消化导致的形态改变，还可以观察到细胞间的相互关系，如鳞状细胞癌，甚至可以见到细胞间桥的结构。收取细胞的时间要适当，要在细胞生长旺盛又健康的状态下取出，避免细胞过度生长，引起大量凋亡或坏死，这样会见到大量细胞碎屑及变性的细胞。胰蛋白酶的消化虽对细胞形态有影响，但并不改变免疫组化染色的结果。离心会对细胞形态有些影响，因此离心机的速度不宜过高。
作者简介：吴惠茜，女，43岁，主管技师
收稿日期：1999-03-20, 百拇医药