福尔马林固定组织电镜标本制作法
作者：井建华
单位：(电镜室 长沙 410078)
关键词：显微镜检查；电子；标本制作；方法学
湖南医科大学学报990627
提要 本文介绍了一种能使福尔马林固定、石蜡包埋的组织达到电镜观察要求的样品制备方法。对于取材新鲜、固定及时的石蜡包埋组织，脱蜡后再以4%戊二醛固定24h，1%锇酸后固定1～2h，再常规丙酮脱水、Epon812包埋、超薄切片，可获得基本上符合诊断要求的超微结构。此外，本文还对该方法的要点及注意事项进行了讨论。
中国图书分类号 R331
Sample preparation for electron microscope with tissues fixed
, http://www.100md.com
with formalin and embeded in paraffin
Jing Jianhua
(Electron Microscope Laboratory, Hunan Medical University, Changsha 410 078)
A method of sample preparation for electron microscope is introduced. A fter paraffin-embedded tissues, fresh and fixed on time,were deparaffined, the tissue were fixed in 4% glutaraldehyde for 24 hours, in 1% osmic acid for 1～2 hou rs, and dehydrated with acetone and embedded in Epon812; then they were cut into ultrathin sections. By this method, better ultrastructure of paraffin-embedded tissues was obtained, and the method could satisfy the demand for observation under electron microscope. In addition, some important proceedings were also disc ussed in the paper.
, 百拇医药
Key words microscopy,electronic; specimen handling; methodology
电子显微镜诊断技术对于某些疾病的鉴别诊断具有特别重要的作用[1]。电镜样品一般要求用戊二醛固定以获得良好的超微结构[2]。但在临床外检工作中，常遇到某些需要进行电镜观察才能最后确诊的病例，其组织由于预先不是用戊二醛固定，而是采用常规的10%福尔马林固定，且经石蜡包埋。如何使这些组织满足电镜观察的需要，是病理诊断中有待解决的问题。笔者在该方面作了一些尝试，并获得了比较满意的结果，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 标本 肠道肿瘤组织2例，光镜病理诊断怀疑为类癌，但不典型，免疫组织化学检测亦未获得明确结论，需作电镜检查确诊。
1.2 方法 从蜡块组织周边取小块组织(1mm×1mm×1mm)→二甲苯脱蜡→无水酒精30min，2次→90%酒精30min→70%酒精30min→0.01mol.L-1PBS浸泡30min→4%戊二醛固定24h(4℃)→0.01mol.L-1PBS洗15min，3次→1%锇酸固定1～2h→0.01mol.L-1PBS洗15min，3次→常规脱水、Epon812浸泡、包埋和聚合→超薄切片→铀-铅双染色→H600透射电镜观察。
, 百拇医药
2 结果和讨论
电镜下细胞结构保存尚好，线粒体和内分泌颗粒等细胞器清晰可见(附图)。基本上满足了电镜诊断的要求。
附图 细胞浆内分泌颗粒和细胞器保存较好
Fig. Showing better conserved endocrine granules and or ganelles in cytoplasm.
透射电镜样品制备的关键是组织新鲜和固定及时[2]。戊二醛是一种常用的电镜固定剂，它对细胞的膜性结构和蛋白成分具有良好的固定作用，常用于电镜样品的前固定[2]。福尔马林是光镜样品最常用的固定剂，它对组织的穿透性强，固定时间短，且价格低廉，但其对细胞的微细胞结构保存欠佳，难于达到电镜诊断的要求[2]。为此，作者利用福尔马林固定、石蜡包埋后的组织经脱蜡后再以4%戊二醛固定24h，1%锇酸后固定1～2h，可部分修复细胞的超微结构。为获得较满意的结果，根据笔者的经验应注意以下几点：①标本应为取材新鲜、固定及时且时间短的组织，这样有利于细胞的结构保存较好，有利于超微结构的修复；②进行电镜取材时应取蜡块内标本周边的组织，因周边组织较中央处固定好；且组织不宜大于1mm×1mm×1mm；③组织脱蜡后一定要用较高浓度的戊二醛(4%)固定24h，并且锇酸后固定的时间亦要较通常的长(>1.5h)，这样一方面可部分修复细胞超微结构，另一方面又可保证细胞结构不会在其后的制样过程中进一步破坏；④ 本方法尤其适应于有内分泌功能肿瘤的鉴别诊断。
参 考 文 献
1 杭振镳，蔡文琴，主编.电子显微镜术在临床医学的应用.重庆：重庆出版社，1988：165～179
2 应国华主编.电镜技术与细胞超微结构.香港：香港现代出版社，1993：30～80, 百拇医药
单位：(电镜室 长沙 410078)
关键词：显微镜检查；电子；标本制作；方法学
湖南医科大学学报990627
提要 本文介绍了一种能使福尔马林固定、石蜡包埋的组织达到电镜观察要求的样品制备方法。对于取材新鲜、固定及时的石蜡包埋组织，脱蜡后再以4%戊二醛固定24h，1%锇酸后固定1～2h，再常规丙酮脱水、Epon812包埋、超薄切片，可获得基本上符合诊断要求的超微结构。此外，本文还对该方法的要点及注意事项进行了讨论。
中国图书分类号 R331
Sample preparation for electron microscope with tissues fixed
, http://www.100md.com
with formalin and embeded in paraffin
Jing Jianhua
(Electron Microscope Laboratory, Hunan Medical University, Changsha 410 078)
A method of sample preparation for electron microscope is introduced. A fter paraffin-embedded tissues, fresh and fixed on time,were deparaffined, the tissue were fixed in 4% glutaraldehyde for 24 hours, in 1% osmic acid for 1～2 hou rs, and dehydrated with acetone and embedded in Epon812; then they were cut into ultrathin sections. By this method, better ultrastructure of paraffin-embedded tissues was obtained, and the method could satisfy the demand for observation under electron microscope. In addition, some important proceedings were also disc ussed in the paper.
