薄层扫描法测定妇炎克颗粒剂中盐酸小檗碱及大黄素的含量
作者：徐平声 谭桂山 李新中 雷鹏
单位：湖南医科大学附属湘雅医院药剂科 长沙 410008
关键词：妇炎克颗粒剂；盐酸小檗碱；大黄素；薄层扫描法
中国现代医学杂志000509 目的：建立妇炎克颗粒剂的定量方法。方法：采用薄层扫描法测定妇炎克颗粒剂中盐酸小檗碱(Ⅰ)及大黄素(Ⅱ)的含量，结果：加样回收率分别为(97.86±1.96)%；(100.70±3.06)%。结论：方法较为简便，结果满意，适用于控制该制剂的质量。
分类号 R392.33
DETERMINATION THE CONTENTS OF BERBERINE
AND EMODIN IN FUYANKE GRANULE BY TLCS
, 百拇医药
Xu Pingsheng, Tan Guishan, Li Xinzhong, Lei Peng
Department of Pharmacy Xiangya Hospital Affiliatd Hunan Medical University, Changsha 410008
[Abstract] Objective: To establish the quantitative method for Fuyanke Granule. Methods: Berberine (I) and emodin (II) in FYK Granule were determined by thin layer chromatographic scanning (TLCs). Results: The average recoveries were 96.98% (I) and 100.78% (II), respectively. And the relative standard deviations were 1.28% (I) and 3.06% (II), respectively. Conclusions: The method is simple, accurate.
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Key words: Fuyanke Granule; Berberine; Emodin; TLCs
妇炎克颗粒剂是由黄柏、虎杖、蒲公英、甘草等组成的复方中药制剂。具有清热利湿、止带止血、理气止痛[1，2]之功效，临床上用于慢性盆腔炎、慢性子宫内膜炎等症具有很好的疗效。由于处方中所含药物较多，为控制制剂的质量，采用薄层扫描法测定妇炎克颗粒剂中盐酸小檗碱及大黄素的含量，现报告如下。
1 仪器及试剂
CS-9301PC薄层扫描仪(日本Shimadzu公司)，定量毛细管(美国Drummond公司)，硅胶-G(60型)(青岛海洋化工集团公司)，盐酸小檗碱及大黄素对照品(中国药品生物制品检定所)，妇炎克颗粒剂(湘雅医院研制)，其他试剂均为分析纯。
2 实验条件
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2.1 薄层层析条件
吸附剂：硅胶-G(60型)-0.3%CMC-Na(3∶1)铺板(20cm×20cm)，厚度0.4mm，105℃活化30min后备用。
2.1.1 盐酸小檗碱 展开剂：苯∶醋酸乙酯∶异丙醇∶甲醇∶浓氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)。薄层扫描条件：反射锯齿扫描法，扫描宽度10.0mm，线性参数SX=3，根据扫描图谱确定测定波长：λS=345nm,λR=300nm。
2.1.2 大黄素 展开剂：石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层液。薄层扫描条件：反射锯齿扫描法，扫描宽度10.0mm，线性参数SX=3，根据扫描图谱确定测定波长：λS=450nm,λR=530nm。
2.2 线性关系的考察
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2.2.1 盐酸小檗碱 精确称取盐酸小檗碱对照品4.57mg，置于10ml量瓶中，加甲醇溶解，释释至刻度，制成0.457mg/ml的对照品溶液，分别吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6，7μl点于薄层板上，按实验条件展开，测定。以面积积分值对浓度绘制标准曲线，Y=1741.7X+6.4207 r=0.999。结果表明在0.457～3.2μg的范围内具有良好的线性关系。
2.2.2 大黄素 精确称取大黄素对照品8.30mg，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，取该溶液2ml，移到5ml量瓶中，稀释至刻度，制成0.0664mg/ml的对照品溶液。分别吸取对照品溶液2，4，6，8，10，12μl点于薄层板上，按实验条件展开，测定。以面积积分值对浓度绘制标准曲线，Y=3944.600X-48.234，r=0.998。结果表明在0.1328～0.7968μg的范围内具有良好的线性关系。
3 精密度实验
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板内差：同一薄层板上点同样量的同一样品，按实验条件测定，结果见表1。
板间差：二块相同的硅胶G薄层板上点同样量的同一样品，按实验条件测定，结果见表1。
表1 精密度实验结果
板内RSD%
板间RSD%
盐酸小檗碱
1.24(n=4)
2.36(n=9)
大黄素
2.08(n=6)
2.75(n=13)
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结果表明，方法的精密度较好。
4 稳定性实验
样品按各自条件展开后，对盐酸小檗碱、大黄素斑点每隔30min及20min扫描1次，结果表明在3h及2h内稳定[RSD分别为1.38(n=7)、1.45(n=7)]。
5 样品测定
5.1 样品溶液的制备
取妇炎克颗粒剂适量，碾成细粉，精密称取本品约2g，置带塞的三角瓶中，精密加入3%盐酸-甲醇混合液20ml，称重，超声处理2h，再称重，补足混合液减失的重量，充分振摇，滤过，弃去初滤液，取续滤液2ml，移至2ml量瓶中，作为盐酸小檗碱样品溶液。
