薄层扫描法测定抗类风湿胶囊中粉防己碱的含量
作者：李青翠 钟化人 郝丽晓 窦爱兰
单位：李青翠(山西省药品检验所 太原 030001)；钟化人(山西省药品检验所 太原 030001)；郝丽晓(山西省药品检验所 太原 030001)；窦爱兰(山西省药品检验所 太原 030001)
关键词：抗类风湿胶囊；粉防己碱；薄层扫描法
山西医科大学学报000219 摘要： 样品经有机溶媒提取后，在硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-二乙胺(7∶2∶1)展开，测定波长500 nm，参比波长700 nm，平均回收率为100.2%，RSD为1.9%。
中图分类号： TQ460.7+2 文献标识码： B
文章编号：1007-6611(2000)02-0136-02
, http://www.100md.com
抗类风湿胶囊由防己、苦参、黄柏、百部、甘草、连翘、雷公藤、通草、蚕砂、薏苡仁、半夏、杏仁、滑石粉组成，具有清利湿热、通络宣痹、消肿止痛之功效。粉防己是君药，在处方中起到解表祛风、胜湿、止痉等作用，而粉防己碱是粉防己的主要有效成分，故拟测定粉防己中粉防己碱的含量来控制其内在质量。粉防己碱的含量测定方法已有不少介绍：薄层-洗脱紫外分光光度法[1]，高效液相色谱法[2]，薄层扫描法[3，4]等，方法[1]由于洗脱繁琐、回收率低；方法[2]由于固体成药制剂干扰严重，因此本文选用双波长薄层扫描法，并且在样品的提取和净化上做了很大改进，为排除苦参碱对测定的干扰，筛选了多种展开剂，而得到一种分离效果好，斑点集中，测定准确的分析方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试药 岛津CS-910型薄层扫描仪、C-EIB型积分仪；瑞士CAMAG薄层自动涂布器。青岛海洋化工厂硅胶G；试剂均为分析纯。粉防己碱对照品，中国药品生物制品检定所；抗类风湿胶囊，试制。
, 百拇医药
1.2 供试品溶液及对照品溶液的制备 取本品内容物5 g，精密称定，置50 ml具塞三角瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，加塞，称重，超声处理1 h，放置12 h，补足重量，精密量取上清液20 ml，置蒸发皿中，水浴上蒸至残液约3 ml，用50 ml水转入分液漏斗中，加浓氨试液2 ml，摇匀，用氯仿提取5次，每次30 ml，合并氯仿液，经无水硫酸钠脱水，回收氯仿至干，残留物加无水乙醇使溶解，定量转移至5 ml容量瓶内，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取粉防己碱对照品适量，加无水乙醇制成每1 ml约含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
1.3 实验条件 展开剂石油醚-醋酸乙酯-二乙胺(7∶2∶1)，展距15 cm；显色剂稀碘化铋钾试液喷至薄层板湿润，上面覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定；薄层板为20 cm×20 cm的硅胶G板，铺板厚度为0.5 nm，在105 ℃活化2 h；扫描条件双波长反射法锯齿扫描，λs=500 nm,λR=700 nm,灵敏度×1，狭缝1.25 mm×1.25 mm，线性化参数SX＝3。
, 百拇医药
1.4 线性关系 精密吸取粉防己碱对照品溶液(0.519 mg/ml)1，2，3，4，5，6 μl点样，依法展开，扫描测定峰面积积分值。以点样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y＝113 898X+5 099 r=0.999 4(n=6)。表明粉防己碱在0.5～3.0 μg范围内呈良好的线性关系。
1.5 空白对照试验 取缺防己的成药，同供试品溶液制备方法，制成空白对照液，按上述方法测定，空白样品在粉防己碱相应位置上无斑点出现，表明对测定无干扰，而测定供试品溶液则得到分离度良好的色谱扫描图，见图1。
图1 抗类风湿胶囊薄层扫描图
1.6 稳定性试验 吸取供试品溶液5 μl点样，依法展开、显色，每隔0.5 h测定1次斑点峰面积积分值，结果表明在2 h之内斑点峰面积积分值基本稳定，RSD为2.0%(n=5)。
, 百拇医药
1.7 精密度试验 吸取供试品溶液5 μl，在同一块薄层板上重复点样6次，依法展开，扫描测定斑点峰面积积分值RSD为1.8%。
吸取供试品溶液5 μl，点于不同薄层板上，测定斑点峰面积积分值RSD为2.3%。
1.8 重现性试验 按拟定的含量测定方法，对同一批样品进行重复测定，RSD＝2.1%(n=6)。
1.9 回收率试验 精密称取已知含量的抗类风湿胶囊内容物，分别精密加入一定含量的粉防己碱对照品，按供试品溶液制备方法制样品溶液，依法测定，结果见表1。
表1 粉防己碱回收率 样品含量
(mg)
加入量
