Coxsackievirus B3m与T-2毒素对小鼠脂质过氧化物代谢的影响
作者：曲波 尹新华 刘立志 于维汉
单位：哈尔滨医科大学克山病研究所，150086
关键词：T-2毒素；Coxsackievirus B3m；脂质过氧化物
中国地方病学杂志990305 【摘要】 目的 探讨T-2毒素与Coxsa ckievirus B3m的双重作用对小鼠肝脏脂质过氧化物的影响。方法 实验采用析因设计，BALB/C小鼠随机分成4组，I正常对照组；Ⅱ病毒组；ⅢT-2毒素组；Ⅳ病毒+毒素组。病毒组常规腹腔接种0.1ml内含1000TCID50的1640营养液；毒素组隔日按1.0mg/kg体重T-2毒素灌胃，直至实验结束；病毒+毒素组先T-2灌胃，3周后腹腔接种同稀释度病毒。各组鼠于病毒接种后第7天，14天，21天，30天，50天分批处死测定肝脏脂质过氧化物(LPO)含量。结果 显示病毒和T-2毒素均可非常明显(P<0.01)引起小鼠肝脏LPO含量升高。两者双重作用更为明显，但两者之间没有交互作用。结论 Coxsackievirus B3m和T-2毒素作用于生物体可导致机体脂质过氧化损伤，其效应强于单纯给予T-2毒素或Coxsackievirus B3m感染。
, 百拇医药
分类号：R373.23;R519 文献标识码：A 论文编号：1000-4955(1999)03-0173-75
Combined effect of Coxsackievirus B3m and T-2 toxin on metabo lism of lipid peroxide in mice
QU Bo,YIN Xinhua,LIU Lizhi,et al.
Institute of Keshan Disease,Harbin Medical University,Harbin 150086
【Abstract】 Objective To research the combined effec t of Coxsackievirus B3m and T-2 toxin on the metabolism of lipid peroxide by factorial design. Methods BALB/C mice as experimental animals were randomly divided into 4 groups:1.control group;2.virus group;3.T-2 toxin group;4.viru s and T-2 toxin group.The mice in group 2 were injected with Coxsackievirus B3m liquor 1000 TCID 50 in the dose of 0.1ml into abdominal cavity.The mice in group 3 were forced to swallow T-2 toxin every other day in the dose of 1.0m g/kg until the end of the experiment.The mice in group 4 were treated with T-2 toxin in the same way in the first 3 weeks,then the same concentration viral liq uor like that used in group 2 was inoculated.The content of LPO in 4 groups was determined when the mice were killed in the seventh,fourteenth,twentieth,thirtie th and fiftieth day after inoculation.Results The results show that both virus and T-2 toxin have significant influence on the content of LPO in mice liver.The interaction between virus and T-2 toxin was not remarkable.Conclusions The obvious lipid peroxidation induced by coxsackievirus B3m and T-2 toxin is more serious than that caused by Coxs ackievirus B3m or T-2 toxin respectively.
, http://www.100md.com
【Key words】 Coxsackievirus B3m T-2 toxin Lipid peroxide
克山病是一种地方性心肌病，病因不明。迄今为止曾先后提出过10多种假说。其中营养缺乏学说、缺硒学说、病毒感染学说和真菌毒素中毒学说是学者支持较多的4种学说[1]。本文着眼于CoxsackievirusB3m和T-2毒素的复合作用，研究它们对小鼠脂质过氧化物代谢的影响，探讨二者对心肌损伤的可能机制。
1 材料与方法
1.1 动物 BALB/C小鼠，200只，雌雄各半，体重12～16g，协和医科大学动物部提供。动物随机分成4组，I正常对照组，50只，Ⅱ病毒组50只，ⅢT-2毒素组50只，Ⅳ病毒+毒素组50只。
1.2 病毒 CoxsackievirusB3mTCID50为10-7/ml,-70℃保存。
, http://www.100md.com
