助孕3号方对脾虚黄体抑制动物流产模型的作用
作者：张铭
单位：张铭(广州中医药大学92级七年制硕士班，广州 510405)
关键词：@助孕3号方/药理学；流产/中药疗法；补益脾肾；孕酮/血液；大鼠
广州中医药大学学报000117摘要：为探讨中医药防治自然流产的机理，以利血平、米非司酮(RU486)建立病证结合动物流产模型，模拟脾虚、黄体不健的状态，观察补肾健脾中药复方“助孕3号方”对该模型流产率的影响；并以四君子汤、黄体酮为对照，同时设立脾虚流产模型组、脾虚模型组、流产模型组及正常妊娠组；以血清孕激素水平、子宫蜕膜孕激素受体(PR)阳性率及子宫卵巢病理形态学变化为观察指标。结果：助孕3号组流产率低于四君子汤组、流产模型组(P<0.05)；该组孕激素水平、PR阳性率均比四君子汤组、脾虚流产模型组、流产模型组高；并对脾虚大鼠体重的减轻有改善作用。提示：“助孕3号方”是通过促进妊娠黄体和合体滋养细胞的分泌功能，维持靶细胞受体的含量及改善脾虚证候、提高整体功能而发挥效应。说明其作用是多环节、多层次的。同时表明脾肾并补法优于单纯健脾法，补肾药在防治流产方面可能起主导作用。
, 百拇医药
中图分类号：R714.21 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)01-0064-05
Effect of Zhuyun Ⅲ on Animal Models with Abortion Induced by Inhibition of Corpus Luteum
ZHANG Ming(advisors:LIANG Guozhen，LUO Songping)
(Seven-year graduate Class of Grade 92,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
Abstract:To explore the mechanism of Zhuyun Ⅲ,a herbal formula for spontaneous abortion by strengthening the spleen and supplementing the kidney,an abortion model with corpus luteum inhibition induced by reserpine and mifepristone (RU486) was used.One-hundred and four pregnant SD rats were allocated to seven groups:①reserpine+RU486+Zhuyun Ⅲ,②reserpine+RU486+sijunzitang,③reserpine+RU486+progesterone,④reserpine+RU486,⑤reserpine control,⑥RU486 control and ⑦ normal pregnant group.Different groups were observed at the same period on the level of serum progesterone(P),estradio(E2),follicle-stimulating hormone(FSH),the positive rate of decidua progesterone receptor(PR) and the pathological changes of uterus and ovaries.The results showed that the abortion rate of group ① was lower than that of group ④ and ⑥(P<0.05).The level of serum progesterone and the positive rate of PR of group ① were all higher than that of group ②,④ and ⑥.On the other hand,Zhuyun Ⅲ can also improve the weight reduction of body,spleen and ovary.The results indicate that Zhuyun Ⅲ exerts anti-abortion effect by promoting the secretion of corpus luteum and trophocytes,maintaining the content of target cells' receptor and relieving spleen-deficiency condition.It is also suggested that strengthening the spleen and kidney is better than supplementing the spleen only.
, 百拇医药
