丹皮总甙对小鼠化学性肝损伤的影响
作者：梅俏 魏伟 许建明 丁长海 熊祖应 徐叔云
单位：梅俏 魏伟 丁长海 徐叔云 安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230032；许建明 熊祖应 安徽医科大学第一附属医院内科，合肥 230022
关键词：牡丹；药理学；糖苷类；药理学；四氯化碳；半乳糖；肝；病理学；肝疾病；化学诱导；疾病模型；动物；小鼠
安徽医科大学学报990203 摘要 目的 观察丹皮总甙(TGM)的抗肝炎作用。方法 采用CCl4和D-Gal-N诱导小鼠化学性肝损伤模型。结果 TGM可降低CCl4和D-Gal-N所致血清ALT、AST的升高，减轻CCl4和D-Gal-N所致肝脏变性和坏死程度，预防给药效果优于治疗给药，其中以50 mg.kg-1剂量组给药7天效果最佳。结论 TGM对化学性肝损伤有一定程度的保护作用。
, 百拇医药
自由词 化学性肝损伤；丹皮总甙
中国图书资料分类法分类号 R575； R971.6
Effects of total glucosides of mudan cortex
on chemical liver injury in mice
Mei Qiao, Wei Wei, Xu Jianming et al
(Institute of Clinical Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective To observe the effects of total glucosides of mudan cortex(TGM) on chemical liver injury. Methods Chemical liver injury model produced by CCl4 and D-Gal-N in mice was applied. Results The elevation of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) in serum produced by CCl4 and D-Gal-N were decreased by TGM, the degrees of degeneration and necrosis in liver produced by CCl4 and D-Gal-N were diminished. The effect was more apparent in the preventive groups than in the therapeutic groups. The pretreatment group with a daily ig dose of TGM (50 mg.kg-1) for 7 days showed the most effective in all groups. Conclusion TGM shows some degree of protective effects on chemical liver injury.
, 百拇医药
MeSH paeonia suffruticosa/pharmacol; glycosides/pharmacol; carbon tetrachloride; galactose; liver/pathol; liver diseases/chem induced; diseases models, animal; mice
Free words chemical liver injury; total glucosides of mudan cortex
中药丹皮具有清热凉血、活血化淤之功效，常作为肝炎的治疗药。其中的活性成分丹皮总甙(total glucosides of mudan cortex, TGM)的药理作用报道不多，为观察丹皮总甙对肝炎防治作用的药效学，采用CCl4和D-Gal-N所致化学性肝损伤模型进行研究。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 材料 TGM：由本所植化室提供；联苯双酯(biophenyldicarboxylate, BPD)：由北京协和药厂提供；CCl4：上海新中化学厂出品；D-Gal-N：重庆医科大学化学教研室提供。
1.2 动物 昆明种小鼠。体重20 g±2 g，♀♂兼用，由安徽医科大学实验动物中心提供。动物合格证号：皖医实动准字第01号。
1.3 实验分组 将小鼠随机分组，设正常溶媒〔0.1%(体积分数，下同)吐温-80〕组、损伤模型组、阳性对照药组、TGM给药组(不同剂量详见表1～3)。
