不同分子量的高纯度透明质酸对猪去全厚皮后伤口愈合的影响
作者：贾赤宇1 陈 璧1 F Arnold2
单位：1 第四军医大学附属西京医院烧伤科(陕西西安，710032)；2 牛津大学邱吉尔医院伤口愈合研究所
关键词：透明质酸；伤口愈合；实验研究
中国修复重建外科杂志980402 摘 要 透明质酸(HA)是一种大分子量的细胞外基质，它可影响伤口愈合。HA的作用与其分子量大小，以及是否含其它蛋白质有关。在猪去全厚皮伤口局部应用不同分子量的高纯度HA 7天，与中分子量的HA(100 ku)和生理盐水对照相比，高分子量的HA(大于1 000 ku)促进伤口的早期收缩，而低分子量HA(10 ku)则对伤口愈合有抑制作用。检测21天的伤口抗撕裂强度，高、中分子量的HA有抑制作用，低分子量HA无作用。用激光多普勒扫描技术检测伤口血运动态变化，高、中分子量HA使第3天伤口血运下降，但在第7天，全部伤口血运增加。实验揭示了不同分子量的HA对伤口收缩、肉芽组织血管生成和伤口愈合强度的作用不一。证明，HA可用于伤口治疗或作为载体，但应注意其确切成分。
, 百拇医药
THE EFFECT OF ULTRAPURE HYALURONIC ACID WITH DIFFERENT MOLECULAR WEIGHTS ON THE HEALING OF PORCINE FULL THICKNESS SKIN WOUND/Jia Chiyu, Chen Bi, F. Arnold. Department of Burn Surgery, Xijing Hospital, The Fourth Military Medical University, Xi'an, P.R.China 710032
Abstract Hyaluronic acid (HA) is an extracellular matrix having a high molecular weight. This study is to investigate (1) whether the ultrapure HA had effect on the healing of full thickness skin wounds in animals, and (2) the relation between the effect of HA and the size of the molecular weight of HA. The ultrapure HA with different molecular weights and HA with intermediate molecular weight were applied topically to the wounds from removal of full thickness of skin and topical application of normal saline was used as control. At 21st. day after the topical application, the tensile strength was reduced in wounds of groups of HA with high and intermediate molecular weights, but not in the group of low molecular weight. Using laser-Doppler scanning of the dynamic changes of the wound perfusion, in the 3rd day the blood supply to the wound was reduced in HA groups of high and intermediate molecular weights, but at the 7th day, the blood supply of all wounds in the two groups was increased. The study revealed that HA with different molecular weights had different actions on the contraction of wounds, the angiogenesis of the granulation tissues and the healing strength of the wounds. It was indicated that hyaluronan could be used for wound treatment or as a carrier, but its accurate composition must be carefully noted.
, 百拇医药
Key words Hyalurocin acid Wound healing Experimental study
透明质酸(hyaluronic acid，HA)存在于成人伤口愈合的早期阶段，但在胚胎修复中则持续存在，因此它可能在胚胎修复的“无瘢痕愈合”中起重要作用[1]。据报道，外源性HA在韧带[2]、角膜[3]、鼓膜[4]损伤和皮肤切口中可增加愈合指数，在实验模型中可减轻肌腱和腹部手术后的粘连[5，6]。大多数情况下的HA不纯，含不同的分子量和蛋白质。有报道，高分子量的HA可促进又可抑制血管生成，这取决于HA的剂量和应用次数。说明，不同分子量的HA对伤口愈合的影响也可能不同。市场上的HA因含蛋白质，使其作用更加复杂化。我们设计本实验的目的是检测：①高纯度的HA是否对急性去全厚皮后动物伤口愈合有影响；②HA的分子量大小与其作用有何种关系。现将实验报道如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 HA溶液的配制
