乳果糖口服液含量的HPLC测定法研究
作者：周立春 纪宏
单位：周立春 纪宏(北京市药品检验所 100035)
关键词：反相高效液相色谱法；乳果糖；有关物质；氨基柱
药物分析杂志000312 摘要 目的：建立一种乳果糖口服液含量的反相高效液相色谱测定法。方法：氨基柱，以磷酸盐缓冲液-乙腈(19∶81)为流动相，流速1.8 mL.min-1，检测器：示差折光检测器。结果：线性范围：50～400 μg,r=0.999 9，回收率为100.0%，RSD为1.0%(n=5)。结论：本方法结果准确，重现性好，为乳果糖口服液提供有效的质量控制方法。
Development of HPLC Method for Lactulose Oral Solution Assay
, 百拇医药
Zhou Lichun，Ji Hong
(Municipal Institute for Drug Control,Beijing 100035)
Abstract Objective：A HPLC method was described for the determination of lactulose.Method:NH2 column,with a mixture of acetonitrile-phosphate buffer(81∶19) pH 6 as mobile phase.The refractive index detector was used. Results:The standard curve was linear in the range of 50～400 μg of lactulose(r=0.999 9).The average recovery of lactulose was 100.0%(n=5),RSD=1.0%.Conclusions:The established method is rapid,accurate and reliable.This method is significant for the quality control of lactulose and its relative substances.
, 百拇医药
Key words RP-HPLC，lactulose,relative substances,NH2 column
乳果糖口服液是中国药典1995年版新增品种，主要用于治疗肝昏迷， 还可用于治疗慢性功能性便秘。由于生产工艺条件所限，乳果糖的纯度接近90%，其相关物质，主要为乳糖、半乳糖和果糖。中国药典(1995年版)[1]中，检测乳果糖口服液的有关物质及含量测定的方法为高效液相色谱法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(77∶23)为流动相，以示差折光检测器测定。但试验表明(见色谱图1-A)，该方法不能将乳果糖与其有关物质完全分离。本文采用以氨基键合硅胶为填充剂，乙腈-磷酸盐缓冲液(81∶19)为流动相，以示差折光检测器测定，使乳果糖与其有关物质完全分离(见色谱图1-B)，达到对乳果糖及其有关物质的质量的有效控制。
1 仪器与试药
, 百拇医药 高效液相色谱仪，日本岛津LC-6A高压泵，RID-6A检测器，C-R4A色谱工作站，以上由SCL-6A系统控制器联机监控，RHEODYNE 7161型进样阀；METTLER AE 260型电子分析天平。
乳果糖(纯度为100.0%)、果糖、半乳糖、乳糖对照品和乳果糖口服液(规格为5 g∶10 mL)，由北京集爱制药公司提供；乙腈为色谱纯试剂，磷酸二氢钠为分析纯试剂。
2 色谱条件
色谱柱：Phenomenex,Nucleosil 5 NH2 100 A氨基键合硅胶色谱柱(10 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(81∶19)，用稀磷酸调节pH至6.0；流速：1.8 mL.min-1；检测器：示差折光检测器；检测灵敏度：0.1 AUFS；柱温：室温；进样量：10 μL。在上述色谱条件下，乳果糖的保留时间约为17 min，在样品的色谱图中乳果糖与其最近的杂质峰得到基线分离，分离度大于1.5。见图1-B。
, 百拇医药
图1 中国药典法(A)与本法(B)条件下色谱图
1.果糖 2.半乳糖 3.乳果糖 4.乳糖
3 线性关系
取乳果糖对照品适量，精密称定，加流动相制成40 mg.mL-1的对照品溶液，精密量取上述溶液1.25，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL，以乳果糖的量(μg)为横坐标，以乳果糖的峰面积为纵坐标，求得回归方程为：
Y=5.182X-38.46 r=0.999 9
结果表明，当进样量为10 μL时，乳果糖在5～40 mg.mL-1浓度范围内，乳果糖的量与峰面积呈良好的线性关系。
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4 样品的测定
