肝癌发生中乙肝病毒感染与黄曲霉毒素暴露的作用
作者：陆培新 旷双远 王金兵 方晰 张启南 吴燕 陆振宏 钱耕荪
单位：226200 江苏省启东肝癌防治研究所(陆培新、王金兵、张启南、吴燕、陆振宏)；上海市肿瘤研究所病因室(旷双远、方晰、钱耕荪)
关键词：肝肿瘤；乙型肝炎病毒；黄曲霉毒素
中华医学杂志980508 【摘要】 目的 研究肝癌发生中乙型肝炎病毒(HBV)与黄曲霉毒素(AF)的作用。方法 在肝癌高发区，对737例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性和699例HBsAg阴性人群进行了10年前瞻性研究，同时按1∶5的病例-对照模式，随机对队列中30例肝癌和相应的150例非肝癌人群进行血清中黄曲霉毒素B1-白蛋白加成物(AFB1-Alb)测定。结果 (1)HBsAg阳性组平均年肝癌发生率为824.13/10万，明显高于对照组的70.97/10万，相对危险度(RR)为11.61，其他肿瘤发病率两组间差异无显著意义(P>0.05)。(2)肝癌组人群血清中AFB1-Alb阳性率为76.7%，明显高于对照组的48.7%，比值比(OR)为3.47，肝癌组人群血清中AFB1-Alb的浓度也明显高于对照组(P<0.01)。结论 HBV感染及AF暴露是肝癌发生的重要病因因素，两者可能具有协同致癌作用。
, 百拇医药
Hepatitis B virus infection and aflatoxin exposure in the development of primary liver cancer Lu Peixin*, Kuang Shuangyuan, Wang Jinbing, et al. * Qidong Liver Cancer Institute, Jiangsu 226200
【Abstract 】 Objective To investigate the role of hepatitis B Virus (HBV) infection and aflatoxin (AF) exposure in the development of primary liver cancer (PLC). Methods A 10-year prospective case-control study was carried out in 737 HBsAg carriers and 699 HBsAg negative cases, and the aflatoxin B1 albumin adducts (AFB1-Alb) were detected in the serum of the cohort including 30 HBsAg postive cases and 150 control individuals according to the case-control study model (ratio 1∶5) at random in the high prevalance area of PLC. Results The average year-incidence rate was significantly higher in the HBsAg postive group (824.13/100 000) than in the control group (70.97/100 000, RR=11.61). There was no significant difference in the incidence rate of other tumors between the two groups (P>0.05). The serum positive rate of AFB1-Alb was significantly higher in the PLC group (76.67%) than in the control group (48.67%, OR=3.47), and the serum concentration of AFB1-Alb was also significantly higher in the PLC group than in the control group (P<0.01). Conclusion HBV infection and AF exposure are important etiological factors in the development of PLC and both result in carcinogenic synergy.
, 百拇医药
【Key words 】 Liver neoplasms Hepatitis B Virus Aflatoxin