高分子量HA(1 000 ku) 和中分子量HA(100 ku)为干粉， 蛋白质含量小于0.2%(Pronova Biopolymers公司生产)。分子量经粘性测定、激光散射量和凝胶渗透色谱法证实。低分子量HA(10 ku)由高分子量HA经透明质酸酶处理、凝胶过滤(sephadex 50柱)和校对等方法配成。将HA溶于无菌生理盐水中，终浓度为1 mg/ml。对照溶液为生理盐水，使用前一天液体用孔径0.22 μm的过滤器消毒，4℃冰箱贮存过夜。
1.2 伤口模型制作
实验动物为雌性白猪，共8只，体重22 kg～26 kg。于实验前一周购入适应水土，分栏喂养。用笑气、氧气和氟烷混合麻醉。麻醉生效后，在猪背部两侧部脱毛，用有一定顺应性(以适应身体的弯曲)的铝片作成的模具为标准，制作2 cm×2 cm正方形去全厚皮伤口，在伤口四个角的外方6 mm作点标记(图1)。伤口用洗必泰清洗，压迫止血。每个伤口创缘相距4 cm，一行三个，每侧两行。
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图1 猪去全厚皮伤口模型
1.3 治疗和包扎
每行的三个伤口接受相同的治疗(100 μg高、中或低分子量的HA，无菌生理盐水作对照)，用加样器将溶液滴加在创面上。加样时，按动物不同随机选择不同位置的伤口，以避免因解剖位置对伤口愈合的影响。创面局部用药1次/天，7天后停止给药。伤口大小和形状及外方的四个标记点用无菌乙酸盐薄膜绘出。为了避免人为误差，实验采用双盲法，即配制溶液者将溶液编上密码。用透气但不透水的透明薄膜覆盖(Beiersdorf AG公司生产)以防交叉污染。薄膜四周用粘性胶带密封，外加弹力网套固定。
每次换药，猪均予以麻醉，生理盐水冲洗创面，记录创面形状和大小。伤后7天，处死4只动物，另4只继续观察，维持2周，并分别于第11，14和18天换药，直至第21天。
1.4 激光多普勒扫描
, 百拇医药
于伤后0，3和7天，用激光多普勒仪对每个伤口及其周围皮肤进行扫描。检测的范围为4 cm×4 cm，用该扫描仪相连的计算机直接将信号转变为彩色图像，红色表明血运丰富，黄色次之，蓝色或黑色表明血运差。
1.5 组织学检查
在第7天和第21天，对各组的伤口及其周围皮肤作组织学检查，一份常规切片，染色。另一份以多聚甲醛固定，用于电镜观察和冰冻切片。
1.6 抗撕裂强度分析
取一份含伤口全长及周围正常组织的全层皮肤标本，液氮冷冻用于伤口抗撕裂强度分析。仪器为张力测试仪(速度5 mm/min)。
1.7 统计学处理
全部数据均用双相t检验法处理，P值<0.05为有显著差异。
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2 结果
在闭合性敷料下应用HA与Breuing等[7]提出的“湿性伤口模型”原理相符，这对研究猪和人的皮肤修复很有价值。伤口应用HA后动物全部存活。第14天，在伤口四周可见轻度浸渍现象。
2.1 伤口愈合速度
术后即刻，伤口面积略有增加，推测是伤口周围皮肤松弛所致。然后是一“平台期”，大量的肉芽组织产生而引起伤口收缩，最后是由于创缘收缩和上皮化，伤口面积迅速缩小。各治疗组的伤口愈合速度见图2。图2e为用高和低分子量HA治疗组的迭加图。一般情况下，作切口当时由于皮肤松弛，导致面积稍有扩大(约10%)；2天内，面积有缩小；第2天～第3天，面积变化不大；第4天，各治疗组间的差异开始出现。低分子量HA治疗组在第2天～第3天伤口面积稍有扩大(0.16 cm，P<0.05)。相反，与其它治疗组相比，高分子量HA组面积在第2天～第4天有明显减小(0.12 cm)；第6天各治疗组的面积均明显减小(0.18 cm，P<0.05)。用面积的平方根为纵坐标，时间为横坐标制图时可发现，在对照组第5天～第11天，两者呈线性关系(图2f)。与对照组相比，各治疗组中两者的关系也类似。
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图2 各治疗组和对照组创面愈合速度曲线图
a 对照组 b 低分子量HA组 c 中分子量HA组 d 高分子量HA组 e 低分子量HA(实)与高分子量HA(虚)迭加图 f 对照组伤口面积的平方根与愈合时间关系图 (纵坐标为伤口面积，横坐标为天数)
2.2 创面血流测定
制作伤口时，伤基部分血管外露，血流量增加。第3天，对照组或低分子量HA治疗组创基血运量高于中、高分子量HA治疗组。第7天，创面全部被新生的肉芽组织充填，血流量急剧增加，所有治疗组创面血流量均高于对照组(图3)。
2.3 组织学检查
各治疗组间的组织学检查未见明显差别。在伤口中央的切片中，可见与伤口平面平行的新生毛细血管，而新生的成纤维细胞则垂直于伤口平面。
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2.4 伤口抗撕裂强度测定
伤口的抗撕裂强度与治疗有明显的对应性。其变化趋势为：对照组>低分子量HA组>中分子量HA组>高分子量HA组(图4)。高分子量HA组和中分子量HA组与对照组间有显著差异(P<0.05)，但其它组之间无显著差异。
图3 伤后第3天和第7天创面血供情况比较图
图4 第21天不同治疗组的抗撕裂强度对比图
3 讨论
应用高分子量的HA可改变伤口愈合的几个参数：①愈合速度的“平台期”稍有缩短；②伤后第3天创基血流灌注减少；③愈合后的抗撕裂强度轻度减弱。中分子量HA在早期血运和抗撕裂强度方面也有类似作用，但对伤口的早期收缩无明显作用。低分子量HA对创面早期血运和抗撕裂强度无作用，但可抑制早期创面收缩。在第7天，所有HA可使创面血流灌注和创缘收缩加强。
