CCK-8抗内毒素所致低血管反应性及其机理初探*
作者：李淑瑾 王殿华 凌亦凌 谷振勇 孟爱宏
单位：河北医科大学基础医学院病理生理学研究室(石家庄050011)
关键词：缩胆囊素类；代谢；内毒素类；代谢
河北医科大学学报990315 中图号 R332.3
内毒素休克(endotoxic shock，ES)是临床常见的危重病症之一，其病死率极高，一直受到国内外医学界的高度重视。内毒素的主要致毒成分脂多糖(lipopolysaccharide，LPS) 及其诱生的各种细胞因子诱导诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS) 的表达，使NO超量生成，这是导致低血管反应性的主要因素。
胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK) 是一种在体内广泛分布的小分子肽类物质，具有重要的生理功能。已有实验证实8肽胆囊收缩素(CCK-8)具有抗失血性休克和ES的作用，可使ES大鼠的血压升高，但其机制尚未明确。本实验应用内毒素孵育离体兔胸主动脉的方法，探讨CCK-8 能否对抗内毒素引起的低血管反应性及其可能的作用机理。
, 百拇医药
1 材料和方法
实验所用E.coli LPS、CCK-8、iNOS抑制剂氨基胍(AG)、环氧酶抑制剂消炎痛、新福林(PE)均为Sigma公司产品，L-精氨酸(L-Arg)由中国医科院微生物研究室提供。
制备兔胸主动脉环，将血管环按以下分组置于RPMI-1640培养液中(2个环/ml)37 ℃孵育14 h。实验分组:①对照组(n=9);②LPS组(n=10) ，LPS 100 μg/ml;③LPS+CCK组(n=8),LPS 100 μg/ml及CCK-8 1 μg/ml;④CCK 组(n=7),CCK-8 1 μ g/ml 。将孵育后的血管环悬挂于盛有 Krebs- Ringer-Bicarbonate(KRB)液的浴槽中，浴液温度保持37 ℃，持续通以混合气(V(O2)+V(CO2)=95%+5%)。给血管环施加4 g的前负荷，平衡1 h后，用PE(10-6 mol/L)检测血管环的反应性，待血管环的反应性稳定后，观察:①血管环对PE(10-6 mol/L)的收缩反应;②血管环对PE(10-8～10-5 mol/L)的累积浓度收缩反应;③用10-6 mol/L PE预收缩后，加入NOS的底物L-Arg(10-3 mol/L)，观察血管张力的变化;④用iNOS抑制剂AG(10-4 mol/L)预孵育15 min后血管环对PE(10-6 mol/L)反应性。通过张力传感器连接计算机记录系统记录张力变化。数据用均数±标准误(
±
)表示，其中收缩反应以干重时克.张力/毫克(g.t/mg)为单位，舒张反应以舒张后血管张力占舒张前张力的百分比表示。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 CCK-8对LPS所致主动脉低血管反应性的影响:LPS组血管环对PE的收缩反应性较对照组明显降低(在PE为10-6 mol/L时，0.72±0.07 vs 1.71±0.06 g.t/mg，P<0.01),剂量-反应曲线右移;LPS+CCK组较LPS组明显增加( PE为10-6 mol/L时，0.99±0.09 vs 0.72±0.07 g.t/mg，P<0.05),剂量- 反应曲线左移，CCK组较对照组无明显改变。
2.2 NO对CCK-8抗LPS所致低血管反应性的作用:对照组及CCK组预收缩血管环对L-Arg(10-3 mol/L)表现为轻微舒张反应(81.68±4.99) %和(87.45±4.21) %，LPS组及LPS+CCK组的舒张反应明显加强(39.62±2.26) %和(48.05±7.09) %，与对照组相比，均为P<0.01，LPS+CCK组稍弱于LPS组，但无统计学意义。对照组、CCK组在AG孵育前后收缩性均无明显改变(对照组:1.60±0.06 vs 1.60±0.08 g.t/mg,CCK组:1.45±0.11 vs 1.47±0.12 g.t/mg) ，而LPS组和LPS+CCK组在孵育后比孵育前其收缩性分别提高了61.54 %和29.17 %(LPS组:0.65±0.08 vs 1.05±0.08 g.t/mg,P<0.01;LPS+CCK组: 0.96±0.04 vs 1.24±0.08 g.t/mg,P<0.05)。LPS组血管环经AG孵育后对PE的反应性较LPS+CCK组无明显差异。
, http://www.100md.com
3 讨 论
本实验结果表明，CCK-8能够部分对抗内毒素导致的主动脉低血管反应，其机理可能与降低NO的生成量有关。现已证实iNOS诱生大量NO是内毒素导致低血管反应性的一个重要因素。该实验发现iNOS抑制剂AG能部分逆转LPS所致的低血管反应性，且与LPS+CCK组血管环对PE 的收缩反应性相比无明显差异，提示CCK-8可能通过抑制iNOS的诱生发挥保护作用。但LPS+CCK组经AG孵育后血管环的收缩反应仍能提高，并且预收缩后对L-Arg 也产生较大的舒张反应，表明CCK-8对LPS诱生iNOS的抑制作用是不完全性的。因此，可以推测，CCK-8可能通过对iNOS的部分抑制作用对抗内毒素诱导的低血管反应性，而利于血压回升，逆转休克，其具体的作用环节有待进一步研究。
* 国家自然科学基金资助课题(No.39570304)
(1999-03-05 收稿), 百拇医药