, http://www.100md.com (mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
1.125
0.519
0.527
101.5
, http://www.100md.com
1.023
0.834
0.825
98.9
1.102
1.038
1.044
100.6
100.2
1.9
1.203
1.243
1.216
, 百拇医药
97.8
1.198
1.557
1.595
102.4
1.10 样品测定 精密吸取供试品溶液5 μl与8 μl，对照品溶液3 μl与5 μl，分别交叉点于同一薄层板上，依法测定，以外标两点法计算含量。结果见表2。
表2 抗类风湿胶囊中粉防己碱的含量(μg/0.4 g，n=3) 批号
粉防己碱含量
RSD
, http://www.100md.com
(%)
930101
296
301
303
300
1.2
930205
306
303
296
302
1.7
, http://www.100md.com
930215
302
297
303
301
1.1
2 讨论
样品的提取方法比较了70%乙醇索氏回流提取6 h和70%乙醇超声1 h，放置12 h，以下步骤相同，二者结果一致，且与文献[3，4]报道相当。
以稀碘化铋钾试液显色时，一定要喷至薄层板湿润，否则斑点不稳定，测定值下降，影响测定重现性。
作者简介：李青翠，女，1964年11月生，本科，副主任药师
, 百拇医药
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典，一部[M].北京：化学工业出版社，广东科技出版社，1990.124.
[2] 张启伟，姚三桃.抗类风湿胶囊定性定量方法的研究[J].中国中药杂志，1993， 18(4)： 669.
[3] 陈浩桉，徐国钧，金蓉鸾.粉防己药材中汉防己甲素和乙素含量测定[J].中国中药杂志，1993， 18(4)： 232.
[4] 倪龙，马双成，陈德昌，等.薄层扫描法测定止痛软胶囊中粉防己碱的含量[J].中草药，1994， 25(5)： 245.
收稿日期：1999-11-15, 百拇医药
单位：李青翠(山西省药品检验所 太原 030001)；钟化人(山西省药品检验所 太原 030001)；郝丽晓(山西省药品检验所 太原 030001)；窦爱兰(山西省药品检验所 太原 030001)
关键词：抗类风湿胶囊；粉防己碱；薄层扫描法
山西医科大学学报000219 摘要： 样品经有机溶媒提取后，在硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-二乙胺(7∶2∶1)展开，测定波长500 nm，参比波长700 nm，平均回收率为100.2%，RSD为1.9%。
中图分类号： TQ460.7+2 文献标识码： B
文章编号：1007-6611(2000)02-0136-02
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抗类风湿胶囊由防己、苦参、黄柏、百部、甘草、连翘、雷公藤、通草、蚕砂、薏苡仁、半夏、杏仁、滑石粉组成，具有清利湿热、通络宣痹、消肿止痛之功效。粉防己是君药，在处方中起到解表祛风、胜湿、止痉等作用，而粉防己碱是粉防己的主要有效成分，故拟测定粉防己中粉防己碱的含量来控制其内在质量。粉防己碱的含量测定方法已有不少介绍：薄层-洗脱紫外分光光度法[1]，高效液相色谱法[2]，薄层扫描法[3，4]等，方法[1]由于洗脱繁琐、回收率低；方法[2]由于固体成药制剂干扰严重，因此本文选用双波长薄层扫描法，并且在样品的提取和净化上做了很大改进，为排除苦参碱对测定的干扰，筛选了多种展开剂，而得到一种分离效果好，斑点集中，测定准确的分析方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试药 岛津CS-910型薄层扫描仪、C-EIB型积分仪；瑞士CAMAG薄层自动涂布器。青岛海洋化工厂硅胶G；试剂均为分析纯。粉防己碱对照品，中国药品生物制品检定所；抗类风湿胶囊，试制。
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1.2 供试品溶液及对照品溶液的制备 取本品内容物5 g，精密称定，置50 ml具塞三角瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，加塞，称重，超声处理1 h，放置12 h，补足重量，精密量取上清液20 ml，置蒸发皿中，水浴上蒸至残液约3 ml，用50 ml水转入分液漏斗中，加浓氨试液2 ml，摇匀，用氯仿提取5次，每次30 ml，合并氯仿液，经无水硫酸钠脱水，回收氯仿至干，残留物加无水乙醇使溶解，定量转移至5 ml容量瓶内，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取粉防己碱对照品适量，加无水乙醇制成每1 ml约含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
