TNF-α、IL-1β、LPS对人多核白细胞、脐静脉内皮细胞血小板内皮细胞粘附分子-1表达的影响
作者：王建春 毛宝龄 钱桂生
单位：王建春(中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所， 邮政编码 重庆 400037)；毛宝龄(中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所， 邮政编码 重庆 400037)；钱桂生(中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所， 邮政编码 重庆 400037)
关键词：血小板内皮细胞粘附分子-1；多核白细胞；人脐静脉内皮细胞
微循环学杂志000106
目的： 初探炎性刺激对人多核白细胞(PMN)和脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)表达的影响和PECAM-1的可能作用。 方法： 使用流式细胞仪和免疫组化法， 观察脂多糖(LPS)、 白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α对PMN和HUVEC PECAM-1表达的变化。 结果： LPS、 IL-1β和TNF-α可引起PMN表达PECAM-1蛋白减少， 而对HUVEC PECAM-1的表达无显著影响， 但组化显著在HUVEC连接部的PECAM-1染色变淡。 结论： 上述炎性刺激物不仅可引起PMN表达PECAM-1减少、 激活PMN， 而且可改变内皮细胞PECAM-1的分布， 因此PECAM-1在炎症中可能起重要作用。
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TNF-α、 IL-1β、 LPS Affects of Expression of Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1 in Human Polymorphonuclear and Umbilical Vein Endothelial Cells
Wang, Jianchun, Mao Baoling, Qian Guisheng
(Xinqiao Hospital of Chinese PLA Third Military Medical University, Chongqing 400037)
Objective: Preliminarily effect of inflammation stimuli on platelet endothelial cell adhesion molecule-1(PECAM-1) in polymorphonuclear(PMN) and human umbilical vein endothelial cells(HUVEC) and potential roles of PECAM-1 were explored. Method: Changes of PECAM-1 expression in PMN and HUVEC stimulated by lipopolysaccharide(LPS)、 interleukin-1β(IL-1β) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) by flow cytometry and immunohistochemistry were observed. Results: LPS、 IL-1β and TNF-α induced PECAM-1 protein expression reduction in PMN, but did not affect significantly PECAM-1 expression in HUVEC. Immunohistochemistry revealed reduced PECAM-1 staining in HUVEC junctions stimulated by inflammation stimuli. Conclusion: Inflammation stimuli above can cause not only reduction of PECAM-1 expression for activating PMN but also PECAM-1 redistribution on HUVEC, these imply PECAM-1 maybe play an important role during inflammation.
, 百拇医药
Key words: Platelet endothelial cell adhesion molecule-1; Polymorphonuclear; Human umbilical vein endothelial cells
多核白细胞(PMN)和血管内皮细胞是免疫和炎症反应中的重要细胞， 是近年来人们关注的焦点 。 PMN是炎症中的主要效应细胞， 能分泌多种物质， 可引起炎症反应的扩大、 加重和组 织损伤。 血管内皮细胞既是一种效应细胞， 又是一种靶细胞， 在炎症反应中易受到损害 。 血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)主要分布于血细胞和血管内皮细胞， 不仅参与 粘附分子的信号传导和炎症中白细胞的渗出， 而且参与内皮细胞完整性的维持， 对内皮细 胞屏障功能具有一定的调节作用[1]。 为此， 本文观察了脂多糖(LPS)、 白介素( IL)-1β、 肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎性刺激对人PMN、 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)PECAM -1蛋白表达的调控作用， 以探讨炎性刺激对PECAM-1表达的影响。