Key words:@ZHUYUN Ⅲ/pharmacology;ABORTION/TCD therapy;REINFORCING SPLEEN& KIDNEY;PROGESTERONE/blood;RATS
自然流产(简称SA)是妇产科常见病症之一，约占全部妊娠的15%～18%[1]。临床上以早期流产多见，约占SA的60%[2]，并以其反复发生的倾向威胁着妇女的健康和家庭的稳定。
现代医学认为黄体不健是SA的常见病因之一，中医则认为肾气不足，冲任不固，脾气虚弱，胎失所养是其主要病机，多辨证为脾虚或肾虚或脾肾两虚。中医药通过整体的调节作用，改善机体的内分泌和免疫功能而对SA有较好的疗效。复方“助孕3号方”由黄芪、党参、白术、菟丝子、续断等中药组成，补肾健脾并重，经临床应用近10年，已初步证实有增强免疫应答，促进黄体功能以防治SA的作用。本实验力图从激素水平和受体水平方面揭示其保胎机理，为进一步研究中医药防治自然流产提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 动物及分组 一级SD雌性大鼠104只，健康，未产，10～12周龄，体重约200～230g，随机分为7组：助孕3号组(A组)；四君子汤组(B组)；黄体酮组(C组)；脾虚流产模型组(D组)；脾虚模型组(E组)；流产模型组(F组)；正常妊娠组(G组)。
1.2 建立病证结合动物模型[3，4] 按2∶1雌雄合笼，每天清晨阴道涂片，以发现大量精子为妊娠第1天。在妊娠第1天(D1)至第10天(D10)：A、B、C、D、E5组每天肌注利血平(0.15mg/kg)以造成脾虚模型，同时A组每天灌服助孕3号水提浓缩液(4mL/kg)，B组每天灌服四君子汤水提浓缩液(4mL/kg)，C组隔天肌注黄体酮(4mg/kg)，D、E两组每天灌服生理盐水(4mL/只)；F、G两组每天灌胃生理盐水4mL/只。在妊娠第10天(D10)A、B、C、D、F5组分别加灌米非司酮(RU486)3.75mg/kg以造成流产模型，E、G两组灌服等量生理盐水。在妊娠第12天(D12)，各组大鼠均处死解剖，观察子宫变化，记录着床胚胎数和流产胚胎数，随机将一侧子宫送检测定孕激素受体(PR)阳性率(标本置液氮罐保存)，另一侧子宫及双侧卵巢用10%甲醛乙醇固定，送病理检查。各组实验动物于合笼前及灌服RU486前后，即D0、D10、D11、D12分别从后眼眶静脉丛穿刺取血，分离血清，-20℃保存，待测相关项目。
, 百拇医药
1.3 观察项目 (1)一般状态：纳食、体重、毛色形态、活动、粪便情况。(2)计算流产率。(3)血清孕激素含量测定：采用酶联免疫法检测。(4)子宫蜕膜孕激素受体阳性率测定：采用S-P免疫组化染色，测定方法按试剂盒说明书进行。参照夏雅仙[5]提出的判定标准：细胞核内见棕黄色颗粒为受体阳性，未见棕黄色颗粒为受体阴性。(5)病理检查子宫蜕膜、胚胎卵巢成熟黄体情况。
1.4 统计学方法 t检验和χ2检验。
2 结果
2.1 一般状态 脾虚组大鼠造模第5天即出现纳差、嗜卧、便软、肛门污秽等脾虚证候，造模结束后还见形体消瘦、倦怠乏力、拱背眯眼等表现。助孕3号组及四君子汤组大鼠一般状态得到改善，纳食增加。正常妊娠组大鼠一般状态良好，毛色光滑，反应灵活，大便正常。
2.2 各组大鼠造模前后体重的变化 见表1。造模后A、B、C、D、E各组体重均减轻(P<0.01)，F、G两组体重增加(P<0.05)；造模前后E组体重增值最低，A、B两组均比该组高(P<0.05～0.01)，但两组间无差异。说明利血平可使模型动物体重减轻，四君子汤和助孕3号方均能抑制虚证动物体重的减轻，且具有同等功效。
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表1 各组大鼠脾虚造模前后体重的变化(
) 组 别
N/例
m造模前/g
m前后差值/g
助孕3号组(A)
16
224.25±20.61
-27.25±17.64*
四君子汤组(B)
12
, 百拇医药
225.70±16.57
-22.75±17.04**
黄体酮组(C)
12
216.42±12.76
-36.08±11.48
脾虚流产模型组(D)
11
210.45±18.50
-23.18±16.06
脾虚模型组(E)
, 百拇医药
13
208.15±18.23
-41.69±11.82
流产模型组(F)
11
187.64±73.63
+15.91±8.50
正常妊娠组(G)
8
220.50±20.92
+23.13±6.64*
t检验：*与E组比较P<0.05，**P<0.01
, 百拇医药
2.3 各组大鼠造模前后孕酮的变化 见表2。造模前各组孕激素水平(c孕酮0)无差异，妊娠第10天各组孕激素水平(c孕酮1)上升，C组较其他组上升幅度大(P<0.01)，可能与直接注射黄体酮有关，A组孕激素水平高于D、E、F、G组(P<0.01)，B组与A组比较差异无显著性(P>0.05)，说明助孕3号方、四君子汤和黄体酮均能提高孕激素水平。使用RU486后各组孕激素水平(c孕酮2)均下降，除黄体酮组外，与正常妊娠组差异均有显著性，说明助孕3号方虽然可改善脾虚妊娠大鼠的孕激素水平，但对本研究中造成的流产仍未能最终起保胎作用。