(Natl Med J China, 1998, 78:340-342)
原发性肝癌(肝癌)是最常见的十种恶性肿瘤之一，在我国，已占居民恶性肿瘤死亡的第二位[1]，其病因涉及多种因素，有关研究结果表明，乙型肝炎病毒(HBV)及黄曲霉毒素(AF)是我国肝癌发生的主要病因因素。我们应用前瞻性病例对照研究的方法，进一步探讨HBV与AF在肝癌发生中的作用。
对象和方法
一、对象
在肝癌高发的江苏省启东市某区七个乡内，对男性、年龄在20～60岁之间，曾患肝炎或体检、普查中发现HBsAg携带的1 238例患者进行采血检查，其中半年内连续2次检测HBsAg阳性的806例列为前瞻研究对象，同时配以性别相同，年龄相近(±5岁)，居住相邻的800名HBsAg阴性人群为对照，进行前瞻观察。随访过程中，剔除一年内发生肝癌或其他恶性肿瘤及不足一年即因故死亡、失访者，因此，实际前瞻研究人数HBsAg阳性组737人，对照组699人。研究时间自1987年7月1日～1997年7月31日。
, 百拇医药
二、方法
1.前瞻观察：建立详细的个人健康及体检、血检档案，同时设立血清库，保留每个对象每次血检时的血清1 ml于-30℃冰柜中。随访每半年一次，除一般体检外，采血检测肝功能、HBsAg(Abbott试剂)、AFP(放射免疫法，试剂盒由北京原子能研究所提供)。
2.病例对照研究：对HBsAg阳性的肝癌患者，按确诊的时间顺序予以排列编号，而后进行机械抽样，确定30例肝癌患者，每例配以年龄相近(±3岁)、居住相邻、HBV血清学标志均相同、肝功能检测结果一致的5例非肝癌对象为对照，组成1∶5的病例对照模式，检测血清中AFB1-Alb。检测用血清取自血清库，肝癌血清采用诊断前1年以上样品，相应的对照血清亦为同一时间内样品。
AFB1-Alb检测按文献[2]的方法，血清白蛋白经Microcon-50(美国Amicon公司)浓缩纯化后，链霉蛋白酶(美国Calbiochem公司)酶解，丙酮提取，浓缩挥干，放射免疫法测定。
, 百拇医药
3.统计学分析：发病(死亡)率比较采用χ2检验，危险度评估(χ2检验差异有显著意义后)计算相对危险度(RR)、特异危险度(AR)及特异危险度的百分比(AR%)。AFB1-Alb检测结果，阳性率用比值比(OR)评价，浓度采用非参数中位数检验，计算P值。
结果
一、肝癌发生率
队列中总人数为1 436人，10年中死亡108人，继访1 328人。前瞻结果，在9 930人年中，发生肝癌50例，平均年肝癌发生率为503.53/10万，其中HBsAg阳性组平均年肝癌发生率为824.13/10万(47/5 703)，对照组为70.97/10万(3/4 227)，两组比较，RR为11.61，AR为753.16，AR%达91.39%。
50例肝癌患者确诊时年龄自29～66岁不等，中位年龄47岁，平均年龄46岁。
, 百拇医药
二、其他肿瘤发生与肝硬化死亡
前瞻人群中发生肝癌以外的其他恶性肿瘤17例，两组间发病率差异无显著意义。因患慢性肝炎、肝硬化死亡者18例，HBsAg阳性组明显高于对照组(附表)。
三、病例对照人群血清中AFB1-Alb检测结果
180例病例对照人群血清AFB1-Alb检测结果，阳性96例，阳性率为53.33%(96/180)，其中肝癌组阳性率为76.7%(23/30)，明显高于对照组的48.7%(73/150)，OR为3.47。
全部病例对照人群中，血清AFB1-Alb浓度最高为3.97 pmol/mg，中位值为0.99 pmol/mg，其中AFB1-Alb>0.99 pmol/mg共88例，肝癌组(30例)和对照组(150例)分别为22例和66例；AFB1-Alb≤0.99 pmol/mg共92例，肝癌组与对照组分别为8例和84例，两组比较，差异有非常显著意义(P<0.01)。在96例AFB1-Alb阳性对象中，中位值为1.39 pmol/mg，其中AFB1-Alb>1.39 pmol/mg共42例，肝癌组(23例)和对照组(73例)分别为18和24例，AFB1-Alb≤1.39 pmol/mg共54例，肝癌组和对照组分别为5例和49例，两组比较，差异亦有非常显著意义(P<0.01)。
, 百拇医药
讨论
近年来的肝癌病因研究结果表明，嗜肝病毒感染及AF摄入可被视为二种独立的高危因子。在嗜肝病毒中，HBV是肝癌发生的主要危险因素。我们在居民肝癌年发病率高达50/10万的江苏省启东地区，对1 436例肝癌高危人群进行了10年前瞻观察，结果发现，HBsAg阳性人群平均年肝癌发生率高达824.13/10万，显著高于HBsAg阴性组的70.97/10万(P<0.001)，为当地同期内相同性别、同一年龄段自然人群肝癌发生率(145/10万)的5.68倍。危险性分析表明，感染HBV后发生肝癌的危险度为对照组的11.61倍。在HBV感染组肝癌发病率824.13/10万中，有753.16/10万归因于HBV感染，附表 队列中其他肿瘤发生及肝硬化死亡情况