1.3 毒素 T-2毒素由军事医学科学院毒物药物研究所提供，纯度为99%。将毒素溶解在无水乙醇中，然后用生理盐水稀释成所需浓度，T-2毒素溶液中乙醇终浓度为1%。
1.4 实验感染
1.4.1 正常对照组生理盐水灌胃，腹腔注射不含病毒的1640营养液。
1.4.2 病毒组腹腔接种0.1ml内含1000TCID50的病毒液。
1.4.3 毒素组隔日T-2灌胃，剂量为1.0mg/kg体重，直至实验结束。
1.4.4 病毒+毒素组T-2灌胃，3周后腹腔接种同稀释度病毒液。各组动物于病毒接种后第7天，14天，21天，30天和50天时分批随机处死进行实验。
1.5 测定方法 脂质过氧化物测定采用TBA荧光测定法[2]。
, 百拇医药
1.6 统计处理 实验采用析因分析，所得数据经F检验。
2 结果
小鼠肝脏LPO含量测定结果见表。
表 病毒及毒素对小鼠肝脏LPO含量的影响 组别
动物数
分比(
±s)(nmol/mg)
7天
14天
21天
30天
, 百拇医药
50天
I正常对照组
10
0.293±0.069
0.299±0.089
0.274±0.079
0.277±0.095
0.246±0.071
Ⅱ病毒组
10
0.763±0.213
0.503±0.178
, http://www.100md.com
0.355±0.091
0.275±0.078
0.264±0.072
Ⅲ毒素组
10
0.511±0.121
0.472±0.086
0.484±0.093
0.574±0.125
0.634±0.183
Ⅳ病毒+毒素
10
, 百拇医药
0.907±0.241
0.782±0.090
0.478±0.149
0.331±0.144
0.301±0.116
F检验
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0001
Q检验
, http://www.100md.com
Ⅱ∶Ⅰ**
Ⅱ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅳ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅱ**
Ⅲ∶Ⅱ**
, http://www.100md.com
Ⅳ∶Ⅰ**
Ⅳ∶Ⅰ**
Ⅱ∶Ⅲ*
Ⅲ∶Ⅲ*
Ⅲ∶Ⅲ*
Ⅱ∶Ⅲ**
Ⅱ∶Ⅲ**
Ⅱ∶Ⅳ**
Ⅳ∶Ⅲ**
Ⅳ∶Ⅱ**
, 百拇医药
注：**P<0.01;*P<0.05
图 病毒和毒素对小鼠肝脏LPO的影响
结果经单因素方差(F检验)显示：各阶段(天)四组间均有非常显著性差异(P<
0.0001)，进一步经多组均数间的两两比较(Q检验)显示：第7天时，不论是病毒组，毒素组及病毒+毒素组，小鼠肝脏LPO含量与对照组比均明显升高(P<0.01)；病毒组比毒素组LPO含量较高，两组间差异非常显著(P<0.01)；病毒+毒素组比毒素组LPO含量更高，组间差异非常显著(P<0.01)；但病毒与病毒+毒素组两者之间差异不显著。
第14天时，各实验组小鼠肝脏LPO含量仍高于对照组，差异非常显著(P<0.01)；病毒+毒素组均比单纯病毒组或毒素组LPO含量较高，差异非常显著(P<0.01)；但后两者之间无显著差异。
, 百拇医药
第21天时，仅毒素组与病毒+毒素组LPO含量高于对照组，差异非常显著(P<0.01)，但前两者之间无显著差异。而病毒组明显低于前两组差异均显著(P<0.05)，在病毒组与对照组之间已无明显差异。
第30天及50天时，只有毒素组LPO含量高于其它三组，差异非常显著(P<0.01)，后三组之间无显著差异。
从以上结果可见：病毒组与病毒+毒素组在感染第7天时，LPO含量迅速升高，至第14天病毒组迅速下降，病毒+毒素组有所降低，至21天病毒组已与对照组无差异,而病毒+毒素组与毒素组持平，至30～50天时此两组已与对照组无差异;毒素组虽也引起肝脏LPO含量升高，但升高幅度较平缓，第7天与第50天无差异。
再经2×2析因方差分析，不论在各时间段其中交互作用的P值均大于0.05，可见病毒与毒之间没有交互作用。
3 讨论
, 百拇医药
脂质过氧化是一个自由基介导的过程，是氧化性应激的结果，自由基从脂肪酸侧链甲烯碳中夺取氢原子，可启动脂质的过氧化而形成脂质过氧化物。脂质过氧化物具有毒性，能够损伤大多数体细胞。
1994年彭双清[3]体内体外实验证实T-2毒素引起大鼠心肌损伤的同时，可明显引起肝脏LPO含量增高。另有报道[4]，病毒性心肌炎小鼠心肌LPO含量随着心肌炎性损伤加重而增高。以上实验结果说明，脂质过氧化是心肌细胞损伤的原因之一。
实验结果提示，CoxsackievirusB3m和T-2毒素均可引起小鼠肝脏LPO含量升高。病毒引起LPO含量变化明显，在病毒感染急性期LPO含量迅速升高，恢复期含量降至正常。小鼠持续给予毒素则引起肝脏LPO含量缓慢升高。此两者同时存在时对LPO含量影响较单一因素更为明显，并且含量降至正常的时间也比病毒或毒素所需时间要长。析因分析未发现毒素和病毒之间有交互作用。两者对肝脏LPO含量的作用仅仅是简单的相加作用。
, http://www.100md.com
病毒感染使心肌细胞膜的完整性受到破坏，膜完整性和通透性发生改变，引起一系列生化改变；同时病毒可使全血谷胱甘肽过氧化物酶活力降低而发生脂质过氧化，LPO随之大量产生。而毒素的蛋白合成抑制作用可能是引起小鼠肝脏LPO含量升高的原因。蛋白合成抑制作用影响谷胱甘肽过氧化物酶活力，体内自由基的产生和清除平衡失调，脂质过氧化物不能有效地清除从而导致对机体的毒性损伤。这两个因素同时作用于小鼠，则引起强烈的脂质过氧化，加重心肌细胞损伤。当两个因素作用消失时，肝脏LPO含量恢复正常。
