c-myc、Fas蛋白在成骨性肿瘤及瘤样病变中的表达
作者：王勇 刘兴炎 葛宝丰 陈克明 宋媛 陈淑云
单位：王勇 刘兴炎 葛宝丰 陈克明 宋媛 陈淑云(兰州军区总医院骨科研究所 兰州 730050)
关键词：骨肿瘤；骨肉瘤；癌基因蛋白质类；免疫组织化学
肿瘤000408 摘要：目的 针对c-myc、Fas蛋白在肿瘤细胞中不同表达方式，探索其与成骨性肿瘤细胞分化的相关性。方法 对骨肉瘤33例，骨化性纤维瘤13例，骨纤维结构不良24例，正常骨痂标本5例，进行了c-myc、Fas、p53蛋白免疫组化染色，与肿瘤细胞分化、核有丝分裂及组织学分级比较分析。结果 p53和c-myc蛋白胞核阳性表达主要在低分化骨肉瘤。Fas和c-myc蛋白胞浆内阳性，在骨肉瘤的高分化细胞(骨母细胞型和软骨细胞型瘤细胞)和骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、骨痂组织中骨母细胞呈强表达；而在低分化瘤细胞和纤维母细胞则呈弱表达。结论 Fas蛋白高表达与对抗瘤细胞的增殖有关；c-myc蛋白胞浆阳性表达与瘤细胞分化相关。
, 百拇医药
中图分类号：R738.1 文献标识码：A 文章编号：1000-7431(2000)04-0261-02
EXPRESSION OF c-myc AND Fas PROTEIN IN OSTEOGENIC TUMOR AND TUMOUR-LIKE DISEASE
WANG Yong
(Institute of Traumatology and Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of PLA, Lanzhou 730050)
LIU Xing-yan
(Institute of Traumatology and Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of PLA, Lanzhou 730050)
, 百拇医药
GE Bao-feng, et al.
(Institute of Traumatology and Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of PLA, Lanzhou 730050)
Abstract：Objective To investigate the relationship between the differentiation of osteogenic tumor cells and different expression ways of c-myc and fas protein. Methods 33 osteosarcoma, 13 ossifying fibroma, 24 fibrous dysplasia of bone and 5 normal bone callus were included, and were immunohistologically stained from c-myc, Fas and p53 antigen. The results were correlated with the differenssion of tumor cells, histological grading and mitosis etc.Results The coexpression of p53 and c-myc protein in nuclei were found mainly in low-differentiated osteosarcoma. When Fas and c-myc protein were coexpressed in cytoplasm, a strong positive sign appeared in highly differentiated osteosarcoma, fibrous dysplasia of bone and osteoplast of bone callus, a weak sign was found in low-differentiated tumour cells and fibroblasts. Conclusion the strong expression of Fas protein is related to antiproliferation of tumour cells, and the expression of c-myc in cytoplasm is related to tumour cell differentiation.