组别
人年
其他肿瘤
, 百拇医药
肝硬化死亡
例数
发病率(/10万)
χ2值
P值
例数
死亡率(/10万)
χ2值
P值
HBsAg(+)
5 703
7
, http://www.100md.com
122.74
1.84
>0.05
15
263.02
4.95
<0.05
HBsAg(-)
4 227
10
236.57
3
70.92
, 百拇医药
合 计
9 930
17
171.20
18
181.27
因感染HBV造成的肝癌发病率占整个发病率的91.39%，而队列中其他肿瘤的发病率两组间差异无显著意义，说明在肝癌的发生中，HBV感染起了极其重要的作用。
大量的流行病学调查及实验室研究均证实，AFB1是一种强烈的致肝癌物质[3]。最近研究揭示，肝癌患者p53基因249密码子突变起主导作用，而249密码子中第三碱基对上G→T的突变提示与AF暴露有关[4]。以往的纵向观察结果指出，HBV感染及AF摄入与肝癌的发生密切相关[5]。本研究随机取30例HBsAg阳性的肝癌患者血清，同时按1∶5选择条件均等或相近的非肝癌对象为对照，组成病例-对照研究模式，而后同时测定血清中AFB1-Alb。结果表明，HBsAg携带者中，暴露于AF的肝癌发生率高于非暴露组，危险度为3.47倍，且肝癌组暴露AF的量亦高于对照组(P<0.01)，提示了AF暴露与肝癌的发生相关，且HBV感染与AF暴露在肝癌的发生中可能具有协同作用。这与一些报道[6，7]认为肝癌发病与摄入AF量呈等级相关关系及HBV与AF具有协同致癌作用的结论相一致。
, http://www.100md.com
在用流行病学方法探讨疾病病因的研究中，前瞻性调查如同“现场试验”，可确定因果关系[8]。在探讨AF与肝癌关系的研究中，本研究采用了测定血清AFB1-Alb的方法。由于血清AFB1-Albumin加成物半衰期较长[9]，能反映一段时间内AF的暴露量，因此，本研究结果能更有力地说明HBV感染及AF暴露在肝癌发生中具有明显的相关性。预防HBV感染及阻断AF摄入，在肝癌的预防中具有现实的可操作性及长远的战略意义。
志谢 本研究AFB1-Alb检测在美国约翰霍普金斯大学实验室完成，得到Groopman J D及Kensler T W教授的热情帮助和大力支持，谨致谢意
本课题为国家“八五”重点科技攻关课题基金资助项目参考文献
1 李连弟，鲁凤珠，张思维，等.中国恶性肿瘤死亡率20年变化趋势和近期预测分析.中华肿瘤杂志，1997，19：3-9.
, 百拇医药
2 Wang JS, Qian GS, Zarba A, et al. Temporal patterns of Aflatioxin-albumin adducts in hepatitis B surface antigen-positive and antigen-negative residents of daxin, Qidong County, People′s Republic of China. Cancer Epidemiol Biom Prevent, 1996, 5:253-261.
3 沈靖，叶本法，徐耀初，等.以乙型肝炎病毒感染为主因的肝癌病因多因素分析.肿瘤，1993，13：109-111.
4 Fujimoto Y, Hampton LL, Wirth PJ, et al. Alterations of tumor suppressor genes and allelic losses in human hepatocellular carcinomas in China.Cancer Res, 1994, 54:281-285.
, http://www.100md.com
5 陆培新，韦耀鹏，吴玉英，等.乙型肝炎表面抗原携带者尿中黄曲霉毒素M1排出量测定.肿瘤，1993，13：257-259.
6 徐达道.黄曲霉毒素与肝癌关系.见：汤钊猷主编，原发性肝癌.上海：上海科学技术出版社，1981，95-113.
7 Qian GS, Ross RK, Yu MC, et al. A follow-up study of urinary markers of aflatoxin exposure and liver cancer risk in Shanghai, People′s Republic of China. Cancer Epidemiol Biom Prevent, 1994, 3:3-10.
8 叶本法，洪德庆编著.流行病学理论和方法.南京：江苏科学技术出版社，1984，223-234.
