不同性质大肠粘膜细胞EGFR表达的研究
作者：徐德龙 王克诚 刘宁青 肖文华 魏梅新
单位：河北医科大学第三医院外科(石家庄，050051)
关键词：大肠腺瘤；大肠癌；癌旁粘膜；表皮生长因子受体
癌症990438
中图分类号：R735.34 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)04-0470-02
本课题研究了正常大肠粘膜上皮细胞、大肠腺瘤和大肠癌不同部位粘膜细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达及意义。
1 材料与方法
1.1 材料
, http://www.100md.com
痔切除时，用活检钳咬取并经病理证实的正常直肠粘膜10例。经纤维结肠镜咬取或手术切除并经病理确诊的大肠腺瘤20例。根治性手术切除的大肠癌30例，标本离体后，立即沿肠管纵轴剖开铺展，在自然伸展状态下，分别取远癌旁(距肿瘤边缘5～10cm)、近癌旁(距肿瘤边缘2cm)和癌粘膜各1块(0.5cm×0.5cm×0.5cm)。30例大肠癌的分化程度：高分化6例，中分化22例，低分化2例。分期：A期5例，B期14例，C期9例，D期2例。
1.2 方法
1.2.1 标本处理：采取标本后立即用10%中性甲醛固定，12～24小时后石蜡包埋，作6μm连续切片分别作HE染色和EGFR免疫组化染色。
1.2.2 试剂：EGFR多克隆抗体为美国SantaCruz公司产品，SP即用型试剂盒和DAB显色试剂盒均为美国Zymed公司产品。
1.2.3 染色方法和结果判断：过氧化物酶标记的链霉卵白素染色(SP法)，用PBS代替一抗做阴性对照。光镜下观察细胞膜或细胞浆被染成棕黄色者为阳性细胞，以阳性细胞数≥25%为阳性病例。
, 百拇医药
1.2.4 统计学处理：EGFR阳性率间的比较用χ2检验。
2 结果
EGFR染色阳性物质主要定位于胞膜和胞浆，呈棕黄色，以胞膜更明显。EGFR阳性细胞在大肠腺瘤和癌组织中的分布呈不同程度的异质性(见图1，2)。
图1 正常大肠粘膜上皮细胞EGFR的表达阴性×400
图2 大肠癌细胞EGFR的表达阳性×400
正常大肠粘膜上皮细胞EGFR均为阴性表达，大肠腺瘤和大肠癌细胞EGFR阳性率分别为30%(6/20)和73.33%(22/30)。各组间比较均有显著性差异(P<0.05)。远癌旁、近癌旁和癌粘膜细胞EGFR阳性率分别为3.33%(1/30)、20%(6/30)和73.33%(22/30)，远癌旁与癌、近癌旁与癌粘膜间比较均有显著性差异(P<0.05)。不同分化程度的大肠癌EGFR阳性率，按高、中和低分化的顺序分别为50%(3/6)、77.27%(17/22)和100%(2/2)，高与中分化癌、高与低分化癌间比较均有显著性差异(P<0.05)。不同分期的大肠癌EGFR阳性率分别为A期40%(2/5)、B期64.29%(9/14)、C期100%(9/9)、D期100%(2/2)，A+B期与C+D期比较有显著性差异(P<0.05)。有淋巴结转移组和无淋巴结转移组EGFR阳性率分别为100%(11/11)和57.89%(11/19)，两组间比较有显著性差异(P<0.05)。各组织学类型的大肠癌EGFR阳性率比较，均无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
EGFR是由1186个氨基酸组成的单链跨膜糖蛋白，EGF或TGFα与EGFR胞外结合区结合后，通过穿膜的桥链将膜内侧的酪氨酸激酶激活，从而启动细胞的有丝分裂，促进细胞的增殖和转化[1]。体外细胞培养时发现大肠癌细胞能在无血清和无外来生长因子的条件下自主性增殖；最近有学者在体外培养的人大肠癌细胞系中发现EGFR及其配体EGF和TGFα的基因表达[2]。说明在大肠癌存在EGF和/或TGFα及其受体的自/旁分泌环，即大肠癌细胞能合成和分泌EGF和/或TGFα，并作用于其自身或邻近细胞的膜受体EGFR，从而不断地刺激其自身或邻近细胞的增殖，这可能是大肠癌细胞自主性增殖的重要原因。