表2 各组大鼠造模前后血清孕酮含量(c孕酮)的变化() 组 别
N/例
c孕酮0/(nmol.L-1)
, 百拇医药
c孕酮1/(nmol.L-1)
c孕酮2/(nmol.L-1)
助孕3号组(A)
14
16.60±11.88
92.88±22.97△△
22.74±21.54##
四君子汤组(B)
9
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17.01±12.05
80.15±24.23△△
20.90±31.12#
黄体酮组(C)
10
12.66±8.11
124.85±7.34**
34.58±37.44
脾虚流产模型组(D)
10
16.14±10.19
, 百拇医药
62.45±43.70△△**
22.93±26.90##
脾虚模型组(E)
11
12.84±7.40
61.65±22.58△△**
28.07±29.83#
流产模型组(F)
10
23.20±22.92
, 百拇医药 53.62±34.13△△**
16.28±10.30##
正常妊娠组(G)
9
16.46±8.72
62.08±16.28△△**
55.39±19.31
t检验：**与A组比较P<0.01；△与C组比较P<0.05，△△P<0.01；#与G组比较P<0.05，##P<0.01
2.4 各组妊娠大鼠流产率、孕激素受体及成熟黄体数目比较 见表3。各造模组流产率均比正常妊娠组高(P<0.01)，但A、C、E组均比F组低(P<0.05～0.01)；造模后F组孕激素受体阳性率最低(0%)，与其余各组比较差异有显著性(P<0.01)，A、B组均比C组低(P<0.01)，但两组间无差异，提示助孕3号方能使RU486与孕激素受体的结合率降低，维持靶细胞PR的含量，在受体水平促进卵巢黄体功能，而四君子汤在这方面作用则不及助孕3号方；A组卵巢成熟黄体数比E、F两组多(P<0.01)，说明助孕3号方能促进妊娠黄体成熟。
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表3 各组妊娠大鼠流产率(p流产)、孕激素受体
阳性率(p阳性)及成熟黄体数(N成熟)比较 组 别
p流产/%
p阳性/%
N成熟/个
助孕3号组(A)
70.00##*
50.00**△△
2.688±1.621
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四君子汤组(B)
91.67##▲
37.50**△△
1.333±1.614▲
黄体酮组(C)
50.00##**
75.00**
1.692±1.494
脾虚流产组(D)
86.30##
, 百拇医药
37.50**
1.833±1.697
脾虚模型组(E)
53.85##**
75.00**
0.923±1.038▲▲
流产模型组(F)
83.30##▲
0.00
0.909±1.221▲▲
, 百拇医药
正常妊娠组(G)
0.00
100.00
1.111±1.537
χ2检验：▲与A组比较P<0.05，▲▲P<0.01；△与C组比P<0.05，△△P<0.01；*与F组比P<0.05，**P<0.01；#与G组比P<0.05，##P<0.012.5 子宫、卵巢病理形态学改变 肉眼观察：正常非妊娠大鼠子宫细小，呈淡红色；正常妊娠子宫粗大如串珠状，呈粉红色，解剖后见胚胎完好；部分流产子宫宫腔内见瘀血，胚胎不完整；完全流产子宫呈竹节样改变，宫腔内未见胚胎或明显瘀血。
光镜下观察：(1)子宫：正常妊娠组大鼠子宫蜕膜完整，细胞大，胞浆丰富，胚胎发育正常；流产模型组子宫蜕膜组织坏死出血，胚胎完全流产；助孕3号组和黄体酮组部分胚胎发育正常或部分流产。(2)卵巢：正常妊娠组大鼠卵巢黄体直径大，颗粒细胞排列均匀，胞浆丰富；脾虚模型组黄体直径小，细胞排列疏松，胞浆少；助孕3号组卵巢黄体直径、颗粒细胞大小与正常妊娠组无差别(图1)。
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图1 各组大鼠光镜下子宫、黄体比较
A、正常妊娠组大鼠子宫(HE40×)：蜕膜组织完整，未见出血，胚胎发育正常；B、流产模型组大鼠子宫(HE40×)：蜕膜组织坏死出血，胚胎完全流产；C、黄体酮对照组大鼠子宫(HE40×)：部分蜕膜组织坏死出血，胚胎部分流产；D、助孕3号组大鼠子宫(HE40×)：蜕膜组织少量出血坏死，胚胎发育尚好；E、助孕3号组大鼠黄体(HE40×)：黄体直径大，细胞排列均匀，颜色深；F、助孕3号组大鼠黄体(HE100×)：颗粒细胞体积大，胞浆丰富；G、脾虚模型组大鼠黄体(HE40×)：黄体直径小，细胞排列疏松，颜色淡；H、脾虚模型组大鼠黄体(HE100×)：颗粒细胞体积小，胞浆少；I、正常妊娠组大鼠黄体(HE40×)：黄体直径大，细胞排列均匀，颜色深；J、正常妊娠组大鼠黄体(HE100×)：颗粒细胞体积大，胞浆丰富；K、激素受体阳性(DAB染色400×)：细胞核内见棕黄色颗粒；L、激素受体阴性(DAB染色400×)：细胞核内为无色颗粒
, 百拇医药 3 讨论