1.4 模型建立〔1〕
1.4.1 预防给药 正常溶媒组和损伤模型组ig等量溶媒，阳性对照药组ig BPD 200 mg.kg-1，丹皮总甙给药组ig TGM(不同剂量)，每天1次，连续给药4，7天，未次给药后2 h，正常溶媒组ig(或ip)等容量溶媒，其余各组ig 0.1% CCl4植物油溶液10 ml.kg-1(或ip D-Gal-N生理盐水溶液800 mg.kg-1)1次，禁食16 h后处死动物，眼眶取血测ALT和AST，另取肝脏左叶进行病理组织学检查。
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1.4.2 治疗给药 CCl4肝损伤模型组：实验开始第1，3，5，7天每天上午8：00正常溶媒组ig等容量溶媒，其余各组ig 0.1% CCl4植物油溶液10 ml.kg-11次，共4次；每天上午10：00正常溶媒组ig等容量溶媒，阳性对照药组ig BPD 200 mg.kg-1，丹皮总甙给药组ig TGM 50 mg.kg-1，连续给药7天。末次给药后16 h处死动物，眼眶取血测ALT和AST，另取肝脏左叶进行病理组织学检查。 D-Gal-N 肝损伤模型组：正常溶媒组ip生理盐水，其余各组 ip D-Gal-N溶液800 mg.kg-1 1次后，在4，8，12 h正常溶媒组ig等量溶媒，阳性对照药组ig BPD 200 mg.kg-1，丹皮总甙给药组ig TGM 50 mg.kg-1，共3次，末次给药后2 h处死动物，眼眶取血测ALT和AST，另取肝脏左叶进行病理组织学检查。
, http://www.100md.com
1.5 检测方法 血清ALT、AST测定用上海荣盛试剂公司试剂盒进行测定。肝脏病理组织学检测方法：切取肝脏左叶，10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察片状坏死程度并进行分析。
1.6 数据处理 所有数据均以
±s表示，采用t检验进行统计处理。
2 结果
2.1 TGM预防给药4天对化学性肝损伤的影响 表1结果表明，TGM 20，50，80 mg.kg-1可显著降低CCl4引起的血清ALT和AST的升高(P<0.01)，TGM 50，80 mg.kg-1可显著降低D-Gal-N引起的血清ALT的升高(P<0.01)，表明TGM预防给药4天对CCl4和D-Gal-N所引起的肝损伤有一定程度的保护作用。
, 百拇医药
2.2 TGM预防给药7天对化学性肝损伤的影响 表2结果表明，TGM 25，50 mg.kg-1可显著降低CCl4引起的血清ALT和AST的升高(P<0.01)，100 mg.kg-1作用不明显；TGM 25，50 mg.kg-1可显著降低D-Gal-N引起的血清ALT的升高(P<0.01)，亦可降低血清AST的升高，100 mg.kg-1作用不明显。表明TGM预防给药7天对CCl4和D-Gal-N所引起的肝损伤有一定程度的保护作用。
表1 TGM预防给药4天对化学性肝损伤的影响(n=10,±s) 组别
剂量(mg.kg-1)
, 百拇医药
ALT (King U)
ALT(King U)
CCl4
D-Gal-N
CCl4
D-Gal-N
正常组
—
171.1±31.8
243.7±9.4
193.8±12.4
197.5±33.2
, http://www.100md.com
损伤组
—
2 724.1±163.6#
2 531.3±196.9＃
1 213.8±304.6＃
2 556.9±166.2＃
损伤组+BPD
200
1 363.6±103.2**
2 137.5±117.2**
, 百拇医药
720.0±124.6**
1 920.0±830.8**
损伤组+TGM
20
1 845.5±209.1**
2 489.1±271.8
1 006.2±193.8
2 353.8±313.8
50
1 663.6±404.5**
, 百拇医药
2 259.4±92.8**
696.9±96.9**
2 030.8±526.2**
80
2 322.7±254.5*
2 282.8±150.0**
1 352.3±276.9
2 483.1±600.0
与正常组比较：#P<0.01；与损伤组比较：*P<0.05，**P<0.01表2 TGM预防给药7天对化学性肝损伤的影响(n=10,±s)
, 百拇医药
组别
剂量
(mg.kg-1)
ALT(King U)
AST(King U)
CCl4
D-Gal-N
CCl4
D-Gal-N
正常组
