凋亡抑制基因bcl-2在牙胚发育中的作用
作者：赵书芳 赵 皿 金 岩 吴补领 柳安生
单位：赵书芳 赵 皿 金 岩 吴补领：第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032；柳安生：市中心医院，吉林 通化 134000)
关键词：bcl-2基因；细胞凋亡；牙胚；发育
牙体牙髓牙周病学杂志990202 摘要 目的：通过检测牙胚发育中bcl-2基因、蛋白的表达及细胞凋亡的情况，探讨bcl-2基因及细胞凋亡在牙齿发育中的作用。方法：利用原位末端标记法(TUNEL)、原位杂交及免疫组织化学技术分别对SD大鼠牙胚发育不同时期bcl-2 mRNA、蛋白的表达及细胞凋亡进行研究。结果：在牙胚发育的各时期均有细胞凋亡现象及bcl-2 mRNA、蛋白的表达。bcl-2 mRNA早期在上皮性成釉器及周围的间充质细胞尤其是生长中心部位表达明显。牙体组织形成后各部位阳性表达逐渐减弱、消失；bcl-2蛋白与mRNA的表达基本一致。早期凋亡细胞集中出现在细胞生长中心处。牙体组织形成后散在可见。结论：bcl-2基因可能是牙齿发育中的细胞生长、增殖及凋亡的内在调控基因之一，参与了牙齿发育的重要塑形过程。
, http://www.100md.com
中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0096-03
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(2)：96]
The rofe of inhibiting apoptosis gene bcl-2 in the
development of tooth germ
Zhao Shufang, Zhao Min, Jin Yan et al
School of Stomatology,The Fourth Military Medical University， Xi’an 710032
Abstrat Aim:Examing the expression of bcl-2 gene, protein, and apoptosis in the development of tooth germ to make out the rofe of bcl-2 and apoptosis in the tooth development. Methods:The expression of bcl-2 mRNA,protein and apoptosis in different stages of tooth bud development of SD rat was studied by Tdt-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL),in situ hybridization and immunohistochemical staining. Results: There were apoptosis and expression of bcl-2 mRNA and protein in all the stages of development of tooth germ,bcl-2 mRNA was remarkably expressed in the stellate reticulum cells of enamel organ and peripheral mesenchymal cells, especially in the growth center in early stage. The positive expression is gradually weakened and disappeared after the tooth tissue was formed. The expression of protein was consistent with mRNA of bcl-2. In the early stage, the apoptosis cells were concentrated in the growth center and became scattered after the tooth tissue was formed. Conclusions: bcl-2 probably is one of the inner regulating genes of the cell growth,proliferation and apoptosis in the development of tooth and takes part in the formation of tooth shape.
