麝香保心片中人参皂甙的含量测定
作者：秦冬彦 郭涛 宋洪涛 柳正良
单位：秦冬彦(第二军医大学药学 院分析化学教研室，上海200433)；郭涛(沈阳军区总医院药剂科宋洪涛(沈阳军区总医院药剂科；柳正良(第二军医大学药学 院分析化学教研室，上海200433)
关键词：麝香保心片；人参总皂甙；色谱法，高液液相
第二军医大学学报001033 [中图分类 号] R 284.1 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0992-02
麝香保心片是由人参、人工麝香、人工牛黄、蟾酥、苏合香等七味药材组成的复方制 剂，具有芳香温通、益气强心的功效，临床用于治疗心肌缺血引起的心绞痛、胸闷和心肌梗 死。方中人参为君药。据文献报道，对人参及其制剂中皂甙类成分的含量测定方法主要有比 色法、薄层扫描法、HPLC 法等[1]。为了控制该制剂的质量，我们分别采用比色法 及HPLC法测定了麝香保心片中人参总皂甙及人参皂甙Rb1的含量,初步建立了该药的质量控 制方法。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器 UV-160A型分光光度计(日本岛津)；美国Waters 501 型 HPLC仪，484型紫外检测仪；SC1100型色谱工作站(北京化工学院)。
1.2 药品和试剂 麝香保心片(沈阳军 区总医院制剂室提供)；人参皂甙Re、人参皂甙Rb1(中国药品生物制品检定所)；乙腈 为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 比色法测定麝香保心片中人参总皂甙的含量[2,3]
2.1.1 溶液的制备 精密称取人参皂甙Re 10 mg，置10 ml容量瓶中，用少量甲醇 溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取麝香保心片40片，研细，过80目筛。 精密称取样品粉末2 g，置索氏提取器中，用氯仿加热回流脱脂2 h，脱脂粉末再用甲醇连续 回流提取5 h。回收甲醇至干，残渣用水饱和的正丁醇15 ml溶解，并提取3次，合并提取液 ，用1%氢氧化钠溶液洗涤3次，再用水饱和的正丁醇洗至中性。弃去水层，回收正丁醇至干 ，残渣用70%乙醇适量溶解，移入已净化处理的氧化铝-D101型大孔树脂柱[内径1 cm，D101型大孔树脂高7 cm(下层)；100～200目中性氧化铝高3 cm(上层)]上， 再用70%乙醇80 ml洗脱。收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，定量转移至2 ml量瓶内， 用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。依处方称取除人参外的其他药材1.9 g，按照 供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
, 百拇医药
2.1.2 线性关系考察 精密吸取对照品溶液20，40，80，120，160，200 μl， 分别盛于6支具塞磨口试管中，低温挥去溶剂，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸 0.8 ml，于水浴上60℃保温15 min。取出，置冰浴中冷却2～3 min，再加入冰醋酸5 ml，摇 匀，随行试剂空白，在548 nm处测定吸光度。以吸光度(Y)对质量[X(μg)] 绘制标准曲线。结果表明，Re在20～200 μg范围内线性关系良好。回归方程：Y＝4.4 06×10-3X-0.034 (r＝0.999 9)。
2.1.3 方法稳定性和重现性实验 取上述检测液每隔30 min测定1次吸光度，结果 表明，3 h内吸光度稳定。取同一批号样品平行测定5次，结果RSD＝1.7%。
2.1.4 加样回收率实验 取已知含量的同批号样品粉末5份，分别精密加入同一量 的人参皂甙Re对照品，依法提取测定，结果测得平均回收率为98.9%，RSD＝2.8%。
, 百拇医药
2.1.5 样品含量测定 精密量取供试品溶液40 μl，依法测定，计算，结果见表1 。
表 1 样品中人参总皂甙含量测定结果(n＝3) 批号
含量(wB/10-3)
RSD(%)
981106
4.27
3.0
981108
4.05
2.9
981112
, 百拇医药
4.44
3.3
981115
4.32
3.8
981122
4.01
2.6
981127
4.14
2.8