1.3 实验条件 展开剂石油醚-醋酸乙酯-二乙胺(7∶2∶1)，展距15 cm；显色剂稀碘化铋钾试液喷至薄层板湿润，上面覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定；薄层板为20 cm×20 cm的硅胶G板，铺板厚度为0.5 nm，在105 ℃活化2 h；扫描条件双波长反射法锯齿扫描，λs=500 nm,λR=700 nm,灵敏度×1，狭缝1.25 mm×1.25 mm，线性化参数SX＝3。
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1.4 线性关系 精密吸取粉防己碱对照品溶液(0.519 mg/ml)1，2，3，4，5，6 μl点样，依法展开，扫描测定峰面积积分值。以点样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y＝113 898X+5 099 r=0.999 4(n=6)。表明粉防己碱在0.5～3.0 μg范围内呈良好的线性关系。
1.5 空白对照试验 取缺防己的成药，同供试品溶液制备方法，制成空白对照液，按上述方法测定，空白样品在粉防己碱相应位置上无斑点出现，表明对测定无干扰，而测定供试品溶液则得到分离度良好的色谱扫描图，见图1。
图1 抗类风湿胶囊薄层扫描图
1.6 稳定性试验 吸取供试品溶液5 μl点样，依法展开、显色，每隔0.5 h测定1次斑点峰面积积分值，结果表明在2 h之内斑点峰面积积分值基本稳定，RSD为2.0%(n=5)。
, 百拇医药
1.7 精密度试验 吸取供试品溶液5 μl，在同一块薄层板上重复点样6次，依法展开，扫描测定斑点峰面积积分值RSD为1.8%。
吸取供试品溶液5 μl，点于不同薄层板上，测定斑点峰面积积分值RSD为2.3%。
1.8 重现性试验 按拟定的含量测定方法，对同一批样品进行重复测定，RSD＝2.1%(n=6)。
1.9 回收率试验 精密称取已知含量的抗类风湿胶囊内容物，分别精密加入一定含量的粉防己碱对照品，按供试品溶液制备方法制样品溶液，依法测定，结果见表1。
表1 粉防己碱回收率 样品含量
(mg)
加入量
, http://www.100md.com (mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
1.125
0.519
0.527
101.5
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1.023
0.834
0.825
98.9
1.102
1.038
1.044
100.6
100.2
1.9
1.203
1.243
1.216
, 百拇医药
97.8
1.198
1.557
1.595
102.4
1.10 样品测定 精密吸取供试品溶液5 μl与8 μl，对照品溶液3 μl与5 μl，分别交叉点于同一薄层板上，依法测定，以外标两点法计算含量。结果见表2。
表2 抗类风湿胶囊中粉防己碱的含量(μg/0.4 g，n=3) 批号
粉防己碱含量
RSD
, http://www.100md.com
(%)
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296
301
303
300
1.2
930205
306
303
296
302
1.7
, http://www.100md.com
930215
302
297
303
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1.1
2 讨论
样品的提取方法比较了70%乙醇索氏回流提取6 h和70%乙醇超声1 h，放置12 h，以下步骤相同，二者结果一致，且与文献[3，4]报道相当。
以稀碘化铋钾试液显色时，一定要喷至薄层板湿润，否则斑点不稳定，测定值下降，影响测定重现性。
作者简介：李青翠，女，1964年11月生，本科，副主任药师
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参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典，一部[M].北京：化学工业出版社，广东科技出版社，1990.124.
[2] 张启伟，姚三桃.抗类风湿胶囊定性定量方法的研究[J].中国中药杂志，1993， 18(4)： 669.
[3] 陈浩桉，徐国钧，金蓉鸾.粉防己药材中汉防己甲素和乙素含量测定[J].中国中药杂志，1993， 18(4)： 232.
[4] 倪龙，马双成，陈德昌，等.薄层扫描法测定止痛软胶囊中粉防己碱的含量[J].中草药，1994， 25(5)： 245.
收稿日期：1999-11-15, 百拇医药