5-氟尿嘧啶壳聚糖微球的制备
作者：梁桂媛 方华丰 刘志伟
单位：梁桂媛(同济医科大学药学院，湖北武汉430030)；方华丰(同济医科大学环境医学研究所，湖北武汉430030)；刘志伟(同济医科大学94级毕业实习生)
关键词：5-氟尿嘧啶；壳聚糖；微球
广东药学院学报000102 摘 要 本文报道了采用两种不同的方法制备5-Fu壳聚糖微球，微球A采用乳化交联法制备，微 球B是首先制备成白蛋白微球，然后在其表面固定壳聚糖。研究了微球的一些基本特征，包 括微球大小、形态与表面状态，结果表明微球A及微球B粒径主要分布在3.5～6.5 μm和0.6 ～2.8 μm范围内，药物含量分别为10.86%和8.52%，体外释放实验表明，在pH7.4磷酸盐缓 冲溶液中，微球B具有显著的缓释作用，其释放特征符合Higuchi方程。
中图号 R944.9 文献标识码:A 文章编号:1006-8783(2000)01-0007-04
, http://www.100md.com
Preparation of 5-fluorouracil-loaded
Chitosan Microspheres
LIANG Gui-yuan,FANG Hua-feng,LIU Zhiwei
(College of Pharmacy, Tongji Medical University, Wuhan,P.R.China 430030)
Abstract Chitosan microspheres loaded with 5-Fu were prepared with two different methods. Microspheres A were prepared by cross-linking-emulsion method. Microspheres B were prepared by two steps：BSA microspheres were first made and then covered with chitosan. The size of the two kind of microspheres was about 3.5～6.5 μm a n d 0.6～2.8 μm respectively. The drug loading was about 10.86% and 8.52% respec tively. 5-Fu release from mi crospheres B was sustained in phosphate buffer solution(pH 7.4) and it was ru led by Higuchi equation.
, 百拇医药
Key Words 5-fluorouracil;chitosan;microsphere
CLC number R944.9 Document code:A Article ID:1006-8783(2000)01-0007-04
微球可在体内特异性分布，提高药效。以5-Fu为模型药物，采用合成的或 天然的高分子材料制备了各种微球，例 如：明胶、蜂蜡、乙基纤微素、牛血清白蛋白、纤微蛋白原、PLA等[1,2]。壳聚糖 (chitos an)是天然多糖中唯一的碱性多糖，具有许多独特的物理化学特性和生物学功能。壳聚糖及 其分解产物无毒，具有生物相容性及生物可降解性，有抗菌消炎，促进伤口愈合，抗酸、抗 溃疡、降脂和降低胆固醇的作用，壳聚糖具有直接抑制肿瘤细胞的作用，并可通过活化免疫 系统显示抗癌活性，与现有的抗癌药合用可增强抗癌效果。近年来壳聚糖作为一种新型药用 辅料在缓释给药系统中的应用引起了人们浓厚的兴趣[3，4]。已制备了包含有抗癌 药、消炎 药及生化制剂的壳聚糖微球。在此基础上，我们采用两种不同的方法制备了5-Fu壳聚糖微球 。1 材料与仪器
