鼻咽癌VEGF表达与癌生物学行为相关性的研究
作者：李杰恩 黄光武 徐志文 韦敏怡
单位：李杰恩 黄光武 徐志文 广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 南宁 530021；韦敏怡 广西医科大学第一附属医院病理科
关键词：鼻咽肿瘤；血管内皮细胞生长因子；癌生物学行为
广西医科大学学报990313
摘要 目的：探讨鼻咽癌(NPC)VEGF表达与癌生物学行为的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测了65例NPC、15例鼻咽良性肿瘤、15例无瘤鼻咽部石蜡标本组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达,鼻咽癌中转移组41例,非转移组24例。结果:NPC组织VEGF表达显著高于鼻咽良性肿瘤组织中的表达,转移组又较非转移组的表达高,差异有显著性;VEGF表达与临床分期有关。结论:NPC组织中VEGF表达与癌生物学行为密切相关，有可能作为判断肿瘤生物学行为、转移潜能及预后指标，有助于预测NPC转移的高危患者，对采用血管生成抑制剂防止NPC转移有参考价值。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R739.62
EXPRESSION OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR CORRELATING WITH BIOLOGICAL BEHAVIORS OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA
Li Jieen,Huang Guangwu,Xu Zhiwen
Department of Otolaryngology,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021
Abstract Objective:To study the correlation between expression of EVGF and biological behavivors of nasapharyngeal carcinoma(NPC).Methods: Expression of vascular endothelial growth factor( VEGF) using immunohistochemical SP stainning.Paraffin-embedded specimens from 65 patients with NPC and 15 with benign nasopharyngeal tumors,15 with tumor-free nasopharyngeal mucosac were detected.Results:Expressions of VEGF in NPC group were higher than that of nonmetastic carcinomasgroup.The relationship between expressions of VEGF and the clinical staging had statistic signicance.Conclusion:Expression of VEGF closely correlated with biological behaviors of NPC,which may serve as a parameter for determining tumor biological metastatic potential and prognosis.Angiogenesis inhibitors might be helpful in preventing NPC from metastasis.
, 百拇医药
Key words nasopharyngeal neoplasms;vascular endothelial growth factor(VEGF);biological behaviors
恶性肿瘤的生长、浸润及转移过程受到多种因素的影响。近来研究表明肿瘤诱导的血管生成反应与其生物学行为密切相关，有可能作为判断肿瘤生物学行为、转移潜能及预后的指标。为探讨鼻咽癌血管生成与癌生物学行为的关系，本研究采用免疫组织化学方法检测了65例鼻咽癌(NPC)石蜡标本组织中的血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达，并进行观察与分析。
1 材料与方法
1.1 材料：收集广西医科大学第一附属医院1995～1997年收治的65例NPC患者的临床资料及瘤体活检组织的福尔马林固定、石蜡包埋标本，男46例，女19例，年龄25～73岁，平均43岁。其中低分化鳞癌58例，泡状核细胞癌7例。临床分期Ⅰ期3例，Ⅱ期20例，Ⅲ期27例，Ⅳ期15例。设鼻咽部良性肿瘤对照组15例。另选15例鼻咽粘膜慢性炎症蜡块标本作对照组。鼻咽癌组分转移组及非转移组：转移组41例(其中远处转移7例)，男30例，女11例，年龄25～73岁，平均48岁；非转移组24例，男16例，女8例，年龄25～70岁，平均39岁。
, http://www.100md.com
1.2 试剂：兔抗人VEGF抗体(SC-507)，SP免疫组化试剂盒等。购自北京中山公司。
1.3 染色：采用免疫组化SP法。VEGF工作浓度为1∶50。
1.4 结果判断：VEGF阳性细胞的细胞浆染成棕黄色。每张切片选择4个区在400倍视野连续计数100个肿瘤细胞，以组织中阳性细胞数比值，将其分为四级：阴性：无阳性细胞；Ⅰ级：阳性细胞数为1%～60%,Ⅱ级 61%～ 80%；Ⅲ级：>80%。
2 结果
2.1 VEGF的表达情况，见表1,2。
表1 3组组织中VEGF表达的比较(Wilcoxon法)(
±s) 组 别
, 百拇医药
n
VEGF
P
无瘤NP组织
15
0.33±0.48
0.037
NP良性肿瘤
15
0.93±0.26
0.0000
NPC
65
, 百拇医药
1.95±0.79
0.0000
表2 转移组和非转移组VEGF表达的比较(t′检验)(
±s) 组 别
n
VEGF
P
转移组
41
2.33±0.89
0.0073
非转移组
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24
