不同病理类型原发性肾小球肾炎患者尿ET-1和NO的测定
作者：段绍斌 刘伏友 罗季安 彭佑铭
单位：段绍斌(第二附属医院内科 长沙 410011)；刘伏友(第二附属医院内科 长沙 410011)；罗季安(第二附属医院内科 长沙 410011)；彭佑铭(第二附属医院内科 长沙 410011)
关键词：肾小球肾炎；内皮素；一氧化氮
湖南医科大学学报000132 分类号：R692.31 文献标识码：B
文章编号：1000-5625(2000)01-0091-02▲
内皮素(ET-1)是一种由21个氨基酸组成的多 肽，具有强烈持续缩血管作用；内皮细胞是合成和分泌ET-1的主要组织细胞。近年研究证 实，肾脏多种组织有ET-1 mRNA的丰富表达，能合成和分泌ET-1，同时拥有ET-1受体。ET -1诱导平滑肌细胞和系膜细胞有丝分裂，促进细胞外基质产生和肾小球硬化。内皮素在肾 小球肾炎的病理生理中起重要作用[1，2]。
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一氧化氮(NO)为血管内皮细胞释放和合成的血管舒张因子，它不仅抑制ET-1的产生，而且 亦能抑制系膜细胞收缩和生长因子诱导系膜细胞的增殖[3]。实验性肾小球肾炎模 型证实肾小球内NO连续释放可降低肾小球毛细血管压，对肾脏起保护作用[4]。作 者检测27例经肾活检证实为原发性肾小球肾炎患者的尿ET-1和NO水平，旨在探讨尿ET-1和 NO与原发性肾小球肾炎患者临床及病理之间的关系，为肾脏病防治开拓新的途径。
1 临床一般资料与方法
1.1 病例来源与分组 1996年8月～1997年4月我科住院经临床和肾活检 证 实为原发性肾小球肾炎患者(肾炎组)27例，男18例，女9例，年龄15～46(平均28.0)岁。患 者均为初治病例，未用激素和其它免疫抑制剂，亦未用血管紧张素转换酶抑制剂及硝基类药 物。血清肌酐小于133.6μmol*L-1。肾活检标本包括5个以上肾小球，均作光镜 和免疫荧光检查。临床类型表现为肾病综合征19例，肾炎综合征8例。病理类型包括：轻度 系膜增殖性肾炎13例，中度系膜增殖性肾炎7例，膜增殖性肾炎2例，膜性肾病2例，局灶肾 小球硬化3例。健康对照12例(对照组)，均为本院职工，男女各6例，年龄18～35(平均25.5 )岁。
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1.2 标本收集 每例患者住院后收集24h尿，备用2只小试管，分别留 尿样本1.0ml，存于-70℃冰箱内，成批分别检测ET-1和NO含量。
1.3 测定指标方法 (1)尿ET-1：采用放射免疫法，试剂盒由东亚免疫 技术研究所提供(批号9704)。(2)NO-2测定：由于NO极不稳定，在体内很快生成亚硝酸 盐(NO-2)和硝酸盐(NO-3)，故测定样本中NO-2/NO-3的浓度可作为衡量NO 合成的指标。本文NO-2的测定参考文献[5]的方法，即采用镀铜镉还原法。
1.4 统计方法 实验结果以均数±标准差(
±s)或中位数表 示。将数据输入计算机，采用STATA软件包进行统计分析。多个样本均数的比较采用单变量 方差分析(ANOVA)，两组间样本均数的比较采用t检验；两组中位数的比较用χ 2检验。
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2 结 果
2.1 肾炎患者尿ET-1和NO水平与临床类型的关系 表1示：肾炎组两种 临床类型24h尿ET-1水平均明显高于正常对照组(P<0.01)，而尿NO与对照组比较差异 无显著性(P>0.05)；临床表现为肾病综合征患者，尿ET-1明显高于肾炎综合征( P<0.01)，尿NO水平显著低于肾炎综合征患者(P<0.05)。
表1 二种不同临床类型的原发性肾小球肾 炎患者尿ET-1与NO水平(±s) 临床类型
病例
ET-1
(μmol/24h×10-15)
, http://www.100md.com NO
(μmol/24h)
肾炎综合征
8
19.7±8.78①
436.5(170.8～773.9)
肾病综合征
19
35.5±14.1①②
275.1(82.93～610.5)③
正常对照组
, 百拇医药
12
7.90±3.37
402.4(228.3～754. 3)
①与对照组比较P<0.01；与肾炎综合征比较：②P<0.01,③P<0.05
2.2 系膜增殖性肾炎系膜细胞增殖程度与尿ET-1及NO的关系 表2示 ， 中度系膜增殖性肾炎患者尿ET-1水平显著高于轻度患者(P<0.05)；而两组间尿NO比较 ，差异无显著性(P>0.05)。
表2 系膜增殖性肾炎系膜细胞增殖程度与 尿ET-1及NO的关系(±s) 系膜细胞