, 百拇医药
有关含蛋白质的HA的实验研究已有报道，但对高纯度(基本上不含蛋白质)尤其是不同分子量的HA对伤口愈合的影响尚未见报道。我们的结论是：HA对组织修复有生物学作用，且与其分子量大小密切相关。其确切机制目前尚不清楚。有关HA在肉芽组织中的数据也很有限，有学者[8]发现增生性瘢痕中HA的分子量大于萎缩性瘢痕中HA的分子量；还有学者[9]发现胚胎愈合中的HA含量下降趋势较成人伤口为慢。我们的实验发现，HA分子量的减小与伤口收缩和血流灌注关系密切。
尽管HA的结构并不复杂，但其在伤口愈合中的作用还了解甚少。HA可“组织”其周围的水份，为“离子通道”创造优先途径，调节蛋白质的能动性；促进细胞粘连和迁移，调节细胞增殖或改变其合成活动，还可调控胶原的合成；延缓某些生长因子的降解速度，加快伤口愈合[10，11]。不同大小分子量的HA可能通过与其受体竞争的机理发挥其不同的作用。
一般说来，改善有缺陷的伤口愈合速度较加速正常伤口愈合容易。例如，至今尚未见任何一种物质对正常皮肤移植的血管生成有明显促进作用，但低分子量的HA可增强有缺陷伤口的血液供应[12]。
, http://www.100md.com
我们的实验结果发现，纯度和分子量大小对HA的生物学效应影响很大。建议在实验室研究和临床观察HA作用时，应注意其纯度和分子量。
激光多普勒扫描能反映检查区域红细胞的运动强度及其速率[13]。一般而言，皮肤特别是伤口的血管分布呈明显的立体空间构象，常规的激光多普勒仪检查范围大约是1 mm，不宜用于分析伤口的血运[14]。我们选用了新的激光多普勒扫描仪，用以分析伤口的血运状态。激光多普勒扫描仪目前尚不能区分是由于血管增生还是血管扩张导致血运增强，鉴别这两种差异还需血管形态测定法。尽管如此，我们认为激光多普勒扫描仪对检测表面伤口的血运动态变化提供了一个无创伤、有价值的新方法。
4 参考文献
1 Adzick NS, Longaker MT. Scarless fetal bealing. Therapeutic implications. Ann Surg, 1992;215(1):3
, 百拇医药
2 McFarland EG. The biology of anterior cruciate ligament reconstructions. Orthopedics, 1993;16(14):403
3 Sugiyama T, Miyanchis, Machida A et al. The effect of sodium hyaluronate on the migration of robbit corueal epithelium Ⅱ. The effect of topical administration. J Ocular Pharmacol, 1991;7(1):53
4 Hellstrom S, Bloom GD, Berghe T et al. A comparison of hyaluronan and fibronectin in the healing of tympanic membrane perforations. Eur Arch Otorhinolarynogol, 1991;248(7):2305
, http://www.100md.com
5 Fournier N, Doillon CJ. In vitro angiogenesis in fibrin matrices containing fibronection or hyaluronic adic. Cell Bio Int Rep, 1992;16(4):1251
6 King SR, Hickerson WL, Proctor KG. Benefical actions of exogenous hyaluronic acid on wound healing. Surgery, 1991;109(1):76
7 Breuing K, Eriksson E, Liu P et al. Healing of partial thickness porcine wounds in a liquid enoironment. J Surg Res, 1991;52(1):50
, 百拇医药
8 Ueno N, Chakrabarti B, Garg HG. Hyaluronic acid of human skin and post-burn scar: Heterogeneity in primary structure and molecularweiht. Biochem Int, 1992;26:787
9 Laurent TC, Fraser RE. Hyaluronan. Federation American Societies Experimental Biology J, 1992;6(8):2397
10 Arnold F, West DC. Angiogenesis in wound healing. Pharmacol Ther, 1992;52(3):407
11 Berry SM, Green MH, Amiel D. Hyaluronan: A potential carrier for growth factors for the healing of ligamentous tissues. Wound Rep Reg, 1997;5(1):33
, 百拇医药
12 Lees VC, West DC. Angiogenesis in delayed revascularization model is accelerated by low molecular weight hyaluronic acid fragements. Wound Rep Reg, 1993;1(1):113