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1 材料与方法
1.1材料
由： (1) 淋巴细胞分离液(上海试剂二厂)； (2) LPS(O111∶B4， Sigma)； (3) 重组TNF-α、 IL-1β(北京邦定)； (4) 免疫组化染色SP试剂盒、 抗Ⅷ： von Wille br and因子抗体(北京中山)； (5) PECAM-1单克隆抗体(Newman PJ博士惠赠)； (6) FITC标记 的二抗(北京邦定)等组成。
1.2 方法
1.2.1 人PMN的分离和培养： 取健康献血员静脉血150 ml， 3.8%枸橼 酸钠抗凝， 以Hank's液(含5%小牛血清)二倍稀释后， 加于淋巴细胞分离液层上， 室温1 000 r/min离心20 min， 小心吸弃上层的血浆和单个核白细胞， 向下层的粒细胞和红细 胞中加入5倍体积的红细胞溶解液， 在0 ℃溶解红细胞15 min， 然后800 r/min室温离心10 min， 再以Hank's液漂洗2次、 离心， 沉淀细胞以DMEM培养基悬浮， 显微镜下用血细胞 计数器计数， 台盼蓝活力判断， 显示PMN活力大于95%。
, 百拇医药
1.2.2 HUVEC的分离和培养： 采用胰蛋白酶消化法。 培养一周后， HUVEC 融合成单层， 经Ⅷ： von Wille brand因子组化鉴定证实， 供本实验使用。
1.2.3 LPS、 TNF-α、 IL-1β对人PMN、 HUVEC PECAM-1表达的影响： 将106/ml PMN和2.5×106/ml呈单层融合状态的HUVEC， 均分设LPS组、 TNF-α 组、 IL-1β组和对照组， 分别予LPS 10 μg、 IL-1β 1 000 U、 TNF-α 1 00 0 U刺激24 h。 培养24 h后， 收集细胞， 将细胞4 ℃离心(1 000 r/min×10 min) 后， 加入4%多聚甲醛固定细胞， 并制成单细胞悬液备流式细胞仪检测。 HUVEC同时作盖玻 片培养备组化分析用。
1.2.4 PECAM-1的流式细胞仪检测： 用FACS 420型流式细胞仪(光源 为2 W的氩离子激光器， 工作功率为300 mW)， 分别进行单参数分析， 测量的数据、 图形 同时输入HP-300 Consort 30计算机处理， 采用免疫荧光间接标记法进行检测。 以表示荧 光强度变化的平均荧光道数(Mode)， 反映PECAM-1表达情况。
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1.2.5 HUVEC PECAM-1组化观察： 采用SP法。
1.2.6 统计分析： 采用Excel 97软件进行t检验， 结果以均数± 标准差(
±s)表示， 以P<0.05为相差显著。 2 结 果
2.1PMN和HUVEC PECAM-1表达的变化
经流式细胞仪检测发现， 在PMN， 给予LPS、 IL-1β、 TNF-α刺激后， PECAM-1表达 均较对照组显著减少； 而在HUVEC， LPS、 TNF-α、 IL-1β刺激后， PECAM-1虽有降 低， 但均未达到显著水平。 见附表。
附表 LPS、 TNF-α、 IL-1β对PM N、 HUVEC、PECAM-1表达的影响(n均=6， Mode， [ AKx-D ±s) 组 分
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PMN
HUVEC
对照组
7.83±1.30
6.85±0.57
LPS组
6.13±0.291)
6.63±1.11
TNF-α组
6.16±0.951)
6.29±0.50
IL-1β组
, 百拇医药
5.87±0.591)
6.21±0.57
注: 1) 与对照组比较： P<0.05
2.2 HUVEC免疫组化
在未受刺激的HUVEC， PECAM-1主要位于内皮细胞之间的连接部， 该部位呈深棕色， LPS 、 TNF-α、 IL-1β刺激后， 在细胞连接部PECAM-1的染色明显变淡。 见图1、 2。
图1 静息状态下PECAM-1主要位于HUVEC细胞连接部×400
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图2 TNF刺激后，PECAM-1D在HUVEC连接部染变浅×400
3 讨 论
PECAM-1是粘附分子中免疫球蛋白基因超家族的一个成员， PECAM-1可在血小板、 粒细胞 、 T淋巴细胞、 内皮细胞表达。 研究显示， 该分子在心脏发育、 血管完整性的维持、 炎症中白细胞渗出等病理生理过程中具有重要作用[1，2]。 本研究发现， PMN受L PS、 TNF-α、 IL-1β刺激后， 流式细胞仪检测显示PMN表面PECAM-1表达显著降低。 有人在FLMP刺激的人粒细胞和体外循环病人的白细胞、 血小板也观察到PECAM-1表达降低 [3，4]； 由于PECAM-1活化后， 可引起细胞释放活性氧和TNF、 IL-1、 IL-8 等细胞因子[3]， 因此PMN PECAM-1表达减少， 可能反映白细胞功能的激活， 以利于白细胞的游走、 渗出， 参与免疫和炎症反应。 PECAM-1表达减少可能与以下因素 有关[5，6]： (1) PMN受上述致炎因子刺激而激活， PECAM-1从细胞表面大量释 放。 (2) PECAM-1转录水平下降、 稳定性降低， 导致蛋白表达减少。 (3) PECAM-1激活 后发生磷酸化， 引起蛋白分解加快。