, 百拇医药
壳聚糖(脱乙酰度为80%，自制)、BSA(牛血清白蛋白，Sigma)、5-氟尿嘧啶(5-Fu上海 第十二药厂)、0.25%5-Fu溶液:上海旭东海善药业有限公司，本文HCl是指盐酸0.1 mol/L ，NaOH是指氢氧化钠0.1 mol/L；
小鼠：昆明种，18～20 g，雌雄各半，同济医科大学动物中心提供；瘤源小鼠：H22 ，同济医科大学药学院提供；
TS14-2型分析天平、751-G紫外分光光度计、D40-2型电动搅拌机、UV-260 Shimadzuh紫 外分光光度计、SPC-1A超声波粉碎机、离心机、显微镜。
2 方法与结果
2.1 5-Fu壳聚糖微球的制备
2.2.1 微球A的制备
, 百拇医药
取壳聚糖200 mg于20 mL 5%的醋酸中，溶解并过滤，将20 mg 5-Fu溶于3 mL滤液中，混匀， 置于 250 mL烧瓶中，加入含6 g Span85及1 g吐温20的120 mL液体石蜡中。以1000 r/min的速度 搅拌2 0 min，超声均化10 min，然后倒入含有0.6 mL甲醛的乙醚120 mL中，以800 r/min继续搅拌 2 h， 放置。以3000 r/min离心后，分别用无水乙醇和乙醚洗涤、沉淀三次，真空干燥，得微球A 。
2.2.2 微球B的制备
取5-Fu适量(约25 mg)，加热溶解于1 mL H2O中，稍放冷后，加入BSA约50 mg使溶解， 然后逐 滴加入到100 mL强力搅拌的蓖麻油中，加Span80 1 mL，超声均化20 min，倾入搅拌的乙醚 中， 加入甲醛0.2 mL，固化15 min，放置，离心，乙醚洗涤3～4次，挥尽乙醚，得白色固态的白 蛋白微球。
, 百拇医药
取壳聚糖100 mg于2%的醋酸溶液10 mL中，搅拌使其溶解并过滤，加入上述制备的白蛋白 微球100 mg，以1000 r/min的速度搅拌15 min，离心(10000～12000 r/min)，分别用水、 乙醇、乙 醚洗涤，转移至平皿上，加少量丙酮分散后，在红外灯下40 ℃挥去丙酮。取干燥的微球细 粒 置盛有甲醛的真空干燥器中，微热，6 h后取出，挥去残留的甲醛，真空干燥，得微球B。
2.3 微球的大小、形态
取微球少许，用含0.2%吐温80的生理盐水分散，在显微镜下观察微球的大小、形态。测定30 0个微球的粒径，并将数据进行处理。
本实验制备的两种壳聚糖微球，粒径大小均匀，微球外观为淡黄色粉末，光镜下微球外壳表 面光滑。生理盐水悬浮状态下，分散性和流动性良好。微球A，粒度主要分布在3.5～6.5 μ m；微球B，主要分布在0.6～2.8 μm，见图1。
, 百拇医药
Fig.1 Scanning optical micrograph(magnification×400)of 5-Fu chitosan microspheres A and B
2.4 灭菌实验
用60Co发射的2.5×104Gy为辐射剂量，对灌封于5 mL安培中的微球进行灭菌实验， 观察灭菌效果。
根据1995版中国药典规定的方法进行厌氧菌、需氧菌的检查，经2.5×104Gy的γ-射线辐 射后，无上述菌落，达到了灭菌要求。
2.5 紫外扫描
取5-Fu及壳聚糖适量溶于HCl中，以HCl作空白对照，于200～400 nm内紫外扫描。在265 nm处，5-Fu有较强的吸收，而相同浓度的壳聚糖、BSA吸收较小。可以用紫外分光光 度法测定5-Fu的量
, http://www.100md.com
2.6 标准曲线的绘制