实验提示，CoxsackievirusB3m和T-2毒素作用于生物体可导致机体脂质过氧化损伤，其效应强于单纯给予T-2毒素或CoxsackievirusB3m感染。鉴于脂质过氧化被认为是克山病发病机制中的一个重要环节，本实验的结果为克山病的病因研究提供了佐证。
作者简介：曲波，女，1970年生，博士
, 百拇医药
4 参考文献
[1]刘兴阶.串珠镰刀菌素与克山病病因关系的研究进展[J].卫生研究，1996,25(3):151～156
[2]周翔，辛中国，孙国光.血清过氧化脂质的测定和意义[J].白求恩医科大学学报，1985,11(4):358～361
[3]彭双清，杨进生.硒对T-2毒素致大鼠脂质过氧化损伤的保护效应[J].中国地方病学杂志，1992,11(5):257～259
[4]钱素娟，曾宪惠，于维汉.细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎发生发展的关系[J].中国地方病学杂志，1997,16(4):132～134
*收稿日期：1998-12-01；修订日期：1999-01-12, 百拇医药
单位：哈尔滨医科大学克山病研究所，150086
关键词：T-2毒素；Coxsackievirus B3m；脂质过氧化物
中国地方病学杂志990305 【摘要】 目的 探讨T-2毒素与Coxsa ckievirus B3m的双重作用对小鼠肝脏脂质过氧化物的影响。方法 实验采用析因设计，BALB/C小鼠随机分成4组，I正常对照组；Ⅱ病毒组；ⅢT-2毒素组；Ⅳ病毒+毒素组。病毒组常规腹腔接种0.1ml内含1000TCID50的1640营养液；毒素组隔日按1.0mg/kg体重T-2毒素灌胃，直至实验结束；病毒+毒素组先T-2灌胃，3周后腹腔接种同稀释度病毒。各组鼠于病毒接种后第7天，14天，21天，30天，50天分批处死测定肝脏脂质过氧化物(LPO)含量。结果 显示病毒和T-2毒素均可非常明显(P<0.01)引起小鼠肝脏LPO含量升高。两者双重作用更为明显，但两者之间没有交互作用。结论 Coxsackievirus B3m和T-2毒素作用于生物体可导致机体脂质过氧化损伤，其效应强于单纯给予T-2毒素或Coxsackievirus B3m感染。
, 百拇医药
分类号：R373.23;R519 文献标识码：A 论文编号：1000-4955(1999)03-0173-75
Combined effect of Coxsackievirus B3m and T-2 toxin on metabo lism of lipid peroxide in mice
QU Bo,YIN Xinhua,LIU Lizhi,et al.
Institute of Keshan Disease,Harbin Medical University,Harbin 150086
【Abstract】 Objective To research the combined effec t of Coxsackievirus B3m and T-2 toxin on the metabolism of lipid peroxide by factorial design. Methods BALB/C mice as experimental animals were randomly divided into 4 groups:1.control group;2.virus group;3.T-2 toxin group;4.viru s and T-2 toxin group.The mice in group 2 were injected with Coxsackievirus B3m liquor 1000 TCID 50 in the dose of 0.1ml into abdominal cavity.The mice in group 3 were forced to swallow T-2 toxin every other day in the dose of 1.0m g/kg until the end of the experiment.The mice in group 4 were treated with T-2 toxin in the same way in the first 3 weeks,then the same concentration viral liq uor like that used in group 2 was inoculated.The content of LPO in 4 groups was determined when the mice were killed in the seventh,fourteenth,twentieth,thirtie th and fiftieth day after inoculation.Results The results show that both virus and T-2 toxin have significant influence on the content of LPO in mice liver.The interaction between virus and T-2 toxin was not remarkable.Conclusions The obvious lipid peroxidation induced by coxsackievirus B3m and T-2 toxin is more serious than that caused by Coxs ackievirus B3m or T-2 toxin respectively.