, http://www.100md.com
Key words bcl-2 gene；apoptosis；dental germ；development
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(2)：96]
研究表明，细胞凋亡(apoptosis或programmed cell death ，PCD)在胚胎发育、器官形成、变态反应、肿瘤发生及保持机体的稳态中发挥着至关重要的作用[1]。而细胞凋亡与细胞增殖一样受多种基因的调控[2]。那么，牙齿发育中凋亡抑制基因bcl-2是否表达又是否对细胞凋亡现象发挥着调控作用，尚未见此方面的报道。为此，本研究通过观察SD大鼠牙胚发育中bcl-2表达与细胞凋亡关系，初步探讨牙齿发育的机制。
1 材料和方法
1.1 动物模型及标本制备
, http://www.100md.com
选用纯系、3月龄SD大鼠(上海产)20只，按雌雄4：1的比例同笼，每天早晨8：00观察雌鼠阴栓，以观察到阴栓计为妊娠0d，分别于妊娠13、15、17、19d脱颈处死大鼠，切取胎鼠头部置于40g/L的多聚甲醛中固定，另取出生后1、3、5、7d幼鼠，均取头部(沿正中线切开鼠头后分切)置入含盐酸、甲酸、冰醋酸的40g/L多聚甲醛液中充分固定、脱钙，流水冲洗后，常规脱水、石蜡包埋。行冠状和矢状面5μm切片，分别用于TUNEL染色、原位杂交及免疫组织化学染色。
1.2 原位末端标记法(TUNEL法)标记PCD细胞
TUNEL法(试剂盒购自美国Oncor公司)：切片常规脱蜡至水，室温下20mg/L的蛋白酶K消化15min；30ml/L H2O2 的PBS溶液中处理5min后，加50μl的平衡液(TUNEL试剂盒原配)1min；再加含TDT酶反应液15μl，37℃孵育1.5h后用预热的中止反应液中止反应(TUNEL试剂盒原配)；buffer1漂洗2次(15min/次)后加20ml/L 的正常羊血清孵育30min；滴加抗地高辛碱性磷酸酶抗体置于湿盒中孵育2h；经buffer1 、buffer3漂洗后，加新配制的显色液 (NBT/BCIP显色系统，用buffer3配制，NBT4.5μl、BCIP3.5μl、左旋咪唑0.24mg/L) 20μl，暗处显色。中止显色后，梯度酒精脱水，二甲苯透明封片。
, 百拇医药
1.3 原位杂交检测bcl-2基因的表达
1.3.1 探针及标记：质粒pDOR-SB8.4(第四军医大学生化教研室朱峰博士惠赠)含1.9kb的bcl-2基因片段。取已鉴定的质粒DNA，经EcoRI酶切后，将目的基因用冻溶法回收。bcl-2探针参照地高辛标记检测试剂盒(Boehringer Mannheim公司)说明书，采用随机引物法标记。
1.3.2 bcl-2原位杂交：石蜡切片脱蜡至DEPC水，分别用0.2mol HCl和20mg/L的蛋白酶K处理，梯度酒精脱水后室温干燥。用地高辛标记探针于42℃杂交后，分别用2×SSC、1×SSC、0.5×SSC、buffer1、buffer2依次充分洗涤，再用质量浓度20ml/L 正常羊血清封闭30min后，滴加抗地高辛碱性磷酸酶抗体2h，经buffer1 、buffer3漂洗后，加新配制的显色液 (NBT/BCIP显色系统) 20μl，暗处显色。中止显色后，梯度酒精脱水，二甲苯透明封片。
, 百拇医药
1.4 免疫组织化学检测bcl-2蛋白的表达
石蜡切片脱蜡至水，经30ml/L H2O2封闭内源性过氧化物酶及枸橼酸缓冲液微波修复抗原10min后，用正常羊血清封闭30 min；加bcl-2 抗体(兔抗鼠多抗，美国Santa Cruz 公司产品)置于4℃过夜，室温下复温1h后滴加生物素化羊抗鼠二抗37℃反应30 min ；再加ABC复合物37℃孵育30 min，DAB显色后，二甲苯透明、封片。
2 结果
2.1 bcl-2原位杂交结果
bcl-2 mRNA阳性反应可出现于细胞浆和细胞核呈紫蓝色颗粒或团块。牙齿发育的蕾状期蕾状突起头部及周围的间充质细胞均有明显阳性表达，其余部位也有散在阳性细胞。帽状期、钟状期细胞生长增殖中心部位：上皮性成釉器的内釉上皮凹面中心区域、未来牙尖形成部位、颈环处及周围的牙乳头、牙囊中表达明显(图1)，其余部位表达稍弱。牙体组织形成后改变各部位的表达逐渐减弱消失。
, 百拇医药
图1 帽状期成釉器bcl-2 mRNA阳性表达细胞(40×5)
2.2 bcl-2的免疫组织化学染色结果
bcl-2 阳性细胞核膜及细胞浆着棕黄色颗粒或片状。在牙齿发育过程中 bcl-2蛋白的表达基本与bcl-2 mRNA表达一致(图2)。
图2 帽状期颈环处 bcl-2蛋白阳性表达细胞(40×15)
2.3 TUNEL法染色结果
