HPLC法测定刺五加制剂中异梣皮定的含量
作者：乔菲 张清波 卢守奇 冯兆云
单位：乔菲 张清波 卢守奇(黑龙江省药品检验所 哈尔滨 150001)；冯兆云(黑龙江泽扬制药有限公司 哈尔滨 150038)
关键词：刺五加制剂；异梣皮定；高效液相色谱
药物分析杂志000309 摘要 目的：建立测定刺五加制剂中异梣皮定的高效液相色谱法。方法：采用YMC-ODS(4.6 mm×150 mm)色谱柱，以乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)为流动相，检测波长345 nm，外标法定量。结果：异梣皮定在0.05～0.4 μg.mL-1内呈线性关系，片剂及浸膏的方法回收率分别为97.14%和99.32%(n=5)，RSD分别为1.8%和1.1%。结论：此法简便，准确，重现性好。
Determination of Isofraxidin in Ciwujia Preparation by HPLC
, 百拇医药
Qiao Fei，Zhang Qingbo，Lu Shouqi
(Heilongjiang Institute for Drug Control,Ha′erbin 150001)
Feng Zhaoyun
(Heilong jiang Zeyang Pharmaceutical Limeted Company Harbin)
Abstract Objective：A HPLC method was developed for the determination of isofraxidin in Ciwujia preparation.Methods:Using an ODS column(4.6 mm×150 mm).The mobile phase consisted of acelonitrile-water-formic acid(85∶15∶1).The UV detection wavelength was 345 nm.The concentration of isofraxidin was quantified by external standard method.Results:Within 0.05～0.4 μg.mL-1,isofraxidin had a good li-nearity.The average recovery of Ciwujia tablet was 97.14% with RSD of 1.8% and the average recovery of Ciwujia extract was 99.32% with RSD of 1.1%.Conclusion:The method is simple,accurate and reproducible.
, 百拇医药
Key words Ciwujia preparation,isofraxidin,HPLC
刺五加浸膏及片剂系由刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxin.)Harms.单味药材加工而成，具有益气健脾，补肾安神等功效[1]，含有多种化学成分，如异梣皮定，丁香苷等。其中异梣皮定(isofraxidin)具有明显的镇静作用。文献报道其含量测定有薄层层析紫外法[2]。本文采用HPLC法测定刺五加片及浸膏中异梣皮定的含量，并对色谱条件进行了考察，结果表明此法简便、准确、重现性好。
1 仪器与试药
SP2000高效液相色谱仪，SP2000紫外检测器(美国光谱物理公司)。
对照品为沈阳药科大学天然药物研究所提供的精制品，经HPLC测定异梣皮定的含量99.7%。
, 百拇医药
刺五加浸膏(黑龙江省一面坡制药厂，黑龙江尚志青云制药厂)；刺五加片(黑龙江省一面坡制药厂，黑龙江省南岔制药厂)，每片相当于刺五加浸膏0.15 g；甲醇等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：YMC-ODS柱(150 mm×4.6 mm)；柱温：室温；流动相：乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)；流速1.0 mL.min-1；检测波长：345 nm，灵敏度：0.1 AUFS。对照品及样品图谱见图1。
2.2 线性关系考察 精密称取异梣皮定对照品，加甲醇制成0.02 mg.mL-1的溶液，按上述色谱条件分别进样2，6，10，14，18 μL，测定。以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：
, 百拇医药
Y=2.277×106X+1.145×104 r=0.999 1
线性范围为0.05～0.4 μg。
2.3 精密度试验 取上述0.02 mg.mL-1对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL，结果峰面积的RSD为1.0%。
图1 异梣皮定色谱图
A.异NFDA1皮定对照品 B.刺五加浸膏 C.刺五加片
1.异梣皮定
2.4 重现性试验 分别取同一批号刺五加浸膏及片剂各5份，照“2.6”项下方法操作，测定峰面积并计算含量，结果RSD分别为3.3%和2.7%(n=5)。
, http://www.100md.com
2.5 回收率测定 取已测知含量的刺五加浸膏0.2 g，刺五加片剂0.4 g，各5份，分别精密加入对照品0.117 5 mg，照“2.6”项下方法操作，测得片剂平均回收率为97.14%，RSD为1.8%，浸膏平均回收率为99.32%，RSD为1.1%(n=5)。