精密称取12.25 mg 5-Fu置于50 mL容量瓶中，加HCl溶解并定容至刻度。分别取0.5、1、1.5 、2.5、3 mL溶液于50 mL容量瓶中，加HCl定容至刻度，测定265 nm处A。
线性回归方程为：
A=0.0446C+0.0309(C：μg/mL),r=0.998
2.7 回收率实验
分别取适量5-Fu、BSA等溶解于10 mL水中，加NaOH约40 mL，加热回流2 h，放冷后，定容， 取适量用HCl稀释，测定265 nm处A值。
分别取5-Fu、壳聚糖适量，溶解于50 mL HCl中，定容并适当稀释，测定265 nm处A值。微球的消化方法一般常用酶消化法、酸碱消化法，由于壳聚糖不溶于碱，也未见有体外酶消 化壳聚糖微球之报道，对微球A我们采用HCl使壳聚糖溶解；对微球B，采用HCl使壳聚糖 先充分溶解，然后用NaOH溶液沸水消化白蛋白微球。我们测定了壳聚糖、碱消化对5-Fu回 收率的影响，回收率分别为(103.58±2.33)%、(102.1±1.13)%。
, http://www.100md.com
2.8 5-Fu壳聚糖微球的含量测定
取微球A约50 mg置于100 mL烧瓶中，加HCl 50 mL，搅拌回流6 h使微球完全溶解，放冷，定 容并稀释，测定265 nm处A值。
取微球B约100 mg置于100 mL锥形瓶中，用HCl 50 mL搅拌回流6 h，离心，将沉淀用HCl、水 洗涤 ，收集离心液、洗涤液，并过滤，得滤液Ⅰ。将离心所剩的沉淀置于100 mL烧瓶中，加NaOH 溶液约50 mL，加热回流2 h，过滤，得滤液Ⅱ。将Ⅰ、Ⅱ分别加水定容，并用HCl稀释，测 定265 nm处A值。
微球A中5-Fu的含量为10.86%，微球B含量为8.52%。据Sheu MT等[5]报道，5-Fu在 油相 中具有适当的溶解性，由于其中一部分可分散到油相介质中，导致微球中药物含量大大降低 。微球B在表面包封壳聚糖时，也可能丧失一部分5-Fu。
, 百拇医药
2.9 体外释放度的测定
将装有5-Fu壳聚糖微球的混悬液(约50 mg/2mL)的透析袋，置于98 mL pH7.4的PBS中。于 37 ℃动态透析。一定时间从外部溶液中取样1.0 mL。同时补充1.0 mL PBS。将所取样液用H Cl 稀释至5.0 mL后，测定A值，并计算累积释放度。为了考核是否有透析膜的控释作用，同时 以5-Fu原料作对照。
壳聚糖微球A、B体外释放结果见图2。微球A有一定的缓释作用，但缓释 效果不好。微球B有明显的缓释作用，其释放特征符合Higuchi方程(r=0.97)。
Fig.2 Release behavior of 5-Fu from
chitosan microspheres A and B
, http://www.100md.com
2.10 体内抗癌活性
取接种6～8 d的H22瘤源小鼠，颈椎脱臼致死，用无菌注射器穿过腹壁肌层抽取腹水 ，放入无菌小瓶，按1∶3加入无菌生理盐水将腹水稀释，作为接种液。分别于小鼠腹腔及右 前肢腋下注射接种液0.2 mL。每3 d注射供试液1次，分别计算生命延长率及20 d肿瘤抑制率 。
5-Fu壳聚糖微球(Fu-M)能显著延长H22肝癌小鼠的生存期，降低小鼠瘤重,见表1,2 。
Tab.1 Survival time of mice Expt.no.
Mice
number
Dose
, 百拇医药
Survival
time(days)
Prolong
rate/%
Fu-M
10
0.5 mg
25.1±1.1
35.7
Fu
10
0.5 mg
23.1±1.8
, 百拇医药
24.9
H2O
10
0.2 mL
18.5±1.5
-
Tab.2 Inhibition of weight of cancer Expt.no.