凋亡细胞细胞核为紫蓝色。结果显示，蕾状早期凋亡细胞集中在上皮细胞形成的蕾状突起头部。随着细胞增殖中轴区星形细胞增多，凋亡细胞也在其中增多，周围间充质组织中散在。帽状期、钟状期凋亡细胞主要集中在上皮性成釉器的内釉上皮凹面中心区域(原发性釉结节)(图3)、未来牙尖形成部位(继发性釉结节)内外釉上皮细胞增殖形成的颈环处及其周围的牙乳头、牙囊中，余者散在。牙体组织形成后，随着冠部牙本质、牙釉质基质的形成, 凋亡细胞集中在成釉器的星网层及牙乳头间充质细胞中，已分化的成牙本质细胞、成釉细胞中散在。
, 百拇医药
图3 凋亡细胞主要集中在原发性釉结节 (20×6.7)
3 讨论
发育中的细胞凋亡，是在许多基因调控下发生的生理性现象。这些调控基因包括某些癌基因和抑癌基因(bcl-2,c-myc,p53等)，例如bcl-2在白血病细胞中的高表达可显著抑制去除生长因子诱导的细胞凋亡[3]。研究表明 bcl-2是重要的细胞凋亡抑制基因,1984年人bcl-2基因首先克隆于携带t(14;18)(q32;q21) 染色体易位的滤泡性淋巴瘤细胞系，是控制线虫细胞凋亡的主要负调控基因ced-9的同源基因[4]。已知bcl-2可通过控制核内外物质的运输、抑制Ca2+的释放或阻断细胞内过氧化物的堆积而抑制细胞凋亡的发生。有学者证明bcl-2基因在许多胚胎组织有广泛的表达，在成体组织中的迅速分裂并分化的细胞中表达，在成熟的细胞或将被清除的细胞中表达下调。说明bcl-2是早期始祖细胞或长寿命细胞的存活因子。同时在组织分化过程中表达下调也和细胞凋亡有关[2，3]。bcl-2的基本生物学功能为延长细胞的生命期限，增加细胞对多种凋亡刺激因素的抗性，此外还具有抗细胞坏死的作用[4]。
, 百拇医药
本实验中的bcl-2 mRNA及蛋白在牙齿发育的蕾状期蕾状突起头部及周围的间充质细胞均有明显表达，帽状期、钟状期，细胞增殖中心部位：上皮性成釉器的内釉上皮凹面中心区域、未来牙尖形成部位、颈环处及周围的牙乳头、牙囊中表达较强。说明牙齿发育早期，尤其是生长旺盛部位，bcl-2表达的增强促进这些胚胎细胞生长，延长细胞的生存，是细胞的存活因子，这可能将有利于牙胚早期的发育。但是，从本实验TUNEL法染色结果可看出这些部位也是牙胚发育早期细胞凋亡的活跃区域，这样似乎与bcl-2的抗凋亡作用相背，但细胞凋亡是多基因协调调控的复杂结果，如bax一类的促凋亡基因及其它因子的拮抗作用[2]。正是这些因素的相互协调作用，才使细胞增殖和细胞凋亡保持平衡，使得牙齿才能正常发育，否则，将导致畸形甚至肿瘤的发生。而进入牙体组织形成期，成牙本质细胞、成釉细胞、星网层、牙乳头、牙囊等表达逐渐减弱、消失。说明此时bcl-2在成熟的细胞或将被清除的细胞中表达下调，将促进细胞凋亡的发生，这可能是随着成釉细胞、成牙本质细胞的分化成熟，牙本质、牙釉质基质的分泌形成，此时需要通过细胞凋亡清除已经结束生命周期的、衰老的、多余的上皮及间充质细胞，控制着细胞数量，消除釉结节及星网层等暂时性结构所必须的机制[5]。可见，在牙齿发育过程中，bcl-2基因在转录和翻译水平都参与了牙胚发育的各阶段，早期表达较强可能是促进细胞生长的需要，牙体组织形成后表达下调可能是细胞分化，成熟及凋亡的需要。提示bcl-2基因在牙齿形态形成过程中，是调控细胞的增殖、分化、成熟、消亡的重要因素，是牙齿发育的塑形机制之一。
, 百拇医药
参考文献
1 Michael D, Weil JM, Raff MC.Programmed Cell death in animal development. Cell,1997,88:3474
2 黄小明,高翼之. bcl-2及其相关蛋白与细胞凋亡的调节. 国外医学分子生物学分册,1997,19(1):16
3 Miyashita T, Reed JC.bcl-2 on coprotein biocks chemotherapyinduced apoptosis in a human leukemia cell line. Blood,1993,8(1):151
4 Tsujimoto Y, Finger LR, Yunis J et al. Cloning of the chromosome breakpoinr of neoplastic B cells with the t(14;18) chromosome translocation. Science, 1984, 226:1097
5 Slootweng PJ, de-Weger RA. Immunohistochemical demonstration of bcl-2 protein in human tooth germs. Arch Oral Biol, 1994,39(7):545
