采用流式细胞仪分析31例优秀运动员T细胞亚群*

http://www.100md.com 《中国运动医学杂志》 1998年第4期

     作者：庄 洁 陈佩杰 章建成 张剑 皮衍灵

    单位：庄 洁 陈佩杰 章建成 张剑 皮衍灵 (上海体育学院(200438))

    关键词：运动员；T细胞亚群；流式细胞仪

    采用流式细胞仪分析31例优秀运动员T细胞亚群 提要 采用双色荧光法流式细胞仪测定31例优秀运动员外周血T淋巴细胞表型的分布特征，并与我国正常成人参考值作比较。结果显示：运动员CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺的分布离散度较大，与我国正常成人参考值相比，除CD₃⁺无显著性差异外，CD₄⁺较正常成人低，CD₈⁺较正常成人高，CD₄⁺/CD₈⁺比值较正常成人低，统计学上均存在显著性差异。
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    运动可以影响机体免疫状态。一般认为，适量运动可增进免疫系统机能，而长时间过大强度训练可导致机体免疫机能下降^[1]，因此在运动训练过程中观察机体的免疫状态对提高运动能力、增进身体健康就显得十分重要。评价免疫功能状态一般采用两种方法，即了解免疫细胞的数量和功能状态，其中了解免疫细胞数量目前多应用流式细胞仪分析T细胞亚群。由于该方法具有所需血量少，实验结果重复性好，实验操作简单快速等优点，已在国内外被广泛采用。但迄今，关于运动员T淋巴细胞亚群的分析少有报道。为此，我们采用流式细胞仪分析法，检测了31例我国优秀运动员T淋巴细胞及其亚群，探讨运动员作为一特殊人群，其T淋巴细胞及其亚群与国人正常值是否存在差异。

    1 材料与方法

    1.1 对象：二级以上男运动员31名，平均年龄20.77岁(18～22岁)，训练年限平均7.74年(4～15年)，从事专项主要为田径、武术和球类。所有受试者均经体检确认无免疫系统和内分泌系统疾病。
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    1.2 试剂：OKT₃^-FTTC/OKT₄^-PE(CD₃⁺/CD₄⁺)(购于美国B.D.公司)和OKT₈^-PE(CD₈⁺)(购于北京医科大学免疫系单抗室)；红细胞溶解液：KHCO₃ 1.0g,NH₄Cl 8.3g,EDTA-Na₂ 37mg，加蒸馏水至1，000ml；固定液为含0.5%甲醛的0.01mol/L PBS液(pH7.4)。

    1.3 仪器：流式细胞仪采用上海第二医科大学细胞分析学开放实验室的美国Becton Dickinson公司产品FACScan，用氩离子激光器作为光源。

    1.4 采样：于上午7∶00始在安静环境下休息5分钟后取血1ml，血液经肝素抗凝后，立即送检。
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    1.5 方法：双色免疫荧光法流式细胞仪检测淋巴细胞表型

    肝素抗凝血分2管，每管200μl，第1管加OKT₃^-FTTC/OKT₄^-PE，第2管加OKT₈^-PE，于常温下避光孵育30min，加红细胞溶解液4ml，放置3～5min，离心1500r/min 5min，用0.01mol/L PBS洗2遍后，滴入含0.5%甲醛的固定液300μl/管，经流式细胞仪检测。

    2 结果

    2.1 运动员CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺(采用国际人白细胞分化抗原命名系统)的分布范围见图1，可见离散度较大，标准差分别为9.68%、5.30%和5.54%。
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    2.2 31例运动员T细胞亚群的均值和实测范围，见表1。

    2.3 与文献报告^[2]的我国正常成人参考值相比(表2)，除CD₃⁺无显著性差异外，CD₄⁺、CD₈⁺以及CD₄⁺/CD₈⁺均与普通人存在显著性差异。其中CD₄⁺以及CD₄⁺/CD₈⁺比值较正常成人低，CD₈⁺较正常成人为高。
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    图1 运动员T细胞亚群分布范围