1.34±0.75
2.2 临床分期与VEGF比较，见表3。表3 临床分期中VEGF比较(q检验，Newman-Keuls法)(
±s) 分期比较
n
VEGF
Ⅰ
3
0.67±0.47
Ⅱ
20
0.95±0.58
, http://www.100md.com
Ⅲ
27
2.48±0.72
Ⅳ
15
2.53±0.76
Ⅲ与Ⅳ，Ⅱ与Ⅰ相比，P>0.05，而Ⅲ与Ⅱ，Ⅲ与Ⅰ，Ⅳ与Ⅱ，Ⅳ与Ⅰ相比，P均<0.013 讨论
恶性肿瘤的浸润和转移是其主要预后因素之一，但其确切机制尚未明了。近来研究表明，血管生成是实体瘤发展和转移的关键。原发肿瘤生长需要有新的血管生成。同样，转移灶要继续生长也要有新的血管生成[1、2]。VEGF在血管的发生中起着重要的作用[2～5]。它作为一种内皮细胞的有丝分裂原和促血管生成因子，在原位肿瘤的形成和生长以及在转移瘤的形成中起着十分重要的作用。如能抑制或破坏这些新生血管就可以防止肿瘤的发展和转移。因此，寻找毒性低、效果好的血管生长抑制剂是近来肿瘤研究的新热点。肿瘤生物学发展过程中主要涉及到两个方面，一是肿瘤抑制基因的低调节而导致的瘤细胞生长促进的活化，另一方面是肿瘤诱导血管的生成[6]。从血管生成(Angiogenesis)的角度，可以将恶性肿瘤的发展分为血管生成前期和血管生成期两个阶段。实体瘤生长至1 mm以上时即需要瘤内血管生成，否则肿瘤静止于休眠状态，不发生转移。而一旦进入血管生成期，其转移潜能迅即出现[2]。血管生成是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉的新的毛细血管性血管的生长。它受到血管生成因子的调控，涉及细胞外基质的降解与再塑，内皮细胞的迁移与增殖，以及毛细血管襻的形成和分化等多步骤参与的复杂过程[7，8]。目前发现10余种具有促进血管生成活性的肽类物质，以VEGF研究最多。VEGF是一种由肿瘤细胞分泌的分子量为45KD的二聚体糖蛋白，与肝素结合，能特异作用于血管内皮细胞，引起血管内皮细胞增殖，并在体内诱导血管生成，故称血管内皮细胞生长因子。1989年David等[6]从牛垂体滤泡星状细胞培养物中分离纯化而来。可存在于一些成熟的组织器官，如肝、肺、肾等[3,8 ]。而在肿瘤组织中则呈过度表达[9～11]，并与肿瘤血管化程度相关。本研究的结果显示，良性肿瘤VEGF的表达高于无瘤鼻咽组织，而鼻咽癌VEGF的表达高于良性肿瘤。鼻咽癌中转移组VEGF的表达又较非转移组高。这些证据表明，VEGF诱导的血管生成在NPC的发生发展及转移过程中可能引起重要作用，有可能作为判断肿瘤生物学行为、转移潜能及预后的指标。有助于预测NPC转移的高危患者，对采用血管生成抑制剂防止NPC转移有参考价值。针对VEGF诱发的血管生成可采用：①抑制VEGF基因表达：利用显性阴性技术的基因治疗[12]。反义寡核苷酸(ODN)技术治疗[13]；②直接拮抗VEGF作用：应用VEGF及其受体的单克隆中和抗体[11,14,15]，将VEGF单抗与药物交联，进行内皮细胞导向治疗，抑制肿瘤血管生成。这一途径有望成为恶性肿瘤理想的基因疗法；③阻止VEGF与其受体结合：苏拉明(Suramin)及Lavendustin(一种酪氨酸激酶受体抑制剂)[16,17]已应用于临床，但疗效未见报道。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Takahashi Y,Kitadai Y,Bucana CD,et al.Expression of vascularendothelial growth factor and its recptor,KDR,correlates withvascularity,metastasis and proliferation of Human colon cancer.Cancer Res,1995,55(9):3964～3968
2 Folkman J.What is the evdence that tumors are angiogenesisdependent J Natl Cancer Inst,1990，82(1):4～6
3 Koch AE,Halow LA,Haines GK,et al.Vascular endothelial growth factor,a cytokine modulationg endothelia function in rheunatioid arthritis.J Immunol,1994,152(8):4149～4156
, http://www.100md.com
4 Maeda K,Chumg Y,Ogawa Y,et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma.Cancer,1996,77(5):858～863
5 Connolly DT,Heuvelman DM,Nelson R,et al.Tumor vascular permeability factor stimulates endothlial cell growth and angiogenesis.J Clin Invest,1989,84(5):1470～1478
6 Folkman J,Watson K,Ingberg D.Induction of angiogenesis duringthe transition from hyperplasia to neoplasia.Nature,1989,339(1):58～61
, http://www.100md.com
7 Blood CH,Zetter BR.Tumor interaction with the vasculature:angiogenesis and metastasis.Biochem Biophys Acta,1990,732(1):89～92
8 Lachgar S,Moukadiri H,Jonca F,et al.Vascular endothelia growth factor is an autocrine growth factor for hair dermal papilla cells.J Invest Dermatol,l996,106(1):17～23
9 Collins PD,Connolly DT,Williams TJ.Characterization of theincrease in vascular permeability induced by vascular permeability factor in vivo.Br J Pharmacol,1993,109(1):195～199