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Key words： Bone neoplasms； Osteosarcoma; Oncogene proteins； Immunohistology
p53蛋白过度表达被认为是肿瘤预后差的标志[1]。有关c-myc,Fas蛋白在成骨性肿瘤及瘤样病变中的表达及其与成骨性细胞分化的相关性研究文献仍较少。为此，对c-myc、Fas、p53蛋白在成骨性肿瘤及瘤样病变中的表达进行分析，以求探索凋亡相关基因与成骨性肿瘤组织学分级、细胞分化及凋亡的相关性。
材料与方法
1.标本 骨肉瘤33例，骨化性纤维瘤13例，骨纤维结构不良24例，由慢性骨髓炎骨膜反应和创伤性骨折所致反应性骨痂标本5例。10 %福尔马林固定，石蜡包埋，其中44例标本经5 %硝酸脱钙处理。
2.HE染色 骨肉瘤，按文献[2]组织学分级；根据10个高倍视野(HPF)核有丝分裂数分为：<10个/10HPF和>10个/10HPF。骨纤维结构不良，分为：基本病变区(胶原纤维丰富，纤维细胞核细长，胞质窄小，骨小梁细小，缺乏骨母细胞)；不典型病变区(成骨活跃，纤维母细胞和骨母细胞肥硕，胞浆丰富)。
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3.免疫组织化学染色 采用武汉博士德生物工程公司试剂和APA方法，显示c-myc、Fas、p53蛋白。对骨肉瘤、骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良及正常骨痂组织中阳性细胞进行计数分析：每张切片选取10个具有代表性的高倍视野，其阳性细胞0%者为(-)，<25%者为(+)，25%～50%者为(++)，>50%者为(+++)。
结果
一、p53蛋白 阳性染色位于细胞核内，阳性细胞主要分布于低分化骨肉瘤；骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、骨痂组织为阴性。
二、Fas蛋白 阳性染色位于细胞浆和细胞膜。在骨肉瘤高分化细胞强阳性，低分化细胞弱阳性。骨化性纤维瘤，13例中11例阳性(85%)，7例(++)，4例(+++)；骨母细胞强阳性，骨小梁间梭形细胞弱阳性或阴性。骨纤维结构不良，24例中12例阳性(50%)，7例(+)，5例(++)；不典型病变区，肥硕的纤维母细胞和骨母细胞呈较强阳性，基本病变区阴性。正常骨痂中，成骨活跃区肥硕的骨母细胞阳性(++)；成熟的静止区瘦小骨细胞阴性。
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三、c-myc蛋白 (一)胞核阳性细胞：主要分布在骨肉瘤低分化细胞(见封三图 )。骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、骨痂组织中无核阳性细胞。(二)胞浆阳性细胞：在骨肉瘤高分化细胞(骨母型和软骨型瘤细胞)强阳性，低分化瘤细胞弱阳性，瘤旁组织中浸润的浆细胞强阳性。骨化性纤维瘤，13例100%阳性，7例(++)，6例(+++)；骨母细胞呈强阳性，骨小梁间梭形细胞呈弱阳性(见封三图 )。骨纤维结构不良，24例中15例阳性(63%)，6例(+)，7例(++)，2例(+++)；不典型病变区，肥硕的纤维母细胞和骨母细胞强阳性；基本病变区弱阳性或阴性。正常骨痂中，成骨活跃区肥硕的骨母细胞呈较强阳性(++)，成熟静止区瘦小骨细胞阴性。
图3 低分化骨肉瘤细胞核内c-myc蛋白阳性表达×1200
c-myc、Fas、p53蛋白表达与骨肉瘤组织学分级、核有丝分裂的关系(见附表)。
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附表 c-myc、Fas、p53蛋白在骨肉瘤组织中的表达
类 别
n
33
p53胞核表达
c-myc胞核表达
c-myc胞浆表达
Fas胞浆表达
(-)
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(+)
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3
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7
组织学分级
Ⅰ
Ⅱ
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Ⅲ
8
18
7
5
10
1
3
7
3
1
2
1
5
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4
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2
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4
3
4
核丝分裂
<10/10HPF
>10/10HPF
18
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13
3
5
8
3
1
13
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3
1