收稿日期：1998-11-30, http://www.100md.com
单位：赵书芳 赵 皿 金 岩 吴补领：第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032；柳安生：市中心医院，吉林 通化 134000)
关键词：bcl-2基因；细胞凋亡；牙胚；发育
牙体牙髓牙周病学杂志990202 摘要 目的：通过检测牙胚发育中bcl-2基因、蛋白的表达及细胞凋亡的情况，探讨bcl-2基因及细胞凋亡在牙齿发育中的作用。方法：利用原位末端标记法(TUNEL)、原位杂交及免疫组织化学技术分别对SD大鼠牙胚发育不同时期bcl-2 mRNA、蛋白的表达及细胞凋亡进行研究。结果：在牙胚发育的各时期均有细胞凋亡现象及bcl-2 mRNA、蛋白的表达。bcl-2 mRNA早期在上皮性成釉器及周围的间充质细胞尤其是生长中心部位表达明显。牙体组织形成后各部位阳性表达逐渐减弱、消失；bcl-2蛋白与mRNA的表达基本一致。早期凋亡细胞集中出现在细胞生长中心处。牙体组织形成后散在可见。结论：bcl-2基因可能是牙齿发育中的细胞生长、增殖及凋亡的内在调控基因之一，参与了牙齿发育的重要塑形过程。
, http://www.100md.com
中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0096-03
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(2)：96]
The rofe of inhibiting apoptosis gene bcl-2 in the
development of tooth germ
Zhao Shufang, Zhao Min, Jin Yan et al
School of Stomatology,The Fourth Military Medical University， Xi’an 710032
Abstrat Aim:Examing the expression of bcl-2 gene, protein, and apoptosis in the development of tooth germ to make out the rofe of bcl-2 and apoptosis in the tooth development. Methods:The expression of bcl-2 mRNA,protein and apoptosis in different stages of tooth bud development of SD rat was studied by Tdt-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL),in situ hybridization and immunohistochemical staining. Results: There were apoptosis and expression of bcl-2 mRNA and protein in all the stages of development of tooth germ,bcl-2 mRNA was remarkably expressed in the stellate reticulum cells of enamel organ and peripheral mesenchymal cells, especially in the growth center in early stage. The positive expression is gradually weakened and disappeared after the tooth tissue was formed. The expression of protein was consistent with mRNA of bcl-2. In the early stage, the apoptosis cells were concentrated in the growth center and became scattered after the tooth tissue was formed. Conclusions: bcl-2 probably is one of the inner regulating genes of the cell growth,proliferation and apoptosis in the development of tooth and takes part in the formation of tooth shape.