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内皮细胞间的连接是维持血管完整性、 调节白细胞渗出和血管通透性的结构基础。 研究发 现， PECAM-1主要位于内皮细胞之间的连接部， 且PECAM-1参与HUVEC单层结构完整性的 维持， 在内皮细胞间的连接中起作用[1，7]。 本文在HUVEC研究发现， 给予LPS 、 TNF-α、 IL-1β刺激后， 虽然流式细胞仪检测显示HUVEC PECAM-1表达无显著降 低， 但组化显示细胞连接部PECAM-1的染色明显变淡， 提示内皮细胞之间的连接可能减弱 ， 由此可能导致血管通透性增加。 Ferrero和Rival分别在TNF-α刺激的HUVEC， 用流式 细胞仪和免疫印迹技术观察到PECAM-1的表达基本无变化[8，9]， 与本文结果基 本一致。 HUVEC的PECAM-1组化染色变浅可能与以下原因有关[9，10]： 内皮细胞 被激活后， 可引起PECAM-1的酪氨酸、 丝氨酸磷酸化， 然后与细胞骨架发生作用， 导致 PECAM-1从内皮细胞连接部聚集状到弥散状排列， 而使连接中染色变淡。 内皮细胞的这种 改变可能具有以下意义： 在炎症初期， 内皮细胞结构性表达的PECAM-1有助于白细胞的识 别和结合； 当受炎性因子持续刺激后， 内皮细胞连接部
, 百拇医药
PECAM-1减少， 可能通过增加血管通透性， 促进大量的血浆蛋白渗出而有助于体液免疫， 同时对白细胞的渗出也可能具有一定的调节作用。
本研究提示， 炎性刺激物LPS、 TNF-α、 IL-1β不仅可引起PMN表达PECAM-1减少， 激 活PMN功能， 而且可改变内皮细胞PECAM-1的分布， 从而参与白细胞渗出和血管通透性的 调节。 因此， PECAM-1在炎症调节中可能具有重要作用。
本文作者简介：王建春(1965～)， 男， 汉族， 副教授， 博士
参考文献
1，Newman PJ. The biology of PECAM-1. J Clin Invest, 1997, 99(1):3～8
, 百拇医药
2，Carlos TM, Harlan JM. Leukocyte-endothelial adhesion molecules. Blood , 1994, 84(7):2 068～2 101.
3，Stockinger H, Gadd SJ, Eher R, et al. Molecular characterization and f unctional analysis of the leukocyte surface protein CD31. J Immunol, 1990, 145(1 1):3 889～3 897.
4，Galinanes M, Watson C, Trivedi U, et al. Differential patterns of neut rophil adhesion molecules during cardiopulmonary bypass in humans. Circulation, 1996, 94(9 Suppl):Ⅱ364～Ⅱ369.
, 百拇医药
5，Zehnder JL, Hirai K, Shatsky M, et al. The cell adhesion molecule CD31 is phosphorylated after cell activation. Down-regulation of CD31 in activated T lymphocytes. J Biol Chem, 1992, 267(8):5 243～5 249.
6，Christofidou SM, Nakada MT, Williams J, et al. Neutrophil platelet e ndothelial cell adhesion molecule-1 participates in neutrophil recruitment at i nflammatory sites and is down-regulated after leukocyte extravasation. J Immuno l, 1997, 158(10):4 872～4 878.
, http://www.100md.com
7，Ferrero E, Ferrero ME, Pardi R, et al. The platelet endothelial cell a dhesion molecule-1(PECAM-1) contributes to endothelial barrier function. FEBS Lett, 1995, 374(3):323～326.
8，Ferrero E, Villa A, Ferrero ME, et al. Tumor necrosis factor alpha-in duced vascular leakage involves PECAM-1 phosphorylation. Cancer Res, 1996, 56(1 4):3 211～3 215.
9，Rival Y, Del-Maschio A, Rabiet MJ, et al. Inhibition of platelet endo thelial cell adhesion molecule-1 synthesis and leukocyte transmigration in endo thelial cells by the combined action of TNF-alpha and TNF-gamma. J Immunol, 19 96, 157(3):1 233～1 241.
10，Romer LH, McLean NV, Yan HC, et al. INF-gamma and TNF-alpha induce redistribution of PECAM-1(CD31) on human endothelial cells. J Immunol, 1995, 15 4(12):6 582～6 592.