增殖程度
, http://www.100md.com
例 数
ET-1
(μmol/24h×10-15)
NO
(μmol/24h)[ HJ
轻度
13
25.2±9.25
350.2(82.93～796.1)
中度
7
47.8±14.4
, http://www.100md.com
389.3(185.5～773.9)
P
<0.05
>0.05
3 讨 论
肾小球肾炎主要是一种免疫反应疾病，造成肾损害的机制较复杂，其中肾脏血液动力学改变 及免疫缺损占重要地位。ET-1是迄今所知的最强的缩血管物质。病理情况下，如肾组织缺 血、缺氧及免疫损害可作为刺激因子使ET-1释放增加，ET-1的增高诱导系膜细胞有丝分裂 ，促进细胞外基质产生和肾小球硬化[1～3]。尿ET-1增高反映肾脏合成和分泌E T-1 增多，其尿中水平与肾脏损害程度和肾小球硬化密切相关[3]。本资料表明：原发 肾小球肾炎患者尿ET-1水平明显增高，中度系膜增殖肾炎患者尿ET-1水平显著高于轻度系 膜增殖性肾炎患者。此结果进一步说明：原发性肾小球肾炎患者，尿ET-1排泄增加；尿ET -1活性增高与系膜细胞增殖程度相关。故可认为尿中内皮素含量可作为肾小球损伤的病理 生理学标志之一。
, 百拇医药
NO系L-精氨酸在一氧化氮合酶作用下生成，其体内半衰期短，化学性质活泼，可迅速与 机体内氧及超氧阴离子反应，生成NO-2及NO-3[5]。内源性NO不仅是新型 细胞内信使和神经递质，而且是强烈的血管舒张因子，具有调节肾血流、血小板聚集、炎症 和免疫损害及抑制肾小球系膜细胞增生的作用[4]。长期NO阻滞可导致肾性高血压 ，尿蛋白增加及肾小球硬化[6]。
长期大量蛋白尿可引起肾小球结构和机能破坏，也是导致肾小球硬化及肾机能不全的主要原 因。因此，探讨蛋白尿发生的机制及如何减少蛋白尿是临床治疗肾小球肾炎的重点。本文发 现：临床表现大量蛋白尿的肾病综合征患者，尿ET-1明显高于肾炎综合征患者，尿NO显著 低于肾炎综合征患者，提示ET-1和NO失衡与原发性肾炎蛋白尿的发生有一定联系。分析其 机制可能与NO水平下降引起肾脏血液动力学改变和不同程度免疫缺损有关。机体ET-1和NO 的代谢失衡加重ET-1介导肾脏的血液动力学改变，这可能是导致肾小球硬化的因素之一。
, 百拇医药
综上所述，尿ET-1水平增高可作为肾小球损伤的病理生理学标志；ET-1和NO失衡与原发性肾小球肾炎的发病机制及蛋白尿的发生有一定联系。随着NO和ET-1的深入研究，调整机体NO适当合成，适时使用ET-1受体拮抗剂，将有助于开拓肾脏病防治的新途径。
承本院中心实验室方建珍和同位素科潘佑铭主管技师的技术帮助，谨致谢意
作者简介：段绍斌(1966-)，男，副教授
参考文献：
[1]Kohan DE. Endothelins in the normal and diseased kidney [J]. Am J Kidney Dis, 1997,29(1):2-26.
[2]Herman WH. Emancipator SN, Rhoteno RLP, et al. Vascular and glomerula r expression of endothelin-1 in normal human kidney[J]. Am J Physiol, 1998,2 75:F8-17.
, 百拇医药
[3]Roccatello D, Mosso R, Ferro M, et al. Urinary endothelin in glomerul onephritis patients with normal renal function[J]. Clin Nephrol, 1994,41(6):3 23-330.
[4]Ketteler M, Distler A. The role of nitric oxide in experimental glomerulo nephritis[J]. Kidney Blood Press Res, 1996,19(3-4):177-181.
[5]Marletta MA. Macrophage oxidation of L-arginine to NO-2 and NO-3 : NO is an intermediate[J]. Biochemistry, 1988,27:8706.
[6]Baylis C, Mitruka B, Deng A. Chronic blockade of nitric oxide synthesis i n the rat produces systemic hypertension and glomerular damage[J]. J Clin Inv est, 1992,90:278-281.