取妇炎克颗粒剂适量，碾成细粉。精密称取样品0.5g，加20ml水及1ml硫酸，摇匀，加氯仿(30，20，20ml)回流提取3次(3，0.5，0.5h)。取氯仿层，挥干，加甲醇溶解，移至10ml量瓶中，稀释至刻度，作为大黄素样品溶液。
, 百拇医药
5.2 样品的测定
吸取盐酸小檗碱样品溶液5μl点于薄层板上，同时点对照品溶液2μl及4μl，按层析条件展开，扫描测定，根据随行对照品采用外标两点法计算含量，结果见表2。
吸取大黄素样品溶液5μl点于薄层板上，同时点对照品溶液2μl及10μl，按拟定的条件层析、定位，扫描测定，用外标二点法计算样品中大黄素含量即得，结果见表2。
表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果 批号
盐酸小檗碱
大 黄 素
含量(%)
RSD%(n=3)
含量(%)
, 百拇医药
RSD%(n=3)
971206
0.221
2.13
0.1332
3.75
980106
0.240
3.29
0.1290
2.43
980224
0.236
, 百拇医药
2.99
0.1346
2.58
980321
0.231
3.52
0.1021
2.81
980508
0.244
3.56
0.0954
2.89
, 百拇医药
6 回收率试验
采用加样回收法，取已知含量的妇炎克颗粒剂，添加盐酸小檗碱、大黄素对照品，按含量测定项下的方法进行提取，测定计算加样回收率，结果见表3。
表3 加样回收率试验结果
序号
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
总测得量
(mg)
回收率
, 百拇医药
(%)
X±RSD(%)
盐酸小檗碱
1
1.231
0.684
1.891
96.49
97.86±1.96
2
1.263
0.684
1.920
, 百拇医药
96.05
3
1.518
0.684
2.191
98.39
4
1.844
0.684
2.532
100.58
5
1.816
, http://www.100md.com
0.684
2.485
97.80
大 黄 素
1
1.891
1.660
3.586
102.11
100.70±3.06
2
1.383
0.830
, http://www.100md.com
2.205
99.04
3
1.747
1.660
3.427
101.20
4
1.491
1.660
3.093
96.51
5
, http://www.100md.com
1.094
1.660
2.831
104.64
7 讨论
大黄素样品溶液制备时，样品细粉应先以水分散均匀，然后加入硫酸、氯仿回流提取；否则目标成分提取不完全。有文献报导采用甲醇直接提取[3]，但由于虎杖中游离蒽醌含量较低，不利于直接定量；有的甲醇提取后加酸水解再用氯仿回流[4]，亦有甲醇提取后加酸水解再用乙醚萃取[5]，步骤较为繁琐。本文采用方法较为简便，提取完全，样品溶液杂质少，层析展开后背景干扰小，有利于准确定量。
妇炎克颗粒剂中所含小檗碱可与甘草酸及甘草次酸产生沉淀[6]，且难溶于甲醇，从而影响含量测定结果的准确性。作者经反复试验，采用3%盐酸-甲醇溶液进行提取，结果令人满意，回收率为97.86%；为了克服样品液因浓缩而产生沉淀导致定容困难及影响含量测定结果，采用适量溶剂提取而直接作为样品液可达到这一目的。
, 百拇医药
妇炎克颗粒剂所含药味较多，化学成分复杂，经反复试验，采用薄层扫描法测定制剂中两主药的有效成分盐酸小檗碱、大黄素的含量，有利于控制制剂质量，保证药物的疗效。亦为中药复方制剂目标成分含量测定的标准化提供了科学的实验依据。
参 考 文 献
1 王晓兰，李家帮.肝胆湿热文献综述.中国现代医学杂志，1994；增刊：291～293
2 刘腾飞，吴移谋.中草药体外抗淋球菌的实验研究.中国现代医学杂志，1998；8(6)：38～39
3 蓝琪田，罗国安，吕方军，等.薄层扫描法测定防风通圣丸中大黄素和黄苓甙的含量.中国药科大学学报，1989；20(2)：106
4 刘玉珍，钱本余，弥升堂.脂可清胶囊中有效成分测定.中成药，1991；13(7)：16
5 中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典(第一部).1995：179
6 林似兰，赵陆华，吴智南.大黄、黄连、黄柏、黄苓在复方汤剂中的反应研究.中草药，1989：20(6)：10，15, 百拇医药
单位：湖南医科大学附属湘雅医院药剂科 长沙 410008
关键词：妇炎克颗粒剂；盐酸小檗碱；大黄素；薄层扫描法
中国现代医学杂志000509 目的：建立妇炎克颗粒剂的定量方法。方法：采用薄层扫描法测定妇炎克颗粒剂中盐酸小檗碱(Ⅰ)及大黄素(Ⅱ)的含量，结果：加样回收率分别为(97.86±1.96)%；(100.70±3.06)%。结论：方法较为简便，结果满意，适用于控制该制剂的质量。
分类号 R392.33
DETERMINATION THE CONTENTS OF BERBERINE
AND EMODIN IN FUYANKE GRANULE BY TLCS
, 百拇医药
Xu Pingsheng, Tan Guishan, Li Xinzhong, Lei Peng
Department of Pharmacy Xiangya Hospital Affiliatd Hunan Medical University, Changsha 410008
[Abstract] Objective: To establish the quantitative method for Fuyanke Granule. Methods: Berberine (I) and emodin (II) in FYK Granule were determined by thin layer chromatographic scanning (TLCs). Results: The average recoveries were 96.98% (I) and 100.78% (II), respectively. And the relative standard deviations were 1.28% (I) and 3.06% (II), respectively. Conclusions: The method is simple, accurate.