981129
4.23
, 百拇医药
2.7
981201
3.96
3.5
981206
4.19
2.9
981211
4.07
3.1
2.2 HPLC法测定人参皂甙Rb1的含量[1]
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil NH2柱(4.6 mm×200 mm，5 μm,大连依利 特科学仪器有限公司)；流动相∶乙腈-水(82∶18)；流速：1.0 ml/min；柱温：室温； 检测波长：203 nm；灵敏度：0.01 AUFS；进样量：20 μl。
, 百拇医药
2.2.2 溶液的配制 精密称取人参皂甙Rb1 10 mg，置10 ml容量瓶中，用甲醇 溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。供试品溶液的制备同人参总皂甙供试品溶液的制备。
2.2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 ml， 分别置入10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，进样20 μl测定。以对照品浓度c( μg/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，Rb1在10～200 μg/ml范围内线性关系良好，其回归方程为：c＝5.100 8×103 A-3.319 7×1 02 (r＝0.999 8)。设信噪比>4，则Rb1的最低检测浓度为0.6 μg/ml； 最低检出限为12 ng。
2.2.4 精密度和重现性实验 测定已知浓度的对照品溶液多份，计算所测浓度的 相对标准差，结果Rb1的日内RSD＝1.8%(n＝5)，日间RSD＝2.4%(n＝5)。 精密称取同一批号的样品5份，按拟定的含量测定方法测定人参皂甙Rb1的含量，结果RSD 为2.0%。
, 百拇医药
2.2.5 加样回收率实验 精密吸取人参皂甙Rb1对照品溶液0.5 ml，加入2.0 g 已知含量的同批号麝香保心片粉末，按供试品溶液的制备方法制备，进样20 μl。结果人参 皂甙Rb1的平均加样回收率为99.1%，RSD＝2.7%(n＝5)。
2.2.6 样品含量测定 吸取供试品溶液，进样20 μl测定并计算。结果见表2，色 谱图见图1。
图 1 对照品和供试品的HPLC图谱
A: 对照品； B:供试品； 1: 人参皂甙Rb1
3 讨 论
由于人参是麝香保心片中的君药，而人参的主要有效成分为人参总皂甙，因此，我们采用比 色法对麝香保心片中的人参总皂甙进行了含量测定。供试样品制备采用脱脂后甲醇提取，水 饱和正丁醇萃取，最后采用氧化铝-大孔吸附树脂处理，从而除去了绝大部分非皂甙杂质成 分，同时用阴性对照液作参比，尽量消除其背景干扰，结果证明，该法简便、准确。
, 百拇医药
为了更进一步控制制剂的质量，我们又采用了专属性较高的HPLC法，对该 片剂中的有效成分之一人参皂甙Rb1进行含量测定方法研究。所采用色谱条件为氨基柱和乙腈-水系统，其分离效果优于ODS柱 系统。实验结果表明，在本实验条件下，Rb1的色谱峰峰形良好，与其他成分分离度大于1 .5。采用比色法、HPLC法相结合的方法，两者相互补充，可以对麝香保心片进行更全面、更 准确的质量控制。
表 2 样品中人参皂甙Rb1的含量测定结果(n＝3) 批号
含量(wB/10-3)
RSD(%)
981106
0.368
, 百拇医药
2.6
981108
0.390
3.0
981112
0.360
2.9
981115
0.323
3.1
981122
0.312
2.8
, http://www.100md.com
981127
0.314
3.3
981129
0.351
2.7
981201
0.377
2.9
981206
0.324
3.1
981211
, 百拇医药
0.356
3.2
[作者简介] 秦冬彦(1975-),女(汉族)，硕士，药师.
[参 考 文 献]
[1] 李海生，赵路平.人参及其制剂中人参皂甙类成分分析方法概况[J] .国外医药*植物药分册，1993， 8(5):204-205.
[2] 张中苏，杨 艳，罗晋萍，等.薄层扫描法测定龟龄集中人参皂苷Rg1的含量[ J].药物分析杂志，1999， 19(1):13-15.
[3] 张桂燕，连珊枝，路蕴如，等 .中药剂型对化学成分影响的研究：对人参总皂甙含量的影响[J].北京中医学院学报，19 93， 16(6):29-30.
