199例慢粒不同病期血小板数量及功能的变化
作者：梁建英 张宏 虞斐 邹正辉 曹祥山
单位：苏州医学院附属第二医院，江苏苏州215004
关键词：慢性粒细胞白血病；血小板计数；血小板功能；巨核细胞
临床检验杂志990434 慢性粒细胞白血病(CGL)属于慢性骨髓增生性疾病，临床上根据其病程演变过程分为慢性期、加速期和急变期，而在不同病期，患者血小板数量及功能差异很大。我们对199例CGL患者各病期外周血血小板数量和功能的变化及骨髓涂片巨核细胞数量进行动态观察，结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 病例来源 199例CGL病例均经MIC分型确诊为本院门诊或住院患者，按全国统一标准[1]分期。初诊患者78例，缓解期84例，加速期16例，急变期8例，复发13例。其中男性126例，女性73例，年龄11～63岁，平均年龄41岁。
, http://www.100md.com
1.1 外周血血小板计数 取20 μl手指血于0.38 ml 1 g/dl草酸铵溶液内，置37°C，10 min。待红细胞充分溶解后，滴入计数板内于显微镜下按常法计数。
1.3 骨髓涂片巨核细胞计数 取制片良好(面积达1 cm×3 cm)的骨髓涂片3张，分别计数全片巨核细胞数，并计算每片巨核细胞平均数。
1.4 血小板聚集试验 取静脉血5 ml分离富含血小板血浆(PRP)，调PRP血小板数至200～300 ×109/L，以ADP作诱导剂(终浓度为2 μmol/L)，使用上海通用医用仪器公司生产的TYXN-91智能型血凝仪进行血小板聚集试验。
1.5 血小板粘附试验 取患者静脉血1 ml,以血小板粘附仪(江苏无锡石塘湾电器厂生产的WTP型)作粘附试验，分别计数血液粘附前后血小板数量，并求出血小板粘附率。
, 百拇医药
1.6 血小板表面α-颗粒膜蛋白测定(GMP-140) 使用放射免疫法，用同位素标记的抗GMP-140的单克隆抗体直接测定血小板表面的GMP-140分子数，药盒由苏州医学院血栓研究室提供。
2 结果
2.1 各期CGL患者外周血血小板数量测定结果见表1
2.2 各期CGL患者骨髓涂片巨核细胞数量结果见表2
表1 正常组及各期CGL患者外周血血小板数量 组 别
例数
血小板数(109/L)
P
正常组
, http://www.100md.com
34
152±56
初 诊
78
214±163
<0.05
缓解期
84
145±68
>0.05
复 发
13
279±142
, 百拇医药
<0.01
加速期
16
191±102
>0.05
急变期
8
65±41
<0.01
表2 正常组及各期CGL患者每张骨髓涂片巨核细胞数 组 别
例数
巨核细胞数/骨髓涂片
, 百拇医药
<7
7～100
>100
正常组
34
2(5.88)
27(79.41)
5(14.71)
初 诊
78
7(8.97)
43(55.13)
28(35.90)
, 百拇医药
缓解期
84
6(7.14)
63(75.00)
15(17.86)
复 发
13
0
3(23.08)
10(76.92)
加速期
16
2(12.5)
, 百拇医药
7(43.75)
7(43.75)
急变期
8
3(37.5)
4(50.00)
1(12.50)
注( )内为百分率
2.3 各期CGL患者血小板功能测定结果 见表3。除急变期外，CGL患者血小板粘附率与正常组比较均无显著性差异。血小板最大聚集率初诊时高于正常组，急变期明显低于正常组。血小板GMP-140含量各组比较无明显差异。
表3 正常组及各期CGL患者血小板粘附率、聚集率及血小板表面GMP-140的测定结果 组别
, 百拇医药
例数
粘附率(%)
聚集率(%)
GMP-140分子量/血小板
正常组
34
37.5±5.60
61.5±15.5
780±490
初 诊
78
39.7±6.37#
, 百拇医药
80.7±10.8Δ
658±302#(n＝24)
缓解期
41
38.2±7.24#
65.2±12.2#
671±335#(n＝21)
复 发
11
37.2±7.16#
, 百拇医药 68.7±13.6#
加速期
10
35.5±6.84#
57.5±11.4#
急变期
5
31.5±5.56
32.5±10.7Δ
与正常人比较 P<0.05，Δ P<0.01，# P>0.05
3 讨论
, 百拇医药