, 百拇医药
Key words microscopy,electronic; specimen handling; methodology
电子显微镜诊断技术对于某些疾病的鉴别诊断具有特别重要的作用[1]。电镜样品一般要求用戊二醛固定以获得良好的超微结构[2]。但在临床外检工作中，常遇到某些需要进行电镜观察才能最后确诊的病例，其组织由于预先不是用戊二醛固定，而是采用常规的10%福尔马林固定，且经石蜡包埋。如何使这些组织满足电镜观察的需要，是病理诊断中有待解决的问题。笔者在该方面作了一些尝试，并获得了比较满意的结果，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 标本 肠道肿瘤组织2例，光镜病理诊断怀疑为类癌，但不典型，免疫组织化学检测亦未获得明确结论，需作电镜检查确诊。
1.2 方法 从蜡块组织周边取小块组织(1mm×1mm×1mm)→二甲苯脱蜡→无水酒精30min，2次→90%酒精30min→70%酒精30min→0.01mol.L-1PBS浸泡30min→4%戊二醛固定24h(4℃)→0.01mol.L-1PBS洗15min，3次→1%锇酸固定1～2h→0.01mol.L-1PBS洗15min，3次→常规脱水、Epon812浸泡、包埋和聚合→超薄切片→铀-铅双染色→H600透射电镜观察。
, 百拇医药
2 结果和讨论
电镜下细胞结构保存尚好，线粒体和内分泌颗粒等细胞器清晰可见(附图)。基本上满足了电镜诊断的要求。
附图 细胞浆内分泌颗粒和细胞器保存较好
Fig. Showing better conserved endocrine granules and or ganelles in cytoplasm.
透射电镜样品制备的关键是组织新鲜和固定及时[2]。戊二醛是一种常用的电镜固定剂，它对细胞的膜性结构和蛋白成分具有良好的固定作用，常用于电镜样品的前固定[2]。福尔马林是光镜样品最常用的固定剂，它对组织的穿透性强，固定时间短，且价格低廉，但其对细胞的微细胞结构保存欠佳，难于达到电镜诊断的要求[2]。为此，作者利用福尔马林固定、石蜡包埋后的组织经脱蜡后再以4%戊二醛固定24h，1%锇酸后固定1～2h，可部分修复细胞的超微结构。为获得较满意的结果，根据笔者的经验应注意以下几点：①标本应为取材新鲜、固定及时且时间短的组织，这样有利于细胞的结构保存较好，有利于超微结构的修复；②进行电镜取材时应取蜡块内标本周边的组织，因周边组织较中央处固定好；且组织不宜大于1mm×1mm×1mm；③组织脱蜡后一定要用较高浓度的戊二醛(4%)固定24h，并且锇酸后固定的时间亦要较通常的长(>1.5h)，这样一方面可部分修复细胞超微结构，另一方面又可保证细胞结构不会在其后的制样过程中进一步破坏；④ 本方法尤其适应于有内分泌功能肿瘤的鉴别诊断。
参 考 文 献
1 杭振镳，蔡文琴，主编.电子显微镜术在临床医学的应用.重庆：重庆出版社，1988：165～179
2 应国华主编.电镜技术与细胞超微结构.香港：香港现代出版社，1993：30～80, 百拇医药