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4
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7
8
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1
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6
4
3
讨论
虽然c-myc蛋白是核癌基因蛋白，但实际上常有细胞浆内表达[3，4]。研究病例中，所有标本均采用10%福尔马林固定；脱钙与未脱钙标本比较，均有c-myc蛋白胞浆或胞核阳性染色，因此推测不是由于固定和脱钙处理造成的人工假象。
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c-myc是PCD调控中的一个重要相关基因。有研究认为c-myc蛋白高表达具有促进某些肿瘤分化的作用。正常成骨过程中，具有高度增殖活性的细胞在前成骨细胞和确定性软骨祖细胞阶段，而到分泌型成骨细胞和软骨细胞阶段，其功能已成熟，再不具有有丝分裂增殖的能力。正常骺板软骨细胞c-myc表达：增生阶段主要为胞核强阳性；成熟期其胞核阳性逐渐减低，且出现胞浆内阳性反应；完全分化的肥大软骨细胞则胞浆阳性增强。此研究中，骨纤维结构不良和正常骨痂组织，c-myc阳性染色主要存在于分泌型成骨细胞胞浆内。文献报道[4]：分化好的结肠癌细胞胞浆内c-myc阳性表达明显高于分化差的结肠癌细胞；c-myc蛋白在正常结肠粘膜和结肠良性病变中的表达，主要分布在分化成熟区域的腺管上皮细胞浆内。陈平圣，等[5]在对部分侵袭性骨肿瘤的研究中，发现良性软骨母细胞瘤c-myc蛋白表达强度超过骨肉瘤。此研究中，p53和c-myc蛋白胞核阳性表达与肿瘤细胞分化差和核有丝分裂多有密切的相关性。Fas和c-myc蛋白胞浆阳性表达，与肿瘤细胞高分化有密切相关性。因此推测，Fas蛋白表达水平的增高，在于对抗肿瘤的高增殖作用。c-myc可能在瘤细胞分化、代谢中起着重要作用。
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作者简介：王 勇，男，大专，副主任技师。
参考文献
[1]吴秉铨.癌的分子标志物及其临床意义〔J〕.中华病理学杂志，1997，26(1)：3
[2]丘钜世，朱全胜，王连唐.骨肉瘤的病理类型及其病理特点〔J〕.中华病理学杂志，1997，26(5)：259
[3]Sikora K, Frcr Chan S, et al. C-myc oncogene expression in colorectal cancer〔J〕. Cancer, 1987,59:1289
[4]Stewart J, Evan G, Watson J. Detection of the c-myc oncogene product in colonic polyps and carcinomas〔J〕. Br J Cancer,1986,53:19
[5]陈平圣，丘钜世，王连唐，等.侵袭性骨肿瘤癌基因蛋白的表达〔J〕.中华病理学杂志，1996，25(6)：364
(收稿日期：1998-07-20；修回日期：1998-11-10), http://www.100md.com
单位：王勇 刘兴炎 葛宝丰 陈克明 宋媛 陈淑云(兰州军区总医院骨科研究所 兰州 730050)
关键词：骨肿瘤；骨肉瘤；癌基因蛋白质类；免疫组织化学
肿瘤000408 摘要：目的 针对c-myc、Fas蛋白在肿瘤细胞中不同表达方式，探索其与成骨性肿瘤细胞分化的相关性。方法 对骨肉瘤33例，骨化性纤维瘤13例，骨纤维结构不良24例，正常骨痂标本5例，进行了c-myc、Fas、p53蛋白免疫组化染色，与肿瘤细胞分化、核有丝分裂及组织学分级比较分析。结果 p53和c-myc蛋白胞核阳性表达主要在低分化骨肉瘤。Fas和c-myc蛋白胞浆内阳性，在骨肉瘤的高分化细胞(骨母细胞型和软骨细胞型瘤细胞)和骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、骨痂组织中骨母细胞呈强表达；而在低分化瘤细胞和纤维母细胞则呈弱表达。结论 Fas蛋白高表达与对抗瘤细胞的增殖有关；c-myc蛋白胞浆阳性表达与瘤细胞分化相关。
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中图分类号：R738.1 文献标识码：A 文章编号：1000-7431(2000)04-0261-02
EXPRESSION OF c-myc AND Fas PROTEIN IN OSTEOGENIC TUMOR AND TUMOUR-LIKE DISEASE
WANG Yong
(Institute of Traumatology and Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of PLA, Lanzhou 730050)
LIU Xing-yan
(Institute of Traumatology and Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of PLA, Lanzhou 730050)
, 百拇医药
GE Bao-feng, et al.