Dose
Mice Number(start/end)
Weight of cancer
(g)
, 百拇医药
inhibition
/%
Fu-M
0.5 mg
10/9
1.4893±0.2532
51.3
Fu
0.5 mg
10/8
2.1684±0.2162
29.0
, 百拇医药 Blank
-
10/10
3.0554±0.2402
-
3 讨论
3.1 Nishimura曾报道用喷雾干燥法测得直径为1～5 μm的壳聚糖微粒[6] 。Callo用溶液蒸 发技术制备了壳聚糖微球[7]，但这种方法制备的微球药物主要分布在微球表面。 由于壳 聚糖分子2位有游离氨基，可通过醛氨缩合反应形成键桥，使微球固化，而将药物固定在骨 架中。我们采用乳化-化学交联方法制备了壳糖微球A，但这种方法制备的微球颗粒较大， 而且释放速度过快，控释效果不佳。白蛋白微球的制备方法比较成熟，很多人对白蛋白微球 制备的影响因素进行了探讨及优化组合[8]，因而我们首先制备了5-Fu白蛋白微球 ，然后 表面固定壳聚糖，得到了壳聚糖微球B。影响壳聚糖微球制备的因素很多,各种因素对本实验 的影响尚需进一步研究。
, 百拇医药
3.2 Sngiboyashi等研究表明[9]：微球在静注后的体内分布取 决于微球粒径的大小，7～1 4 μm的微球主要停留在肺部，而3 μm以下的微球能通过肺循环，并有大部分为肝、脾的网 状内 皮系统所噬留。因而本次实验制备的微球B静脉注射后可望对肝、脾等组织有一定的靶向作 用。
3.3 体外释放实验表明，在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中，微球B具有显著的 缓释作用，其释放 特征符合Higuchi方程。壳聚糖微球B能显著延长H22肝癌小鼠的生存期，降低小鼠瘤 重。
国家自然科学基金资助项目(NO：3999 0570)
参考文献
[1]Boisdron CM,Menei P,Benoit JP. Preparation and Characterization of 5-fluorouracil-loaded microparticles as biodegradable anticancer drug carriers. J Pharm Pharmacol,1995， 47(2):108.
, http://www.100md.com
[2]Ciftci K,Hincal AA,Kas HS et al. Solid tumor chemotherapy and in vivo distribution of fluorouracil following administration in Poly (L-lactic acid)microspheres. Pharm Dev Technol,1997， 2(2):151.
[3]Lisbeth I. Chitosan and its use as a pharmaceutical excipient. Pharm Res，1998，15(9):1326.
[4]H Suheyl Kas. Chitosan:properties,preparations and application to microparticulate systems. J Microencapsul，1997，14(6):689.
, 百拇医药
[5]Sheu MT,Sokoloski TD. Entrapment of bioactive compounds within native albumin beads:Ⅲ. Evaluation of parameters affecting drug release. J Parenter Sci Tec hnol,1986，40(6):259.
[6]Nishimura.k. Nishimura ST et al:Effect of multiporous microspheres de vised fr om chitin and partially deacetylated chitin on the activation of mouse peritonea l macrophages. Vaccine,1987，5:136.
[7]Gallo JM Hassan EE Receptor-mediator magnetic carriers:basis for targ eting. Pharm Res,1988，5:300.
, 百拇医药
[8]程宇慧,廖工铁,侯世祥,等.白蛋白微球作为肝靶向给药载体的研究.药学学报， 1993，28(1)：68.
[9]Sugibayashi K,Morimoto Y,Nadai T, et al. Drug-carrier property of alb umin mic rospheres in chemotherapy.Ⅱ. Preparation and tissue distribution in mice of mi crosphere-entrapped 5-fluorouracil. Chem Pharm Bull (Tokyo),1979，27(1):204.
(收稿日期 1999-08-21), http://www.100md.com
单位：梁桂媛(同济医科大学药学院，湖北武汉430030)；方华丰(同济医科大学环境医学研究所，湖北武汉430030)；刘志伟(同济医科大学94级毕业实习生)
关键词：5-氟尿嘧啶；壳聚糖；微球
广东药学院学报000102 摘 要 本文报道了采用两种不同的方法制备5-Fu壳聚糖微球，微球A采用乳化交联法制备，微 球B是首先制备成白蛋白微球，然后在其表面固定壳聚糖。研究了微球的一些基本特征，包 括微球大小、形态与表面状态，结果表明微球A及微球B粒径主要分布在3.5～6.5 μm和0.6 ～2.8 μm范围内，药物含量分别为10.86%和8.52%，体外释放实验表明，在pH7.4磷酸盐缓 冲溶液中，微球B具有显著的缓释作用，其释放特征符合Higuchi方程。
中图号 R944.9 文献标识码:A 文章编号:1006-8783(2000)01-0007-04
, http://www.100md.com
Preparation of 5-fluorouracil-loaded
Chitosan Microspheres
LIANG Gui-yuan,FANG Hua-feng,LIU Zhiwei
(College of Pharmacy, Tongji Medical University, Wuhan,P.R.China 430030)
Abstract Chitosan microspheres loaded with 5-Fu were prepared with two different methods. Microspheres A were prepared by cross-linking-emulsion method. Microspheres B were prepared by two steps：BSA microspheres were first made and then covered with chitosan. The size of the two kind of microspheres was about 3.5～6.5 μm a n d 0.6～2.8 μm respectively. The drug loading was about 10.86% and 8.52% respec tively. 5-Fu release from mi crospheres B was sustained in phosphate buffer solution(pH 7.4) and it was ru led by Higuchi equation.