, 百拇医药
10 Brown LF,Berse B,Jackmen RW,et al.Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptoors in breast cancer.Hum Pathol,1995,26(1):86～919
11 张曼,周爱儒.血管内皮生长因子的功能与应用.生理科学进展,1996,27(3):255～257
12 Roychowdhury PF,Tseng A,Fu KK,et al.New prognostic factors innasopharyngeal carcinoma: tumor angiogenesis and C-erb B2 expression.Cancer,1996,77(8):1419～1426
, 百拇医药
13 Millauer B,Shawver LK,Plate KH,et al.Gliobastoma growthinhibited in vivo by a dominant-negative flk-1 mutant.Nature,1994,367(6463):576～579
14 董凡,许新,景乃禾，等.反义寡核苷酸抑制肿瘤细胞表达VEGF的研究.肿瘤,1997,17(2):63～66
15 Kim KJ,Li B,Winer J,et al.Inhibition of vascular endothelial growth factor induced angioenesis suppresses tumor growth in vivo.Nature,1993,362(6423):841～844
16 Kandall R,Thomas KA.Inhibition og vascular endothelial cell growth factor activity by an endogerously encoded soluble receptor.Proc Natl Acad Sci USA,1993,90(22):10705～10709
17 Hu D,Fan T.Suramin inhibits angiogenic aetivity of vascular endothelial growth factor in vivo.Br J Pharmacol,1994,112(Sup):581
收稿日期：1998-08-20, http://www.100md.com
单位：李杰恩 黄光武 徐志文 广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 南宁 530021；韦敏怡 广西医科大学第一附属医院病理科
关键词：鼻咽肿瘤；血管内皮细胞生长因子；癌生物学行为
广西医科大学学报990313
摘要 目的：探讨鼻咽癌(NPC)VEGF表达与癌生物学行为的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测了65例NPC、15例鼻咽良性肿瘤、15例无瘤鼻咽部石蜡标本组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达,鼻咽癌中转移组41例,非转移组24例。结果:NPC组织VEGF表达显著高于鼻咽良性肿瘤组织中的表达,转移组又较非转移组的表达高,差异有显著性;VEGF表达与临床分期有关。结论:NPC组织中VEGF表达与癌生物学行为密切相关，有可能作为判断肿瘤生物学行为、转移潜能及预后指标，有助于预测NPC转移的高危患者，对采用血管生成抑制剂防止NPC转移有参考价值。
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中国图书资料分类法分类号 R739.62
EXPRESSION OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR CORRELATING WITH BIOLOGICAL BEHAVIORS OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA
Li Jieen,Huang Guangwu,Xu Zhiwen
Department of Otolaryngology,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021
Abstract Objective:To study the correlation between expression of EVGF and biological behavivors of nasapharyngeal carcinoma(NPC).Methods: Expression of vascular endothelial growth factor( VEGF) using immunohistochemical SP stainning.Paraffin-embedded specimens from 65 patients with NPC and 15 with benign nasopharyngeal tumors,15 with tumor-free nasopharyngeal mucosac were detected.Results:Expressions of VEGF in NPC group were higher than that of nonmetastic carcinomasgroup.The relationship between expressions of VEGF and the clinical staging had statistic signicance.Conclusion:Expression of VEGF closely correlated with biological behaviors of NPC,which may serve as a parameter for determining tumor biological metastatic potential and prognosis.Angiogenesis inhibitors might be helpful in preventing NPC from metastasis.
