HPLC测定六味地黄丸(浓缩)中熊果酸的含量
作者：冯燕芹 王振中 俞海荣
单位：冯燕芹王振中 俞海荣 连云港康缘制药有限责任公司(222001)
关键词：
中草药/990315 六味地黄丸(浓缩)收载于卫生部药品标准第十一册(1993年)，标准中采用薄层扫描法对其中主药山茱萸有效成分熊果酸进行定量，但操作繁琐，重现性差，我们采用HPLC-ELSD对制剂中熊果酸进行含量测定方法的研究。
1 实验方法与结果
1.1 仪器与试剂：美国ALLTECH-426型输液泵，ELSD500型检测器；数据工作站(天津先明科技开发公司)；甲醇为色谱纯；熊果酸对照品(含量为99.1%，中国药品生物制品检定所提供)；六味地黄丸(浓缩丸，连云港康缘制药有限公司出品，批号为980505，980508，980509)。
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1.2 色谱及检测条件：色谱柱：ALLTIMA C18 5 μ；流动相：甲醇-水(80∶20)；流速：0.5 mL/min；进样量10 μL；ELSD检测器漂移管温度：80℃，气流速：1.98 L/min。
1.3 对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含0.05 mg的溶液，作为对照品溶液。
1.4 供试品溶液的制备：取六味地黄丸(浓缩)适量，研细，精密称定5 g，置烧瓶中，加乙醚100 mL，温水回流提取2 h，放冷，滤过，残渣用乙醚洗涤2 次，每次20 mL，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至5 mL量瓶中，作为供试品溶液。
1.5 线性范围考察：精密吸取上述对照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0 μL，注入液相色谱仪中，以峰面积的自然对数为横坐标，以浓度的自然对数为纵坐标，进行线性回归，其回归方程为：Y＝0.238X-3.116，r＝0.995，线性范围为0.25～1.0 mg。
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1.6 稳定性试验：取熊果酸对照品溶液10 μL，每隔2 h进样一次，12 h内峰面积无明显改变。
1.7 加样回收率：精密称取已知含量的六味地黄丸(浓缩)定量加入熊果酸对照品，求得熊果酸的平均回收率99.97%。
1.8 样品测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，将峰面积及浓度自然对数用外标法计算。结果熊果酸含量为0.058%(985050)，0.031%(980508)，0.026%(980509)。
2 讨论
2.1 使用ELSD检测器，漂移管的温度和载气流速是实验的两个关键参数，通过反复实验，确定了本实验的参数条件。
2.2 熊果酸成分紫外吸收为末端吸收，λmax＝203.6 nm，因受试剂影响，使用紫外检测器分析很难进行；薄层扫描法定量，实验得知该方法稳定性和重现性相对较差，且操作时间长，步骤繁琐。而ELSD检测，与紫外吸收强弱无关，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰检测，灵敏度、稳定性及重现性均符合含量测定的要求，且方法简便易行。
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作者简介：*冯燕芹，女，工程师，现任江苏连云港康缘制药有限责任公司研究所所长，连云港市中药工程中心主任。1990年毕业于南京中医药大学中药系。先后在《药物分析杂志》、《中成药》、《中国药科大学学报》等发表论文10余篇，其中有两篇分别被美国和英国《化学文摘》收载。曾获江苏省政府表彰，连云港市青年学科带科带头人，主持研制、开发的8个国家级新药，有的被列入国家星火和火炬计划。
参 考 文 献
[1] 冯埃生，等.药物分析杂志，1996，16(6)：414
[2] 中华人民共和国药典.一部.北京：化学工业出版社，1995：447
(1998-10-12收稿), 百拇医药
单位：冯燕芹王振中 俞海荣 连云港康缘制药有限责任公司(222001)
关键词：
中草药/990315 六味地黄丸(浓缩)收载于卫生部药品标准第十一册(1993年)，标准中采用薄层扫描法对其中主药山茱萸有效成分熊果酸进行定量，但操作繁琐，重现性差，我们采用HPLC-ELSD对制剂中熊果酸进行含量测定方法的研究。
1 实验方法与结果
1.1 仪器与试剂：美国ALLTECH-426型输液泵，ELSD500型检测器；数据工作站(天津先明科技开发公司)；甲醇为色谱纯；熊果酸对照品(含量为99.1%，中国药品生物制品检定所提供)；六味地黄丸(浓缩丸，连云港康缘制药有限公司出品，批号为980505，980508，980509)。
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1.2 色谱及检测条件：色谱柱：ALLTIMA C18 5 μ；流动相：甲醇-水(80∶20)；流速：0.5 mL/min；进样量10 μL；ELSD检测器漂移管温度：80℃，气流速：1.98 L/min。
1.3 对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含0.05 mg的溶液，作为对照品溶液。
1.4 供试品溶液的制备：取六味地黄丸(浓缩)适量，研细，精密称定5 g，置烧瓶中，加乙醚100 mL，温水回流提取2 h，放冷，滤过，残渣用乙醚洗涤2 次，每次20 mL，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至5 mL量瓶中，作为供试品溶液。
1.5 线性范围考察：精密吸取上述对照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0 μL，注入液相色谱仪中，以峰面积的自然对数为横坐标，以浓度的自然对数为纵坐标，进行线性回归，其回归方程为：Y＝0.238X-3.116，r＝0.995，线性范围为0.25～1.0 mg。
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1.6 稳定性试验：取熊果酸对照品溶液10 μL，每隔2 h进样一次，12 h内峰面积无明显改变。
1.7 加样回收率：精密称取已知含量的六味地黄丸(浓缩)定量加入熊果酸对照品，求得熊果酸的平均回收率99.97%。
1.8 样品测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，将峰面积及浓度自然对数用外标法计算。结果熊果酸含量为0.058%(985050)，0.031%(980508)，0.026%(980509)。
2 讨论
2.1 使用ELSD检测器，漂移管的温度和载气流速是实验的两个关键参数，通过反复实验，确定了本实验的参数条件。
2.2 熊果酸成分紫外吸收为末端吸收，λmax＝203.6 nm，因受试剂影响，使用紫外检测器分析很难进行；薄层扫描法定量，实验得知该方法稳定性和重现性相对较差，且操作时间长，步骤繁琐。而ELSD检测，与紫外吸收强弱无关，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰检测，灵敏度、稳定性及重现性均符合含量测定的要求，且方法简便易行。
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作者简介：*冯燕芹，女，工程师，现任江苏连云港康缘制药有限责任公司研究所所长，连云港市中药工程中心主任。1990年毕业于南京中医药大学中药系。先后在《药物分析杂志》、《中成药》、《中国药科大学学报》等发表论文10余篇，其中有两篇分别被美国和英国《化学文摘》收载。曾获江苏省政府表彰，连云港市青年学科带科带头人，主持研制、开发的8个国家级新药，有的被列入国家星火和火炬计划。
参 考 文 献
[1] 冯埃生，等.药物分析杂志，1996，16(6)：414
[2] 中华人民共和国药典.一部.北京：化学工业出版社，1995：447
(1998-10-12收稿), 百拇医药