3.1 关于病证结合动物流产模型 利血平脾虚动物模型是目前国内常用的一种方法,其原理是利血平可以耗竭动物体内去甲肾上腺素，降低脑内和外周单胺类介质含量，使交感肾上腺素能神经功能减弱，副交感神经功能偏亢，导致胃肠功能紊乱而出现中医脾虚证的各种症状。本实验表明，实验大鼠在造模第5天起即出现纳差、嗜卧、四肢乏力、形体消瘦、便软等症，符合中医“脾胃之虚，食无味，不嗜食，食不消”，“病脾则怠惰嗜卧，四肢不收”，“脾虚则肌肉削”等理论。RU486是孕酮受体(PR)拮抗剂，它通过与孕激素受体高亲和力结合而阻断孕激素发挥生理作用，临床上用于终止妊娠。并能抑制孕激素受体基因的转录，减少蜕膜受体的含量[6]，继发性引起孕酮作用下降，与黄体不健的自然流产过程相同。本实验的流产对照组在使用RU48624h后，多数出现阴道流血，解剖后见宫腔内瘀血，胚胎死亡或完全流产，流产率达83.3%，孕激素水平急剧下降。说明用RU486建立黄体功能不全流产模型是成功的。可见用利血平和米非司酮建立脾虚黄体功能抑制病证结合动物流产模型是成功的。
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3.2 助孕3号方防治SA的机理 助孕3号方由黄芪、党参、白术、菟丝子、续断等8味中药组成。黄芪味甘，补中益气健脾；人参味甘微苦，具有强壮补益的作用；白术味苦甘，补气健脾安胎；菟丝子味辛甘平，入肝肾经，平补肾之阴阳，固精益气以培本；续断味苦辛，补肝益肾安胎；诸药合用具有补肾健脾，固气养血，止血安胎之效，又有补肾培脾，先后天同治，以达到填精补脾益血助孕之功。在临床研究中，运用该方治疗反复自然流产患者，妊娠成功率达到90%以上[2]。
本实验提示，助孕3号组的流产率低于脾虚流产模型组和流产模型组。其作用机理可能是：改善脾虚证候，提高整体功能；促使孕激素分泌，维持孕卵发育；维持子宫蜕膜孕激素受体的含量；促进卵巢黄体成熟，改善黄体功能。说明助孕3号方的作用机理是多环节、多层次的。但由于RU486对孕酮与PR的抑制作用较强，在本实验中A、C组的流产率仍显著高于G组，提示RU486流产模型仍需在用药剂量方面进一步完善。
3.3 脾虚、肾虚与SA的关系探讨 肾主藏精，为水火之宅，乃人体生长、发育、生殖之本；脾主运化，为后天之本，气血生化之源。胎元之长养，须由先天之肾气与后天之脾气相互协调，才无殒堕之虞。若肾虚精亏或脾虚血少均可致胎元不固而堕。故肾虚不固，脾失摄养为SA的发病关键。
, 百拇医药
脾与肾在生理上是先后天的关系，两者相互资助，相互促进。在病理上亦相互影响，互为因果，脾虚及肾，反之亦然，终至脾肾两虚。因此，补肾须兼顾健脾，使血气旺盛和调，精髓充足。 安胎主要在于脾肾，肾为先天之本，肾虚则根怯，脾为后天之本，脾虚而本薄。故应脾肾合治，从先天以固胎元，从后天以养胎体，使肾与脾，先天与后天相互支持，相互促进，以巩固胎元。
现代研究表明，肾与性腺密切相关。中医理论中的“肾—冲任—天癸—胞宫”与“下丘脑—垂体—卵巢轴”功能极为相似，益气补肾药可能作用于这一系统，调整该轴的功能而发挥作用。本实验结果显示四君子汤组在脾虚造模阶段具有提高孕酮水平的作用，但在RU486造模后，该组PR阳性率低，而流产率明显高于助孕3号方组，提示四君子汤在对抗RU486的黄体抑制作用方面未见明显作用，是否因未做量效关系研究，而与剂量不足有关，亦未排除实验中的某些误差。但初步证实脾肾并补优于单纯健脾，补肾药在防治流产方面可能起主导作用。确切机理尚待研究。
基金项目：国家中医药管理局资助课题，编号97Z078
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作者简介：张铭，女，1973年出生，硕士生；
参考文献：
[1]王淑贞.实用妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，1985
[2]罗颂平，张玉珍，梁国珍，等.自然流产的免疫性因素与中医药治疗[J].中国医药学报，1996，11(4)：27～29
[3]李小球.补肾健脾中药对妊娠大鼠孕激素及其受体的影响[J].广州中医药大学学报，1998，15(3)：208
[4]周英.脾虚与肾虚雌性大鼠生育能力的实验观察[J].广州中医药大学学报，1998，15(3)：195
[5]夏雅仙，周馥贞，黄荷凤，等.克罗米酚对子宫内膜雌、孕激素受体的影响[J].中华妇产科杂志，1996，31(10)：606
[6]周剑萍，张俊慧，刘银坤，等.米非司酮对人蜕膜及绒毛糖脂及雌孕激素受体的影响[J].生殖与避孕，1996，16(5)：357
收稿日期：1999-09-27, http://www.100md.com
单位：张铭(广州中医药大学92级七年制硕士班，广州 510405)
关键词：@助孕3号方/药理学；流产/中药疗法；补益脾肾；孕酮/血液；大鼠