9 Sheabar FZ, Groopman JD, Qian GS, et al. Quantitative analysis of Aflatoxin-albumin adducts. Carcinogenesis, 1993, 14:1203-1208.
(收稿：1997-11-05 修回：1998-02-08), 百拇医药
单位：226200 江苏省启东肝癌防治研究所(陆培新、王金兵、张启南、吴燕、陆振宏)；上海市肿瘤研究所病因室(旷双远、方晰、钱耕荪)
关键词：肝肿瘤；乙型肝炎病毒；黄曲霉毒素
中华医学杂志980508 【摘要】 目的 研究肝癌发生中乙型肝炎病毒(HBV)与黄曲霉毒素(AF)的作用。方法 在肝癌高发区，对737例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性和699例HBsAg阴性人群进行了10年前瞻性研究，同时按1∶5的病例-对照模式，随机对队列中30例肝癌和相应的150例非肝癌人群进行血清中黄曲霉毒素B1-白蛋白加成物(AFB1-Alb)测定。结果 (1)HBsAg阳性组平均年肝癌发生率为824.13/10万，明显高于对照组的70.97/10万，相对危险度(RR)为11.61，其他肿瘤发病率两组间差异无显著意义(P>0.05)。(2)肝癌组人群血清中AFB1-Alb阳性率为76.7%，明显高于对照组的48.7%，比值比(OR)为3.47，肝癌组人群血清中AFB1-Alb的浓度也明显高于对照组(P<0.01)。结论 HBV感染及AF暴露是肝癌发生的重要病因因素，两者可能具有协同致癌作用。
, 百拇医药
Hepatitis B virus infection and aflatoxin exposure in the development of primary liver cancer Lu Peixin*, Kuang Shuangyuan, Wang Jinbing, et al. * Qidong Liver Cancer Institute, Jiangsu 226200
【Abstract 】 Objective To investigate the role of hepatitis B Virus (HBV) infection and aflatoxin (AF) exposure in the development of primary liver cancer (PLC). Methods A 10-year prospective case-control study was carried out in 737 HBsAg carriers and 699 HBsAg negative cases, and the aflatoxin B1 albumin adducts (AFB1-Alb) were detected in the serum of the cohort including 30 HBsAg postive cases and 150 control individuals according to the case-control study model (ratio 1∶5) at random in the high prevalance area of PLC. Results The average year-incidence rate was significantly higher in the HBsAg postive group (824.13/100 000) than in the control group (70.97/100 000, RR=11.61). There was no significant difference in the incidence rate of other tumors between the two groups (P>0.05). The serum positive rate of AFB1-Alb was significantly higher in the PLC group (76.67%) than in the control group (48.67%, OR=3.47), and the serum concentration of AFB1-Alb was also significantly higher in the PLC group than in the control group (P<0.01). Conclusion HBV infection and AF exposure are important etiological factors in the development of PLC and both result in carcinogenic synergy.
, 百拇医药
【Key words 】 Liver neoplasms Hepatitis B Virus Aflatoxin
(Natl Med J China, 1998, 78:340-342)