—
, http://www.100md.com 256.8±14.0
262.5±11.8
240.0±81.2
193.8±34.2
损伤组
—
1 584.4±220.3#
2 465.6±403.1#
1 176.9±309.2#
2 215.4±830.7#
损伤组+BPD
, 百拇医药
200
692.2±103.2**
1 050.0±309.4**
710.7±166.2**
1 624.6±221.5*
损伤组+TGM
25
1 012.5±135.9**
1 651.8±384.3**
770.7±73.8**
, http://www.100md.com
1 938.5±115.4
50
928.2±206.3**
1 331.2±168.8**
720.0±110.3**
1 638.4±161.5*
100
1 580.0±209.6
2 174.3±207.5
1 073.6±270.2
, http://www.100md.com
2 283.4±241.6
与正常组比较：#P<0.01；与损伤组比较：*P<0.05，**P<0.01表3 TGM对化学性肝损伤的治疗作用(n=10,±s) 组别
剂量
(mg.kg-1)
ALT(King U)
AST(King U)
CCl4
D-Gal-N
, http://www.100md.com
CCl4
D-Gal-N
正常组
—
160.6±20.8
109.4±26.8
182.8±7.5
167.3±34.7
损伤组
—
1 720.6±100.3#
1 950.9±600.8#
, http://www.100md.com
1 931.3±140.6#
2 128.1±656.2#
损伤组+BPD
200
1 550.4±200.7
1 300.7±400.2*
1 715.6±159.3**
2 156.2±750.0
损伤组+TGM
50
, 百拇医药
1 610.5±150.9
1 830.2±270.1*
1 593.7±178.1**
1 968.7±159.3
与正常组比较：#P<0.01；与损伤组比较：*P<0.05，**P<0.01
2.3 TGM预防给药对化学性肝损伤病理组织学的影响 结果表明，CCl4损伤组小鼠肝细胞广泛坏死，坏死区周围肝细胞发生不同程度的气球样变及嗜酸性变，D-Gal-N损伤组小鼠肝细胞明显浊肿，易见嗜酸性变，散在分布点状坏死灶，汇管区内有炎细胞浸润，TGM组肝细胞浊肿及嗜酸性变减轻，坏死灶减少，汇管区炎细胞浸润减轻，表明TGM和CCl4和D-Gal-N损伤所致肝脏病理组织学变化有一定程度的减轻作用。
, 百拇医药
2.4 TGM对化学性肝损伤的治疗作用 表3结果表明，TGM 50 mg.kg-1可显著降低CCl4所致血清AST的升高(P<0.01)及D-Gal-N所致血清ALT的升高(P<0.05)，表明TGM对化学性肝损伤有一定程度的治疗作用。
3 讨论
TGM是一种具有多种药理作用的中药有效成分。既往研究表明TGM具有剂量依赖性的免疫调节作用，可明显增强机体的免疫功能〔2〕，且TGM可明显减轻乙醇CCl4引起的肝损伤，具有较强的清除自由基和保护细胞作用〔3〕。本实验在此基础上采用CCl4和D-Gal-N 2种肝损伤模型，系统地研究了TGM保肝作用的药效学特点。
实验结果表明，TGM不同剂量和不同时间预防给药均能降低CCl4和D-Gal-N所致的血清ALT和AST的升高，使肝细胞变性和坏死程度减轻，表明TGM对CCl4对D-Gal-N造成的肝损伤有保护作用。其中以50 mg.kg-1 ig给药7天效果最明显，其原因可能有：(1)TGM是一种免疫调节剂，具有最适剂量以及剂量依赖性的双向作用；(2)TGM给药时间长，有可能诱导肝微粒体酶的活性增加，药效降低。另发现TGM 50 mg.kg-1 ig给药对化学性肝损伤的治疗作用不及预防给药，对已形成的膜损伤无明显效果，似可说明TGM的保肝作用可能与增加膜稳定性有关。TGM护肝作用机制可能与多个环节有关，有待进一步深入研究。
, 百拇医药
基金项目：安徽省科委八五攻关课题
作者简介：梅 俏，男，28岁，硕士，助教
参考文献
1 卫生部药政局. 新药(西药)临床前研究指导原则. 北京：人民卫生出版社，1993：92～93
2 徐叔云，沈玉先，许杜娟等. 白芍总甙和丹皮总甙对松果腺调节炎症免疫反应的影响. 中国药理学与毒理学杂志，1994；8(3)：161～165
3 戴俐明，高本波，徐叔云. 丹皮总甙肝保护作用的研究. 中国药理学通报，1994；10(1)：58～59
1998-04-29收稿，1998-12-24修回, http://www.100md.com