广州中医药大学学报000117摘要：为探讨中医药防治自然流产的机理，以利血平、米非司酮(RU486)建立病证结合动物流产模型，模拟脾虚、黄体不健的状态，观察补肾健脾中药复方“助孕3号方”对该模型流产率的影响；并以四君子汤、黄体酮为对照，同时设立脾虚流产模型组、脾虚模型组、流产模型组及正常妊娠组；以血清孕激素水平、子宫蜕膜孕激素受体(PR)阳性率及子宫卵巢病理形态学变化为观察指标。结果：助孕3号组流产率低于四君子汤组、流产模型组(P<0.05)；该组孕激素水平、PR阳性率均比四君子汤组、脾虚流产模型组、流产模型组高；并对脾虚大鼠体重的减轻有改善作用。提示：“助孕3号方”是通过促进妊娠黄体和合体滋养细胞的分泌功能，维持靶细胞受体的含量及改善脾虚证候、提高整体功能而发挥效应。说明其作用是多环节、多层次的。同时表明脾肾并补法优于单纯健脾法，补肾药在防治流产方面可能起主导作用。
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中图分类号：R714.21 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)01-0064-05
Effect of Zhuyun Ⅲ on Animal Models with Abortion Induced by Inhibition of Corpus Luteum
ZHANG Ming(advisors:LIANG Guozhen，LUO Songping)
(Seven-year graduate Class of Grade 92,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
Abstract:To explore the mechanism of Zhuyun Ⅲ,a herbal formula for spontaneous abortion by strengthening the spleen and supplementing the kidney,an abortion model with corpus luteum inhibition induced by reserpine and mifepristone (RU486) was used.One-hundred and four pregnant SD rats were allocated to seven groups:①reserpine+RU486+Zhuyun Ⅲ,②reserpine+RU486+sijunzitang,③reserpine+RU486+progesterone,④reserpine+RU486,⑤reserpine control,⑥RU486 control and ⑦ normal pregnant group.Different groups were observed at the same period on the level of serum progesterone(P),estradio(E2),follicle-stimulating hormone(FSH),the positive rate of decidua progesterone receptor(PR) and the pathological changes of uterus and ovaries.The results showed that the abortion rate of group ① was lower than that of group ④ and ⑥(P<0.05).The level of serum progesterone and the positive rate of PR of group ① were all higher than that of group ②,④ and ⑥.On the other hand,Zhuyun Ⅲ can also improve the weight reduction of body,spleen and ovary.The results indicate that Zhuyun Ⅲ exerts anti-abortion effect by promoting the secretion of corpus luteum and trophocytes,maintaining the content of target cells' receptor and relieving spleen-deficiency condition.It is also suggested that strengthening the spleen and kidney is better than supplementing the spleen only.
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Key words:@ZHUYUN Ⅲ/pharmacology;ABORTION/TCD therapy;REINFORCING SPLEEN& KIDNEY;PROGESTERONE/blood;RATS
自然流产(简称SA)是妇产科常见病症之一，约占全部妊娠的15%～18%[1]。临床上以早期流产多见，约占SA的60%[2]，并以其反复发生的倾向威胁着妇女的健康和家庭的稳定。