[收稿日期] 2000-03-10
[修回日期] 2000-08-15, 百拇医药
单位：秦冬彦(第二军医大学药学 院分析化学教研室，上海200433)；郭涛(沈阳军区总医院药剂科宋洪涛(沈阳军区总医院药剂科；柳正良(第二军医大学药学 院分析化学教研室，上海200433)
关键词：麝香保心片；人参总皂甙；色谱法，高液液相
第二军医大学学报001033 [中图分类 号] R 284.1 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0992-02
麝香保心片是由人参、人工麝香、人工牛黄、蟾酥、苏合香等七味药材组成的复方制 剂，具有芳香温通、益气强心的功效，临床用于治疗心肌缺血引起的心绞痛、胸闷和心肌梗 死。方中人参为君药。据文献报道，对人参及其制剂中皂甙类成分的含量测定方法主要有比 色法、薄层扫描法、HPLC 法等[1]。为了控制该制剂的质量，我们分别采用比色法 及HPLC法测定了麝香保心片中人参总皂甙及人参皂甙Rb1的含量,初步建立了该药的质量控 制方法。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器 UV-160A型分光光度计(日本岛津)；美国Waters 501 型 HPLC仪，484型紫外检测仪；SC1100型色谱工作站(北京化工学院)。
1.2 药品和试剂 麝香保心片(沈阳军 区总医院制剂室提供)；人参皂甙Re、人参皂甙Rb1(中国药品生物制品检定所)；乙腈 为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 比色法测定麝香保心片中人参总皂甙的含量[2,3]
2.1.1 溶液的制备 精密称取人参皂甙Re 10 mg，置10 ml容量瓶中，用少量甲醇 溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取麝香保心片40片，研细，过80目筛。 精密称取样品粉末2 g，置索氏提取器中，用氯仿加热回流脱脂2 h，脱脂粉末再用甲醇连续 回流提取5 h。回收甲醇至干，残渣用水饱和的正丁醇15 ml溶解，并提取3次，合并提取液 ，用1%氢氧化钠溶液洗涤3次，再用水饱和的正丁醇洗至中性。弃去水层，回收正丁醇至干 ，残渣用70%乙醇适量溶解，移入已净化处理的氧化铝-D101型大孔树脂柱[内径1 cm，D101型大孔树脂高7 cm(下层)；100～200目中性氧化铝高3 cm(上层)]上， 再用70%乙醇80 ml洗脱。收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，定量转移至2 ml量瓶内， 用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。依处方称取除人参外的其他药材1.9 g，按照 供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
, 百拇医药
2.1.2 线性关系考察 精密吸取对照品溶液20，40，80，120，160，200 μl， 分别盛于6支具塞磨口试管中，低温挥去溶剂，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸 0.8 ml，于水浴上60℃保温15 min。取出，置冰浴中冷却2～3 min，再加入冰醋酸5 ml，摇 匀，随行试剂空白，在548 nm处测定吸光度。以吸光度(Y)对质量[X(μg)] 绘制标准曲线。结果表明，Re在20～200 μg范围内线性关系良好。回归方程：Y＝4.4 06×10-3X-0.034 (r＝0.999 9)。
2.1.3 方法稳定性和重现性实验 取上述检测液每隔30 min测定1次吸光度，结果 表明，3 h内吸光度稳定。取同一批号样品平行测定5次，结果RSD＝1.7%。
2.1.4 加样回收率实验 取已知含量的同批号样品粉末5份，分别精密加入同一量 的人参皂甙Re对照品，依法提取测定，结果测得平均回收率为98.9%，RSD＝2.8%。
, 百拇医药
2.1.5 样品含量测定 精密量取供试品溶液40 μl，依法测定，计算，结果见表1 。
表 1 样品中人参总皂甙含量测定结果(n＝3) 批号
含量(wB/10-3)
RSD(%)
981106
4.27
3.0
981108
4.05
2.9
981112
, 百拇医药
4.44
3.3
981115
4.32
3.8
981122
4.01
2.6
981127
4.14
2.8
981129
4.23
, 百拇医药
2.7
981201
3.96
3.5