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Key Words 5-fluorouracil;chitosan;microsphere
CLC number R944.9 Document code:A Article ID:1006-8783(2000)01-0007-04
微球可在体内特异性分布，提高药效。以5-Fu为模型药物，采用合成的或 天然的高分子材料制备了各种微球，例 如：明胶、蜂蜡、乙基纤微素、牛血清白蛋白、纤微蛋白原、PLA等[1,2]。壳聚糖 (chitos an)是天然多糖中唯一的碱性多糖，具有许多独特的物理化学特性和生物学功能。壳聚糖及 其分解产物无毒，具有生物相容性及生物可降解性，有抗菌消炎，促进伤口愈合，抗酸、抗 溃疡、降脂和降低胆固醇的作用，壳聚糖具有直接抑制肿瘤细胞的作用，并可通过活化免疫 系统显示抗癌活性，与现有的抗癌药合用可增强抗癌效果。近年来壳聚糖作为一种新型药用 辅料在缓释给药系统中的应用引起了人们浓厚的兴趣[3，4]。已制备了包含有抗癌 药、消炎 药及生化制剂的壳聚糖微球。在此基础上，我们采用两种不同的方法制备了5-Fu壳聚糖微球 。1 材料与仪器
, 百拇医药
壳聚糖(脱乙酰度为80%，自制)、BSA(牛血清白蛋白，Sigma)、5-氟尿嘧啶(5-Fu上海 第十二药厂)、0.25%5-Fu溶液:上海旭东海善药业有限公司，本文HCl是指盐酸0.1 mol/L ，NaOH是指氢氧化钠0.1 mol/L；
小鼠：昆明种，18～20 g，雌雄各半，同济医科大学动物中心提供；瘤源小鼠：H22 ，同济医科大学药学院提供；
TS14-2型分析天平、751-G紫外分光光度计、D40-2型电动搅拌机、UV-260 Shimadzuh紫 外分光光度计、SPC-1A超声波粉碎机、离心机、显微镜。
2 方法与结果
2.1 5-Fu壳聚糖微球的制备
2.2.1 微球A的制备
, 百拇医药
取壳聚糖200 mg于20 mL 5%的醋酸中，溶解并过滤，将20 mg 5-Fu溶于3 mL滤液中，混匀， 置于 250 mL烧瓶中，加入含6 g Span85及1 g吐温20的120 mL液体石蜡中。以1000 r/min的速度 搅拌2 0 min，超声均化10 min，然后倒入含有0.6 mL甲醛的乙醚120 mL中，以800 r/min继续搅拌 2 h， 放置。以3000 r/min离心后，分别用无水乙醇和乙醚洗涤、沉淀三次，真空干燥，得微球A 。
2.2.2 微球B的制备
取5-Fu适量(约25 mg)，加热溶解于1 mL H2O中，稍放冷后，加入BSA约50 mg使溶解， 然后逐 滴加入到100 mL强力搅拌的蓖麻油中，加Span80 1 mL，超声均化20 min，倾入搅拌的乙醚 中， 加入甲醛0.2 mL，固化15 min，放置，离心，乙醚洗涤3～4次，挥尽乙醚，得白色固态的白 蛋白微球。
, 百拇医药
取壳聚糖100 mg于2%的醋酸溶液10 mL中，搅拌使其溶解并过滤，加入上述制备的白蛋白 微球100 mg，以1000 r/min的速度搅拌15 min，离心(10000～12000 r/min)，分别用水、 乙醇、乙 醚洗涤，转移至平皿上，加少量丙酮分散后，在红外灯下40 ℃挥去丙酮。取干燥的微球细 粒 置盛有甲醛的真空干燥器中，微热，6 h后取出，挥去残留的甲醛，真空干燥，得微球B。
2.3 微球的大小、形态
取微球少许，用含0.2%吐温80的生理盐水分散，在显微镜下观察微球的大小、形态。测定30 0个微球的粒径，并将数据进行处理。
