SLE患者血清DNA、Dnase与抗DNA抗体的测定及相互关系
作者：陈宜芳 陈明春 李伯有 曾凡钦 许德清
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院皮肤科(510120)
关键词：红斑狼疮，系统性；DNA；DNA酶；抗DNA抗体
广东医学991211 【摘要】 目的 了解SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体的水平以及三者间的相互关系，探讨其在SLE发生发展中的作用及临床意义。方法 荧光分光光度法测定抗DNA，单相酶扩散法测定DNase，金标免疫斑点法测定抗DNA抗体。结果 SLE患者血清DNA、抗DNA抗体水平高于正常人，而DNase水平低于正常人；活动期患者DNA、抗DNA抗体水平高于缓解期患者，而DNase水平低于缓解期患者；伴肾损害患者的DNase水平明显低于非肾损害患者；血清DNA浓度与DNase活性呈显著性负相关，DNA、抗DNA抗体水平及DNase活性均与病情积分相关。结论 SLE患者血中DNase活性下降、DNA及抗DNA抗体水平升高并形成免疫复合物，三者间相互作用，共同促进SLE的发生发展。
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系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，患者体内存在多种自身抗体及抗原抗体复合物，DNA-抗DNA免疫复合物在SLE的发病中起着重要作用[1]。SLE患者血循环中DNA水平升高，其原因迄今尚不清楚。本文检测了63例SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体的水平，旨在比较三者间的相互关系并探讨其在SLE发生发展中的作用及临床意义。
1 资料与方法
1.1 研究对象 SLE患者63例，男6例，女57例；年龄12～65岁，平均36岁。全部为我科1997年9月～1998年3月的住院及门诊患者。所有患者均符合美国风湿病协会1982年修订的诊断标准。参照文献[2]，根据患者的临床症状及实验室检查评定病情活动积分，将患者分为活动期和缓解期、伴肾损害和非肾损害。正常对照组：我市中心血站的健康献血员38例，性别构成及年龄均与患者组相匹配。
1.2 DNA测定 荧光分光光度法。其原理为溴化乙啶(EB)与DNA结合，形成一种荧光络合物(EB-DNA)，这种络合物的荧光强度与DNA的浓度成正比。用荧光分光光度计(F-2000型，日本Hitachi公司)测定荧光强度。
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1.3 DNase测定 单相酶扩散法[3]。其原理为：在含有DNA与EB的琼脂板上打孔加样，样本中的DNase向周围扩散，水解琼脂板中的DNA形成水解环，在紫外透射仪(WP-1型)下可见为不发荧光的暗环。在一定条件下水解环的大小与DNase的浓度成正比。
1.4 抗DNA抗体测定 金标免疫斑点法，以抗体滴度>1∶10为阳性。
1.5 其他观察指标 ANA：间接免疫荧光法。补体C3及C4：免疫化学比浊法，Beckman Array 360蛋白分析仪。以上检查项目由本院检验科专人操作。
1.6 统计学处理 计量资料以
±s表示，分别采用t检验、χ2检验及直线相关分析。
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2 结果
2.1 SLE患者血清DNA、DNase、抗DNA抗体的测定结果 见表1。
表1 SLE患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的测定结果 组别
例数
DNA(μg/mL)
DNase(ng/mL)
抗DNA抗体阳性率(%)
SLE
63
76.7±26.8*
28.5±8.3*
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38.1
正常
38
39.5±5.8
51.2±3.7
0
与正常组比较*P<0.01
2.2 SLE活动期与缓解期患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 相关分析发现，不论在活动期还是缓解期，血清DNA含量都与DNase浓度成负相关(活动期：r=-0.745，P<0.01；缓解期：r=-0.827，P<0.01)，而两者均与抗DNA抗体无相关性。见表2。
表2 SLE活动期与缓解期患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 组别
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例数
DNA(μg/mL)
DNase(ng/mL)
抗DNA抗体阳性率(%)
活动期
35
92.1±20.3*
18.7±5.9*
45.7**
缓解期
28
57.2±16.1
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40.8±4.3
28.6
