冰冻切片制片方法的改进
作者：孙青 张进华 张素娟 蒋胜辉 孟海
单位：第一军医大学病理学教研室, 广州, 510515
关键词：冰冻切片；制片
冰冻切片制片方法的改进中图分类号：R361.2
冰冻切片是保证术中病理诊断和进行科学研究的重要手段,切片质量的好坏直接影响快速诊断的效果及科研的可靠性。为此，我们在冰冻切片中应用不同的包埋剂及固定液进行反复试验、比较，优化整个制片过程，取得了满意结果。现介绍如下:
1 材料与方法
1.1 包埋剂 分别采用英国进口OCT、普通胶水、自来水包埋。
1.2 冷冻 将组织放置在持物台上，用以上包埋剂包埋后直接放入恒冷箱中用冷冻头冷冻1min后切片。
1.3 固定 厚度5mm的组织片在刀上或防卷片上展平后，用载玻片直接靠近快速贴附，稍晾干后分别置10%缓冲福尔马林3% H2O2丙酮液、95%乙醇中固定35min。
1.4 染色 切片经快速梯度酒精、水洗后，入苏木素染色2min，盐酸酒精分化，在伊红中停留片刻，入梯度酒精脱水,二甲苯透明，中性树胶封片。
2 结果
进口包埋剂和胶水冷冻速度相对较慢，切片易卷曲，还因其水溶性差而致染色不均匀。我们用自来水代替，消除了以上包埋剂的缺陷，使冰冻制片变得快捷简便，且切片平整，极好贴附，无冰晶形成。值得注意的是，仅需微量水，达到将持物台和组织湿润即可。若组织上积水过多，冷冻后形成的冰硬度高，不仅磨损刀刃，且切片易碎。
三种固定液比较，10%缓冲福尔马林固定的组织，结构完整，图像真实，染色清晰；3% H2O2丙酮液固定的组织内有散在细胞破损产生的“气泡”样结构，HE染色较模糊,但免疫组化抗体定位较好；95%乙醇固定的组织，细胞收缩较明显，染色尚清晰。
3 讨论
总结以上结果，最佳的制片方法为：用自来水稍湿润组织后冷冻；切片置入10%缓冲福尔马林中固定3~5min；为达到切片有良好的透明度，HE染色、梯度酒精脱水后，适当延长在二甲苯中的处理时间。
冰冻制片是较难掌握的病理技术之一，要获得一张厚薄均匀、染色清晰的切片更非易事。本实验方法，可在十分钟内完成整个制片过程，简化了实验程序，降低了成本，且效果与石蜡切片比较无明显差异，有一定推广应用价值。
作者简介：孙青，女，1962年出生；1999年毕业于第一军医大学；硕士，主治医师；电话：85148371
(收稿日期：1999-01-12), 百拇医药
单位：第一军医大学病理学教研室, 广州, 510515
关键词：冰冻切片；制片
冰冻切片制片方法的改进中图分类号：R361.2
冰冻切片是保证术中病理诊断和进行科学研究的重要手段,切片质量的好坏直接影响快速诊断的效果及科研的可靠性。为此，我们在冰冻切片中应用不同的包埋剂及固定液进行反复试验、比较，优化整个制片过程，取得了满意结果。现介绍如下:
1 材料与方法
1.1 包埋剂 分别采用英国进口OCT、普通胶水、自来水包埋。
1.2 冷冻 将组织放置在持物台上，用以上包埋剂包埋后直接放入恒冷箱中用冷冻头冷冻1min后切片。
1.3 固定 厚度5mm的组织片在刀上或防卷片上展平后，用载玻片直接靠近快速贴附，稍晾干后分别置10%缓冲福尔马林3% H2O2丙酮液、95%乙醇中固定35min。
1.4 染色 切片经快速梯度酒精、水洗后，入苏木素染色2min，盐酸酒精分化，在伊红中停留片刻，入梯度酒精脱水,二甲苯透明，中性树胶封片。
2 结果
进口包埋剂和胶水冷冻速度相对较慢，切片易卷曲，还因其水溶性差而致染色不均匀。我们用自来水代替，消除了以上包埋剂的缺陷，使冰冻制片变得快捷简便，且切片平整，极好贴附，无冰晶形成。值得注意的是，仅需微量水，达到将持物台和组织湿润即可。若组织上积水过多，冷冻后形成的冰硬度高，不仅磨损刀刃，且切片易碎。
三种固定液比较，10%缓冲福尔马林固定的组织，结构完整，图像真实，染色清晰；3% H2O2丙酮液固定的组织内有散在细胞破损产生的“气泡”样结构，HE染色较模糊,但免疫组化抗体定位较好；95%乙醇固定的组织，细胞收缩较明显，染色尚清晰。
3 讨论
总结以上结果，最佳的制片方法为：用自来水稍湿润组织后冷冻；切片置入10%缓冲福尔马林中固定3~5min；为达到切片有良好的透明度，HE染色、梯度酒精脱水后，适当延长在二甲苯中的处理时间。
冰冻制片是较难掌握的病理技术之一，要获得一张厚薄均匀、染色清晰的切片更非易事。本实验方法，可在十分钟内完成整个制片过程，简化了实验程序，降低了成本，且效果与石蜡切片比较无明显差异，有一定推广应用价值。
作者简介：孙青，女，1962年出生；1999年毕业于第一军医大学；硕士，主治医师；电话：85148371
(收稿日期：1999-01-12), 百拇医药