2.6 样品测定 刺五加片供试品溶液：取本品20片，除去糖衣，精密称定，平均片重为0.224 4g，研细，取2 g精密称定，置索氏提取器中，加氯仿适量，加热回流4 h，将提取液回收氯仿至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。刺五加浸膏供试品溶液：取本品0.3 g，精密称定，加20%乙醇20 mL使溶解，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次15 mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取0.02 mg.mL-1对照品溶液与上述供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。5批片剂的每片含量分别为0.027，0.024，0.020，0.012，0.017 mg(n=2)；浸膏含量分别为0.099%，0.074%，0.066%，0.068%，0.072%(n=2)。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 刺五加生药测定方法与结果 取刺五加粗粉5 g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿适量，加热回流提取至提取液无色，回收氯仿至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取0.02 mg.mL-1异梣皮定对照品溶液及上述供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，色谱条件同正文，测定，结果含异梣皮定以干燥品计为0.004%～0.006%。
3.2 检测波长选择 取异梣皮定对照品溶液，进行紫外扫描，其最大吸收波长为345 nm，因此确定其检测波长为345 nm。
3.3 流动相选择 进行色谱系统选择时，分别用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-水-甲酸系统对样品进行分离，结果以乙腈-水-甲酸系统(85∶15∶1)的分离效果为佳。
, 百拇医药 3.4 供试品溶液的制备方法的考察 分别对刺五加浸膏进行了氯仿索氏回流提取、氯仿超声、氯仿萃取的处理方法，但提取均不完全，将浸膏先溶解，再萃取，效果较理想；对刺五加片，分别用甲醇和氯仿进行索氏回流提取试验，结果氯仿提取的杂质少，分离效果好，通过对回流时间的考察发现4 h已能基本提取完全。
参考文献
1，中国药典.1995.一部：520
2，许正斌，佟婉筠，杨光.刺五加各部位有效成分的含量测定.中草药，1984，15(5)：32
(本文于1999年3月26日收到), 百拇医药
单位：乔菲 张清波 卢守奇(黑龙江省药品检验所 哈尔滨 150001)；冯兆云(黑龙江泽扬制药有限公司 哈尔滨 150038)
关键词：刺五加制剂；异梣皮定；高效液相色谱
药物分析杂志000309 摘要 目的：建立测定刺五加制剂中异梣皮定的高效液相色谱法。方法：采用YMC-ODS(4.6 mm×150 mm)色谱柱，以乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)为流动相，检测波长345 nm，外标法定量。结果：异梣皮定在0.05～0.4 μg.mL-1内呈线性关系，片剂及浸膏的方法回收率分别为97.14%和99.32%(n=5)，RSD分别为1.8%和1.1%。结论：此法简便，准确，重现性好。
Determination of Isofraxidin in Ciwujia Preparation by HPLC
, 百拇医药
Qiao Fei，Zhang Qingbo，Lu Shouqi
(Heilongjiang Institute for Drug Control,Ha′erbin 150001)
Feng Zhaoyun
(Heilong jiang Zeyang Pharmaceutical Limeted Company Harbin)
Abstract Objective：A HPLC method was developed for the determination of isofraxidin in Ciwujia preparation.Methods:Using an ODS column(4.6 mm×150 mm).The mobile phase consisted of acelonitrile-water-formic acid(85∶15∶1).The UV detection wavelength was 345 nm.The concentration of isofraxidin was quantified by external standard method.Results:Within 0.05～0.4 μg.mL-1,isofraxidin had a good li-nearity.The average recovery of Ciwujia tablet was 97.14% with RSD of 1.8% and the average recovery of Ciwujia extract was 99.32% with RSD of 1.1%.Conclusion:The method is simple,accurate and reproducible.