与缓解期比较*P<0.01，**P<0.05
2.3 SLE肾损组与非肾损组患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 见表3。表3 SLE肾损与非肾损患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 组别
例数
DNA(μg/mL)
DNase(ng/mL)
抗DNA抗体阳性率(%)
肾损
21
, 百拇医药
54±18.5*
15.5±5.8*
71.4*
非肾损
42
52±11.6
35.0±4.8
21.4
*与非肾损组比较P<0.01
2.4 SLE患者血清DNA及DNase与血沉、ANA、补体C3、C4的相关性 直接相关分析结果为：DNA水平与血沉、ANA呈正相关(r分别为0.683，0.316，P值分别<0.001，0.05)，与C3、C4呈负相关(r分别为-0.427，-0.374，P值均小于0.01)；DNase浓度与血沉、ANA呈负相关(r分别为-0.701，-0.416，P值分别<0.001，0.01)，与C3、C4呈正相关(r分别为0.469，0.438，P值均小于0.01)。
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2.5 SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体与病情积分的相关性 直线相关分析表明，患者血清DNA水平与病情积分呈正相关(r=0.754,P<0.01)。DNase水平与病情积分呈负相关(r=-0.884，P<0.01)；抗DNA抗体滴度与病情积分呈正相关(r=0.547,P<0.01)。三者与病情积分的相关程度依次为DNase>DNA>抗DNA抗体。
3 讨论
SLE的发病机理迄今仍不十分清楚，其主要特征为患者体内存在各种自身抗体，以抗DNA抗体尤为引人注目，患者血清DNA浓度升高[1]，但其机制不明。本文首次对SLE患者进行血清DNA、DNase、抗DNA抗体的同步测定，结果表明，SLE患者血清DNA水平高于正常人，而DNase低于正常人，活动期患者DNA水平高于缓解期，而DNase低于缓解期；DNA的升高与DNase的低下相平行，提示DNase活性不足是造成血中DNA升高的重要原因。机体因代谢、衰老、炎症等都可释放DNA到血中，正常情况下，这些DNA可迅速被体内DNase降解，其半衰期约4 min左右，而SLE患者因其血中DNase活性低下，于是造成DNA在体内滞留。
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本文发现SLE患者的抗DNA抗体水平明显高于正常人，活动期患者高于缓解期患者，这与以往的文献报道相同。抗DNA抗体的水平与血清DNA，DNase的水平均无相关性，因此我们认为抗体升高的原因并非是由于DNA抗原的刺激，而是患者免疫功能紊乱、B细胞多克隆激活的结果。
我们还发现DNase低下与DNA升高的程度均与病情积分明显相关，推测由于DNase活性低下造成血循环中DNA堆积，后者对DNA抗体起选择作用，两者结合形成免疫复合物在疾病发展中发挥一定作用。
本文对SLE伴肾损和非肾损患者进行比较分析，发现前者的DNase水平明显低于后者。国外学者检测了狼疮鼠血清中的DNase，发现NZB/WF1的DNase浓度明显低于同样性别和年龄的正常小鼠，更有意义的发现是小鼠先有DNase的低下，然后才有抗DNA抗体的产生[4]。作者认为DNase活性低下在提高DNA核蛋白抗原性方面起着重要作用。值得注意的是：在伴有肾损害的SLE患者中，虽DNase水平低下，但血清DNA水平并无明显升高，我们推测肾损患者可能因其大量DNA与抗DNA抗体形成免疫复合物沉积于组织器官，而致使血中游离DNA反而减少。有实验用酶切和32P标记的电泳自显影也发现，狼疮肾炎血清中游离DNA很少，多以免疫复合物的形式出现。
, 百拇医药
SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体均与病情积分有相关性，相关程度依次为DNase>DNA>抗DNA抗体。检测血清DNA、DNase能及时判断病情变化，而抗DNA抗体滴度的改变则需要一定的时间，但可以持续较久，更实用于疾病的诊断。
参考文献
1 Mohan C, Datta SK. Lupus: key pathogenic mechanisms and contributing factors. Clinical Immunology & Immunopathology,1995,77(3):209
2 许蓓红，许德清，谢彦博.SLE患者BPMC表面的DNA受体及其临床意义.中华皮肤科杂志，1991，24：228
3 曾凡钦，陈宜芳，李伯有，等.SLE患者血清DNA酶测定的临床意义.中华皮肤科杂志，1998，31：354
4 Macanovic M, Lachmann PJ. Measurement of deoxyribonuclease I in the serum and urine of system lupus erythematosus-prone NZB/W mice by a new radial enzyme diffusion assay. Clin Exp Immunol,1997,108(2):220, 百拇医药