单位：梅俏 魏伟 丁长海 徐叔云 安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230032；许建明 熊祖应 安徽医科大学第一附属医院内科，合肥 230022
关键词：牡丹；药理学；糖苷类；药理学；四氯化碳；半乳糖；肝；病理学；肝疾病；化学诱导；疾病模型；动物；小鼠
安徽医科大学学报990203 摘要 目的 观察丹皮总甙(TGM)的抗肝炎作用。方法 采用CCl4和D-Gal-N诱导小鼠化学性肝损伤模型。结果 TGM可降低CCl4和D-Gal-N所致血清ALT、AST的升高，减轻CCl4和D-Gal-N所致肝脏变性和坏死程度，预防给药效果优于治疗给药，其中以50 mg.kg-1剂量组给药7天效果最佳。结论 TGM对化学性肝损伤有一定程度的保护作用。
, 百拇医药
自由词 化学性肝损伤；丹皮总甙
中国图书资料分类法分类号 R575； R971.6
Effects of total glucosides of mudan cortex
on chemical liver injury in mice
Mei Qiao, Wei Wei, Xu Jianming et al
(Institute of Clinical Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective To observe the effects of total glucosides of mudan cortex(TGM) on chemical liver injury. Methods Chemical liver injury model produced by CCl4 and D-Gal-N in mice was applied. Results The elevation of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) in serum produced by CCl4 and D-Gal-N were decreased by TGM, the degrees of degeneration and necrosis in liver produced by CCl4 and D-Gal-N were diminished. The effect was more apparent in the preventive groups than in the therapeutic groups. The pretreatment group with a daily ig dose of TGM (50 mg.kg-1) for 7 days showed the most effective in all groups. Conclusion TGM shows some degree of protective effects on chemical liver injury.
, 百拇医药
MeSH paeonia suffruticosa/pharmacol; glycosides/pharmacol; carbon tetrachloride; galactose; liver/pathol; liver diseases/chem induced; diseases models, animal; mice
Free words chemical liver injury; total glucosides of mudan cortex
中药丹皮具有清热凉血、活血化淤之功效，常作为肝炎的治疗药。其中的活性成分丹皮总甙(total glucosides of mudan cortex, TGM)的药理作用报道不多，为观察丹皮总甙对肝炎防治作用的药效学，采用CCl4和D-Gal-N所致化学性肝损伤模型进行研究。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 材料 TGM：由本所植化室提供；联苯双酯(biophenyldicarboxylate, BPD)：由北京协和药厂提供；CCl4：上海新中化学厂出品；D-Gal-N：重庆医科大学化学教研室提供。
1.2 动物 昆明种小鼠。体重20 g±2 g，♀♂兼用，由安徽医科大学实验动物中心提供。动物合格证号：皖医实动准字第01号。
1.3 实验分组 将小鼠随机分组，设正常溶媒〔0.1%(体积分数，下同)吐温-80〕组、损伤模型组、阳性对照药组、TGM给药组(不同剂量详见表1～3)。