, http://www.100md.com
Key words bcl-2 gene；apoptosis；dental germ；development
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(2)：96]
研究表明，细胞凋亡(apoptosis或programmed cell death ，PCD)在胚胎发育、器官形成、变态反应、肿瘤发生及保持机体的稳态中发挥着至关重要的作用[1]。而细胞凋亡与细胞增殖一样受多种基因的调控[2]。那么，牙齿发育中凋亡抑制基因bcl-2是否表达又是否对细胞凋亡现象发挥着调控作用，尚未见此方面的报道。为此，本研究通过观察SD大鼠牙胚发育中bcl-2表达与细胞凋亡关系，初步探讨牙齿发育的机制。
1 材料和方法
1.1 动物模型及标本制备
, http://www.100md.com
选用纯系、3月龄SD大鼠(上海产)20只，按雌雄4：1的比例同笼，每天早晨8：00观察雌鼠阴栓，以观察到阴栓计为妊娠0d，分别于妊娠13、15、17、19d脱颈处死大鼠，切取胎鼠头部置于40g/L的多聚甲醛中固定，另取出生后1、3、5、7d幼鼠，均取头部(沿正中线切开鼠头后分切)置入含盐酸、甲酸、冰醋酸的40g/L多聚甲醛液中充分固定、脱钙，流水冲洗后，常规脱水、石蜡包埋。行冠状和矢状面5μm切片，分别用于TUNEL染色、原位杂交及免疫组织化学染色。
1.2 原位末端标记法(TUNEL法)标记PCD细胞
TUNEL法(试剂盒购自美国Oncor公司)：切片常规脱蜡至水，室温下20mg/L的蛋白酶K消化15min；30ml/L H2O2 的PBS溶液中处理5min后，加50μl的平衡液(TUNEL试剂盒原配)1min；再加含TDT酶反应液15μl，37℃孵育1.5h后用预热的中止反应液中止反应(TUNEL试剂盒原配)；buffer1漂洗2次(15min/次)后加20ml/L 的正常羊血清孵育30min；滴加抗地高辛碱性磷酸酶抗体置于湿盒中孵育2h；经buffer1 、buffer3漂洗后，加新配制的显色液 (NBT/BCIP显色系统，用buffer3配制，NBT4.5μl、BCIP3.5μl、左旋咪唑0.24mg/L) 20μl，暗处显色。中止显色后，梯度酒精脱水，二甲苯透明封片。
, 百拇医药
1.3 原位杂交检测bcl-2基因的表达
1.3.1 探针及标记：质粒pDOR-SB8.4(第四军医大学生化教研室朱峰博士惠赠)含1.9kb的bcl-2基因片段。取已鉴定的质粒DNA，经EcoRI酶切后，将目的基因用冻溶法回收。bcl-2探针参照地高辛标记检测试剂盒(Boehringer Mannheim公司)说明书，采用随机引物法标记。
1.3.2 bcl-2原位杂交：石蜡切片脱蜡至DEPC水，分别用0.2mol HCl和20mg/L的蛋白酶K处理，梯度酒精脱水后室温干燥。用地高辛标记探针于42℃杂交后，分别用2×SSC、1×SSC、0.5×SSC、buffer1、buffer2依次充分洗涤，再用质量浓度20ml/L 正常羊血清封闭30min后，滴加抗地高辛碱性磷酸酶抗体2h，经buffer1 、buffer3漂洗后，加新配制的显色液 (NBT/BCIP显色系统) 20μl，暗处显色。中止显色后，梯度酒精脱水，二甲苯透明封片。
, 百拇医药
1.4 免疫组织化学检测bcl-2蛋白的表达
石蜡切片脱蜡至水，经30ml/L H2O2封闭内源性过氧化物酶及枸橼酸缓冲液微波修复抗原10min后，用正常羊血清封闭30 min；加bcl-2 抗体(兔抗鼠多抗，美国Santa Cruz 公司产品)置于4℃过夜，室温下复温1h后滴加生物素化羊抗鼠二抗37℃反应30 min ；再加ABC复合物37℃孵育30 min，DAB显色后，二甲苯透明、封片。
2 结果
2.1 bcl-2原位杂交结果
bcl-2 mRNA阳性反应可出现于细胞浆和细胞核呈紫蓝色颗粒或团块。牙齿发育的蕾状期蕾状突起头部及周围的间充质细胞均有明显阳性表达，其余部位也有散在阳性细胞。帽状期、钟状期细胞生长增殖中心部位：上皮性成釉器的内釉上皮凹面中心区域、未来牙尖形成部位、颈环处及周围的牙乳头、牙囊中表达明显(图1)，其余部位表达稍弱。牙体组织形成后改变各部位的表达逐渐减弱消失。
, 百拇医药
图1 帽状期成釉器bcl-2 mRNA阳性表达细胞(40×5)
2.2 bcl-2的免疫组织化学染色结果
bcl-2 阳性细胞核膜及细胞浆着棕黄色颗粒或片状。在牙齿发育过程中 bcl-2蛋白的表达基本与bcl-2 mRNA表达一致(图2)。
图2 帽状期颈环处 bcl-2蛋白阳性表达细胞(40×15)
2.3 TUNEL法染色结果