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Key words Ciwujia preparation,isofraxidin,HPLC
刺五加浸膏及片剂系由刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxin.)Harms.单味药材加工而成，具有益气健脾，补肾安神等功效[1]，含有多种化学成分，如异梣皮定，丁香苷等。其中异梣皮定(isofraxidin)具有明显的镇静作用。文献报道其含量测定有薄层层析紫外法[2]。本文采用HPLC法测定刺五加片及浸膏中异梣皮定的含量，并对色谱条件进行了考察，结果表明此法简便、准确、重现性好。
1 仪器与试药
SP2000高效液相色谱仪，SP2000紫外检测器(美国光谱物理公司)。
对照品为沈阳药科大学天然药物研究所提供的精制品，经HPLC测定异梣皮定的含量99.7%。
, 百拇医药
刺五加浸膏(黑龙江省一面坡制药厂，黑龙江尚志青云制药厂)；刺五加片(黑龙江省一面坡制药厂，黑龙江省南岔制药厂)，每片相当于刺五加浸膏0.15 g；甲醇等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：YMC-ODS柱(150 mm×4.6 mm)；柱温：室温；流动相：乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)；流速1.0 mL.min-1；检测波长：345 nm，灵敏度：0.1 AUFS。对照品及样品图谱见图1。
2.2 线性关系考察 精密称取异梣皮定对照品，加甲醇制成0.02 mg.mL-1的溶液，按上述色谱条件分别进样2，6，10，14，18 μL，测定。以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：
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Y=2.277×106X+1.145×104 r=0.999 1
线性范围为0.05～0.4 μg。
2.3 精密度试验 取上述0.02 mg.mL-1对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL，结果峰面积的RSD为1.0%。
图1 异梣皮定色谱图
A.异NFDA1皮定对照品 B.刺五加浸膏 C.刺五加片
1.异梣皮定
2.4 重现性试验 分别取同一批号刺五加浸膏及片剂各5份，照“2.6”项下方法操作，测定峰面积并计算含量，结果RSD分别为3.3%和2.7%(n=5)。
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2.5 回收率测定 取已测知含量的刺五加浸膏0.2 g，刺五加片剂0.4 g，各5份，分别精密加入对照品0.117 5 mg，照“2.6”项下方法操作，测得片剂平均回收率为97.14%，RSD为1.8%，浸膏平均回收率为99.32%，RSD为1.1%(n=5)。
2.6 样品测定 刺五加片供试品溶液：取本品20片，除去糖衣，精密称定，平均片重为0.224 4g，研细，取2 g精密称定，置索氏提取器中，加氯仿适量，加热回流4 h，将提取液回收氯仿至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。刺五加浸膏供试品溶液：取本品0.3 g，精密称定，加20%乙醇20 mL使溶解，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次15 mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取0.02 mg.mL-1对照品溶液与上述供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。5批片剂的每片含量分别为0.027，0.024，0.020，0.012，0.017 mg(n=2)；浸膏含量分别为0.099%，0.074%，0.066%，0.068%，0.072%(n=2)。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 刺五加生药测定方法与结果 取刺五加粗粉5 g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿适量，加热回流提取至提取液无色，回收氯仿至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取0.02 mg.mL-1异梣皮定对照品溶液及上述供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，色谱条件同正文，测定，结果含异梣皮定以干燥品计为0.004%～0.006%。
3.2 检测波长选择 取异梣皮定对照品溶液，进行紫外扫描，其最大吸收波长为345 nm，因此确定其检测波长为345 nm。
3.3 流动相选择 进行色谱系统选择时，分别用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-水-甲酸系统对样品进行分离，结果以乙腈-水-甲酸系统(85∶15∶1)的分离效果为佳。
, 百拇医药 3.4 供试品溶液的制备方法的考察 分别对刺五加浸膏进行了氯仿索氏回流提取、氯仿超声、氯仿萃取的处理方法，但提取均不完全，将浸膏先溶解，再萃取，效果较理想；对刺五加片，分别用甲醇和氯仿进行索氏回流提取试验，结果氯仿提取的杂质少，分离效果好，通过对回流时间的考察发现4 h已能基本提取完全。
参考文献
1，中国药典.1995.一部：520
2，许正斌，佟婉筠，杨光.刺五加各部位有效成分的含量测定.中草药，1984，15(5)：32
(本文于1999年3月26日收到), 百拇医药