c-myc、PCNA、Fas在成骨性肿瘤中的表达
作者：王勇 刘兴炎 葛宝丰 殷莹 陈克明 苗国安
单位：王勇(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；刘兴炎(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；葛宝丰(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；殷莹(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；陈克明(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；苗国安(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)
关键词：骨肿瘤；免疫组织化学；细胞分化
癌症000314
摘 要：目的：探索c-myc、PCNA、Fas表达与成骨性肿瘤细胞分化的关系。方法：采用免疫组织化学方法对骨肉瘤、骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、正常骨痂进行c-myc、PCNA、Fas蛋白测定，与肿瘤组织学分级、细胞分化、核丝分裂比较分析。结果：PCNA和c-myc胞核阳性与肿瘤低分化相关，Fas和c-myc胞浆阳性与肿瘤的高分化具有一致性。结论：PCNA高表达是瘤细胞增殖活跃的重要指标；c-myc胞浆表达与细胞分化密切相关，其高表达不能代表瘤细胞的高增殖性。
, http://www.100md.com
分类号：R738.1;R730.3 文献标识码：A
文章编号：1000467X(2000)03-0242-03
Expression of c-myc, PCNA and Fas protein in osteogenic tumour
WANG yong LIU Xing-yan GE Bao-feng et al.
(The Institute of Traumatology and Orthopaedics,Lanzhou General Hospital, Lanzhou 730050,P.R. China)
Abstract：Objective:To investigate the relationship between osteogenic tumour differentiation and expression of c-myc,PCNA and Fas protein. Methods:The expression of c-myc,PCNA and Fas protein were examined immunohistologically in osteosarcoma, ossifying fibroma, fibrous dysplasia of bone and normal bone callus. The results were compared with the histological grading of tumour, cellular differentiation, mitosis. Results: The positive expression of PCNA and c-myc protein in nuclei was associated with poorly differentiated tumours; the positive expression of Fas and c-myc protein in cytoplasms was consistent with well-differentiated tumours .Conclusion:The high expression of PCNA protein was important index of the active proliferation of tumour cells; the expression of c-myc protein in cytoplasm was closely related to the differentiation of tumour cells, and its high expression could not represent the active proliferation of tumour cells.
, 百拇医药
Key words：Bone tumour; Immunohistology; Cell differentiation ▲
PCNA是细胞增殖的标志。Fas与细胞凋亡密切相关。而癌基因c-myc对细胞有介导增殖和诱导凋亡的双重作用[1,2]。本文对c-myc、PCNA、Fas的表达进行分析，以求探索与成骨性肿瘤细胞分化的关系。
1 材料和方法
骨肉瘤33例，骨化性纤维瘤13例，骨纤维结构不良24例，正常骨痂5例。10%福尔马林固定，其中44例经5%硝酸脱钙。对骨肉瘤组织学分级[3]。
免疫组织化学染色：武汉博士德公司试剂和APA方法，显示c-myc、Fas、PCNA蛋白。已知阳性标本作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照，CK抗体代替一抗作无关蛋白替代对照。每例选10个有代表性的高倍视野(HPF)，阳性细胞0%者为(-)，<25%者为(+)，25%～50%者为(++)，>50%者为(+++)。
, 百拇医药
2 结果
PCNA阳性位于细胞核。骨肉瘤的阳性表达见表1，图1。骨化性纤维瘤阳性率77%(10/13)，骨纤维结构不良阳性率46%(11/24)，骨痂阳性率40%(2/5)，均为(+)。
表1 c-myc、Fas、PCNA表达与组织学表现的关系(n=33) 项目
n
PCNA胞核表达
c-myc胞核表达
c-myc胞浆表达
Fas胞浆表达
(-)
(+)
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(++)
(+++)
(-)
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(+++)
(-)
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(++)
(+++)
(-)
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(++)
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组织
学分
级
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Ⅱ
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Ⅲ
7
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0
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2
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单细
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1
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单细
胞及
片状
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大片
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无明
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核丝
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3