, http://www.100md.com
【Key words】 Coxsackievirus B3m T-2 toxin Lipid peroxide
克山病是一种地方性心肌病，病因不明。迄今为止曾先后提出过10多种假说。其中营养缺乏学说、缺硒学说、病毒感染学说和真菌毒素中毒学说是学者支持较多的4种学说[1]。本文着眼于CoxsackievirusB3m和T-2毒素的复合作用，研究它们对小鼠脂质过氧化物代谢的影响，探讨二者对心肌损伤的可能机制。
1 材料与方法
1.1 动物 BALB/C小鼠，200只，雌雄各半，体重12～16g，协和医科大学动物部提供。动物随机分成4组，I正常对照组，50只，Ⅱ病毒组50只，ⅢT-2毒素组50只，Ⅳ病毒+毒素组50只。
1.2 病毒 CoxsackievirusB3mTCID50为10-7/ml,-70℃保存。
, http://www.100md.com
1.3 毒素 T-2毒素由军事医学科学院毒物药物研究所提供，纯度为99%。将毒素溶解在无水乙醇中，然后用生理盐水稀释成所需浓度，T-2毒素溶液中乙醇终浓度为1%。
1.4 实验感染
1.4.1 正常对照组生理盐水灌胃，腹腔注射不含病毒的1640营养液。
1.4.2 病毒组腹腔接种0.1ml内含1000TCID50的病毒液。
1.4.3 毒素组隔日T-2灌胃，剂量为1.0mg/kg体重，直至实验结束。
1.4.4 病毒+毒素组T-2灌胃，3周后腹腔接种同稀释度病毒液。各组动物于病毒接种后第7天，14天，21天，30天和50天时分批随机处死进行实验。
1.5 测定方法 脂质过氧化物测定采用TBA荧光测定法[2]。
, 百拇医药
1.6 统计处理 实验采用析因分析，所得数据经F检验。
2 结果
小鼠肝脏LPO含量测定结果见表。
表 病毒及毒素对小鼠肝脏LPO含量的影响 组别
动物数
分比(
±s)(nmol/mg)7天
14天
21天
30天
, 百拇医药
50天
I正常对照组
10
0.293±0.069
0.299±0.089
0.274±0.079
0.277±0.095
0.246±0.071
Ⅱ病毒组
10
0.763±0.213
0.503±0.178
, http://www.100md.com
0.355±0.091
0.275±0.078
0.264±0.072
Ⅲ毒素组
10
0.511±0.121
0.472±0.086
0.484±0.093
0.574±0.125
0.634±0.183
Ⅳ病毒+毒素
10
, 百拇医药
0.907±0.241
0.782±0.090
0.478±0.149
0.331±0.144
0.301±0.116
F检验
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0001
Q检验
, http://www.100md.com
Ⅱ∶Ⅰ**
Ⅱ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅰ**
Ⅳ∶Ⅰ**
Ⅲ∶Ⅱ**
Ⅲ∶Ⅱ**
, http://www.100md.com
Ⅳ∶Ⅰ**
Ⅳ∶Ⅰ**
Ⅱ∶Ⅲ*
Ⅲ∶Ⅲ*
Ⅲ∶Ⅲ*
Ⅱ∶Ⅲ**
Ⅱ∶Ⅲ**
Ⅱ∶Ⅳ**
Ⅳ∶Ⅲ**
Ⅳ∶Ⅱ**
, 百拇医药
注：**P<0.01;*P<0.05
图 病毒和毒素对小鼠肝脏LPO的影响
结果经单因素方差(F检验)显示：各阶段(天)四组间均有非常显著性差异(P<
0.0001)，进一步经多组均数间的两两比较(Q检验)显示：第7天时，不论是病毒组，毒素组及病毒+毒素组，小鼠肝脏LPO含量与对照组比均明显升高(P<0.01)；病毒组比毒素组LPO含量较高，两组间差异非常显著(P<0.01)；病毒+毒素组比毒素组LPO含量更高，组间差异非常显著(P<0.01)；但病毒与病毒+毒素组两者之间差异不显著。