13 Bonner RF, Nossal R. Principles of laser doppler flowmetry. In Hepherd AP, oberg PA, editors. Laser Doppler flowmetry. Boston Kluwer Academic, 1990:12～18
14 Wardell K, Jakobsson A, Nisson G. Larser doppler perfusion imaging by dynamic light scattering. IEEE Trans Bonmed Eng, 1993;40(1):309
(收稿：1997-01-27修回：1997-05-20), http://www.100md.com
单位：1 第四军医大学附属西京医院烧伤科(陕西西安，710032)；2 牛津大学邱吉尔医院伤口愈合研究所
关键词：透明质酸；伤口愈合；实验研究
中国修复重建外科杂志980402 摘 要 透明质酸(HA)是一种大分子量的细胞外基质，它可影响伤口愈合。HA的作用与其分子量大小，以及是否含其它蛋白质有关。在猪去全厚皮伤口局部应用不同分子量的高纯度HA 7天，与中分子量的HA(100 ku)和生理盐水对照相比，高分子量的HA(大于1 000 ku)促进伤口的早期收缩，而低分子量HA(10 ku)则对伤口愈合有抑制作用。检测21天的伤口抗撕裂强度，高、中分子量的HA有抑制作用，低分子量HA无作用。用激光多普勒扫描技术检测伤口血运动态变化，高、中分子量HA使第3天伤口血运下降，但在第7天，全部伤口血运增加。实验揭示了不同分子量的HA对伤口收缩、肉芽组织血管生成和伤口愈合强度的作用不一。证明，HA可用于伤口治疗或作为载体，但应注意其确切成分。
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THE EFFECT OF ULTRAPURE HYALURONIC ACID WITH DIFFERENT MOLECULAR WEIGHTS ON THE HEALING OF PORCINE FULL THICKNESS SKIN WOUND/Jia Chiyu, Chen Bi, F. Arnold. Department of Burn Surgery, Xijing Hospital, The Fourth Military Medical University, Xi'an, P.R.China 710032
Abstract Hyaluronic acid (HA) is an extracellular matrix having a high molecular weight. This study is to investigate (1) whether the ultrapure HA had effect on the healing of full thickness skin wounds in animals, and (2) the relation between the effect of HA and the size of the molecular weight of HA. The ultrapure HA with different molecular weights and HA with intermediate molecular weight were applied topically to the wounds from removal of full thickness of skin and topical application of normal saline was used as control. At 21st. day after the topical application, the tensile strength was reduced in wounds of groups of HA with high and intermediate molecular weights, but not in the group of low molecular weight. Using laser-Doppler scanning of the dynamic changes of the wound perfusion, in the 3rd day the blood supply to the wound was reduced in HA groups of high and intermediate molecular weights, but at the 7th day, the blood supply of all wounds in the two groups was increased. The study revealed that HA with different molecular weights had different actions on the contraction of wounds, the angiogenesis of the granulation tissues and the healing strength of the wounds. It was indicated that hyaluronan could be used for wound treatment or as a carrier, but its accurate composition must be carefully noted.