本文1999-09-14收到, 1999-11-22修回, 2000-01-20接受, 百拇医药
单位：王建春(中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所， 邮政编码 重庆 400037)；毛宝龄(中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所， 邮政编码 重庆 400037)；钱桂生(中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所， 邮政编码 重庆 400037)
关键词：血小板内皮细胞粘附分子-1；多核白细胞；人脐静脉内皮细胞
微循环学杂志000106
目的： 初探炎性刺激对人多核白细胞(PMN)和脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)表达的影响和PECAM-1的可能作用。 方法： 使用流式细胞仪和免疫组化法， 观察脂多糖(LPS)、 白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α对PMN和HUVEC PECAM-1表达的变化。 结果： LPS、 IL-1β和TNF-α可引起PMN表达PECAM-1蛋白减少， 而对HUVEC PECAM-1的表达无显著影响， 但组化显著在HUVEC连接部的PECAM-1染色变淡。 结论： 上述炎性刺激物不仅可引起PMN表达PECAM-1减少、 激活PMN， 而且可改变内皮细胞PECAM-1的分布， 因此PECAM-1在炎症中可能起重要作用。
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TNF-α、 IL-1β、 LPS Affects of Expression of Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1 in Human Polymorphonuclear and Umbilical Vein Endothelial Cells
Wang, Jianchun, Mao Baoling, Qian Guisheng
(Xinqiao Hospital of Chinese PLA Third Military Medical University, Chongqing 400037)
Objective: Preliminarily effect of inflammation stimuli on platelet endothelial cell adhesion molecule-1(PECAM-1) in polymorphonuclear(PMN) and human umbilical vein endothelial cells(HUVEC) and potential roles of PECAM-1 were explored. Method: Changes of PECAM-1 expression in PMN and HUVEC stimulated by lipopolysaccharide(LPS)、 interleukin-1β(IL-1β) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) by flow cytometry and immunohistochemistry were observed. Results: LPS、 IL-1β and TNF-α induced PECAM-1 protein expression reduction in PMN, but did not affect significantly PECAM-1 expression in HUVEC. Immunohistochemistry revealed reduced PECAM-1 staining in HUVEC junctions stimulated by inflammation stimuli. Conclusion: Inflammation stimuli above can cause not only reduction of PECAM-1 expression for activating PMN but also PECAM-1 redistribution on HUVEC, these imply PECAM-1 maybe play an important role during inflammation.
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Key words: Platelet endothelial cell adhesion molecule-1; Polymorphonuclear; Human umbilical vein endothelial cells
多核白细胞(PMN)和血管内皮细胞是免疫和炎症反应中的重要细胞， 是近年来人们关注的焦点 。 PMN是炎症中的主要效应细胞， 能分泌多种物质， 可引起炎症反应的扩大、 加重和组 织损伤。 血管内皮细胞既是一种效应细胞， 又是一种靶细胞， 在炎症反应中易受到损害 。 血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)主要分布于血细胞和血管内皮细胞， 不仅参与 粘附分子的信号传导和炎症中白细胞的渗出， 而且参与内皮细胞完整性的维持， 对内皮细 胞屏障功能具有一定的调节作用[1]。 为此， 本文观察了脂多糖(LPS)、 白介素( IL)-1β、 肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎性刺激对人PMN、 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)PECAM -1蛋白表达的调控作用， 以探讨炎性刺激对PECAM-1表达的影响。