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Key words nasopharyngeal neoplasms;vascular endothelial growth factor(VEGF);biological behaviors
恶性肿瘤的生长、浸润及转移过程受到多种因素的影响。近来研究表明肿瘤诱导的血管生成反应与其生物学行为密切相关，有可能作为判断肿瘤生物学行为、转移潜能及预后的指标。为探讨鼻咽癌血管生成与癌生物学行为的关系，本研究采用免疫组织化学方法检测了65例鼻咽癌(NPC)石蜡标本组织中的血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达，并进行观察与分析。
1 材料与方法
1.1 材料：收集广西医科大学第一附属医院1995～1997年收治的65例NPC患者的临床资料及瘤体活检组织的福尔马林固定、石蜡包埋标本，男46例，女19例，年龄25～73岁，平均43岁。其中低分化鳞癌58例，泡状核细胞癌7例。临床分期Ⅰ期3例，Ⅱ期20例，Ⅲ期27例，Ⅳ期15例。设鼻咽部良性肿瘤对照组15例。另选15例鼻咽粘膜慢性炎症蜡块标本作对照组。鼻咽癌组分转移组及非转移组：转移组41例(其中远处转移7例)，男30例，女11例，年龄25～73岁，平均48岁；非转移组24例，男16例，女8例，年龄25～70岁，平均39岁。
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1.2 试剂：兔抗人VEGF抗体(SC-507)，SP免疫组化试剂盒等。购自北京中山公司。
1.3 染色：采用免疫组化SP法。VEGF工作浓度为1∶50。
1.4 结果判断：VEGF阳性细胞的细胞浆染成棕黄色。每张切片选择4个区在400倍视野连续计数100个肿瘤细胞，以组织中阳性细胞数比值，将其分为四级：阴性：无阳性细胞；Ⅰ级：阳性细胞数为1%～60%,Ⅱ级 61%～ 80%；Ⅲ级：>80%。
2 结果
2.1 VEGF的表达情况，见表1,2。
表1 3组组织中VEGF表达的比较(Wilcoxon法)(
±s) 组 别, 百拇医药
n
VEGF
P
无瘤NP组织
15
0.33±0.48
0.037
NP良性肿瘤
15
0.93±0.26
0.0000
NPC
65
, 百拇医药
1.95±0.79
0.0000
表2 转移组和非转移组VEGF表达的比较(t′检验)(
±s) 组 别n
VEGF
P
转移组
41
2.33±0.89
0.0073
非转移组
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24
1.34±0.75
2.2 临床分期与VEGF比较，见表3。表3 临床分期中VEGF比较(q检验，Newman-Keuls法)(
±s) 分期比较n
VEGF
Ⅰ
3
0.67±0.47
Ⅱ
20
0.95±0.58
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Ⅲ
27
2.48±0.72
Ⅳ
15
2.53±0.76
Ⅲ与Ⅳ，Ⅱ与Ⅰ相比，P>0.05，而Ⅲ与Ⅱ，Ⅲ与Ⅰ，Ⅳ与Ⅱ，Ⅳ与Ⅰ相比，P均<0.013 讨论
恶性肿瘤的浸润和转移是其主要预后因素之一，但其确切机制尚未明了。近来研究表明，血管生成是实体瘤发展和转移的关键。原发肿瘤生长需要有新的血管生成。同样，转移灶要继续生长也要有新的血管生成[1、2]。VEGF在血管的发生中起着重要的作用[2～5]。它作为一种内皮细胞的有丝分裂原和促血管生成因子，在原位肿瘤的形成和生长以及在转移瘤的形成中起着十分重要的作用。如能抑制或破坏这些新生血管就可以防止肿瘤的发展和转移。因此，寻找毒性低、效果好的血管生长抑制剂是近来肿瘤研究的新热点。肿瘤生物学发展过程中主要涉及到两个方面，一是肿瘤抑制基因的低调节而导致的瘤细胞生长促进的活化，另一方面是肿瘤诱导血管的生成[6]。从血管生成(Angiogenesis)的角度，可以将恶性肿瘤的发展分为血管生成前期和血管生成期两个阶段。实体瘤生长至1 mm以上时即需要瘤内血管生成，否则肿瘤静止于休眠状态，不发生转移。而一旦进入血管生成期，其转移潜能迅即出现[2]。血管生成是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉的新的毛细血管性血管的生长。它受到血管生成因子的调控，涉及细胞外基质的降解与再塑，内皮细胞的迁移与增殖，以及毛细血管襻的形成和分化等多步骤参与的复杂过程[7，8]。目前发现10余种具有促进血管生成活性的肽类物质，以VEGF研究最多。VEGF是一种由肿瘤细胞分泌的分子量为45KD的二聚体糖蛋白，与肝素结合，能特异作用于血管内皮细胞，引起血管内皮细胞增殖，并在体内诱导血管生成，故称血管内皮细胞生长因子。1989年David等[6]从牛垂体滤泡星状细胞培养物中分离纯化而来。可存在于一些成熟的组织器官，如肝、肺、肾等[3,8 ]。而在肿瘤组织中则呈过度表达[9～11]，并与肿瘤血管化程度相关。本研究的结果显示，良性肿瘤VEGF的表达高于无瘤鼻咽组织，而鼻咽癌VEGF的表达高于良性肿瘤。鼻咽癌中转移组VEGF的表达又较非转移组高。这些证据表明，VEGF诱导的血管生成在NPC的发生发展及转移过程中可能引起重要作用，有可能作为判断肿瘤生物学行为、转移潜能及预后的指标。有助于预测NPC转移的高危患者，对采用血管生成抑制剂防止NPC转移有参考价值。针对VEGF诱发的血管生成可采用：①抑制VEGF基因表达：利用显性阴性技术的基因治疗[12]。反义寡核苷酸(ODN)技术治疗[13]；②直接拮抗VEGF作用：应用VEGF及其受体的单克隆中和抗体[11,14,15]，将VEGF单抗与药物交联，进行内皮细胞导向治疗，抑制肿瘤血管生成。这一途径有望成为恶性肿瘤理想的基因疗法；③阻止VEGF与其受体结合：苏拉明(Suramin)及Lavendustin(一种酪氨酸激酶受体抑制剂)[16,17]已应用于临床，但疗效未见报道。