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院皮肤科(510120)
关键词：红斑狼疮，系统性；DNA；DNA酶；抗DNA抗体
广东医学991211 【摘要】 目的 了解SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体的水平以及三者间的相互关系，探讨其在SLE发生发展中的作用及临床意义。方法 荧光分光光度法测定抗DNA，单相酶扩散法测定DNase，金标免疫斑点法测定抗DNA抗体。结果 SLE患者血清DNA、抗DNA抗体水平高于正常人，而DNase水平低于正常人；活动期患者DNA、抗DNA抗体水平高于缓解期患者，而DNase水平低于缓解期患者；伴肾损害患者的DNase水平明显低于非肾损害患者；血清DNA浓度与DNase活性呈显著性负相关，DNA、抗DNA抗体水平及DNase活性均与病情积分相关。结论 SLE患者血中DNase活性下降、DNA及抗DNA抗体水平升高并形成免疫复合物，三者间相互作用，共同促进SLE的发生发展。
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系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，患者体内存在多种自身抗体及抗原抗体复合物，DNA-抗DNA免疫复合物在SLE的发病中起着重要作用[1]。SLE患者血循环中DNA水平升高，其原因迄今尚不清楚。本文检测了63例SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体的水平，旨在比较三者间的相互关系并探讨其在SLE发生发展中的作用及临床意义。
1 资料与方法
1.1 研究对象 SLE患者63例，男6例，女57例；年龄12～65岁，平均36岁。全部为我科1997年9月～1998年3月的住院及门诊患者。所有患者均符合美国风湿病协会1982年修订的诊断标准。参照文献[2]，根据患者的临床症状及实验室检查评定病情活动积分，将患者分为活动期和缓解期、伴肾损害和非肾损害。正常对照组：我市中心血站的健康献血员38例，性别构成及年龄均与患者组相匹配。
1.2 DNA测定 荧光分光光度法。其原理为溴化乙啶(EB)与DNA结合，形成一种荧光络合物(EB-DNA)，这种络合物的荧光强度与DNA的浓度成正比。用荧光分光光度计(F-2000型，日本Hitachi公司)测定荧光强度。
, 百拇医药
1.3 DNase测定 单相酶扩散法[3]。其原理为：在含有DNA与EB的琼脂板上打孔加样，样本中的DNase向周围扩散，水解琼脂板中的DNA形成水解环，在紫外透射仪(WP-1型)下可见为不发荧光的暗环。在一定条件下水解环的大小与DNase的浓度成正比。
1.4 抗DNA抗体测定 金标免疫斑点法，以抗体滴度>1∶10为阳性。
1.5 其他观察指标 ANA：间接免疫荧光法。补体C3及C4：免疫化学比浊法，Beckman Array 360蛋白分析仪。以上检查项目由本院检验科专人操作。
1.6 统计学处理 计量资料以
±s表示，分别采用t检验、χ2检验及直线相关分析。, 百拇医药
2 结果
2.1 SLE患者血清DNA、DNase、抗DNA抗体的测定结果 见表1。
表1 SLE患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的测定结果 组别
例数
DNA(μg/mL)
DNase(ng/mL)
抗DNA抗体阳性率(%)
SLE
63
76.7±26.8*
28.5±8.3*
, 百拇医药
38.1
正常
38
39.5±5.8
51.2±3.7
0
与正常组比较*P<0.01
2.2 SLE活动期与缓解期患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 相关分析发现，不论在活动期还是缓解期，血清DNA含量都与DNase浓度成负相关(活动期：r=-0.745，P<0.01；缓解期：r=-0.827，P<0.01)，而两者均与抗DNA抗体无相关性。见表2。
表2 SLE活动期与缓解期患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 组别
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例数
DNA(μg/mL)
DNase(ng/mL)
抗DNA抗体阳性率(%)
活动期
35
92.1±20.3*
18.7±5.9*
45.7**
缓解期
28
57.2±16.1
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40.8±4.3
28.6
与缓解期比较*P<0.01，**P<0.05
2.3 SLE肾损组与非肾损组患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 见表3。表3 SLE肾损与非肾损患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的比较 组别