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1 材料与方法
1.1材料
由： (1) 淋巴细胞分离液(上海试剂二厂)； (2) LPS(O111∶B4， Sigma)； (3) 重组TNF-α、 IL-1β(北京邦定)； (4) 免疫组化染色SP试剂盒、 抗Ⅷ： von Wille br and因子抗体(北京中山)； (5) PECAM-1单克隆抗体(Newman PJ博士惠赠)； (6) FITC标记 的二抗(北京邦定)等组成。
1.2 方法
1.2.1 人PMN的分离和培养： 取健康献血员静脉血150 ml， 3.8%枸橼 酸钠抗凝， 以Hank's液(含5%小牛血清)二倍稀释后， 加于淋巴细胞分离液层上， 室温1 000 r/min离心20 min， 小心吸弃上层的血浆和单个核白细胞， 向下层的粒细胞和红细 胞中加入5倍体积的红细胞溶解液， 在0 ℃溶解红细胞15 min， 然后800 r/min室温离心10 min， 再以Hank's液漂洗2次、 离心， 沉淀细胞以DMEM培养基悬浮， 显微镜下用血细胞 计数器计数， 台盼蓝活力判断， 显示PMN活力大于95%。
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1.2.2 HUVEC的分离和培养： 采用胰蛋白酶消化法。 培养一周后， HUVEC 融合成单层， 经Ⅷ： von Wille brand因子组化鉴定证实， 供本实验使用。
1.2.3 LPS、 TNF-α、 IL-1β对人PMN、 HUVEC PECAM-1表达的影响： 将106/ml PMN和2.5×106/ml呈单层融合状态的HUVEC， 均分设LPS组、 TNF-α 组、 IL-1β组和对照组， 分别予LPS 10 μg、 IL-1β 1 000 U、 TNF-α 1 00 0 U刺激24 h。 培养24 h后， 收集细胞， 将细胞4 ℃离心(1 000 r/min×10 min) 后， 加入4%多聚甲醛固定细胞， 并制成单细胞悬液备流式细胞仪检测。 HUVEC同时作盖玻 片培养备组化分析用。
1.2.4 PECAM-1的流式细胞仪检测： 用FACS 420型流式细胞仪(光源 为2 W的氩离子激光器， 工作功率为300 mW)， 分别进行单参数分析， 测量的数据、 图形 同时输入HP-300 Consort 30计算机处理， 采用免疫荧光间接标记法进行检测。 以表示荧 光强度变化的平均荧光道数(Mode)， 反映PECAM-1表达情况。
, http://www.100md.com
1.2.5 HUVEC PECAM-1组化观察： 采用SP法。
1.2.6 统计分析： 采用Excel 97软件进行t检验， 结果以均数± 标准差(
±s)表示， 以P<0.05为相差显著。 2 结 果2.1PMN和HUVEC PECAM-1表达的变化
经流式细胞仪检测发现， 在PMN， 给予LPS、 IL-1β、 TNF-α刺激后， PECAM-1表达 均较对照组显著减少； 而在HUVEC， LPS、 TNF-α、 IL-1β刺激后， PECAM-1虽有降 低， 但均未达到显著水平。 见附表。
附表 LPS、 TNF-α、 IL-1β对PM N、 HUVEC、PECAM-1表达的影响(n均=6， Mode， [ AKx-D ±s) 组 分
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PMN
HUVEC
对照组
7.83±1.30
6.85±0.57
LPS组
6.13±0.291)
6.63±1.11
TNF-α组
6.16±0.951)
6.29±0.50
IL-1β组
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5.87±0.591)
6.21±0.57
注: 1) 与对照组比较： P<0.05
2.2 HUVEC免疫组化
在未受刺激的HUVEC， PECAM-1主要位于内皮细胞之间的连接部， 该部位呈深棕色， LPS 、 TNF-α、 IL-1β刺激后， 在细胞连接部PECAM-1的染色明显变淡。 见图1、 2。
图1 静息状态下PECAM-1主要位于HUVEC细胞连接部×400
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图2 TNF刺激后，PECAM-1D在HUVEC连接部染变浅×400
3 讨 论
PECAM-1是粘附分子中免疫球蛋白基因超家族的一个成员， PECAM-1可在血小板、 粒细胞 、 T淋巴细胞、 内皮细胞表达。 研究显示， 该分子在心脏发育、 血管完整性的维持、 炎症中白细胞渗出等病理生理过程中具有重要作用[1，2]。 本研究发现， PMN受L PS、 TNF-α、 IL-1β刺激后， 流式细胞仪检测显示PMN表面PECAM-1表达显著降低。 有人在FLMP刺激的人粒细胞和体外循环病人的白细胞、 血小板也观察到PECAM-1表达降低 [3，4]； 由于PECAM-1活化后， 可引起细胞释放活性氧和TNF、 IL-1、 IL-8 等细胞因子[3]， 因此PMN PECAM-1表达减少， 可能反映白细胞功能的激活， 以利于白细胞的游走、 渗出， 参与免疫和炎症反应。 PECAM-1表达减少可能与以下因素 有关[5，6]： (1) PMN受上述致炎因子刺激而激活， PECAM-1从细胞表面大量释 放。 (2) PECAM-1转录水平下降、 稳定性降低， 导致蛋白表达减少。 (3) PECAM-1激活 后发生磷酸化， 引起蛋白分解加快。