取乳果糖对照品约500 mg、果糖对照品约180 mg、半乳糖对照品约100 mg和乳糖对照品约20 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取乳果糖口服液，精密称取适量(约相当于乳果糖500 mg)，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，计算，即得。批号为971018，971021，971007的样品含量(标示量%)测定结果分别为104.5%、103.1%、102.3%，n=2。
5 回收试验
精密称取乳果糖口服液适量(约相当于乳果糖250 mg)，置25 mL量瓶中，再分别加入精密称定的乳果糖对照品约250 mg，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。按色谱条件下方法测定，计算回收率，其平均回收率为100.0%，RSD为1.0%，n=5，说明辅料对含量测定基本无干扰，方法可行。
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6 重现性试验
取浓度为20 mg.mL-1的供试品溶液，进样5次，计算峰面积的RSD值，结果小于1%。
7 讨论
7.1 色谱条件的选择
7.1.1 流动相的选择 经试验，以乙腈与0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液二元系统作流动相，其中乙腈的比例对乳果糖的保留时间及与杂质的分离程度有一定的影响，经比较，选定乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(81∶19)为流动相的配比。二元流动相系统的比例可根据色谱柱的具体情况进行适当调节。乙腈量的增加与保留时间的增加成正比。
7.1.2 流动相的pH对色谱行为的影响 在乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(81∶19)的条件下，以磷酸调节pH，结果发现，样品的保留时间随pH的升高而增加，乳果糖与相近有关物质的分离度随pH的升高而增加，但pH的升高到一定程度，将对色谱柱有破坏作用，当pH为6.0时，分离效果较佳，样品的保留时间及测定时间适中，且能有效地保护色谱柱。
, 百拇医药
7.1.3 柱温对色谱行为的影响 经试验表明，样品的保留时间随柱温的升高而略有减少，分离度略有增加，通过试验认为，室温条件下，能保证分离效果，又可降低对仪器条件的要求。
7.1.4 分离柱的选择 本文选择了对糖类分离首选的氨基键合硅胶色谱柱作为分离柱。对国内、外数种牌号的分离柱进行比较，结果表明，乳果糖在不同牌号的氨基键合硅胶柱上均可达到药典规定的分离度，必要时可适当调整二元流动相的比例。
7.2 溶液稳定性试验 照本法配制的对照品溶液及供试品溶液在24 h之内进行测定，溶液稳定，结果无显著变化。
7.3 系统适用性试验 理论塔板数按乳果糖峰计算应不低于2 000，同一对照品溶液重复注射5次，峰面积的RSD小于1%，乳果糖峰的拖尾因子小于1.5，与其最近杂质峰的分离度大于1.5。
参考文献
1，中国药典.1995.二部：397
(本文于1999年2月23日收到), 百拇医药
单位：周立春 纪宏(北京市药品检验所 100035)
关键词：反相高效液相色谱法；乳果糖；有关物质；氨基柱
药物分析杂志000312 摘要 目的：建立一种乳果糖口服液含量的反相高效液相色谱测定法。方法：氨基柱，以磷酸盐缓冲液-乙腈(19∶81)为流动相，流速1.8 mL.min-1，检测器：示差折光检测器。结果：线性范围：50～400 μg,r=0.999 9，回收率为100.0%，RSD为1.0%(n=5)。结论：本方法结果准确，重现性好，为乳果糖口服液提供有效的质量控制方法。
Development of HPLC Method for Lactulose Oral Solution Assay
, 百拇医药
Zhou Lichun，Ji Hong
(Municipal Institute for Drug Control,Beijing 100035)
Abstract Objective：A HPLC method was described for the determination of lactulose.Method:NH2 column,with a mixture of acetonitrile-phosphate buffer(81∶19) pH 6 as mobile phase.The refractive index detector was used. Results:The standard curve was linear in the range of 50～400 μg of lactulose(r=0.999 9).The average recovery of lactulose was 100.0%(n=5),RSD=1.0%.Conclusions:The established method is rapid,accurate and reliable.This method is significant for the quality control of lactulose and its relative substances.