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Key words Hyalurocin acid Wound healing Experimental study
透明质酸(hyaluronic acid，HA)存在于成人伤口愈合的早期阶段，但在胚胎修复中则持续存在，因此它可能在胚胎修复的“无瘢痕愈合”中起重要作用[1]。据报道，外源性HA在韧带[2]、角膜[3]、鼓膜[4]损伤和皮肤切口中可增加愈合指数，在实验模型中可减轻肌腱和腹部手术后的粘连[5，6]。大多数情况下的HA不纯，含不同的分子量和蛋白质。有报道，高分子量的HA可促进又可抑制血管生成，这取决于HA的剂量和应用次数。说明，不同分子量的HA对伤口愈合的影响也可能不同。市场上的HA因含蛋白质，使其作用更加复杂化。我们设计本实验的目的是检测：①高纯度的HA是否对急性去全厚皮后动物伤口愈合有影响；②HA的分子量大小与其作用有何种关系。现将实验报道如下。
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1 材料与方法
1.1 HA溶液的配制
高分子量HA(1 000 ku) 和中分子量HA(100 ku)为干粉， 蛋白质含量小于0.2%(Pronova Biopolymers公司生产)。分子量经粘性测定、激光散射量和凝胶渗透色谱法证实。低分子量HA(10 ku)由高分子量HA经透明质酸酶处理、凝胶过滤(sephadex 50柱)和校对等方法配成。将HA溶于无菌生理盐水中，终浓度为1 mg/ml。对照溶液为生理盐水，使用前一天液体用孔径0.22 μm的过滤器消毒，4℃冰箱贮存过夜。
1.2 伤口模型制作
实验动物为雌性白猪，共8只，体重22 kg～26 kg。于实验前一周购入适应水土，分栏喂养。用笑气、氧气和氟烷混合麻醉。麻醉生效后，在猪背部两侧部脱毛，用有一定顺应性(以适应身体的弯曲)的铝片作成的模具为标准，制作2 cm×2 cm正方形去全厚皮伤口，在伤口四个角的外方6 mm作点标记(图1)。伤口用洗必泰清洗，压迫止血。每个伤口创缘相距4 cm，一行三个，每侧两行。
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图1 猪去全厚皮伤口模型
1.3 治疗和包扎
每行的三个伤口接受相同的治疗(100 μg高、中或低分子量的HA，无菌生理盐水作对照)，用加样器将溶液滴加在创面上。加样时，按动物不同随机选择不同位置的伤口，以避免因解剖位置对伤口愈合的影响。创面局部用药1次/天，7天后停止给药。伤口大小和形状及外方的四个标记点用无菌乙酸盐薄膜绘出。为了避免人为误差，实验采用双盲法，即配制溶液者将溶液编上密码。用透气但不透水的透明薄膜覆盖(Beiersdorf AG公司生产)以防交叉污染。薄膜四周用粘性胶带密封，外加弹力网套固定。
每次换药，猪均予以麻醉，生理盐水冲洗创面，记录创面形状和大小。伤后7天，处死4只动物，另4只继续观察，维持2周，并分别于第11，14和18天换药，直至第21天。
1.4 激光多普勒扫描
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于伤后0，3和7天，用激光多普勒仪对每个伤口及其周围皮肤进行扫描。检测的范围为4 cm×4 cm，用该扫描仪相连的计算机直接将信号转变为彩色图像，红色表明血运丰富，黄色次之，蓝色或黑色表明血运差。
1.5 组织学检查
在第7天和第21天，对各组的伤口及其周围皮肤作组织学检查，一份常规切片，染色。另一份以多聚甲醛固定，用于电镜观察和冰冻切片。
1.6 抗撕裂强度分析
取一份含伤口全长及周围正常组织的全层皮肤标本，液氮冷冻用于伤口抗撕裂强度分析。仪器为张力测试仪(速度5 mm/min)。
1.7 统计学处理
全部数据均用双相t检验法处理，P值<0.05为有显著差异。
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2 结果
在闭合性敷料下应用HA与Breuing等[7]提出的“湿性伤口模型”原理相符，这对研究猪和人的皮肤修复很有价值。伤口应用HA后动物全部存活。第14天，在伤口四周可见轻度浸渍现象。
2.1 伤口愈合速度