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内皮细胞间的连接是维持血管完整性、 调节白细胞渗出和血管通透性的结构基础。 研究发 现， PECAM-1主要位于内皮细胞之间的连接部， 且PECAM-1参与HUVEC单层结构完整性的 维持， 在内皮细胞间的连接中起作用[1，7]。 本文在HUVEC研究发现， 给予LPS 、 TNF-α、 IL-1β刺激后， 虽然流式细胞仪检测显示HUVEC PECAM-1表达无显著降 低， 但组化显示细胞连接部PECAM-1的染色明显变淡， 提示内皮细胞之间的连接可能减弱 ， 由此可能导致血管通透性增加。 Ferrero和Rival分别在TNF-α刺激的HUVEC， 用流式 细胞仪和免疫印迹技术观察到PECAM-1的表达基本无变化[8，9]， 与本文结果基 本一致。 HUVEC的PECAM-1组化染色变浅可能与以下原因有关[9，10]： 内皮细胞 被激活后， 可引起PECAM-1的酪氨酸、 丝氨酸磷酸化， 然后与细胞骨架发生作用， 导致 PECAM-1从内皮细胞连接部聚集状到弥散状排列， 而使连接中染色变淡。 内皮细胞的这种 改变可能具有以下意义： 在炎症初期， 内皮细胞结构性表达的PECAM-1有助于白细胞的识 别和结合； 当受炎性因子持续刺激后， 内皮细胞连接部
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PECAM-1减少， 可能通过增加血管通透性， 促进大量的血浆蛋白渗出而有助于体液免疫， 同时对白细胞的渗出也可能具有一定的调节作用。
本研究提示， 炎性刺激物LPS、 TNF-α、 IL-1β不仅可引起PMN表达PECAM-1减少， 激 活PMN功能， 而且可改变内皮细胞PECAM-1的分布， 从而参与白细胞渗出和血管通透性的 调节。 因此， PECAM-1在炎症调节中可能具有重要作用。
本文作者简介：王建春(1965～)， 男， 汉族， 副教授， 博士
参考文献
1，Newman PJ. The biology of PECAM-1. J Clin Invest, 1997, 99(1):3～8
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2，Carlos TM, Harlan JM. Leukocyte-endothelial adhesion molecules. Blood , 1994, 84(7):2 068～2 101.
3，Stockinger H, Gadd SJ, Eher R, et al. Molecular characterization and f unctional analysis of the leukocyte surface protein CD31. J Immunol, 1990, 145(1 1):3 889～3 897.
4，Galinanes M, Watson C, Trivedi U, et al. Differential patterns of neut rophil adhesion molecules during cardiopulmonary bypass in humans. Circulation, 1996, 94(9 Suppl):Ⅱ364～Ⅱ369.
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5，Zehnder JL, Hirai K, Shatsky M, et al. The cell adhesion molecule CD31 is phosphorylated after cell activation. Down-regulation of CD31 in activated T lymphocytes. J Biol Chem, 1992, 267(8):5 243～5 249.
6，Christofidou SM, Nakada MT, Williams J, et al. Neutrophil platelet e ndothelial cell adhesion molecule-1 participates in neutrophil recruitment at i nflammatory sites and is down-regulated after leukocyte extravasation. J Immuno l, 1997, 158(10):4 872～4 878.
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7，Ferrero E, Ferrero ME, Pardi R, et al. The platelet endothelial cell a dhesion molecule-1(PECAM-1) contributes to endothelial barrier function. FEBS Lett, 1995, 374(3):323～326.
8，Ferrero E, Villa A, Ferrero ME, et al. Tumor necrosis factor alpha-in duced vascular leakage involves PECAM-1 phosphorylation. Cancer Res, 1996, 56(1 4):3 211～3 215.
9，Rival Y, Del-Maschio A, Rabiet MJ, et al. Inhibition of platelet endo thelial cell adhesion molecule-1 synthesis and leukocyte transmigration in endo thelial cells by the combined action of TNF-alpha and TNF-gamma. J Immunol, 19 96, 157(3):1 233～1 241.
10，Romer LH, McLean NV, Yan HC, et al. INF-gamma and TNF-alpha induce redistribution of PECAM-1(CD31) on human endothelial cells. J Immunol, 1995, 15 4(12):6 582～6 592.
本文1999-09-14收到, 1999-11-22修回, 2000-01-20接受, 百拇医药