1.4 模型建立〔1〕
1.4.1 预防给药 正常溶媒组和损伤模型组ig等量溶媒，阳性对照药组ig BPD 200 mg.kg-1，丹皮总甙给药组ig TGM(不同剂量)，每天1次，连续给药4，7天，未次给药后2 h，正常溶媒组ig(或ip)等容量溶媒，其余各组ig 0.1% CCl4植物油溶液10 ml.kg-1(或ip D-Gal-N生理盐水溶液800 mg.kg-1)1次，禁食16 h后处死动物，眼眶取血测ALT和AST，另取肝脏左叶进行病理组织学检查。
, http://www.100md.com
1.4.2 治疗给药 CCl4肝损伤模型组：实验开始第1，3，5，7天每天上午8：00正常溶媒组ig等容量溶媒，其余各组ig 0.1% CCl4植物油溶液10 ml.kg-11次，共4次；每天上午10：00正常溶媒组ig等容量溶媒，阳性对照药组ig BPD 200 mg.kg-1，丹皮总甙给药组ig TGM 50 mg.kg-1，连续给药7天。末次给药后16 h处死动物，眼眶取血测ALT和AST，另取肝脏左叶进行病理组织学检查。 D-Gal-N 肝损伤模型组：正常溶媒组ip生理盐水，其余各组 ip D-Gal-N溶液800 mg.kg-1 1次后，在4，8，12 h正常溶媒组ig等量溶媒，阳性对照药组ig BPD 200 mg.kg-1，丹皮总甙给药组ig TGM 50 mg.kg-1，共3次，末次给药后2 h处死动物，眼眶取血测ALT和AST，另取肝脏左叶进行病理组织学检查。
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1.5 检测方法 血清ALT、AST测定用上海荣盛试剂公司试剂盒进行测定。肝脏病理组织学检测方法：切取肝脏左叶，10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察片状坏死程度并进行分析。
1.6 数据处理 所有数据均以
±s表示，采用t检验进行统计处理。2 结果
2.1 TGM预防给药4天对化学性肝损伤的影响 表1结果表明，TGM 20，50，80 mg.kg-1可显著降低CCl4引起的血清ALT和AST的升高(P<0.01)，TGM 50，80 mg.kg-1可显著降低D-Gal-N引起的血清ALT的升高(P<0.01)，表明TGM预防给药4天对CCl4和D-Gal-N所引起的肝损伤有一定程度的保护作用。
, 百拇医药
2.2 TGM预防给药7天对化学性肝损伤的影响 表2结果表明，TGM 25，50 mg.kg-1可显著降低CCl4引起的血清ALT和AST的升高(P<0.01)，100 mg.kg-1作用不明显；TGM 25，50 mg.kg-1可显著降低D-Gal-N引起的血清ALT的升高(P<0.01)，亦可降低血清AST的升高，100 mg.kg-1作用不明显。表明TGM预防给药7天对CCl4和D-Gal-N所引起的肝损伤有一定程度的保护作用。
表1 TGM预防给药4天对化学性肝损伤的影响(n=10,
±s) 组别剂量(mg.kg-1)
, 百拇医药
ALT (King U)
ALT(King U)
CCl4
D-Gal-N
CCl4
D-Gal-N
正常组
—
171.1±31.8
243.7±9.4
193.8±12.4
197.5±33.2
, http://www.100md.com
损伤组
—
2 724.1±163.6#
2 531.3±196.9＃
1 213.8±304.6＃
2 556.9±166.2＃
损伤组+BPD
200
1 363.6±103.2**
2 137.5±117.2**
, 百拇医药
720.0±124.6**
1 920.0±830.8**
损伤组+TGM
20
1 845.5±209.1**
2 489.1±271.8
1 006.2±193.8
2 353.8±313.8
50
1 663.6±404.5**
, 百拇医药
2 259.4±92.8**
696.9±96.9**
2 030.8±526.2**
80
2 322.7±254.5*
2 282.8±150.0**
1 352.3±276.9
2 483.1±600.0
与正常组比较：#P<0.01；与损伤组比较：*P<0.05，**P<0.01表2 TGM预防给药7天对化学性肝损伤的影响(n=10,
±s), 百拇医药
组别
剂量
(mg.kg-1)
ALT(King U)
AST(King U)
CCl4
D-Gal-N
CCl4
D-Gal-N
正常组
—
, http://www.100md.com 256.8±14.0