本研究结果表明，在不同性质大肠粘膜，EGFR的表达按正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠癌的顺序递增；在大肠癌不同部位粘膜，EGFR的表达按远癌旁、近癌旁和癌粘膜的顺序递增，说明EGFR与大肠腺瘤和大肠癌的发生密切相关。EGFR在大肠近癌旁和远癌旁粘膜细胞均有阳性表达，可能是大肠癌细胞旁分泌作用的结果，与大肠癌的局部浸润和术后复发有重要关系。大肠癌细胞EGFR的高表达和EGF和/或TGFα及其受体自/旁分泌环的存在，为大肠癌的基因诊断和基因治疗提供了根据，并由此提出应用EGFR单克隆抗体治疗大肠癌的可能性[3]。本研究结果进一步表明，大肠癌EGFR的表达与大肠癌的临床病理特点有关，低分化、高分期和有淋巴结转移的大肠癌EGFR表达明显增强，因此，检测大肠癌细胞EGFR的表达有助于对其恶性程度和预后的判断。
, 百拇医药
参考文献
1 Marti U,Burwen SJ,Jones AL. Biological effects of epidermal growth factor, with emphasis on the gastrointestinal tract and liver： an update[J] . Hepatology, 1989, 9： 126 ～ 138.
2 曲娴，陈杰，刘彤华，等.人结肠癌中EGFR、EGF及TGF-α的基因表达[J].中国医学科学院学报，1994,16：259.
3 Mendelsohn J.The epidermal growth factor receptor as a target for therapy with antireceptor monoclonal antibodies [J] .Semin Cancer Biol, 1990,1：339～344.
收稿日期：1998-10-19；修回日期：1999-01-20, 百拇医药
单位：河北医科大学第三医院外科(石家庄，050051)
关键词：大肠腺瘤；大肠癌；癌旁粘膜；表皮生长因子受体
癌症990438
中图分类号：R735.34 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)04-0470-02
本课题研究了正常大肠粘膜上皮细胞、大肠腺瘤和大肠癌不同部位粘膜细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达及意义。
1 材料与方法
1.1 材料
, http://www.100md.com
痔切除时，用活检钳咬取并经病理证实的正常直肠粘膜10例。经纤维结肠镜咬取或手术切除并经病理确诊的大肠腺瘤20例。根治性手术切除的大肠癌30例，标本离体后，立即沿肠管纵轴剖开铺展，在自然伸展状态下，分别取远癌旁(距肿瘤边缘5～10cm)、近癌旁(距肿瘤边缘2cm)和癌粘膜各1块(0.5cm×0.5cm×0.5cm)。30例大肠癌的分化程度：高分化6例，中分化22例，低分化2例。分期：A期5例，B期14例，C期9例，D期2例。
1.2 方法
1.2.1 标本处理：采取标本后立即用10%中性甲醛固定，12～24小时后石蜡包埋，作6μm连续切片分别作HE染色和EGFR免疫组化染色。
1.2.2 试剂：EGFR多克隆抗体为美国SantaCruz公司产品，SP即用型试剂盒和DAB显色试剂盒均为美国Zymed公司产品。
1.2.3 染色方法和结果判断：过氧化物酶标记的链霉卵白素染色(SP法)，用PBS代替一抗做阴性对照。光镜下观察细胞膜或细胞浆被染成棕黄色者为阳性细胞，以阳性细胞数≥25%为阳性病例。
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1.2.4 统计学处理：EGFR阳性率间的比较用χ2检验。
2 结果
EGFR染色阳性物质主要定位于胞膜和胞浆，呈棕黄色，以胞膜更明显。EGFR阳性细胞在大肠腺瘤和癌组织中的分布呈不同程度的异质性(见图1，2)。
图1 正常大肠粘膜上皮细胞EGFR的表达阴性×400