现代医学认为黄体不健是SA的常见病因之一，中医则认为肾气不足，冲任不固，脾气虚弱，胎失所养是其主要病机，多辨证为脾虚或肾虚或脾肾两虚。中医药通过整体的调节作用，改善机体的内分泌和免疫功能而对SA有较好的疗效。复方“助孕3号方”由黄芪、党参、白术、菟丝子、续断等中药组成，补肾健脾并重，经临床应用近10年，已初步证实有增强免疫应答，促进黄体功能以防治SA的作用。本实验力图从激素水平和受体水平方面揭示其保胎机理，为进一步研究中医药防治自然流产提供理论依据。
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1 材料与方法
1.1 动物及分组 一级SD雌性大鼠104只，健康，未产，10～12周龄，体重约200～230g，随机分为7组：助孕3号组(A组)；四君子汤组(B组)；黄体酮组(C组)；脾虚流产模型组(D组)；脾虚模型组(E组)；流产模型组(F组)；正常妊娠组(G组)。
1.2 建立病证结合动物模型[3，4] 按2∶1雌雄合笼，每天清晨阴道涂片，以发现大量精子为妊娠第1天。在妊娠第1天(D1)至第10天(D10)：A、B、C、D、E5组每天肌注利血平(0.15mg/kg)以造成脾虚模型，同时A组每天灌服助孕3号水提浓缩液(4mL/kg)，B组每天灌服四君子汤水提浓缩液(4mL/kg)，C组隔天肌注黄体酮(4mg/kg)，D、E两组每天灌服生理盐水(4mL/只)；F、G两组每天灌胃生理盐水4mL/只。在妊娠第10天(D10)A、B、C、D、F5组分别加灌米非司酮(RU486)3.75mg/kg以造成流产模型，E、G两组灌服等量生理盐水。在妊娠第12天(D12)，各组大鼠均处死解剖，观察子宫变化，记录着床胚胎数和流产胚胎数，随机将一侧子宫送检测定孕激素受体(PR)阳性率(标本置液氮罐保存)，另一侧子宫及双侧卵巢用10%甲醛乙醇固定，送病理检查。各组实验动物于合笼前及灌服RU486前后，即D0、D10、D11、D12分别从后眼眶静脉丛穿刺取血，分离血清，-20℃保存，待测相关项目。
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1.3 观察项目 (1)一般状态：纳食、体重、毛色形态、活动、粪便情况。(2)计算流产率。(3)血清孕激素含量测定：采用酶联免疫法检测。(4)子宫蜕膜孕激素受体阳性率测定：采用S-P免疫组化染色，测定方法按试剂盒说明书进行。参照夏雅仙[5]提出的判定标准：细胞核内见棕黄色颗粒为受体阳性，未见棕黄色颗粒为受体阴性。(5)病理检查子宫蜕膜、胚胎卵巢成熟黄体情况。
1.4 统计学方法 t检验和χ2检验。
2 结果
2.1 一般状态 脾虚组大鼠造模第5天即出现纳差、嗜卧、便软、肛门污秽等脾虚证候，造模结束后还见形体消瘦、倦怠乏力、拱背眯眼等表现。助孕3号组及四君子汤组大鼠一般状态得到改善，纳食增加。正常妊娠组大鼠一般状态良好，毛色光滑，反应灵活，大便正常。
2.2 各组大鼠造模前后体重的变化 见表1。造模后A、B、C、D、E各组体重均减轻(P<0.01)，F、G两组体重增加(P<0.05)；造模前后E组体重增值最低，A、B两组均比该组高(P<0.05～0.01)，但两组间无差异。说明利血平可使模型动物体重减轻，四君子汤和助孕3号方均能抑制虚证动物体重的减轻，且具有同等功效。
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表1 各组大鼠脾虚造模前后体重的变化(
) 组 别N/例
m造模前/g
m前后差值/g
助孕3号组(A)
16
224.25±20.61
-27.25±17.64*
四君子汤组(B)
12
, 百拇医药
225.70±16.57
-22.75±17.04**
黄体酮组(C)
12
216.42±12.76
-36.08±11.48
脾虚流产模型组(D)
11
210.45±18.50
-23.18±16.06
脾虚模型组(E)
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13
208.15±18.23
-41.69±11.82
流产模型组(F)
11
187.64±73.63
+15.91±8.50
正常妊娠组(G)
8
220.50±20.92
+23.13±6.64*
t检验：*与E组比较P<0.05，**P<0.01
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2.3 各组大鼠造模前后孕酮的变化 见表2。造模前各组孕激素水平(c孕酮0)无差异，妊娠第10天各组孕激素水平(c孕酮1)上升，C组较其他组上升幅度大(P<0.01)，可能与直接注射黄体酮有关，A组孕激素水平高于D、E、F、G组(P<0.01)，B组与A组比较差异无显著性(P>0.05)，说明助孕3号方、四君子汤和黄体酮均能提高孕激素水平。使用RU486后各组孕激素水平(c孕酮2)均下降，除黄体酮组外，与正常妊娠组差异均有显著性，说明助孕3号方虽然可改善脾虚妊娠大鼠的孕激素水平，但对本研究中造成的流产仍未能最终起保胎作用。