    表1 31例运动员T淋巴细胞亚群均值及实测范围±SD(%)

    实测范围(%)

    CD₃⁺

    65.00±9.60

    46.19～81.29

    CD₄⁺

    34.17±5.30
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    22.31～44.06

    CD₈⁺

    35.35±5.54

    23.25～43.51

    CD₄⁺/CD₈⁺

    1.0±0.27

    0.95～1.72

    表2 运动员与正常成人T亚群均值与比例的差异(±S%)
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    正常成人(N=100)

    运动员(N=31)

    p值

    CD₃⁺

    63.08±10.85

    65.00±9.68

    >0.05

    CD₄⁺

    42.80±9.43

    34.17±5.30

    <0.001
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    CD₈⁺

    19.58±5.94

    35.35±5.54

    <0.001

    CD₄⁺/CD₈⁺

    2.25±0.68

    1.00±0.27

    <0.001

    3 讨论

    观察训练过程中机体的免疫状态，对于合理安排训练负荷、预防过度疲劳、评价运动员的机能状态等均具有重要意义。本研究结果表明，运动员CD₃⁺与国人正常值无显著性差异，但CD₄⁺和CD₈⁺则分别低于或高于国人正常值，因此CD₄⁺/CD₈⁺明显低于普通国人标准。该结果与本实验室以前报告的结果一致^[3]，而且应用流式细胞仪分析T细胞亚群是当前公认的先进可靠方法，因此我们认为所得数据接近实际值。
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    从分布点图可见，运动员T细胞亚群的百分率离散度较大。国外报告的CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺的标准差分别为7.5%、8.7%、5.0%和0.9%^[4]，国人参考值亦有10.85%、9.43%、5.94%和0.68%，我们的结果为9.68%、5.30%、5.54%和0.27%。综上分析，CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺可有较大范围的变异。鉴于T细胞及其亚群离散度如此之大，我们在分析运动训练过程中运动员T细胞及其亚群时，最好是以动态的自身对照比较为妥，而非一次性的，如单纯把运动员T细胞亚群与正常人标准相比，可能会得出错误结论。
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    运动员CD₄⁺较常人为低，而CD₈⁺又比常人为高，产生这种变异的原因目前尚不清楚，推测与运动员长期从事运动训练有关。在完整机体，免疫功能接受神经内分泌的调节，机体内存在一个完整的神经内分泌免疫网络，可能是由于运动时机体神经内分泌的变化，导致免疫功能的一种适应状态。本实验中，训练年限10年以上的运动员其CD₄⁺/CD₈⁺比值都呈倒置现象，说明训练年限与T细胞及其亚群变化有关，该结果证实了我们的推测。从理论上分析，CD₈⁺百分比上升以及CD₄⁺/CD₈⁺比值倒置反映了机体的一种免疫抑制状态，但近年来发现，T细胞的功能与其表面标志并无特异的对应关系^[5]对运动员CD₄⁺百分比减少，CD₈⁺百分比上升，CD₄⁺/CD₈⁺倒置的功能意义目前还难下结论，有待深入研究。
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    *国家体委科研基金资助项目

    参考文献

    1.Nieman DC.Exercise Immunology:Pratical Applications Int.J.Sports Med.1997;18:91-100

    2.张鲁榕等.流式细胞仪分析100例正常人T细胞亚群.上海免疫学杂志，1988；8(5)：367-368

    3.陈佩杰等.运动训练对T细胞亚群的影响.中国预防医学杂志，1995；29(5)：317-318

    4.Marti GE,et al.Normal Human Blood Density Grandient Lymphocyte Subset Analysis: I. An Interlaboratory Flow Comparison of 85 Normal Adults.American J Hematology 1985;20:41

    5.David HA.Different outlook at the phenotype function relationship of T cell subpopulations:Fundamental and Clinical implications Clin.Immunol.Immunopathol.1992;62:127

    (1997.12.04收稿), http://www.100md.com

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/analecta/2003/09/01/82/429.htm