术后即刻，伤口面积略有增加，推测是伤口周围皮肤松弛所致。然后是一“平台期”，大量的肉芽组织产生而引起伤口收缩，最后是由于创缘收缩和上皮化，伤口面积迅速缩小。各治疗组的伤口愈合速度见图2。图2e为用高和低分子量HA治疗组的迭加图。一般情况下，作切口当时由于皮肤松弛，导致面积稍有扩大(约10%)；2天内，面积有缩小；第2天～第3天，面积变化不大；第4天，各治疗组间的差异开始出现。低分子量HA治疗组在第2天～第3天伤口面积稍有扩大(0.16 cm，P<0.05)。相反，与其它治疗组相比，高分子量HA组面积在第2天～第4天有明显减小(0.12 cm)；第6天各治疗组的面积均明显减小(0.18 cm，P<0.05)。用面积的平方根为纵坐标，时间为横坐标制图时可发现，在对照组第5天～第11天，两者呈线性关系(图2f)。与对照组相比，各治疗组中两者的关系也类似。
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图2 各治疗组和对照组创面愈合速度曲线图
a 对照组 b 低分子量HA组 c 中分子量HA组 d 高分子量HA组 e 低分子量HA(实)与高分子量HA(虚)迭加图 f 对照组伤口面积的平方根与愈合时间关系图 (纵坐标为伤口面积，横坐标为天数)
2.2 创面血流测定
制作伤口时，伤基部分血管外露，血流量增加。第3天，对照组或低分子量HA治疗组创基血运量高于中、高分子量HA治疗组。第7天，创面全部被新生的肉芽组织充填，血流量急剧增加，所有治疗组创面血流量均高于对照组(图3)。
2.3 组织学检查
各治疗组间的组织学检查未见明显差别。在伤口中央的切片中，可见与伤口平面平行的新生毛细血管，而新生的成纤维细胞则垂直于伤口平面。
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2.4 伤口抗撕裂强度测定
伤口的抗撕裂强度与治疗有明显的对应性。其变化趋势为：对照组>低分子量HA组>中分子量HA组>高分子量HA组(图4)。高分子量HA组和中分子量HA组与对照组间有显著差异(P<0.05)，但其它组之间无显著差异。
图3 伤后第3天和第7天创面血供情况比较图
图4 第21天不同治疗组的抗撕裂强度对比图
3 讨论
应用高分子量的HA可改变伤口愈合的几个参数：①愈合速度的“平台期”稍有缩短；②伤后第3天创基血流灌注减少；③愈合后的抗撕裂强度轻度减弱。中分子量HA在早期血运和抗撕裂强度方面也有类似作用，但对伤口的早期收缩无明显作用。低分子量HA对创面早期血运和抗撕裂强度无作用，但可抑制早期创面收缩。在第7天，所有HA可使创面血流灌注和创缘收缩加强。
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有关含蛋白质的HA的实验研究已有报道，但对高纯度(基本上不含蛋白质)尤其是不同分子量的HA对伤口愈合的影响尚未见报道。我们的结论是：HA对组织修复有生物学作用，且与其分子量大小密切相关。其确切机制目前尚不清楚。有关HA在肉芽组织中的数据也很有限，有学者[8]发现增生性瘢痕中HA的分子量大于萎缩性瘢痕中HA的分子量；还有学者[9]发现胚胎愈合中的HA含量下降趋势较成人伤口为慢。我们的实验发现，HA分子量的减小与伤口收缩和血流灌注关系密切。
尽管HA的结构并不复杂，但其在伤口愈合中的作用还了解甚少。HA可“组织”其周围的水份，为“离子通道”创造优先途径，调节蛋白质的能动性；促进细胞粘连和迁移，调节细胞增殖或改变其合成活动，还可调控胶原的合成；延缓某些生长因子的降解速度，加快伤口愈合[10，11]。不同大小分子量的HA可能通过与其受体竞争的机理发挥其不同的作用。
一般说来，改善有缺陷的伤口愈合速度较加速正常伤口愈合容易。例如，至今尚未见任何一种物质对正常皮肤移植的血管生成有明显促进作用，但低分子量的HA可增强有缺陷伤口的血液供应[12]。
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我们的实验结果发现，纯度和分子量大小对HA的生物学效应影响很大。建议在实验室研究和临床观察HA作用时，应注意其纯度和分子量。
激光多普勒扫描能反映检查区域红细胞的运动强度及其速率[13]。一般而言，皮肤特别是伤口的血管分布呈明显的立体空间构象，常规的激光多普勒仪检查范围大约是1 mm，不宜用于分析伤口的血运[14]。我们选用了新的激光多普勒扫描仪，用以分析伤口的血运状态。激光多普勒扫描仪目前尚不能区分是由于血管增生还是血管扩张导致血运增强，鉴别这两种差异还需血管形态测定法。尽管如此，我们认为激光多普勒扫描仪对检测表面伤口的血运动态变化提供了一个无创伤、有价值的新方法。
4 参考文献
1 Adzick NS, Longaker MT. Scarless fetal bealing. Therapeutic implications. Ann Surg, 1992;215(1):3
, 百拇医药