(Institute of Traumatology and Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of PLA, Lanzhou 730050)
Abstract：Objective To investigate the relationship between the differentiation of osteogenic tumor cells and different expression ways of c-myc and fas protein. Methods 33 osteosarcoma, 13 ossifying fibroma, 24 fibrous dysplasia of bone and 5 normal bone callus were included, and were immunohistologically stained from c-myc, Fas and p53 antigen. The results were correlated with the differenssion of tumor cells, histological grading and mitosis etc.Results The coexpression of p53 and c-myc protein in nuclei were found mainly in low-differentiated osteosarcoma. When Fas and c-myc protein were coexpressed in cytoplasm, a strong positive sign appeared in highly differentiated osteosarcoma, fibrous dysplasia of bone and osteoplast of bone callus, a weak sign was found in low-differentiated tumour cells and fibroblasts. Conclusion the strong expression of Fas protein is related to antiproliferation of tumour cells, and the expression of c-myc in cytoplasm is related to tumour cell differentiation.
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Key words： Bone neoplasms； Osteosarcoma; Oncogene proteins； Immunohistology
p53蛋白过度表达被认为是肿瘤预后差的标志[1]。有关c-myc,Fas蛋白在成骨性肿瘤及瘤样病变中的表达及其与成骨性细胞分化的相关性研究文献仍较少。为此，对c-myc、Fas、p53蛋白在成骨性肿瘤及瘤样病变中的表达进行分析，以求探索凋亡相关基因与成骨性肿瘤组织学分级、细胞分化及凋亡的相关性。
材料与方法
1.标本 骨肉瘤33例，骨化性纤维瘤13例，骨纤维结构不良24例，由慢性骨髓炎骨膜反应和创伤性骨折所致反应性骨痂标本5例。10 %福尔马林固定，石蜡包埋，其中44例标本经5 %硝酸脱钙处理。
2.HE染色 骨肉瘤，按文献[2]组织学分级；根据10个高倍视野(HPF)核有丝分裂数分为：<10个/10HPF和>10个/10HPF。骨纤维结构不良，分为：基本病变区(胶原纤维丰富，纤维细胞核细长，胞质窄小，骨小梁细小，缺乏骨母细胞)；不典型病变区(成骨活跃，纤维母细胞和骨母细胞肥硕，胞浆丰富)。
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3.免疫组织化学染色 采用武汉博士德生物工程公司试剂和APA方法，显示c-myc、Fas、p53蛋白。对骨肉瘤、骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良及正常骨痂组织中阳性细胞进行计数分析：每张切片选取10个具有代表性的高倍视野，其阳性细胞0%者为(-)，<25%者为(+)，25%～50%者为(++)，>50%者为(+++)。
结果
一、p53蛋白 阳性染色位于细胞核内，阳性细胞主要分布于低分化骨肉瘤；骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、骨痂组织为阴性。