图1 低分化骨肉瘤，PCNA蛋白阳性染色位于细胞核×1200
Fas阳性位于胞浆和胞膜。骨肉瘤的阳性表达见表1。骨化性纤维瘤阳性率85%(11/13)，7例(++)，4例(+++)；骨纤维结构不良阳性率50%(12/24)，7例(+)，5例(++)；骨痂阳性均(++)；成骨活跃区骨母细胞强阳性(图2)。
, 百拇医药
图2 骨化性纤维瘤，Fas蛋白在肥硕的骨母细胞浆内阳性表达×300
c-myc胞核阳性：骨肉瘤阳性表达见表1，图3。骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良及骨痂中无核阳性细胞。
图3 低分化骨肉瘤，c-myc蛋白在细胞核内阳性表达×600
c-myc胞浆阳性：骨肉瘤阳性表达见表1。骨化性纤维瘤阳性率100%(13/13)，7例(++)，6例(+++)；骨纤维结构不良阳性率63%(15/24)，6例(+)，7例(++)，2例(+++)；骨痂阳性均(++)；成骨活跃区骨母细胞强阳性(图4)。
图4 骨化性纤维瘤，c-myc蛋白在肥硕的骨母细胞浆内呈强阳性表达×600
, 百拇医药
3 讨论
c-myc虽然是核癌基因蛋白，但胞浆内常有表达[4～6]。标本均用福尔马林固定；脱钙与未脱钙标本均有胞浆或核阳性；无关蛋白及阴性对照均无阳性细胞；推测不是处理标本的人工假象。
研究表明，c-myc给予细胞增殖和凋亡两种选择，与致癌因素同时存在表现为增殖效应；与抑癌因素同时存在则促进细胞凋亡[1,2]。软骨细胞c-myc表达：增生期核阳性；完全分化期胞浆阳性[5]。某些良性肿瘤c-myc表达可超过恶性肿瘤[7]；癌旁正常组织中也可c-myc高表达[4]。本文骨肉瘤病例中，PCNA和c-myc胞核阳性与细胞核丝分裂及组织学分级呈正相关；在骨肉瘤、骨化性纤维瘤及骨纤维结构不良病例中,Fas和c-myc胞浆阳性与瘤细胞高分化趋向一致；且胞浆阳性主要在无增殖能力的分泌型骨母细胞。由此推测，其胞浆内高表达可能与骨母细胞蛋白质代谢旺盛有关，并不能完全反映细胞分裂增殖的程度。
, 百拇医药
通讯作者：王勇：Tel：86-931-8975291
参考文献：
[1]黄行许，朴英杰，霍霞.c-Myc和细胞凋亡[J].细胞生物学杂志，1998，20(1):9～12.
[2]郑德先.细胞凋亡的研究进展[J].中华病理学杂志，1996，25(1):50～53.
[3]丘钜世，朱全胜，王连唐.骨肉瘤的病理分型及其病理特点[J].中华病理学杂志，1997，26(5):259～261.
[4]杨少波，王孟薇，尤纬缔，等.人肝细胞和基因的过度表达—免疫组织化学和原位杂交研究[J].中华肿瘤学杂志，1995，17(6):415～417.
[5]Wang Y,Toury R, Hauchecorne M,et al. Expression and subcellular localization of the Myc superfamily proteins:c-Myc,Max,Madl and Mxil in the epiphyseal plate cartiage chondrocytes of growing rats [J]. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand),1997， 43(2):175～ 188.
[6]白亚来，张春雷，尹善雪，等.癌基因p21pan-ras和p62c-myc在皮肤细胞淋巴瘤中的表达及其意义[J].北京医科大学学报，1998，30(1):24～25.
[7]陈平圣，丘钜世，王连唐，等.侵袭性骨肿瘤基因蛋白的表达[J].中华病理学杂志，1996，25(6):364.
收稿日期：1999-03-25
修稿日期：1999-05-12, 百拇医药
单位：王勇(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；刘兴炎(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；葛宝丰(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；殷莹(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；陈克明(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)；苗国安(兰州军区总医院骨科研究所，甘肃兰州730050)
关键词：骨肿瘤；免疫组织化学；细胞分化
癌症000314
摘 要：目的：探索c-myc、PCNA、Fas表达与成骨性肿瘤细胞分化的关系。方法：采用免疫组织化学方法对骨肉瘤、骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良、正常骨痂进行c-myc、PCNA、Fas蛋白测定，与肿瘤组织学分级、细胞分化、核丝分裂比较分析。结果：PCNA和c-myc胞核阳性与肿瘤低分化相关，Fas和c-myc胞浆阳性与肿瘤的高分化具有一致性。结论：PCNA高表达是瘤细胞增殖活跃的重要指标；c-myc胞浆表达与细胞分化密切相关，其高表达不能代表瘤细胞的高增殖性。
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分类号：R738.1;R730.3 文献标识码：A
文章编号：1000467X(2000)03-0242-03
Expression of c-myc, PCNA and Fas protein in osteogenic tumour
WANG yong LIU Xing-yan GE Bao-feng et al.
(The Institute of Traumatology and Orthopaedics,Lanzhou General Hospital, Lanzhou 730050,P.R. China)
Abstract：Objective:To investigate the relationship between osteogenic tumour differentiation and expression of c-myc,PCNA and Fas protein. Methods:The expression of c-myc,PCNA and Fas protein were examined immunohistologically in osteosarcoma, ossifying fibroma, fibrous dysplasia of bone and normal bone callus. The results were compared with the histological grading of tumour, cellular differentiation, mitosis. Results: The positive expression of PCNA and c-myc protein in nuclei was associated with poorly differentiated tumours; the positive expression of Fas and c-myc protein in cytoplasms was consistent with well-differentiated tumours .Conclusion:The high expression of PCNA protein was important index of the active proliferation of tumour cells; the expression of c-myc protein in cytoplasm was closely related to the differentiation of tumour cells, and its high expression could not represent the active proliferation of tumour cells.