2 McFarland EG. The biology of anterior cruciate ligament reconstructions. Orthopedics, 1993;16(14):403
3 Sugiyama T, Miyanchis, Machida A et al. The effect of sodium hyaluronate on the migration of robbit corueal epithelium Ⅱ. The effect of topical administration. J Ocular Pharmacol, 1991;7(1):53
4 Hellstrom S, Bloom GD, Berghe T et al. A comparison of hyaluronan and fibronectin in the healing of tympanic membrane perforations. Eur Arch Otorhinolarynogol, 1991;248(7):2305
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5 Fournier N, Doillon CJ. In vitro angiogenesis in fibrin matrices containing fibronection or hyaluronic adic. Cell Bio Int Rep, 1992;16(4):1251
6 King SR, Hickerson WL, Proctor KG. Benefical actions of exogenous hyaluronic acid on wound healing. Surgery, 1991;109(1):76
7 Breuing K, Eriksson E, Liu P et al. Healing of partial thickness porcine wounds in a liquid enoironment. J Surg Res, 1991;52(1):50
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8 Ueno N, Chakrabarti B, Garg HG. Hyaluronic acid of human skin and post-burn scar: Heterogeneity in primary structure and molecularweiht. Biochem Int, 1992;26:787
9 Laurent TC, Fraser RE. Hyaluronan. Federation American Societies Experimental Biology J, 1992;6(8):2397
10 Arnold F, West DC. Angiogenesis in wound healing. Pharmacol Ther, 1992;52(3):407
11 Berry SM, Green MH, Amiel D. Hyaluronan: A potential carrier for growth factors for the healing of ligamentous tissues. Wound Rep Reg, 1997;5(1):33
, 百拇医药
12 Lees VC, West DC. Angiogenesis in delayed revascularization model is accelerated by low molecular weight hyaluronic acid fragements. Wound Rep Reg, 1993;1(1):113
13 Bonner RF, Nossal R. Principles of laser doppler flowmetry. In Hepherd AP, oberg PA, editors. Laser Doppler flowmetry. Boston Kluwer Academic, 1990:12～18
14 Wardell K, Jakobsson A, Nisson G. Larser doppler perfusion imaging by dynamic light scattering. IEEE Trans Bonmed Eng, 1993;40(1):309
(收稿：1997-01-27修回：1997-05-20), http://www.100md.com