单位：河北医科大学基础医学院病理生理学研究室(石家庄050011)
关键词：缩胆囊素类；代谢；内毒素类；代谢
河北医科大学学报990315 中图号 R332.3
内毒素休克(endotoxic shock，ES)是临床常见的危重病症之一，其病死率极高，一直受到国内外医学界的高度重视。内毒素的主要致毒成分脂多糖(lipopolysaccharide，LPS) 及其诱生的各种细胞因子诱导诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS) 的表达，使NO超量生成，这是导致低血管反应性的主要因素。
胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK) 是一种在体内广泛分布的小分子肽类物质，具有重要的生理功能。已有实验证实8肽胆囊收缩素(CCK-8)具有抗失血性休克和ES的作用，可使ES大鼠的血压升高，但其机制尚未明确。本实验应用内毒素孵育离体兔胸主动脉的方法，探讨CCK-8 能否对抗内毒素引起的低血管反应性及其可能的作用机理。
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1 材料和方法
实验所用E.coli LPS、CCK-8、iNOS抑制剂氨基胍(AG)、环氧酶抑制剂消炎痛、新福林(PE)均为Sigma公司产品，L-精氨酸(L-Arg)由中国医科院微生物研究室提供。
制备兔胸主动脉环，将血管环按以下分组置于RPMI-1640培养液中(2个环/ml)37 ℃孵育14 h。实验分组:①对照组(n=9);②LPS组(n=10) ，LPS 100 μg/ml;③LPS+CCK组(n=8),LPS 100 μg/ml及CCK-8 1 μg/ml;④CCK 组(n=7),CCK-8 1 μ g/ml 。将孵育后的血管环悬挂于盛有 Krebs- Ringer-Bicarbonate(KRB)液的浴槽中，浴液温度保持37 ℃，持续通以混合气(V(O2)+V(CO2)=95%+5%)。给血管环施加4 g的前负荷，平衡1 h后，用PE(10-6 mol/L)检测血管环的反应性，待血管环的反应性稳定后，观察:①血管环对PE(10-6 mol/L)的收缩反应;②血管环对PE(10-8～10-5 mol/L)的累积浓度收缩反应;③用10-6 mol/L PE预收缩后，加入NOS的底物L-Arg(10-3 mol/L)，观察血管张力的变化;④用iNOS抑制剂AG(10-4 mol/L)预孵育15 min后血管环对PE(10-6 mol/L)反应性。通过张力传感器连接计算机记录系统记录张力变化。数据用均数±标准误(
±)表示，其中收缩反应以干重时克.张力/毫克(g.t/mg)为单位，舒张反应以舒张后血管张力占舒张前张力的百分比表示。, 百拇医药
2 结 果
2.1 CCK-8对LPS所致主动脉低血管反应性的影响:LPS组血管环对PE的收缩反应性较对照组明显降低(在PE为10-6 mol/L时，0.72±0.07 vs 1.71±0.06 g.t/mg，P<0.01),剂量-反应曲线右移;LPS+CCK组较LPS组明显增加( PE为10-6 mol/L时，0.99±0.09 vs 0.72±0.07 g.t/mg，P<0.05),剂量- 反应曲线左移，CCK组较对照组无明显改变。
2.2 NO对CCK-8抗LPS所致低血管反应性的作用:对照组及CCK组预收缩血管环对L-Arg(10-3 mol/L)表现为轻微舒张反应(81.68±4.99) %和(87.45±4.21) %，LPS组及LPS+CCK组的舒张反应明显加强(39.62±2.26) %和(48.05±7.09) %，与对照组相比，均为P<0.01，LPS+CCK组稍弱于LPS组，但无统计学意义。对照组、CCK组在AG孵育前后收缩性均无明显改变(对照组:1.60±0.06 vs 1.60±0.08 g.t/mg,CCK组:1.45±0.11 vs 1.47±0.12 g.t/mg) ，而LPS组和LPS+CCK组在孵育后比孵育前其收缩性分别提高了61.54 %和29.17 %(LPS组:0.65±0.08 vs 1.05±0.08 g.t/mg,P<0.01;LPS+CCK组: 0.96±0.04 vs 1.24±0.08 g.t/mg,P<0.05)。LPS组血管环经AG孵育后对PE的反应性较LPS+CCK组无明显差异。
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3 讨 论
本实验结果表明，CCK-8能够部分对抗内毒素导致的主动脉低血管反应，其机理可能与降低NO的生成量有关。现已证实iNOS诱生大量NO是内毒素导致低血管反应性的一个重要因素。该实验发现iNOS抑制剂AG能部分逆转LPS所致的低血管反应性，且与LPS+CCK组血管环对PE 的收缩反应性相比无明显差异，提示CCK-8可能通过抑制iNOS的诱生发挥保护作用。但LPS+CCK组经AG孵育后血管环的收缩反应仍能提高，并且预收缩后对L-Arg 也产生较大的舒张反应，表明CCK-8对LPS诱生iNOS的抑制作用是不完全性的。因此，可以推测，CCK-8可能通过对iNOS的部分抑制作用对抗内毒素诱导的低血管反应性，而利于血压回升，逆转休克，其具体的作用环节有待进一步研究。
* 国家自然科学基金资助课题(No.39570304)
(1999-03-05 收稿), 百拇医药