原发性肝癌(肝癌)是最常见的十种恶性肿瘤之一，在我国，已占居民恶性肿瘤死亡的第二位[1]，其病因涉及多种因素，有关研究结果表明，乙型肝炎病毒(HBV)及黄曲霉毒素(AF)是我国肝癌发生的主要病因因素。我们应用前瞻性病例对照研究的方法，进一步探讨HBV与AF在肝癌发生中的作用。
对象和方法
一、对象
在肝癌高发的江苏省启东市某区七个乡内，对男性、年龄在20～60岁之间，曾患肝炎或体检、普查中发现HBsAg携带的1 238例患者进行采血检查，其中半年内连续2次检测HBsAg阳性的806例列为前瞻研究对象，同时配以性别相同，年龄相近(±5岁)，居住相邻的800名HBsAg阴性人群为对照，进行前瞻观察。随访过程中，剔除一年内发生肝癌或其他恶性肿瘤及不足一年即因故死亡、失访者，因此，实际前瞻研究人数HBsAg阳性组737人，对照组699人。研究时间自1987年7月1日～1997年7月31日。
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二、方法
1.前瞻观察：建立详细的个人健康及体检、血检档案，同时设立血清库，保留每个对象每次血检时的血清1 ml于-30℃冰柜中。随访每半年一次，除一般体检外，采血检测肝功能、HBsAg(Abbott试剂)、AFP(放射免疫法，试剂盒由北京原子能研究所提供)。
2.病例对照研究：对HBsAg阳性的肝癌患者，按确诊的时间顺序予以排列编号，而后进行机械抽样，确定30例肝癌患者，每例配以年龄相近(±3岁)、居住相邻、HBV血清学标志均相同、肝功能检测结果一致的5例非肝癌对象为对照，组成1∶5的病例对照模式，检测血清中AFB1-Alb。检测用血清取自血清库，肝癌血清采用诊断前1年以上样品，相应的对照血清亦为同一时间内样品。
AFB1-Alb检测按文献[2]的方法，血清白蛋白经Microcon-50(美国Amicon公司)浓缩纯化后，链霉蛋白酶(美国Calbiochem公司)酶解，丙酮提取，浓缩挥干，放射免疫法测定。
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3.统计学分析：发病(死亡)率比较采用χ2检验，危险度评估(χ2检验差异有显著意义后)计算相对危险度(RR)、特异危险度(AR)及特异危险度的百分比(AR%)。AFB1-Alb检测结果，阳性率用比值比(OR)评价，浓度采用非参数中位数检验，计算P值。
结果
一、肝癌发生率
队列中总人数为1 436人，10年中死亡108人，继访1 328人。前瞻结果，在9 930人年中，发生肝癌50例，平均年肝癌发生率为503.53/10万，其中HBsAg阳性组平均年肝癌发生率为824.13/10万(47/5 703)，对照组为70.97/10万(3/4 227)，两组比较，RR为11.61，AR为753.16，AR%达91.39%。
50例肝癌患者确诊时年龄自29～66岁不等，中位年龄47岁，平均年龄46岁。
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二、其他肿瘤发生与肝硬化死亡
前瞻人群中发生肝癌以外的其他恶性肿瘤17例，两组间发病率差异无显著意义。因患慢性肝炎、肝硬化死亡者18例，HBsAg阳性组明显高于对照组(附表)。
三、病例对照人群血清中AFB1-Alb检测结果
180例病例对照人群血清AFB1-Alb检测结果，阳性96例，阳性率为53.33%(96/180)，其中肝癌组阳性率为76.7%(23/30)，明显高于对照组的48.7%(73/150)，OR为3.47。
全部病例对照人群中，血清AFB1-Alb浓度最高为3.97 pmol/mg，中位值为0.99 pmol/mg，其中AFB1-Alb>0.99 pmol/mg共88例，肝癌组(30例)和对照组(150例)分别为22例和66例；AFB1-Alb≤0.99 pmol/mg共92例，肝癌组与对照组分别为8例和84例，两组比较，差异有非常显著意义(P<0.01)。在96例AFB1-Alb阳性对象中，中位值为1.39 pmol/mg，其中AFB1-Alb>1.39 pmol/mg共42例，肝癌组(23例)和对照组(73例)分别为18和24例，AFB1-Alb≤1.39 pmol/mg共54例，肝癌组和对照组分别为5例和49例，两组比较，差异亦有非常显著意义(P<0.01)。
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讨论
近年来的肝癌病因研究结果表明，嗜肝病毒感染及AF摄入可被视为二种独立的高危因子。在嗜肝病毒中，HBV是肝癌发生的主要危险因素。我们在居民肝癌年发病率高达50/10万的江苏省启东地区，对1 436例肝癌高危人群进行了10年前瞻观察，结果发现，HBsAg阳性人群平均年肝癌发生率高达824.13/10万，显著高于HBsAg阴性组的70.97/10万(P<0.001)，为当地同期内相同性别、同一年龄段自然人群肝癌发生率(145/10万)的5.68倍。危险性分析表明，感染HBV后发生肝癌的危险度为对照组的11.61倍。在HBV感染组肝癌发病率824.13/10万中，有753.16/10万归因于HBV感染，附表 队列中其他肿瘤发生及肝硬化死亡情况
组别
人年
其他肿瘤
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肝硬化死亡