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Key words：Bone tumour; Immunohistology; Cell differentiation ▲
PCNA是细胞增殖的标志。Fas与细胞凋亡密切相关。而癌基因c-myc对细胞有介导增殖和诱导凋亡的双重作用[1,2]。本文对c-myc、PCNA、Fas的表达进行分析，以求探索与成骨性肿瘤细胞分化的关系。
1 材料和方法
骨肉瘤33例，骨化性纤维瘤13例，骨纤维结构不良24例，正常骨痂5例。10%福尔马林固定，其中44例经5%硝酸脱钙。对骨肉瘤组织学分级[3]。
免疫组织化学染色：武汉博士德公司试剂和APA方法，显示c-myc、Fas、PCNA蛋白。已知阳性标本作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照，CK抗体代替一抗作无关蛋白替代对照。每例选10个有代表性的高倍视野(HPF)，阳性细胞0%者为(-)，<25%者为(+)，25%～50%者为(++)，>50%者为(+++)。
, 百拇医药
2 结果
PCNA阳性位于细胞核。骨肉瘤的阳性表达见表1，图1。骨化性纤维瘤阳性率77%(10/13)，骨纤维结构不良阳性率46%(11/24)，骨痂阳性率40%(2/5)，均为(+)。
表1 c-myc、Fas、PCNA表达与组织学表现的关系(n=33) 项目
n
PCNA胞核表达
c-myc胞核表达
c-myc胞浆表达
Fas胞浆表达
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图1 低分化骨肉瘤，PCNA蛋白阳性染色位于细胞核×1200
Fas阳性位于胞浆和胞膜。骨肉瘤的阳性表达见表1。骨化性纤维瘤阳性率85%(11/13)，7例(++)，4例(+++)；骨纤维结构不良阳性率50%(12/24)，7例(+)，5例(++)；骨痂阳性均(++)；成骨活跃区骨母细胞强阳性(图2)。
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图2 骨化性纤维瘤，Fas蛋白在肥硕的骨母细胞浆内阳性表达×300
c-myc胞核阳性：骨肉瘤阳性表达见表1，图3。骨化性纤维瘤、骨纤维结构不良及骨痂中无核阳性细胞。
图3 低分化骨肉瘤，c-myc蛋白在细胞核内阳性表达×600
c-myc胞浆阳性：骨肉瘤阳性表达见表1。骨化性纤维瘤阳性率100%(13/13)，7例(++)，6例(+++)；骨纤维结构不良阳性率63%(15/24)，6例(+)，7例(++)，2例(+++)；骨痂阳性均(++)；成骨活跃区骨母细胞强阳性(图4)。
图4 骨化性纤维瘤，c-myc蛋白在肥硕的骨母细胞浆内呈强阳性表达×600
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3 讨论
c-myc虽然是核癌基因蛋白，但胞浆内常有表达[4～6]。标本均用福尔马林固定；脱钙与未脱钙标本均有胞浆或核阳性；无关蛋白及阴性对照均无阳性细胞；推测不是处理标本的人工假象。
研究表明，c-myc给予细胞增殖和凋亡两种选择，与致癌因素同时存在表现为增殖效应；与抑癌因素同时存在则促进细胞凋亡[1,2]。软骨细胞c-myc表达：增生期核阳性；完全分化期胞浆阳性[5]。某些良性肿瘤c-myc表达可超过恶性肿瘤[7]；癌旁正常组织中也可c-myc高表达[4]。本文骨肉瘤病例中，PCNA和c-myc胞核阳性与细胞核丝分裂及组织学分级呈正相关；在骨肉瘤、骨化性纤维瘤及骨纤维结构不良病例中,Fas和c-myc胞浆阳性与瘤细胞高分化趋向一致；且胞浆阳性主要在无增殖能力的分泌型骨母细胞。由此推测，其胞浆内高表达可能与骨母细胞蛋白质代谢旺盛有关，并不能完全反映细胞分裂增殖的程度。
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通讯作者：王勇：Tel：86-931-8975291
参考文献：
[1]黄行许，朴英杰，霍霞.c-Myc和细胞凋亡[J].细胞生物学杂志，1998，20(1):9～12.
[2]郑德先.细胞凋亡的研究进展[J].中华病理学杂志，1996，25(1):50～53.
[3]丘钜世，朱全胜，王连唐.骨肉瘤的病理分型及其病理特点[J].中华病理学杂志，1997，26(5):259～261.
[4]杨少波，王孟薇，尤纬缔，等.人肝细胞和基因的过度表达—免疫组织化学和原位杂交研究[J].中华肿瘤学杂志，1995，17(6):415～417.
[5]Wang Y,Toury R, Hauchecorne M,et al. Expression and subcellular localization of the Myc superfamily proteins:c-Myc,Max,Madl and Mxil in the epiphyseal plate cartiage chondrocytes of growing rats [J]. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand),1997， 43(2):175～ 188.
[6]白亚来，张春雷，尹善雪，等.癌基因p21pan-ras和p62c-myc在皮肤细胞淋巴瘤中的表达及其意义[J].北京医科大学学报，1998，30(1):24～25.
[7]陈平圣，丘钜世，王连唐，等.侵袭性骨肿瘤基因蛋白的表达[J].中华病理学杂志，1996，25(6):364.
收稿日期：1999-03-25
修稿日期：1999-05-12, 百拇医药