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Key words: Fuyanke Granule; Berberine; Emodin; TLCs
妇炎克颗粒剂是由黄柏、虎杖、蒲公英、甘草等组成的复方中药制剂。具有清热利湿、止带止血、理气止痛[1，2]之功效，临床上用于慢性盆腔炎、慢性子宫内膜炎等症具有很好的疗效。由于处方中所含药物较多，为控制制剂的质量，采用薄层扫描法测定妇炎克颗粒剂中盐酸小檗碱及大黄素的含量，现报告如下。
1 仪器及试剂
CS-9301PC薄层扫描仪(日本Shimadzu公司)，定量毛细管(美国Drummond公司)，硅胶-G(60型)(青岛海洋化工集团公司)，盐酸小檗碱及大黄素对照品(中国药品生物制品检定所)，妇炎克颗粒剂(湘雅医院研制)，其他试剂均为分析纯。
2 实验条件
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2.1 薄层层析条件
吸附剂：硅胶-G(60型)-0.3%CMC-Na(3∶1)铺板(20cm×20cm)，厚度0.4mm，105℃活化30min后备用。
2.1.1 盐酸小檗碱 展开剂：苯∶醋酸乙酯∶异丙醇∶甲醇∶浓氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)。薄层扫描条件：反射锯齿扫描法，扫描宽度10.0mm，线性参数SX=3，根据扫描图谱确定测定波长：λS=345nm,λR=300nm。
2.1.2 大黄素 展开剂：石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层液。薄层扫描条件：反射锯齿扫描法，扫描宽度10.0mm，线性参数SX=3，根据扫描图谱确定测定波长：λS=450nm,λR=530nm。
2.2 线性关系的考察
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2.2.1 盐酸小檗碱 精确称取盐酸小檗碱对照品4.57mg，置于10ml量瓶中，加甲醇溶解，释释至刻度，制成0.457mg/ml的对照品溶液，分别吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6，7μl点于薄层板上，按实验条件展开，测定。以面积积分值对浓度绘制标准曲线，Y=1741.7X+6.4207 r=0.999。结果表明在0.457～3.2μg的范围内具有良好的线性关系。
2.2.2 大黄素 精确称取大黄素对照品8.30mg，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，取该溶液2ml，移到5ml量瓶中，稀释至刻度，制成0.0664mg/ml的对照品溶液。分别吸取对照品溶液2，4，6，8，10，12μl点于薄层板上，按实验条件展开，测定。以面积积分值对浓度绘制标准曲线，Y=3944.600X-48.234，r=0.998。结果表明在0.1328～0.7968μg的范围内具有良好的线性关系。
3 精密度实验
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板内差：同一薄层板上点同样量的同一样品，按实验条件测定，结果见表1。
板间差：二块相同的硅胶G薄层板上点同样量的同一样品，按实验条件测定，结果见表1。
表1 精密度实验结果
板内RSD%
板间RSD%
盐酸小檗碱
1.24(n=4)
2.36(n=9)
大黄素
2.08(n=6)
2.75(n=13)
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结果表明，方法的精密度较好。
4 稳定性实验
样品按各自条件展开后，对盐酸小檗碱、大黄素斑点每隔30min及20min扫描1次，结果表明在3h及2h内稳定[RSD分别为1.38(n=7)、1.45(n=7)]。
5 样品测定
5.1 样品溶液的制备
取妇炎克颗粒剂适量，碾成细粉，精密称取本品约2g，置带塞的三角瓶中，精密加入3%盐酸-甲醇混合液20ml，称重，超声处理2h，再称重，补足混合液减失的重量，充分振摇，滤过，弃去初滤液，取续滤液2ml，移至2ml量瓶中，作为盐酸小檗碱样品溶液。
取妇炎克颗粒剂适量，碾成细粉。精密称取样品0.5g，加20ml水及1ml硫酸，摇匀，加氯仿(30，20，20ml)回流提取3次(3，0.5，0.5h)。取氯仿层，挥干，加甲醇溶解，移至10ml量瓶中，稀释至刻度，作为大黄素样品溶液。