981206
4.19
2.9
981211
4.07
3.1
2.2 HPLC法测定人参皂甙Rb1的含量[1]
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil NH2柱(4.6 mm×200 mm，5 μm,大连依利 特科学仪器有限公司)；流动相∶乙腈-水(82∶18)；流速：1.0 ml/min；柱温：室温； 检测波长：203 nm；灵敏度：0.01 AUFS；进样量：20 μl。
, 百拇医药
2.2.2 溶液的配制 精密称取人参皂甙Rb1 10 mg，置10 ml容量瓶中，用甲醇 溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。供试品溶液的制备同人参总皂甙供试品溶液的制备。
2.2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 ml， 分别置入10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，进样20 μl测定。以对照品浓度c( μg/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，Rb1在10～200 μg/ml范围内线性关系良好，其回归方程为：c＝5.100 8×103 A-3.319 7×1 02 (r＝0.999 8)。设信噪比>4，则Rb1的最低检测浓度为0.6 μg/ml； 最低检出限为12 ng。
2.2.4 精密度和重现性实验 测定已知浓度的对照品溶液多份，计算所测浓度的 相对标准差，结果Rb1的日内RSD＝1.8%(n＝5)，日间RSD＝2.4%(n＝5)。 精密称取同一批号的样品5份，按拟定的含量测定方法测定人参皂甙Rb1的含量，结果RSD 为2.0%。
, 百拇医药
2.2.5 加样回收率实验 精密吸取人参皂甙Rb1对照品溶液0.5 ml，加入2.0 g 已知含量的同批号麝香保心片粉末，按供试品溶液的制备方法制备，进样20 μl。结果人参 皂甙Rb1的平均加样回收率为99.1%，RSD＝2.7%(n＝5)。
2.2.6 样品含量测定 吸取供试品溶液，进样20 μl测定并计算。结果见表2，色 谱图见图1。
图 1 对照品和供试品的HPLC图谱
A: 对照品； B:供试品； 1: 人参皂甙Rb1
3 讨 论
由于人参是麝香保心片中的君药，而人参的主要有效成分为人参总皂甙，因此，我们采用比 色法对麝香保心片中的人参总皂甙进行了含量测定。供试样品制备采用脱脂后甲醇提取，水 饱和正丁醇萃取，最后采用氧化铝-大孔吸附树脂处理，从而除去了绝大部分非皂甙杂质成 分，同时用阴性对照液作参比，尽量消除其背景干扰，结果证明，该法简便、准确。
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为了更进一步控制制剂的质量，我们又采用了专属性较高的HPLC法，对该 片剂中的有效成分之一人参皂甙Rb1进行含量测定方法研究。所采用色谱条件为氨基柱和乙腈-水系统，其分离效果优于ODS柱 系统。实验结果表明，在本实验条件下，Rb1的色谱峰峰形良好，与其他成分分离度大于1 .5。采用比色法、HPLC法相结合的方法，两者相互补充，可以对麝香保心片进行更全面、更 准确的质量控制。
表 2 样品中人参皂甙Rb1的含量测定结果(n＝3) 批号
含量(wB/10-3)
RSD(%)
981106
0.368
, 百拇医药
2.6
981108
0.390
3.0
981112
0.360
2.9
981115
0.323
3.1
981122
0.312
2.8
, http://www.100md.com
981127
0.314
3.3
981129
0.351
2.7
981201
0.377
2.9
981206
0.324
3.1
981211
, 百拇医药
0.356
3.2
[作者简介] 秦冬彦(1975-),女(汉族)，硕士，药师.
[参 考 文 献]
[1] 李海生，赵路平.人参及其制剂中人参皂甙类成分分析方法概况[J] .国外医药*植物药分册，1993， 8(5):204-205.
[2] 张中苏，杨 艳，罗晋萍，等.薄层扫描法测定龟龄集中人参皂苷Rg1的含量[ J].药物分析杂志，1999， 19(1):13-15.
[3] 张桂燕，连珊枝，路蕴如，等 .中药剂型对化学成分影响的研究：对人参总皂甙含量的影响[J].北京中医学院学报，19 93， 16(6):29-30.
[收稿日期] 2000-03-10
[修回日期] 2000-08-15, 百拇医药