收稿日期：1999-01-08, http://www.100md.com
单位：段绍斌(第二附属医院内科 长沙 410011)；刘伏友(第二附属医院内科 长沙 410011)；罗季安(第二附属医院内科 长沙 410011)；彭佑铭(第二附属医院内科 长沙 410011)
关键词：肾小球肾炎；内皮素；一氧化氮
湖南医科大学学报000132 分类号：R692.31 文献标识码：B
文章编号：1000-5625(2000)01-0091-02▲
内皮素(ET-1)是一种由21个氨基酸组成的多 肽，具有强烈持续缩血管作用；内皮细胞是合成和分泌ET-1的主要组织细胞。近年研究证 实，肾脏多种组织有ET-1 mRNA的丰富表达，能合成和分泌ET-1，同时拥有ET-1受体。ET -1诱导平滑肌细胞和系膜细胞有丝分裂，促进细胞外基质产生和肾小球硬化。内皮素在肾 小球肾炎的病理生理中起重要作用[1，2]。
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一氧化氮(NO)为血管内皮细胞释放和合成的血管舒张因子，它不仅抑制ET-1的产生，而且 亦能抑制系膜细胞收缩和生长因子诱导系膜细胞的增殖[3]。实验性肾小球肾炎模 型证实肾小球内NO连续释放可降低肾小球毛细血管压，对肾脏起保护作用[4]。作 者检测27例经肾活检证实为原发性肾小球肾炎患者的尿ET-1和NO水平，旨在探讨尿ET-1和 NO与原发性肾小球肾炎患者临床及病理之间的关系，为肾脏病防治开拓新的途径。
1 临床一般资料与方法
1.1 病例来源与分组 1996年8月～1997年4月我科住院经临床和肾活检 证 实为原发性肾小球肾炎患者(肾炎组)27例，男18例，女9例，年龄15～46(平均28.0)岁。患 者均为初治病例，未用激素和其它免疫抑制剂，亦未用血管紧张素转换酶抑制剂及硝基类药 物。血清肌酐小于133.6μmol*L-1。肾活检标本包括5个以上肾小球，均作光镜 和免疫荧光检查。临床类型表现为肾病综合征19例，肾炎综合征8例。病理类型包括：轻度 系膜增殖性肾炎13例，中度系膜增殖性肾炎7例，膜增殖性肾炎2例，膜性肾病2例，局灶肾 小球硬化3例。健康对照12例(对照组)，均为本院职工，男女各6例，年龄18～35(平均25.5 )岁。
, http://www.100md.com
1.2 标本收集 每例患者住院后收集24h尿，备用2只小试管，分别留 尿样本1.0ml，存于-70℃冰箱内，成批分别检测ET-1和NO含量。
1.3 测定指标方法 (1)尿ET-1：采用放射免疫法，试剂盒由东亚免疫 技术研究所提供(批号9704)。(2)NO-2测定：由于NO极不稳定，在体内很快生成亚硝酸 盐(NO-2)和硝酸盐(NO-3)，故测定样本中NO-2/NO-3的浓度可作为衡量NO 合成的指标。本文NO-2的测定参考文献[5]的方法，即采用镀铜镉还原法。
1.4 统计方法 实验结果以均数±标准差(
±s)或中位数表 示。将数据输入计算机，采用STATA软件包进行统计分析。多个样本均数的比较采用单变量 方差分析(ANOVA)，两组间样本均数的比较采用t检验；两组中位数的比较用χ 2检验。, http://www.100md.com
2 结 果
2.1 肾炎患者尿ET-1和NO水平与临床类型的关系 表1示：肾炎组两种 临床类型24h尿ET-1水平均明显高于正常对照组(P<0.01)，而尿NO与对照组比较差异 无显著性(P>0.05)；临床表现为肾病综合征患者，尿ET-1明显高于肾炎综合征( P<0.01)，尿NO水平显著低于肾炎综合征患者(P<0.05)。
表1 二种不同临床类型的原发性肾小球肾 炎患者尿ET-1与NO水平(
±s) 临床类型病例
ET-1
(μmol/24h×10-15)
, http://www.100md.com NO
(μmol/24h)
肾炎综合征
8
19.7±8.78①
436.5(170.8～773.9)
肾病综合征
19
35.5±14.1①②
275.1(82.93～610.5)③
正常对照组
, 百拇医药
12
7.90±3.37
402.4(228.3～754. 3)
①与对照组比较P<0.01；与肾炎综合征比较：②P<0.01,③P<0.05
2.2 系膜增殖性肾炎系膜细胞增殖程度与尿ET-1及NO的关系 表2示 ， 中度系膜增殖性肾炎患者尿ET-1水平显著高于轻度患者(P<0.05)；而两组间尿NO比较 ，差异无显著性(P>0.05)。
表2 系膜增殖性肾炎系膜细胞增殖程度与 尿ET-1及NO的关系(
±s) 系膜细胞增殖程度
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例 数
ET-1
(μmol/24h×10-15)
NO
(μmol/24h)[ HJ
轻度
13
25.2±9.25