表2 各组大鼠造模前后血清孕酮含量(c孕酮)的变化(
) 组 别N/例
c孕酮0/(nmol.L-1)
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c孕酮1/(nmol.L-1)
c孕酮2/(nmol.L-1)
助孕3号组(A)
14
16.60±11.88
92.88±22.97△△
22.74±21.54##
四君子汤组(B)
9
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17.01±12.05
80.15±24.23△△
20.90±31.12#
黄体酮组(C)
10
12.66±8.11
124.85±7.34**
34.58±37.44
脾虚流产模型组(D)
10
16.14±10.19
, 百拇医药
62.45±43.70△△**
22.93±26.90##
脾虚模型组(E)
11
12.84±7.40
61.65±22.58△△**
28.07±29.83#
流产模型组(F)
10
23.20±22.92
, 百拇医药 53.62±34.13△△**
16.28±10.30##
正常妊娠组(G)
9
16.46±8.72
62.08±16.28△△**
55.39±19.31
t检验：**与A组比较P<0.01；△与C组比较P<0.05，△△P<0.01；#与G组比较P<0.05，##P<0.01
2.4 各组妊娠大鼠流产率、孕激素受体及成熟黄体数目比较 见表3。各造模组流产率均比正常妊娠组高(P<0.01)，但A、C、E组均比F组低(P<0.05～0.01)；造模后F组孕激素受体阳性率最低(0%)，与其余各组比较差异有显著性(P<0.01)，A、B组均比C组低(P<0.01)，但两组间无差异，提示助孕3号方能使RU486与孕激素受体的结合率降低，维持靶细胞PR的含量，在受体水平促进卵巢黄体功能，而四君子汤在这方面作用则不及助孕3号方；A组卵巢成熟黄体数比E、F两组多(P<0.01)，说明助孕3号方能促进妊娠黄体成熟。
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表3 各组妊娠大鼠流产率(p流产)、孕激素受体
阳性率(p阳性)及成熟黄体数(N成熟)比较 组 别
p流产/%
p阳性/%
N成熟/个
助孕3号组(A)
70.00##*
50.00**△△
2.688±1.621
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四君子汤组(B)
91.67##▲
37.50**△△
1.333±1.614▲
黄体酮组(C)
50.00##**
75.00**
1.692±1.494
脾虚流产组(D)
86.30##
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37.50**
1.833±1.697
脾虚模型组(E)
53.85##**
75.00**
0.923±1.038▲▲
流产模型组(F)
83.30##▲
0.00
0.909±1.221▲▲
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正常妊娠组(G)
0.00
100.00
1.111±1.537
χ2检验：▲与A组比较P<0.05，▲▲P<0.01；△与C组比P<0.05，△△P<0.01；*与F组比P<0.05，**P<0.01；#与G组比P<0.05，##P<0.012.5 子宫、卵巢病理形态学改变 肉眼观察：正常非妊娠大鼠子宫细小，呈淡红色；正常妊娠子宫粗大如串珠状，呈粉红色，解剖后见胚胎完好；部分流产子宫宫腔内见瘀血，胚胎不完整；完全流产子宫呈竹节样改变，宫腔内未见胚胎或明显瘀血。
光镜下观察：(1)子宫：正常妊娠组大鼠子宫蜕膜完整，细胞大，胞浆丰富，胚胎发育正常；流产模型组子宫蜕膜组织坏死出血，胚胎完全流产；助孕3号组和黄体酮组部分胚胎发育正常或部分流产。(2)卵巢：正常妊娠组大鼠卵巢黄体直径大，颗粒细胞排列均匀，胞浆丰富；脾虚模型组黄体直径小，细胞排列疏松，胞浆少；助孕3号组卵巢黄体直径、颗粒细胞大小与正常妊娠组无差别(图1)。
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图1 各组大鼠光镜下子宫、黄体比较
A、正常妊娠组大鼠子宫(HE40×)：蜕膜组织完整，未见出血，胚胎发育正常；B、流产模型组大鼠子宫(HE40×)：蜕膜组织坏死出血，胚胎完全流产；C、黄体酮对照组大鼠子宫(HE40×)：部分蜕膜组织坏死出血，胚胎部分流产；D、助孕3号组大鼠子宫(HE40×)：蜕膜组织少量出血坏死，胚胎发育尚好；E、助孕3号组大鼠黄体(HE40×)：黄体直径大，细胞排列均匀，颜色深；F、助孕3号组大鼠黄体(HE100×)：颗粒细胞体积大，胞浆丰富；G、脾虚模型组大鼠黄体(HE40×)：黄体直径小，细胞排列疏松，颜色淡；H、脾虚模型组大鼠黄体(HE100×)：颗粒细胞体积小，胞浆少；I、正常妊娠组大鼠黄体(HE40×)：黄体直径大，细胞排列均匀，颜色深；J、正常妊娠组大鼠黄体(HE100×)：颗粒细胞体积大，胞浆丰富；K、激素受体阳性(DAB染色400×)：细胞核内见棕黄色颗粒；L、激素受体阴性(DAB染色400×)：细胞核内为无色颗粒
