核酸电泳银染技术及干胶制备的改良
作者：赵菲 张素娟 蒋胜辉
单位：赵菲 张素娟 蒋胜辉(第一军医大学病理学教研室，广州 510515)
关键词：银染色法；电泳；聚丙烯酰氨凝胶
临床与实验病理学杂志990531分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0401-01
核酸电泳银染色技术，是近年发展起来的一种敏感性高、操作简便、无毒污染、快速省时的新方法。电泳后的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)干胶片可长期保存。并可直接投影。因此，银染技术的应用提高了临床基因诊断及研究的阳性检出率。
笔者应用银染技术检测淋巴瘤和急性淋巴细胞性白血病IgH和TCR β基因重排，同时用于PCR-SSCP检测大肠癌K-ras、微小DNA、肺癌p53与p16、乳腺癌c-erbB-2与p53等基因突变，取得满意结果。
1 材料和方法
1.1 标本来源 南方医院病理科石蜡切片，儿科提供骨髓或外周血抗凝血。
1.2 仪器、试剂
1.2.1 凝胶光密度图像分析系统，英国UVP公司，GDS-7500UVP。
1.2.2 硝酸银等试剂均为国产试剂。
1.3 方法步骤
1.3.1 银染色 (1)固定：先用10%乙醇固定5 min；然后用1%硝酸固定10～15 min(去离子水洗 2次)。(2)染色：0.2%硝酸银染色5 min(去离子水洗2次)。(3)显色：3%无水Na2CO3显色(18 gNa2CO3+600 ml水+60 μl甲醛+60 μl Na2SO4)，显色过程中更换显色液2～3次，直至DNA Marker或阳性模板条带清晰为止(去离子水洗2次)。(4)中止显色：弃显色液，水洗，加固定液(1∶3的1%硝酸+10%乙醇)。
1.3.2 制干胶片 (1)取玻璃一块，略大于凝胶，玻璃纸2张，周边大于玻璃3～5 cm。首先，将1张玻璃纸用水打湿，平铺于玻璃上，将凝胶置于中央。(2)取另一张玻璃纸，同样用水打湿后，平铺于凝胶上，排出玻璃纸内多余汽泡，将玻璃周边多出的玻璃纸较紧的翻到玻璃背面，但不可过紧，以免胶破裂。(3)将玻璃板置于通风处，静置24 h以上，待胶干后，可从玻璃上取下，将多余玻璃纸裁去，并可将其过塑，以免潮湿、发霉。
2 体会
银染后在“凝胶光密度分析系统”仪上普通光源下可见清晰、特异条带和DNA Marker条带。最后显色终止时用1∶3硝酸乙醇溶液(1%硝酸∶10%乙醇)固定，可使凝胶底色变浅，DNA条带更清晰。该银染方法简单、快速、效果好、经济实用，无需进口试剂和特殊设备。
作者简介：赵 菲，女，32岁，技师
收稿日期：1999-04-26, 百拇医药
单位：赵菲 张素娟 蒋胜辉(第一军医大学病理学教研室，广州 510515)
关键词：银染色法；电泳；聚丙烯酰氨凝胶
临床与实验病理学杂志990531分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0401-01
核酸电泳银染色技术，是近年发展起来的一种敏感性高、操作简便、无毒污染、快速省时的新方法。电泳后的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)干胶片可长期保存。并可直接投影。因此，银染技术的应用提高了临床基因诊断及研究的阳性检出率。
笔者应用银染技术检测淋巴瘤和急性淋巴细胞性白血病IgH和TCR β基因重排，同时用于PCR-SSCP检测大肠癌K-ras、微小DNA、肺癌p53与p16、乳腺癌c-erbB-2与p53等基因突变，取得满意结果。
1 材料和方法
1.1 标本来源 南方医院病理科石蜡切片，儿科提供骨髓或外周血抗凝血。
1.2 仪器、试剂
1.2.1 凝胶光密度图像分析系统，英国UVP公司，GDS-7500UVP。
1.2.2 硝酸银等试剂均为国产试剂。
1.3 方法步骤
1.3.1 银染色 (1)固定：先用10%乙醇固定5 min；然后用1%硝酸固定10～15 min(去离子水洗 2次)。(2)染色：0.2%硝酸银染色5 min(去离子水洗2次)。(3)显色：3%无水Na2CO3显色(18 gNa2CO3+600 ml水+60 μl甲醛+60 μl Na2SO4)，显色过程中更换显色液2～3次，直至DNA Marker或阳性模板条带清晰为止(去离子水洗2次)。(4)中止显色：弃显色液，水洗，加固定液(1∶3的1%硝酸+10%乙醇)。
1.3.2 制干胶片 (1)取玻璃一块，略大于凝胶，玻璃纸2张，周边大于玻璃3～5 cm。首先，将1张玻璃纸用水打湿，平铺于玻璃上，将凝胶置于中央。(2)取另一张玻璃纸，同样用水打湿后，平铺于凝胶上，排出玻璃纸内多余汽泡，将玻璃周边多出的玻璃纸较紧的翻到玻璃背面，但不可过紧，以免胶破裂。(3)将玻璃板置于通风处，静置24 h以上，待胶干后，可从玻璃上取下，将多余玻璃纸裁去，并可将其过塑，以免潮湿、发霉。
2 体会
银染后在“凝胶光密度分析系统”仪上普通光源下可见清晰、特异条带和DNA Marker条带。最后显色终止时用1∶3硝酸乙醇溶液(1%硝酸∶10%乙醇)固定，可使凝胶底色变浅，DNA条带更清晰。该银染方法简单、快速、效果好、经济实用，无需进口试剂和特殊设备。
作者简介：赵 菲，女，32岁，技师
收稿日期：1999-04-26, 百拇医药