, 百拇医药
5.2 样品的测定
吸取盐酸小檗碱样品溶液5μl点于薄层板上，同时点对照品溶液2μl及4μl，按层析条件展开，扫描测定，根据随行对照品采用外标两点法计算含量，结果见表2。
吸取大黄素样品溶液5μl点于薄层板上，同时点对照品溶液2μl及10μl，按拟定的条件层析、定位，扫描测定，用外标二点法计算样品中大黄素含量即得，结果见表2。
表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果 批号
盐酸小檗碱
大 黄 素
含量(%)
RSD%(n=3)
含量(%)
, 百拇医药
RSD%(n=3)
971206
0.221
2.13
0.1332
3.75
980106
0.240
3.29
0.1290
2.43
980224
0.236
, 百拇医药
2.99
0.1346
2.58
980321
0.231
3.52
0.1021
2.81
980508
0.244
3.56
0.0954
2.89
, 百拇医药
6 回收率试验
采用加样回收法，取已知含量的妇炎克颗粒剂，添加盐酸小檗碱、大黄素对照品，按含量测定项下的方法进行提取，测定计算加样回收率，结果见表3。
表3 加样回收率试验结果
序号
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
总测得量
(mg)
回收率
, 百拇医药
(%)
X±RSD(%)
盐酸小檗碱
1
1.231
0.684
1.891
96.49
97.86±1.96
2
1.263
0.684
1.920
, 百拇医药
96.05
3
1.518
0.684
2.191
98.39
4
1.844
0.684
2.532
100.58
5
1.816
, http://www.100md.com
0.684
2.485
97.80
大 黄 素
1
1.891
1.660
3.586
102.11
100.70±3.06
2
1.383
0.830
, http://www.100md.com
2.205
99.04
3
1.747
1.660
3.427
101.20
4
1.491
1.660
3.093
96.51
5
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1.094
1.660
2.831
104.64
7 讨论
大黄素样品溶液制备时，样品细粉应先以水分散均匀，然后加入硫酸、氯仿回流提取；否则目标成分提取不完全。有文献报导采用甲醇直接提取[3]，但由于虎杖中游离蒽醌含量较低，不利于直接定量；有的甲醇提取后加酸水解再用氯仿回流[4]，亦有甲醇提取后加酸水解再用乙醚萃取[5]，步骤较为繁琐。本文采用方法较为简便，提取完全，样品溶液杂质少，层析展开后背景干扰小，有利于准确定量。
妇炎克颗粒剂中所含小檗碱可与甘草酸及甘草次酸产生沉淀[6]，且难溶于甲醇，从而影响含量测定结果的准确性。作者经反复试验，采用3%盐酸-甲醇溶液进行提取，结果令人满意，回收率为97.86%；为了克服样品液因浓缩而产生沉淀导致定容困难及影响含量测定结果，采用适量溶剂提取而直接作为样品液可达到这一目的。
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妇炎克颗粒剂所含药味较多，化学成分复杂，经反复试验，采用薄层扫描法测定制剂中两主药的有效成分盐酸小檗碱、大黄素的含量，有利于控制制剂质量，保证药物的疗效。亦为中药复方制剂目标成分含量测定的标准化提供了科学的实验依据。
参 考 文 献
1 王晓兰，李家帮.肝胆湿热文献综述.中国现代医学杂志，1994；增刊：291～293
2 刘腾飞，吴移谋.中草药体外抗淋球菌的实验研究.中国现代医学杂志，1998；8(6)：38～39
3 蓝琪田，罗国安，吕方军，等.薄层扫描法测定防风通圣丸中大黄素和黄苓甙的含量.中国药科大学学报，1989；20(2)：106
4 刘玉珍，钱本余，弥升堂.脂可清胶囊中有效成分测定.中成药，1991；13(7)：16
5 中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典(第一部).1995：179
6 林似兰，赵陆华，吴智南.大黄、黄连、黄柏、黄苓在复方汤剂中的反应研究.中草药，1989：20(6)：10，15, 百拇医药