例数
DNA(μg/mL)
DNase(ng/mL)
抗DNA抗体阳性率(%)
肾损
21
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54±18.5*
15.5±5.8*
71.4*
非肾损
42
52±11.6
35.0±4.8
21.4
*与非肾损组比较P<0.01
2.4 SLE患者血清DNA及DNase与血沉、ANA、补体C3、C4的相关性 直接相关分析结果为：DNA水平与血沉、ANA呈正相关(r分别为0.683，0.316，P值分别<0.001，0.05)，与C3、C4呈负相关(r分别为-0.427，-0.374，P值均小于0.01)；DNase浓度与血沉、ANA呈负相关(r分别为-0.701，-0.416，P值分别<0.001，0.01)，与C3、C4呈正相关(r分别为0.469，0.438，P值均小于0.01)。
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2.5 SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体与病情积分的相关性 直线相关分析表明，患者血清DNA水平与病情积分呈正相关(r=0.754,P<0.01)。DNase水平与病情积分呈负相关(r=-0.884，P<0.01)；抗DNA抗体滴度与病情积分呈正相关(r=0.547,P<0.01)。三者与病情积分的相关程度依次为DNase>DNA>抗DNA抗体。
3 讨论
SLE的发病机理迄今仍不十分清楚，其主要特征为患者体内存在各种自身抗体，以抗DNA抗体尤为引人注目，患者血清DNA浓度升高[1]，但其机制不明。本文首次对SLE患者进行血清DNA、DNase、抗DNA抗体的同步测定，结果表明，SLE患者血清DNA水平高于正常人，而DNase低于正常人，活动期患者DNA水平高于缓解期，而DNase低于缓解期；DNA的升高与DNase的低下相平行，提示DNase活性不足是造成血中DNA升高的重要原因。机体因代谢、衰老、炎症等都可释放DNA到血中，正常情况下，这些DNA可迅速被体内DNase降解，其半衰期约4 min左右，而SLE患者因其血中DNase活性低下，于是造成DNA在体内滞留。
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本文发现SLE患者的抗DNA抗体水平明显高于正常人，活动期患者高于缓解期患者，这与以往的文献报道相同。抗DNA抗体的水平与血清DNA，DNase的水平均无相关性，因此我们认为抗体升高的原因并非是由于DNA抗原的刺激，而是患者免疫功能紊乱、B细胞多克隆激活的结果。
我们还发现DNase低下与DNA升高的程度均与病情积分明显相关，推测由于DNase活性低下造成血循环中DNA堆积，后者对DNA抗体起选择作用，两者结合形成免疫复合物在疾病发展中发挥一定作用。
本文对SLE伴肾损和非肾损患者进行比较分析，发现前者的DNase水平明显低于后者。国外学者检测了狼疮鼠血清中的DNase，发现NZB/WF1的DNase浓度明显低于同样性别和年龄的正常小鼠，更有意义的发现是小鼠先有DNase的低下，然后才有抗DNA抗体的产生[4]。作者认为DNase活性低下在提高DNA核蛋白抗原性方面起着重要作用。值得注意的是：在伴有肾损害的SLE患者中，虽DNase水平低下，但血清DNA水平并无明显升高，我们推测肾损患者可能因其大量DNA与抗DNA抗体形成免疫复合物沉积于组织器官，而致使血中游离DNA反而减少。有实验用酶切和32P标记的电泳自显影也发现，狼疮肾炎血清中游离DNA很少，多以免疫复合物的形式出现。
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SLE患者血清DNA、DNase及抗DNA抗体均与病情积分有相关性，相关程度依次为DNase>DNA>抗DNA抗体。检测血清DNA、DNase能及时判断病情变化，而抗DNA抗体滴度的改变则需要一定的时间，但可以持续较久，更实用于疾病的诊断。
参考文献
1 Mohan C, Datta SK. Lupus: key pathogenic mechanisms and contributing factors. Clinical Immunology & Immunopathology,1995,77(3):209
2 许蓓红，许德清，谢彦博.SLE患者BPMC表面的DNA受体及其临床意义.中华皮肤科杂志，1991，24：228
3 曾凡钦，陈宜芳，李伯有，等.SLE患者血清DNA酶测定的临床意义.中华皮肤科杂志，1998，31：354
4 Macanovic M, Lachmann PJ. Measurement of deoxyribonuclease I in the serum and urine of system lupus erythematosus-prone NZB/W mice by a new radial enzyme diffusion assay. Clin Exp Immunol,1997,108(2):220, 百拇医药