第14天时，各实验组小鼠肝脏LPO含量仍高于对照组，差异非常显著(P<0.01)；病毒+毒素组均比单纯病毒组或毒素组LPO含量较高，差异非常显著(P<0.01)；但后两者之间无显著差异。
, 百拇医药
第21天时，仅毒素组与病毒+毒素组LPO含量高于对照组，差异非常显著(P<0.01)，但前两者之间无显著差异。而病毒组明显低于前两组差异均显著(P<0.05)，在病毒组与对照组之间已无明显差异。
第30天及50天时，只有毒素组LPO含量高于其它三组，差异非常显著(P<0.01)，后三组之间无显著差异。
从以上结果可见：病毒组与病毒+毒素组在感染第7天时，LPO含量迅速升高，至第14天病毒组迅速下降，病毒+毒素组有所降低，至21天病毒组已与对照组无差异,而病毒+毒素组与毒素组持平，至30～50天时此两组已与对照组无差异;毒素组虽也引起肝脏LPO含量升高，但升高幅度较平缓，第7天与第50天无差异。
再经2×2析因方差分析，不论在各时间段其中交互作用的P值均大于0.05，可见病毒与毒之间没有交互作用。
3 讨论
, 百拇医药
脂质过氧化是一个自由基介导的过程，是氧化性应激的结果，自由基从脂肪酸侧链甲烯碳中夺取氢原子，可启动脂质的过氧化而形成脂质过氧化物。脂质过氧化物具有毒性，能够损伤大多数体细胞。
1994年彭双清[3]体内体外实验证实T-2毒素引起大鼠心肌损伤的同时，可明显引起肝脏LPO含量增高。另有报道[4]，病毒性心肌炎小鼠心肌LPO含量随着心肌炎性损伤加重而增高。以上实验结果说明，脂质过氧化是心肌细胞损伤的原因之一。
实验结果提示，CoxsackievirusB3m和T-2毒素均可引起小鼠肝脏LPO含量升高。病毒引起LPO含量变化明显，在病毒感染急性期LPO含量迅速升高，恢复期含量降至正常。小鼠持续给予毒素则引起肝脏LPO含量缓慢升高。此两者同时存在时对LPO含量影响较单一因素更为明显，并且含量降至正常的时间也比病毒或毒素所需时间要长。析因分析未发现毒素和病毒之间有交互作用。两者对肝脏LPO含量的作用仅仅是简单的相加作用。
, http://www.100md.com
病毒感染使心肌细胞膜的完整性受到破坏，膜完整性和通透性发生改变，引起一系列生化改变；同时病毒可使全血谷胱甘肽过氧化物酶活力降低而发生脂质过氧化，LPO随之大量产生。而毒素的蛋白合成抑制作用可能是引起小鼠肝脏LPO含量升高的原因。蛋白合成抑制作用影响谷胱甘肽过氧化物酶活力，体内自由基的产生和清除平衡失调，脂质过氧化物不能有效地清除从而导致对机体的毒性损伤。这两个因素同时作用于小鼠，则引起强烈的脂质过氧化，加重心肌细胞损伤。当两个因素作用消失时，肝脏LPO含量恢复正常。
实验提示，CoxsackievirusB3m和T-2毒素作用于生物体可导致机体脂质过氧化损伤，其效应强于单纯给予T-2毒素或CoxsackievirusB3m感染。鉴于脂质过氧化被认为是克山病发病机制中的一个重要环节，本实验的结果为克山病的病因研究提供了佐证。
作者简介：曲波，女，1970年生，博士
, 百拇医药
4 参考文献
[1]刘兴阶.串珠镰刀菌素与克山病病因关系的研究进展[J].卫生研究，1996,25(3):151～156
[2]周翔，辛中国，孙国光.血清过氧化脂质的测定和意义[J].白求恩医科大学学报，1985,11(4):358～361
[3]彭双清，杨进生.硒对T-2毒素致大鼠脂质过氧化损伤的保护效应[J].中国地方病学杂志，1992,11(5):257～259
[4]钱素娟，曾宪惠，于维汉.细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎发生发展的关系[J].中国地方病学杂志，1997,16(4):132～134
*收稿日期：1998-12-01；修订日期：1999-01-12, 百拇医药