本实验制备的两种壳聚糖微球，粒径大小均匀，微球外观为淡黄色粉末，光镜下微球外壳表 面光滑。生理盐水悬浮状态下，分散性和流动性良好。微球A，粒度主要分布在3.5～6.5 μ m；微球B，主要分布在0.6～2.8 μm，见图1。
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Fig.1 Scanning optical micrograph(magnification×400)of 5-Fu chitosan microspheres A and B
2.4 灭菌实验
用60Co发射的2.5×104Gy为辐射剂量，对灌封于5 mL安培中的微球进行灭菌实验， 观察灭菌效果。
根据1995版中国药典规定的方法进行厌氧菌、需氧菌的检查，经2.5×104Gy的γ-射线辐 射后，无上述菌落，达到了灭菌要求。
2.5 紫外扫描
取5-Fu及壳聚糖适量溶于HCl中，以HCl作空白对照，于200～400 nm内紫外扫描。在265 nm处，5-Fu有较强的吸收，而相同浓度的壳聚糖、BSA吸收较小。可以用紫外分光光 度法测定5-Fu的量
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2.6 标准曲线的绘制
精密称取12.25 mg 5-Fu置于50 mL容量瓶中，加HCl溶解并定容至刻度。分别取0.5、1、1.5 、2.5、3 mL溶液于50 mL容量瓶中，加HCl定容至刻度，测定265 nm处A。
线性回归方程为：
A=0.0446C+0.0309(C：μg/mL),r=0.998
2.7 回收率实验
分别取适量5-Fu、BSA等溶解于10 mL水中，加NaOH约40 mL，加热回流2 h，放冷后，定容， 取适量用HCl稀释，测定265 nm处A值。
分别取5-Fu、壳聚糖适量，溶解于50 mL HCl中，定容并适当稀释，测定265 nm处A值。微球的消化方法一般常用酶消化法、酸碱消化法，由于壳聚糖不溶于碱，也未见有体外酶消 化壳聚糖微球之报道，对微球A我们采用HCl使壳聚糖溶解；对微球B，采用HCl使壳聚糖 先充分溶解，然后用NaOH溶液沸水消化白蛋白微球。我们测定了壳聚糖、碱消化对5-Fu回 收率的影响，回收率分别为(103.58±2.33)%、(102.1±1.13)%。
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2.8 5-Fu壳聚糖微球的含量测定
取微球A约50 mg置于100 mL烧瓶中，加HCl 50 mL，搅拌回流6 h使微球完全溶解，放冷，定 容并稀释，测定265 nm处A值。
取微球B约100 mg置于100 mL锥形瓶中，用HCl 50 mL搅拌回流6 h，离心，将沉淀用HCl、水 洗涤 ，收集离心液、洗涤液，并过滤，得滤液Ⅰ。将离心所剩的沉淀置于100 mL烧瓶中，加NaOH 溶液约50 mL，加热回流2 h，过滤，得滤液Ⅱ。将Ⅰ、Ⅱ分别加水定容，并用HCl稀释，测 定265 nm处A值。
微球A中5-Fu的含量为10.86%，微球B含量为8.52%。据Sheu MT等[5]报道，5-Fu在 油相 中具有适当的溶解性，由于其中一部分可分散到油相介质中，导致微球中药物含量大大降低 。微球B在表面包封壳聚糖时，也可能丧失一部分5-Fu。
, 百拇医药
2.9 体外释放度的测定
将装有5-Fu壳聚糖微球的混悬液(约50 mg/2mL)的透析袋，置于98 mL pH7.4的PBS中。于 37 ℃动态透析。一定时间从外部溶液中取样1.0 mL。同时补充1.0 mL PBS。将所取样液用H Cl 稀释至5.0 mL后，测定A值，并计算累积释放度。为了考核是否有透析膜的控释作用，同时 以5-Fu原料作对照。