图2 大肠癌细胞EGFR的表达阳性×400
正常大肠粘膜上皮细胞EGFR均为阴性表达，大肠腺瘤和大肠癌细胞EGFR阳性率分别为30%(6/20)和73.33%(22/30)。各组间比较均有显著性差异(P<0.05)。远癌旁、近癌旁和癌粘膜细胞EGFR阳性率分别为3.33%(1/30)、20%(6/30)和73.33%(22/30)，远癌旁与癌、近癌旁与癌粘膜间比较均有显著性差异(P<0.05)。不同分化程度的大肠癌EGFR阳性率，按高、中和低分化的顺序分别为50%(3/6)、77.27%(17/22)和100%(2/2)，高与中分化癌、高与低分化癌间比较均有显著性差异(P<0.05)。不同分期的大肠癌EGFR阳性率分别为A期40%(2/5)、B期64.29%(9/14)、C期100%(9/9)、D期100%(2/2)，A+B期与C+D期比较有显著性差异(P<0.05)。有淋巴结转移组和无淋巴结转移组EGFR阳性率分别为100%(11/11)和57.89%(11/19)，两组间比较有显著性差异(P<0.05)。各组织学类型的大肠癌EGFR阳性率比较，均无显著性差异(P>0.05)。
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3 讨论
EGFR是由1186个氨基酸组成的单链跨膜糖蛋白，EGF或TGFα与EGFR胞外结合区结合后，通过穿膜的桥链将膜内侧的酪氨酸激酶激活，从而启动细胞的有丝分裂，促进细胞的增殖和转化[1]。体外细胞培养时发现大肠癌细胞能在无血清和无外来生长因子的条件下自主性增殖；最近有学者在体外培养的人大肠癌细胞系中发现EGFR及其配体EGF和TGFα的基因表达[2]。说明在大肠癌存在EGF和/或TGFα及其受体的自/旁分泌环，即大肠癌细胞能合成和分泌EGF和/或TGFα，并作用于其自身或邻近细胞的膜受体EGFR，从而不断地刺激其自身或邻近细胞的增殖，这可能是大肠癌细胞自主性增殖的重要原因。本研究结果表明，在不同性质大肠粘膜，EGFR的表达按正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠癌的顺序递增；在大肠癌不同部位粘膜，EGFR的表达按远癌旁、近癌旁和癌粘膜的顺序递增，说明EGFR与大肠腺瘤和大肠癌的发生密切相关。EGFR在大肠近癌旁和远癌旁粘膜细胞均有阳性表达，可能是大肠癌细胞旁分泌作用的结果，与大肠癌的局部浸润和术后复发有重要关系。大肠癌细胞EGFR的高表达和EGF和/或TGFα及其受体自/旁分泌环的存在，为大肠癌的基因诊断和基因治疗提供了根据，并由此提出应用EGFR单克隆抗体治疗大肠癌的可能性[3]。本研究结果进一步表明，大肠癌EGFR的表达与大肠癌的临床病理特点有关，低分化、高分期和有淋巴结转移的大肠癌EGFR表达明显增强，因此，检测大肠癌细胞EGFR的表达有助于对其恶性程度和预后的判断。
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参考文献
1 Marti U,Burwen SJ,Jones AL. Biological effects of epidermal growth factor, with emphasis on the gastrointestinal tract and liver： an update[J] . Hepatology, 1989, 9： 126 ～ 138.
2 曲娴，陈杰，刘彤华，等.人结肠癌中EGFR、EGF及TGF-α的基因表达[J].中国医学科学院学报，1994,16：259.
3 Mendelsohn J.The epidermal growth factor receptor as a target for therapy with antireceptor monoclonal antibodies [J] .Semin Cancer Biol, 1990,1：339～344.
收稿日期：1998-10-19；修回日期：1999-01-20, 百拇医药