, 百拇医药
Key words RP-HPLC，lactulose,relative substances,NH2 column
乳果糖口服液是中国药典1995年版新增品种，主要用于治疗肝昏迷， 还可用于治疗慢性功能性便秘。由于生产工艺条件所限，乳果糖的纯度接近90%，其相关物质，主要为乳糖、半乳糖和果糖。中国药典(1995年版)[1]中，检测乳果糖口服液的有关物质及含量测定的方法为高效液相色谱法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(77∶23)为流动相，以示差折光检测器测定。但试验表明(见色谱图1-A)，该方法不能将乳果糖与其有关物质完全分离。本文采用以氨基键合硅胶为填充剂，乙腈-磷酸盐缓冲液(81∶19)为流动相，以示差折光检测器测定，使乳果糖与其有关物质完全分离(见色谱图1-B)，达到对乳果糖及其有关物质的质量的有效控制。
1 仪器与试药
, 百拇医药 高效液相色谱仪，日本岛津LC-6A高压泵，RID-6A检测器，C-R4A色谱工作站，以上由SCL-6A系统控制器联机监控，RHEODYNE 7161型进样阀；METTLER AE 260型电子分析天平。
乳果糖(纯度为100.0%)、果糖、半乳糖、乳糖对照品和乳果糖口服液(规格为5 g∶10 mL)，由北京集爱制药公司提供；乙腈为色谱纯试剂，磷酸二氢钠为分析纯试剂。
2 色谱条件
色谱柱：Phenomenex,Nucleosil 5 NH2 100 A氨基键合硅胶色谱柱(10 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(81∶19)，用稀磷酸调节pH至6.0；流速：1.8 mL.min-1；检测器：示差折光检测器；检测灵敏度：0.1 AUFS；柱温：室温；进样量：10 μL。在上述色谱条件下，乳果糖的保留时间约为17 min，在样品的色谱图中乳果糖与其最近的杂质峰得到基线分离，分离度大于1.5。见图1-B。
, 百拇医药
图1 中国药典法(A)与本法(B)条件下色谱图
1.果糖 2.半乳糖 3.乳果糖 4.乳糖
3 线性关系
取乳果糖对照品适量，精密称定，加流动相制成40 mg.mL-1的对照品溶液，精密量取上述溶液1.25，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL，以乳果糖的量(μg)为横坐标，以乳果糖的峰面积为纵坐标，求得回归方程为：
Y=5.182X-38.46 r=0.999 9
结果表明，当进样量为10 μL时，乳果糖在5～40 mg.mL-1浓度范围内，乳果糖的量与峰面积呈良好的线性关系。
, http://www.100md.com
4 样品的测定
取乳果糖对照品约500 mg、果糖对照品约180 mg、半乳糖对照品约100 mg和乳糖对照品约20 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取乳果糖口服液，精密称取适量(约相当于乳果糖500 mg)，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，计算，即得。批号为971018，971021，971007的样品含量(标示量%)测定结果分别为104.5%、103.1%、102.3%，n=2。
5 回收试验
精密称取乳果糖口服液适量(约相当于乳果糖250 mg)，置25 mL量瓶中，再分别加入精密称定的乳果糖对照品约250 mg，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。按色谱条件下方法测定，计算回收率，其平均回收率为100.0%，RSD为1.0%，n=5，说明辅料对含量测定基本无干扰，方法可行。
, http://www.100md.com
6 重现性试验
取浓度为20 mg.mL-1的供试品溶液，进样5次，计算峰面积的RSD值，结果小于1%。
7 讨论
7.1 色谱条件的选择
7.1.1 流动相的选择 经试验，以乙腈与0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液二元系统作流动相，其中乙腈的比例对乳果糖的保留时间及与杂质的分离程度有一定的影响，经比较，选定乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(81∶19)为流动相的配比。二元流动相系统的比例可根据色谱柱的具体情况进行适当调节。乙腈量的增加与保留时间的增加成正比。
7.1.2 流动相的pH对色谱行为的影响 在乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(81∶19)的条件下，以磷酸调节pH，结果发现，样品的保留时间随pH的升高而增加，乳果糖与相近有关物质的分离度随pH的升高而增加，但pH的升高到一定程度，将对色谱柱有破坏作用，当pH为6.0时，分离效果较佳，样品的保留时间及测定时间适中，且能有效地保护色谱柱。
, 百拇医药
7.1.3 柱温对色谱行为的影响 经试验表明，样品的保留时间随柱温的升高而略有减少，分离度略有增加，通过试验认为，室温条件下，能保证分离效果，又可降低对仪器条件的要求。
7.1.4 分离柱的选择 本文选择了对糖类分离首选的氨基键合硅胶色谱柱作为分离柱。对国内、外数种牌号的分离柱进行比较，结果表明，乳果糖在不同牌号的氨基键合硅胶柱上均可达到药典规定的分离度，必要时可适当调整二元流动相的比例。
7.2 溶液稳定性试验 照本法配制的对照品溶液及供试品溶液在24 h之内进行测定，溶液稳定，结果无显著变化。
7.3 系统适用性试验 理论塔板数按乳果糖峰计算应不低于2 000，同一对照品溶液重复注射5次，峰面积的RSD小于1%，乳果糖峰的拖尾因子小于1.5，与其最近杂质峰的分离度大于1.5。
参考文献
1，中国药典.1995.二部：397
(本文于1999年2月23日收到), 百拇医药