壳聚糖微球A、B体外释放结果见图2。微球A有一定的缓释作用，但缓释 效果不好。微球B有明显的缓释作用，其释放特征符合Higuchi方程(r=0.97)。
Fig.2 Release behavior of 5-Fu from
chitosan microspheres A and B
, http://www.100md.com
2.10 体内抗癌活性
取接种6～8 d的H22瘤源小鼠，颈椎脱臼致死，用无菌注射器穿过腹壁肌层抽取腹水 ，放入无菌小瓶，按1∶3加入无菌生理盐水将腹水稀释，作为接种液。分别于小鼠腹腔及右 前肢腋下注射接种液0.2 mL。每3 d注射供试液1次，分别计算生命延长率及20 d肿瘤抑制率 。
5-Fu壳聚糖微球(Fu-M)能显著延长H22肝癌小鼠的生存期，降低小鼠瘤重,见表1,2 。
Tab.1 Survival time of mice Expt.no.
Mice
number
Dose
, 百拇医药
Survival
time(days)
Prolong
rate/%
Fu-M
10
0.5 mg
25.1±1.1
35.7
Fu
10
0.5 mg
23.1±1.8
, 百拇医药
24.9
H2O
10
0.2 mL
18.5±1.5
-
Tab.2 Inhibition of weight of cancer Expt.no.
Dose
Mice Number(start/end)
Weight of cancer
(g)
, 百拇医药
inhibition
/%
Fu-M
0.5 mg
10/9
1.4893±0.2532
51.3
Fu
0.5 mg
10/8
2.1684±0.2162
29.0
, 百拇医药 Blank
-
10/10
3.0554±0.2402
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3 讨论
3.1 Nishimura曾报道用喷雾干燥法测得直径为1～5 μm的壳聚糖微粒[6] 。Callo用溶液蒸 发技术制备了壳聚糖微球[7]，但这种方法制备的微球药物主要分布在微球表面。 由于壳 聚糖分子2位有游离氨基，可通过醛氨缩合反应形成键桥，使微球固化，而将药物固定在骨 架中。我们采用乳化-化学交联方法制备了壳糖微球A，但这种方法制备的微球颗粒较大， 而且释放速度过快，控释效果不佳。白蛋白微球的制备方法比较成熟，很多人对白蛋白微球 制备的影响因素进行了探讨及优化组合[8]，因而我们首先制备了5-Fu白蛋白微球 ，然后 表面固定壳聚糖，得到了壳聚糖微球B。影响壳聚糖微球制备的因素很多,各种因素对本实验 的影响尚需进一步研究。
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3.2 Sngiboyashi等研究表明[9]：微球在静注后的体内分布取 决于微球粒径的大小，7～1 4 μm的微球主要停留在肺部，而3 μm以下的微球能通过肺循环，并有大部分为肝、脾的网 状内 皮系统所噬留。因而本次实验制备的微球B静脉注射后可望对肝、脾等组织有一定的靶向作 用。
3.3 体外释放实验表明，在pH7.4磷酸盐缓冲溶液中，微球B具有显著的 缓释作用，其释放 特征符合Higuchi方程。壳聚糖微球B能显著延长H22肝癌小鼠的生存期，降低小鼠瘤 重。
国家自然科学基金资助项目(NO：3999 0570)
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(收稿日期 1999-08-21), http://www.100md.com