350.2(82.93～796.1)
中度
7
47.8±14.4
, http://www.100md.com
389.3(185.5～773.9)
P
<0.05
>0.05
3 讨 论
肾小球肾炎主要是一种免疫反应疾病，造成肾损害的机制较复杂，其中肾脏血液动力学改变 及免疫缺损占重要地位。ET-1是迄今所知的最强的缩血管物质。病理情况下，如肾组织缺 血、缺氧及免疫损害可作为刺激因子使ET-1释放增加，ET-1的增高诱导系膜细胞有丝分裂 ，促进细胞外基质产生和肾小球硬化[1～3]。尿ET-1增高反映肾脏合成和分泌E T-1 增多，其尿中水平与肾脏损害程度和肾小球硬化密切相关[3]。本资料表明：原发 肾小球肾炎患者尿ET-1水平明显增高，中度系膜增殖肾炎患者尿ET-1水平显著高于轻度系 膜增殖性肾炎患者。此结果进一步说明：原发性肾小球肾炎患者，尿ET-1排泄增加；尿ET -1活性增高与系膜细胞增殖程度相关。故可认为尿中内皮素含量可作为肾小球损伤的病理 生理学标志之一。
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NO系L-精氨酸在一氧化氮合酶作用下生成，其体内半衰期短，化学性质活泼，可迅速与 机体内氧及超氧阴离子反应，生成NO-2及NO-3[5]。内源性NO不仅是新型 细胞内信使和神经递质，而且是强烈的血管舒张因子，具有调节肾血流、血小板聚集、炎症 和免疫损害及抑制肾小球系膜细胞增生的作用[4]。长期NO阻滞可导致肾性高血压 ，尿蛋白增加及肾小球硬化[6]。
长期大量蛋白尿可引起肾小球结构和机能破坏，也是导致肾小球硬化及肾机能不全的主要原 因。因此，探讨蛋白尿发生的机制及如何减少蛋白尿是临床治疗肾小球肾炎的重点。本文发 现：临床表现大量蛋白尿的肾病综合征患者，尿ET-1明显高于肾炎综合征患者，尿NO显著 低于肾炎综合征患者，提示ET-1和NO失衡与原发性肾炎蛋白尿的发生有一定联系。分析其 机制可能与NO水平下降引起肾脏血液动力学改变和不同程度免疫缺损有关。机体ET-1和NO 的代谢失衡加重ET-1介导肾脏的血液动力学改变，这可能是导致肾小球硬化的因素之一。
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综上所述，尿ET-1水平增高可作为肾小球损伤的病理生理学标志；ET-1和NO失衡与原发性肾小球肾炎的发病机制及蛋白尿的发生有一定联系。随着NO和ET-1的深入研究，调整机体NO适当合成，适时使用ET-1受体拮抗剂，将有助于开拓肾脏病防治的新途径。
承本院中心实验室方建珍和同位素科潘佑铭主管技师的技术帮助，谨致谢意
作者简介：段绍斌(1966-)，男，副教授
参考文献：
[1]Kohan DE. Endothelins in the normal and diseased kidney [J]. Am J Kidney Dis, 1997,29(1):2-26.
[2]Herman WH. Emancipator SN, Rhoteno RLP, et al. Vascular and glomerula r expression of endothelin-1 in normal human kidney[J]. Am J Physiol, 1998,2 75:F8-17.
, 百拇医药
[3]Roccatello D, Mosso R, Ferro M, et al. Urinary endothelin in glomerul onephritis patients with normal renal function[J]. Clin Nephrol, 1994,41(6):3 23-330.
[4]Ketteler M, Distler A. The role of nitric oxide in experimental glomerulo nephritis[J]. Kidney Blood Press Res, 1996,19(3-4):177-181.
[5]Marletta MA. Macrophage oxidation of L-arginine to NO-2 and NO-3 : NO is an intermediate[J]. Biochemistry, 1988,27:8706.
[6]Baylis C, Mitruka B, Deng A. Chronic blockade of nitric oxide synthesis i n the rat produces systemic hypertension and glomerular damage[J]. J Clin Inv est, 1992,90:278-281.
收稿日期：1999-01-08, http://www.100md.com