262.5±11.8
240.0±81.2
193.8±34.2
损伤组
—
1 584.4±220.3#
2 465.6±403.1#
1 176.9±309.2#
2 215.4±830.7#
损伤组+BPD
, 百拇医药
200
692.2±103.2**
1 050.0±309.4**
710.7±166.2**
1 624.6±221.5*
损伤组+TGM
25
1 012.5±135.9**
1 651.8±384.3**
770.7±73.8**
, http://www.100md.com
1 938.5±115.4
50
928.2±206.3**
1 331.2±168.8**
720.0±110.3**
1 638.4±161.5*
100
1 580.0±209.6
2 174.3±207.5
1 073.6±270.2
, http://www.100md.com
2 283.4±241.6
与正常组比较：#P<0.01；与损伤组比较：*P<0.05，**P<0.01表3 TGM对化学性肝损伤的治疗作用(n=10,
±s) 组别剂量
(mg.kg-1)
ALT(King U)
AST(King U)
CCl4
D-Gal-N
, http://www.100md.com
CCl4
D-Gal-N
正常组
—
160.6±20.8
109.4±26.8
182.8±7.5
167.3±34.7
损伤组
—
1 720.6±100.3#
1 950.9±600.8#
, http://www.100md.com
1 931.3±140.6#
2 128.1±656.2#
损伤组+BPD
200
1 550.4±200.7
1 300.7±400.2*
1 715.6±159.3**
2 156.2±750.0
损伤组+TGM
50
, 百拇医药
1 610.5±150.9
1 830.2±270.1*
1 593.7±178.1**
1 968.7±159.3
与正常组比较：#P<0.01；与损伤组比较：*P<0.05，**P<0.01
2.3 TGM预防给药对化学性肝损伤病理组织学的影响 结果表明，CCl4损伤组小鼠肝细胞广泛坏死，坏死区周围肝细胞发生不同程度的气球样变及嗜酸性变，D-Gal-N损伤组小鼠肝细胞明显浊肿，易见嗜酸性变，散在分布点状坏死灶，汇管区内有炎细胞浸润，TGM组肝细胞浊肿及嗜酸性变减轻，坏死灶减少，汇管区炎细胞浸润减轻，表明TGM和CCl4和D-Gal-N损伤所致肝脏病理组织学变化有一定程度的减轻作用。
, 百拇医药
2.4 TGM对化学性肝损伤的治疗作用 表3结果表明，TGM 50 mg.kg-1可显著降低CCl4所致血清AST的升高(P<0.01)及D-Gal-N所致血清ALT的升高(P<0.05)，表明TGM对化学性肝损伤有一定程度的治疗作用。
3 讨论
TGM是一种具有多种药理作用的中药有效成分。既往研究表明TGM具有剂量依赖性的免疫调节作用，可明显增强机体的免疫功能〔2〕，且TGM可明显减轻乙醇CCl4引起的肝损伤，具有较强的清除自由基和保护细胞作用〔3〕。本实验在此基础上采用CCl4和D-Gal-N 2种肝损伤模型，系统地研究了TGM保肝作用的药效学特点。
实验结果表明，TGM不同剂量和不同时间预防给药均能降低CCl4和D-Gal-N所致的血清ALT和AST的升高，使肝细胞变性和坏死程度减轻，表明TGM对CCl4对D-Gal-N造成的肝损伤有保护作用。其中以50 mg.kg-1 ig给药7天效果最明显，其原因可能有：(1)TGM是一种免疫调节剂，具有最适剂量以及剂量依赖性的双向作用；(2)TGM给药时间长，有可能诱导肝微粒体酶的活性增加，药效降低。另发现TGM 50 mg.kg-1 ig给药对化学性肝损伤的治疗作用不及预防给药，对已形成的膜损伤无明显效果，似可说明TGM的保肝作用可能与增加膜稳定性有关。TGM护肝作用机制可能与多个环节有关，有待进一步深入研究。
, 百拇医药
基金项目：安徽省科委八五攻关课题
作者简介：梅 俏，男，28岁，硕士，助教
参考文献
1 卫生部药政局. 新药(西药)临床前研究指导原则. 北京：人民卫生出版社，1993：92～93
2 徐叔云，沈玉先，许杜娟等. 白芍总甙和丹皮总甙对松果腺调节炎症免疫反应的影响. 中国药理学与毒理学杂志，1994；8(3)：161～165
3 戴俐明，高本波，徐叔云. 丹皮总甙肝保护作用的研究. 中国药理学通报，1994；10(1)：58～59
1998-04-29收稿，1998-12-24修回, http://www.100md.com