3.1 CGL系慢性骨髓增生性疾病，有文献报道该类疾病除了白细胞增高外，早期有巨核细胞数量增多。因此，CGL初诊及复发患者可见血小板数量增多，而缓解期患者血小板数量又恢复到正常水平。这和我们的实验结果基本一致。另外，我们的检测还显示急变期患者血小板数量明显减少，患者骨髓象与急性白血病相同，巨核细胞数量减少；部分患者巨核细胞数量正常，却见成熟障碍，并可见小巨核细胞。笔者认为这是急变期患者血小板减少的主要原因。
3.2 有文献报道大部分慢性骨髓增生性疾病，特别是真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化患者血小板聚集功能不良，对ADP等诱导剂反应降低，但对CGL各期患者血小板功能的变化迄今未见有文献报道。本实验结果显示，CGL初诊患者血小板聚集率高于正常对照组，提示慢粒早期可合并血栓，CGL初诊患者血小板粘附率与正常组无显著性差异；CGL缓解期、复发期及加速期患者均未见有血小板功能异常；急变期患者血小板聚集率及粘附率均低于正常对照组。笔者认为CGL急变期患者有类似急性白血病样的改变，国内曾有文献报道急性早幼粒细胞白血病患者可同时出现获得性血小板无力症。本文8例急变者其中急淋变3例，急非淋变者5例，血小板聚集及粘附功能均有所下降。
, 百拇医药
3.3 血小板表面α-颗粒膜蛋白(GMP-140)在静息血小板中仅分布于a-颗粒膜上，血小板被活化时，α-颗粒膜与胞浆膜融合，GMP-140才暴露于胞浆膜表面，这一特征被用来鉴别血小板是否已在体内被活化。CGL初诊及缓解期患者血小板表面的GMP-140分子数与正常对照组无显著性差异。复发、加速期与急变期患者血小板表面GMP-140分子数因观察病例数有限，未作统计学处理，有待今后进一步观察。
参考文献
1 张之南主编.血液病诊断及疗效标准.天津，天津科学技术出版社，1991.193～195
2 阮长耿，林宝爵.血液学现代理论与临床实践.北京：北京出版社，1998.52
3 Rasezeja S A,Skibowska A,Kabata J,Hellmann A.Platelet defects in chronic myeloproliferative disorders.Acta Haematol pol,1994,25(3):253～60
4 阮长耿主编.血栓与止血 现代理论和临床实践.南京：江苏科学技术出版社，1994.242～243
(1999-01-15收稿), 百拇医药
单位：苏州医学院附属第二医院，江苏苏州215004
关键词：慢性粒细胞白血病；血小板计数；血小板功能；巨核细胞
临床检验杂志990434 慢性粒细胞白血病(CGL)属于慢性骨髓增生性疾病，临床上根据其病程演变过程分为慢性期、加速期和急变期，而在不同病期，患者血小板数量及功能差异很大。我们对199例CGL患者各病期外周血血小板数量和功能的变化及骨髓涂片巨核细胞数量进行动态观察，结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 病例来源 199例CGL病例均经MIC分型确诊为本院门诊或住院患者，按全国统一标准[1]分期。初诊患者78例，缓解期84例，加速期16例，急变期8例，复发13例。其中男性126例，女性73例，年龄11～63岁，平均年龄41岁。
, http://www.100md.com
1.1 外周血血小板计数 取20 μl手指血于0.38 ml 1 g/dl草酸铵溶液内，置37°C，10 min。待红细胞充分溶解后，滴入计数板内于显微镜下按常法计数。
1.3 骨髓涂片巨核细胞计数 取制片良好(面积达1 cm×3 cm)的骨髓涂片3张，分别计数全片巨核细胞数，并计算每片巨核细胞平均数。
1.4 血小板聚集试验 取静脉血5 ml分离富含血小板血浆(PRP)，调PRP血小板数至200～300 ×109/L，以ADP作诱导剂(终浓度为2 μmol/L)，使用上海通用医用仪器公司生产的TYXN-91智能型血凝仪进行血小板聚集试验。
1.5 血小板粘附试验 取患者静脉血1 ml,以血小板粘附仪(江苏无锡石塘湾电器厂生产的WTP型)作粘附试验，分别计数血液粘附前后血小板数量，并求出血小板粘附率。
, 百拇医药
1.6 血小板表面α-颗粒膜蛋白测定(GMP-140) 使用放射免疫法，用同位素标记的抗GMP-140的单克隆抗体直接测定血小板表面的GMP-140分子数，药盒由苏州医学院血栓研究室提供。
2 结果
2.1 各期CGL患者外周血血小板数量测定结果见表1
2.2 各期CGL患者骨髓涂片巨核细胞数量结果见表2
表1 正常组及各期CGL患者外周血血小板数量 组 别
例数
血小板数(109/L)
P
正常组