二、Fas蛋白 阳性染色位于细胞浆和细胞膜。在骨肉瘤高分化细胞强阳性，低分化细胞弱阳性。骨化性纤维瘤，13例中11例阳性(85%)，7例(++)，4例(+++)；骨母细胞强阳性，骨小梁间梭形细胞弱阳性或阴性。骨纤维结构不良，24例中12例阳性(50%)，7例(+)，5例(++)；不典型病变区，肥硕的纤维母细胞和骨母细胞呈较强阳性，基本病变区阴性。正常骨痂中，成骨活跃区肥硕的骨母细胞阳性(++)；成熟的静止区瘦小骨细胞阴性。
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三、c-myc蛋白 (一)胞核阳性细胞：主要分布在骨肉瘤低分化细胞(见封三图 )。骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、骨痂组织中无核阳性细胞。(二)胞浆阳性细胞：在骨肉瘤高分化细胞(骨母型和软骨型瘤细胞)强阳性，低分化瘤细胞弱阳性，瘤旁组织中浸润的浆细胞强阳性。骨化性纤维瘤，13例100%阳性，7例(++)，6例(+++)；骨母细胞呈强阳性，骨小梁间梭形细胞呈弱阳性(见封三图 )。骨纤维结构不良，24例中15例阳性(63%)，6例(+)，7例(++)，2例(+++)；不典型病变区，肥硕的纤维母细胞和骨母细胞强阳性；基本病变区弱阳性或阴性。正常骨痂中，成骨活跃区肥硕的骨母细胞呈较强阳性(++)，成熟静止区瘦小骨细胞阴性。
图3 低分化骨肉瘤细胞核内c-myc蛋白阳性表达×1200
c-myc、Fas、p53蛋白表达与骨肉瘤组织学分级、核有丝分裂的关系(见附表)。
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附表 c-myc、Fas、p53蛋白在骨肉瘤组织中的表达
类 别
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p53胞核表达
c-myc胞核表达
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讨论
虽然c-myc蛋白是核癌基因蛋白，但实际上常有细胞浆内表达[3，4]。研究病例中，所有标本均采用10%福尔马林固定；脱钙与未脱钙标本比较，均有c-myc蛋白胞浆或胞核阳性染色，因此推测不是由于固定和脱钙处理造成的人工假象。
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c-myc是PCD调控中的一个重要相关基因。有研究认为c-myc蛋白高表达具有促进某些肿瘤分化的作用。正常成骨过程中，具有高度增殖活性的细胞在前成骨细胞和确定性软骨祖细胞阶段，而到分泌型成骨细胞和软骨细胞阶段，其功能已成熟，再不具有有丝分裂增殖的能力。正常骺板软骨细胞c-myc表达：增生阶段主要为胞核强阳性；成熟期其胞核阳性逐渐减低，且出现胞浆内阳性反应；完全分化的肥大软骨细胞则胞浆阳性增强。此研究中，骨纤维结构不良和正常骨痂组织，c-myc阳性染色主要存在于分泌型成骨细胞胞浆内。文献报道[4]：分化好的结肠癌细胞胞浆内c-myc阳性表达明显高于分化差的结肠癌细胞；c-myc蛋白在正常结肠粘膜和结肠良性病变中的表达，主要分布在分化成熟区域的腺管上皮细胞浆内。陈平圣，等[5]在对部分侵袭性骨肿瘤的研究中，发现良性软骨母细胞瘤c-myc蛋白表达强度超过骨肉瘤。此研究中，p53和c-myc蛋白胞核阳性表达与肿瘤细胞分化差和核有丝分裂多有密切的相关性。Fas和c-myc蛋白胞浆阳性表达，与肿瘤细胞高分化有密切相关性。因此推测，Fas蛋白表达水平的增高，在于对抗肿瘤的高增殖作用。c-myc可能在瘤细胞分化、代谢中起着重要作用。
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作者简介：王 勇，男，大专，副主任技师。
参考文献
[1]吴秉铨.癌的分子标志物及其临床意义〔J〕.中华病理学杂志，1997，26(1)：3
[2]丘钜世，朱全胜，王连唐.骨肉瘤的病理类型及其病理特点〔J〕.中华病理学杂志，1997，26(5)：259
[3]Sikora K, Frcr Chan S, et al. C-myc oncogene expression in colorectal cancer〔J〕. Cancer, 1987,59:1289
[4]Stewart J, Evan G, Watson J. Detection of the c-myc oncogene product in colonic polyps and carcinomas〔J〕. Br J Cancer,1986,53:19
[5]陈平圣，丘钜世，王连唐，等.侵袭性骨肿瘤癌基因蛋白的表达〔J〕.中华病理学杂志，1996，25(6)：364
(收稿日期：1998-07-20；修回日期：1998-11-10), http://www.100md.com