凋亡细胞细胞核为紫蓝色。结果显示，蕾状早期凋亡细胞集中在上皮细胞形成的蕾状突起头部。随着细胞增殖中轴区星形细胞增多，凋亡细胞也在其中增多，周围间充质组织中散在。帽状期、钟状期凋亡细胞主要集中在上皮性成釉器的内釉上皮凹面中心区域(原发性釉结节)(图3)、未来牙尖形成部位(继发性釉结节)内外釉上皮细胞增殖形成的颈环处及其周围的牙乳头、牙囊中，余者散在。牙体组织形成后，随着冠部牙本质、牙釉质基质的形成, 凋亡细胞集中在成釉器的星网层及牙乳头间充质细胞中，已分化的成牙本质细胞、成釉细胞中散在。
, 百拇医药
图3 凋亡细胞主要集中在原发性釉结节 (20×6.7)
3 讨论
发育中的细胞凋亡，是在许多基因调控下发生的生理性现象。这些调控基因包括某些癌基因和抑癌基因(bcl-2,c-myc,p53等)，例如bcl-2在白血病细胞中的高表达可显著抑制去除生长因子诱导的细胞凋亡[3]。研究表明 bcl-2是重要的细胞凋亡抑制基因,1984年人bcl-2基因首先克隆于携带t(14;18)(q32;q21) 染色体易位的滤泡性淋巴瘤细胞系，是控制线虫细胞凋亡的主要负调控基因ced-9的同源基因[4]。已知bcl-2可通过控制核内外物质的运输、抑制Ca2+的释放或阻断细胞内过氧化物的堆积而抑制细胞凋亡的发生。有学者证明bcl-2基因在许多胚胎组织有广泛的表达，在成体组织中的迅速分裂并分化的细胞中表达，在成熟的细胞或将被清除的细胞中表达下调。说明bcl-2是早期始祖细胞或长寿命细胞的存活因子。同时在组织分化过程中表达下调也和细胞凋亡有关[2，3]。bcl-2的基本生物学功能为延长细胞的生命期限，增加细胞对多种凋亡刺激因素的抗性，此外还具有抗细胞坏死的作用[4]。
, 百拇医药
本实验中的bcl-2 mRNA及蛋白在牙齿发育的蕾状期蕾状突起头部及周围的间充质细胞均有明显表达，帽状期、钟状期，细胞增殖中心部位：上皮性成釉器的内釉上皮凹面中心区域、未来牙尖形成部位、颈环处及周围的牙乳头、牙囊中表达较强。说明牙齿发育早期，尤其是生长旺盛部位，bcl-2表达的增强促进这些胚胎细胞生长，延长细胞的生存，是细胞的存活因子，这可能将有利于牙胚早期的发育。但是，从本实验TUNEL法染色结果可看出这些部位也是牙胚发育早期细胞凋亡的活跃区域，这样似乎与bcl-2的抗凋亡作用相背，但细胞凋亡是多基因协调调控的复杂结果，如bax一类的促凋亡基因及其它因子的拮抗作用[2]。正是这些因素的相互协调作用，才使细胞增殖和细胞凋亡保持平衡，使得牙齿才能正常发育，否则，将导致畸形甚至肿瘤的发生。而进入牙体组织形成期，成牙本质细胞、成釉细胞、星网层、牙乳头、牙囊等表达逐渐减弱、消失。说明此时bcl-2在成熟的细胞或将被清除的细胞中表达下调，将促进细胞凋亡的发生，这可能是随着成釉细胞、成牙本质细胞的分化成熟，牙本质、牙釉质基质的分泌形成，此时需要通过细胞凋亡清除已经结束生命周期的、衰老的、多余的上皮及间充质细胞，控制着细胞数量，消除釉结节及星网层等暂时性结构所必须的机制[5]。可见，在牙齿发育过程中，bcl-2基因在转录和翻译水平都参与了牙胚发育的各阶段，早期表达较强可能是促进细胞生长的需要，牙体组织形成后表达下调可能是细胞分化，成熟及凋亡的需要。提示bcl-2基因在牙齿形态形成过程中，是调控细胞的增殖、分化、成熟、消亡的重要因素，是牙齿发育的塑形机制之一。
, 百拇医药
参考文献
1 Michael D, Weil JM, Raff MC.Programmed Cell death in animal development. Cell,1997,88:3474
2 黄小明,高翼之. bcl-2及其相关蛋白与细胞凋亡的调节. 国外医学分子生物学分册,1997,19(1):16
3 Miyashita T, Reed JC.bcl-2 on coprotein biocks chemotherapyinduced apoptosis in a human leukemia cell line. Blood,1993,8(1):151
4 Tsujimoto Y, Finger LR, Yunis J et al. Cloning of the chromosome breakpoinr of neoplastic B cells with the t(14;18) chromosome translocation. Science, 1984, 226:1097
5 Slootweng PJ, de-Weger RA. Immunohistochemical demonstration of bcl-2 protein in human tooth germs. Arch Oral Biol, 1994,39(7):545
收稿日期：1998-11-30, http://www.100md.com