, 百拇医药 3 讨论
3.1 关于病证结合动物流产模型 利血平脾虚动物模型是目前国内常用的一种方法,其原理是利血平可以耗竭动物体内去甲肾上腺素，降低脑内和外周单胺类介质含量，使交感肾上腺素能神经功能减弱，副交感神经功能偏亢，导致胃肠功能紊乱而出现中医脾虚证的各种症状。本实验表明，实验大鼠在造模第5天起即出现纳差、嗜卧、四肢乏力、形体消瘦、便软等症，符合中医“脾胃之虚，食无味，不嗜食，食不消”，“病脾则怠惰嗜卧，四肢不收”，“脾虚则肌肉削”等理论。RU486是孕酮受体(PR)拮抗剂，它通过与孕激素受体高亲和力结合而阻断孕激素发挥生理作用，临床上用于终止妊娠。并能抑制孕激素受体基因的转录，减少蜕膜受体的含量[6]，继发性引起孕酮作用下降，与黄体不健的自然流产过程相同。本实验的流产对照组在使用RU48624h后，多数出现阴道流血，解剖后见宫腔内瘀血，胚胎死亡或完全流产，流产率达83.3%，孕激素水平急剧下降。说明用RU486建立黄体功能不全流产模型是成功的。可见用利血平和米非司酮建立脾虚黄体功能抑制病证结合动物流产模型是成功的。
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3.2 助孕3号方防治SA的机理 助孕3号方由黄芪、党参、白术、菟丝子、续断等8味中药组成。黄芪味甘，补中益气健脾；人参味甘微苦，具有强壮补益的作用；白术味苦甘，补气健脾安胎；菟丝子味辛甘平，入肝肾经，平补肾之阴阳，固精益气以培本；续断味苦辛，补肝益肾安胎；诸药合用具有补肾健脾，固气养血，止血安胎之效，又有补肾培脾，先后天同治，以达到填精补脾益血助孕之功。在临床研究中，运用该方治疗反复自然流产患者，妊娠成功率达到90%以上[2]。
本实验提示，助孕3号组的流产率低于脾虚流产模型组和流产模型组。其作用机理可能是：改善脾虚证候，提高整体功能；促使孕激素分泌，维持孕卵发育；维持子宫蜕膜孕激素受体的含量；促进卵巢黄体成熟，改善黄体功能。说明助孕3号方的作用机理是多环节、多层次的。但由于RU486对孕酮与PR的抑制作用较强，在本实验中A、C组的流产率仍显著高于G组，提示RU486流产模型仍需在用药剂量方面进一步完善。
3.3 脾虚、肾虚与SA的关系探讨 肾主藏精，为水火之宅，乃人体生长、发育、生殖之本；脾主运化，为后天之本，气血生化之源。胎元之长养，须由先天之肾气与后天之脾气相互协调，才无殒堕之虞。若肾虚精亏或脾虚血少均可致胎元不固而堕。故肾虚不固，脾失摄养为SA的发病关键。
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脾与肾在生理上是先后天的关系，两者相互资助，相互促进。在病理上亦相互影响，互为因果，脾虚及肾，反之亦然，终至脾肾两虚。因此，补肾须兼顾健脾，使血气旺盛和调，精髓充足。 安胎主要在于脾肾，肾为先天之本，肾虚则根怯，脾为后天之本，脾虚而本薄。故应脾肾合治，从先天以固胎元，从后天以养胎体，使肾与脾，先天与后天相互支持，相互促进，以巩固胎元。
现代研究表明，肾与性腺密切相关。中医理论中的“肾—冲任—天癸—胞宫”与“下丘脑—垂体—卵巢轴”功能极为相似，益气补肾药可能作用于这一系统，调整该轴的功能而发挥作用。本实验结果显示四君子汤组在脾虚造模阶段具有提高孕酮水平的作用，但在RU486造模后，该组PR阳性率低，而流产率明显高于助孕3号方组，提示四君子汤在对抗RU486的黄体抑制作用方面未见明显作用，是否因未做量效关系研究，而与剂量不足有关，亦未排除实验中的某些误差。但初步证实脾肾并补优于单纯健脾，补肾药在防治流产方面可能起主导作用。确切机理尚待研究。
基金项目：国家中医药管理局资助课题，编号97Z078
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作者简介：张铭，女，1973年出生，硕士生；
参考文献：
[1]王淑贞.实用妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，1985
[2]罗颂平，张玉珍，梁国珍，等.自然流产的免疫性因素与中医药治疗[J].中国医药学报，1996，11(4)：27～29
[3]李小球.补肾健脾中药对妊娠大鼠孕激素及其受体的影响[J].广州中医药大学学报，1998，15(3)：208
[4]周英.脾虚与肾虚雌性大鼠生育能力的实验观察[J].广州中医药大学学报，1998，15(3)：195
[5]夏雅仙，周馥贞，黄荷凤，等.克罗米酚对子宫内膜雌、孕激素受体的影响[J].中华妇产科杂志，1996，31(10)：606
[6]周剑萍，张俊慧，刘银坤，等.米非司酮对人蜕膜及绒毛糖脂及雌孕激素受体的影响[J].生殖与避孕，1996，16(5)：357
收稿日期：1999-09-27, http://www.100md.com