例数
发病率(/10万)
χ2值
P值
例数
死亡率(/10万)
χ2值
P值
HBsAg(+)
5 703
7
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122.74
1.84
>0.05
15
263.02
4.95
<0.05
HBsAg(-)
4 227
10
236.57
3
70.92
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合 计
9 930
17
171.20
18
181.27
因感染HBV造成的肝癌发病率占整个发病率的91.39%，而队列中其他肿瘤的发病率两组间差异无显著意义，说明在肝癌的发生中，HBV感染起了极其重要的作用。
大量的流行病学调查及实验室研究均证实，AFB1是一种强烈的致肝癌物质[3]。最近研究揭示，肝癌患者p53基因249密码子突变起主导作用，而249密码子中第三碱基对上G→T的突变提示与AF暴露有关[4]。以往的纵向观察结果指出，HBV感染及AF摄入与肝癌的发生密切相关[5]。本研究随机取30例HBsAg阳性的肝癌患者血清，同时按1∶5选择条件均等或相近的非肝癌对象为对照，组成病例-对照研究模式，而后同时测定血清中AFB1-Alb。结果表明，HBsAg携带者中，暴露于AF的肝癌发生率高于非暴露组，危险度为3.47倍，且肝癌组暴露AF的量亦高于对照组(P<0.01)，提示了AF暴露与肝癌的发生相关，且HBV感染与AF暴露在肝癌的发生中可能具有协同作用。这与一些报道[6，7]认为肝癌发病与摄入AF量呈等级相关关系及HBV与AF具有协同致癌作用的结论相一致。
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在用流行病学方法探讨疾病病因的研究中，前瞻性调查如同“现场试验”，可确定因果关系[8]。在探讨AF与肝癌关系的研究中，本研究采用了测定血清AFB1-Alb的方法。由于血清AFB1-Albumin加成物半衰期较长[9]，能反映一段时间内AF的暴露量，因此，本研究结果能更有力地说明HBV感染及AF暴露在肝癌发生中具有明显的相关性。预防HBV感染及阻断AF摄入，在肝癌的预防中具有现实的可操作性及长远的战略意义。
志谢 本研究AFB1-Alb检测在美国约翰霍普金斯大学实验室完成，得到Groopman J D及Kensler T W教授的热情帮助和大力支持，谨致谢意
本课题为国家“八五”重点科技攻关课题基金资助项目参考文献
1 李连弟，鲁凤珠，张思维，等.中国恶性肿瘤死亡率20年变化趋势和近期预测分析.中华肿瘤杂志，1997，19：3-9.
, 百拇医药
2 Wang JS, Qian GS, Zarba A, et al. Temporal patterns of Aflatioxin-albumin adducts in hepatitis B surface antigen-positive and antigen-negative residents of daxin, Qidong County, People′s Republic of China. Cancer Epidemiol Biom Prevent, 1996, 5:253-261.
3 沈靖，叶本法，徐耀初，等.以乙型肝炎病毒感染为主因的肝癌病因多因素分析.肿瘤，1993，13：109-111.
4 Fujimoto Y, Hampton LL, Wirth PJ, et al. Alterations of tumor suppressor genes and allelic losses in human hepatocellular carcinomas in China.Cancer Res, 1994, 54:281-285.
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5 陆培新，韦耀鹏，吴玉英，等.乙型肝炎表面抗原携带者尿中黄曲霉毒素M1排出量测定.肿瘤，1993，13：257-259.
6 徐达道.黄曲霉毒素与肝癌关系.见：汤钊猷主编，原发性肝癌.上海：上海科学技术出版社，1981，95-113.
7 Qian GS, Ross RK, Yu MC, et al. A follow-up study of urinary markers of aflatoxin exposure and liver cancer risk in Shanghai, People′s Republic of China. Cancer Epidemiol Biom Prevent, 1994, 3:3-10.
8 叶本法，洪德庆编著.流行病学理论和方法.南京：江苏科学技术出版社，1984，223-234.
9 Sheabar FZ, Groopman JD, Qian GS, et al. Quantitative analysis of Aflatoxin-albumin adducts. Carcinogenesis, 1993, 14:1203-1208.
(收稿：1997-11-05 修回：1998-02-08), 百拇医药