, http://www.100md.com
34
152±56
初 诊
78
214±163
<0.05
缓解期
84
145±68
>0.05
复 发
13
279±142
, 百拇医药
<0.01
加速期
16
191±102
>0.05
急变期
8
65±41
<0.01
表2 正常组及各期CGL患者每张骨髓涂片巨核细胞数 组 别
例数
巨核细胞数/骨髓涂片
, 百拇医药
<7
7～100
>100
正常组
34
2(5.88)
27(79.41)
5(14.71)
初 诊
78
7(8.97)
43(55.13)
28(35.90)
, 百拇医药
缓解期
84
6(7.14)
63(75.00)
15(17.86)
复 发
13
0
3(23.08)
10(76.92)
加速期
16
2(12.5)
, 百拇医药
7(43.75)
7(43.75)
急变期
8
3(37.5)
4(50.00)
1(12.50)
注( )内为百分率
2.3 各期CGL患者血小板功能测定结果 见表3。除急变期外，CGL患者血小板粘附率与正常组比较均无显著性差异。血小板最大聚集率初诊时高于正常组，急变期明显低于正常组。血小板GMP-140含量各组比较无明显差异。
表3 正常组及各期CGL患者血小板粘附率、聚集率及血小板表面GMP-140的测定结果 组别
, 百拇医药
例数
粘附率(%)
聚集率(%)
GMP-140分子量/血小板
正常组
34
37.5±5.60
61.5±15.5
780±490
初 诊
78
39.7±6.37#
, 百拇医药
80.7±10.8Δ
658±302#(n＝24)
缓解期
41
38.2±7.24#
65.2±12.2#
671±335#(n＝21)
复 发
11
37.2±7.16#
, 百拇医药 68.7±13.6#
加速期
10
35.5±6.84#
57.5±11.4#
急变期
5
31.5±5.56
32.5±10.7Δ
与正常人比较 P<0.05，Δ P<0.01，# P>0.05
3 讨论
, 百拇医药
3.1 CGL系慢性骨髓增生性疾病，有文献报道该类疾病除了白细胞增高外，早期有巨核细胞数量增多。因此，CGL初诊及复发患者可见血小板数量增多，而缓解期患者血小板数量又恢复到正常水平。这和我们的实验结果基本一致。另外，我们的检测还显示急变期患者血小板数量明显减少，患者骨髓象与急性白血病相同，巨核细胞数量减少；部分患者巨核细胞数量正常，却见成熟障碍，并可见小巨核细胞。笔者认为这是急变期患者血小板减少的主要原因。
3.2 有文献报道大部分慢性骨髓增生性疾病，特别是真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化患者血小板聚集功能不良，对ADP等诱导剂反应降低，但对CGL各期患者血小板功能的变化迄今未见有文献报道。本实验结果显示，CGL初诊患者血小板聚集率高于正常对照组，提示慢粒早期可合并血栓，CGL初诊患者血小板粘附率与正常组无显著性差异；CGL缓解期、复发期及加速期患者均未见有血小板功能异常；急变期患者血小板聚集率及粘附率均低于正常对照组。笔者认为CGL急变期患者有类似急性白血病样的改变，国内曾有文献报道急性早幼粒细胞白血病患者可同时出现获得性血小板无力症。本文8例急变者其中急淋变3例，急非淋变者5例，血小板聚集及粘附功能均有所下降。
, 百拇医药
3.3 血小板表面α-颗粒膜蛋白(GMP-140)在静息血小板中仅分布于a-颗粒膜上，血小板被活化时，α-颗粒膜与胞浆膜融合，GMP-140才暴露于胞浆膜表面，这一特征被用来鉴别血小板是否已在体内被活化。CGL初诊及缓解期患者血小板表面的GMP-140分子数与正常对照组无显著性差异。复发、加速期与急变期患者血小板表面GMP-140分子数因观察病例数有限，未作统计学处理，有待今后进一步观察。
参考文献
1 张之南主编.血液病诊断及疗效标准.天津，天津科学技术出版社，1991.193～195
2 阮长耿，林宝爵.血液学现代理论与临床实践.北京：北京出版社，1998.52
3 Rasezeja S A,Skibowska A,Kabata J,Hellmann A.Platelet defects in chronic myeloproliferative disorders.Acta Haematol pol,1994,25(3):253～60
4 阮长耿主编.血栓与止血 现代理论和临床实践.南京：江苏科学技术出版社，1994.242～243
(1999-01-15收稿), 百拇医药