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参考文献
1 Takahashi Y,Kitadai Y,Bucana CD,et al.Expression of vascularendothelial growth factor and its recptor,KDR,correlates withvascularity,metastasis and proliferation of Human colon cancer.Cancer Res,1995,55(9):3964～3968
2 Folkman J.What is the evdence that tumors are angiogenesisdependent J Natl Cancer Inst,1990，82(1):4～6
3 Koch AE,Halow LA,Haines GK,et al.Vascular endothelial growth factor,a cytokine modulationg endothelia function in rheunatioid arthritis.J Immunol,1994,152(8):4149～4156
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4 Maeda K,Chumg Y,Ogawa Y,et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma.Cancer,1996,77(5):858～863
5 Connolly DT,Heuvelman DM,Nelson R,et al.Tumor vascular permeability factor stimulates endothlial cell growth and angiogenesis.J Clin Invest,1989,84(5):1470～1478
6 Folkman J,Watson K,Ingberg D.Induction of angiogenesis duringthe transition from hyperplasia to neoplasia.Nature,1989,339(1):58～61
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7 Blood CH,Zetter BR.Tumor interaction with the vasculature:angiogenesis and metastasis.Biochem Biophys Acta,1990,732(1):89～92
8 Lachgar S,Moukadiri H,Jonca F,et al.Vascular endothelia growth factor is an autocrine growth factor for hair dermal papilla cells.J Invest Dermatol,l996,106(1):17～23
9 Collins PD,Connolly DT,Williams TJ.Characterization of theincrease in vascular permeability induced by vascular permeability factor in vivo.Br J Pharmacol,1993,109(1):195～199
, 百拇医药
10 Brown LF,Berse B,Jackmen RW,et al.Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptoors in breast cancer.Hum Pathol,1995,26(1):86～919
11 张曼,周爱儒.血管内皮生长因子的功能与应用.生理科学进展,1996,27(3):255～257
12 Roychowdhury PF,Tseng A,Fu KK,et al.New prognostic factors innasopharyngeal carcinoma: tumor angiogenesis and C-erb B2 expression.Cancer,1996,77(8):1419～1426
, 百拇医药
13 Millauer B,Shawver LK,Plate KH,et al.Gliobastoma growthinhibited in vivo by a dominant-negative flk-1 mutant.Nature,1994,367(6463):576～579
14 董凡,许新,景乃禾，等.反义寡核苷酸抑制肿瘤细胞表达VEGF的研究.肿瘤,1997,17(2):63～66
15 Kim KJ,Li B,Winer J,et al.Inhibition of vascular endothelial growth factor induced angioenesis suppresses tumor growth in vivo.Nature,1993,362(6423):841～844
16 Kandall R,Thomas KA.Inhibition og vascular endothelial cell growth factor activity by an endogerously encoded soluble receptor.Proc Natl Acad Sci USA,1993,90(22):10705～10709
17 Hu D,Fan T.Suramin inhibits angiogenic aetivity of vascular endothelial growth factor in vivo.Br J Pharmacol,1994,112(Sup):581
收稿日期：1998-08-20, http://www.100md.com