2种嗜银染色改进法的应用
作者：陈森林 王劲 陈梦红
单位：陈森林 王劲 陈梦红(湖南省肿瘤医院病理科，长沙 410006)
关键词：银染色法；煮沸法
临床与实验病理学杂志990432
分类号 R446；R361.2 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0358-02
在以往的嗜银染色中由于染色时间长、操作较为复杂，制约了这种技术的广泛应用。我们经复习文献发现2种改进法既可保证染色结果又能缩短染色时间。为了更好地了解和掌握这2种方法，我们作了应用染色实验，并根据条件对原方法稍作修改，现报道如下。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 选择已确诊的10例肿瘤，其中肺类癌3例，甲状腺髓样癌4例，嗜铬细胞瘤3例。标本经常规处理后切片，厚4 μm。切片经Grimelius方法证实有嗜银细胞存在，然后应用下列方法进行实验。
1.2 方法
1.2.1 Staples煮沸法 用煮沸的双蒸馏水50 ml，测定水温在85℃～90℃时加入2 ml 2%的硝酸银(新鲜配制)，当水温降至80℃时放入切片停留3 min，用同时煮沸的双蒸馏水配制还原液，允许冷却至65℃～70℃，切片从银溶液中取出并擦去多余的液体，用热蒸馏水轻洗入还原液中1 min，蒸馏水轻洗后再入银溶液内1 min，热蒸馏水轻洗后再入还原液内直至显色适当为止，充分水洗后脱水、透明、封片。
1.2.2 Garvey染色还原一步法 用30 ml 1.5%对苯二酚水溶液，加入10 ml 5%明胶水溶液，然后加入1.1 ml 1%的硝酸银水溶液，用前混合振动均匀后放入切片，置60℃水浴箱中18～20 min，用无水酒精洗2次或用热水洗2次后，脱水、透明、封片。
, 百拇医药
2 结果
煮沸法较Grimelius法显示的结果对比更加清楚，特异性强，阳性结果是在浅黄色背景上染成黑色颗粒。
染色还原一步法的结果与Grimelius法基本一致，但反应时间短。
3 讨论
经多次应用实验，我们体会到这2种方法的共同特点是简单实用、制片迅速、染色结果定位清楚、特异性强等。然而这2种方法也和其它许多方法一样，染色所选择的温度、时间、银溶液的含量以及洗涤的条件对染色结果均有直接影响，要正确应用这2种改良法需注意以下几点。
3.1 温度与时间 在不同的嗜银染色方法中均有不同的温度和染色时间要求，Staples〔1〕改良法要求85℃～90℃双蒸馏水配制银溶液，而染色时间则在60℃～70℃之间为3 min。本方法中应用80℃以上温度缩短染色时间而在60 ℃以下延长染色时间的结果均不很理想，并且还受天气变化的影响。Garvey〔2〕是将染色还原一次性在60℃水浴中孵育大约25 min的方法，其结果与Grimelius 法相似，但产生许多沉淀浮在玻片上，影响对结果的判断。形成这种沉淀可能与染色时间过长及明胶代替乳香胶有关，如果采用微波处理后染色，结果可能会更好。
, 百拇医药
3.2 溶液中银的含量对结果的影响 在嗜银染色中银的含量已被许多作者认为是方法能否重复的关键，在Grimelius法中银的是最终含量为0.03%，其结果为棕色，而Pascual法中银的含量为0.5%，结果呈黑色。当0.03%银溶液用在Staples法时，结果不是看不清就是隐约可见，此时若将银的含量提高至0.08%，结果就得到了加强，并且比Grimelius法好，更易于结果的辨认和诊断。在Garvey法中银的含量为0.03%，单纯从结果上看与Grimelius法基本一致。0.03%的银含量也可能是最高含量，如果再提高则析出来的沉淀可能更多，是否通过加快染色时间可以解决这个问题有待进一步实验。
3.3 水洗对染色结果的影响 在嗜银染色后还原前以蒸馏水洗代替单纯吸除切片多余银溶液，可以减少切片黄色背景及保证玻片的洁净无银镜反应产生。在Staples法中洗涤蒸馏水的温度以45℃～50℃为最好，这样既可以减少银颗粒和硫酸钠颗粒的附着，又不会影响第二次作加强染色的温度，这一点在南方的冬天尤为重要。但也要注意过高温度水洗引起的掉片或切片烧伤现象。
, http://www.100md.com
经过实验觉得Staples法只需掌握好配制银溶液的温度、含量及水洗等事项就能使染色时间不超过10 min，并且还能加强染色的重复性，有一定的意义，而Garvey法在未延长染色时间的情况下，虽能染出嗜银细胞，但其结果的真实性值得推敲，有待进一步实验和观察。
作者简介：陈森林，男，42岁，副主任技师
参考文献
1，Staples TC, Grizzle WE. Effect of temperature on argyrophil impregnation: Development of a high temperature rapid argyrophil procedure. Stain Technol, 1987;62(1):41～49
2，Garvay W, Fathi A, Bigelow F et al.A New method for demonstrating argyrophil cells of the pancreas and intestines. Stain Technol, 1989;64(2):87～91
收稿日期：1998-05-04, 百拇医药
单位：陈森林 王劲 陈梦红(湖南省肿瘤医院病理科，长沙 410006)
关键词：银染色法；煮沸法
临床与实验病理学杂志990432
分类号 R446；R361.2 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0358-02
在以往的嗜银染色中由于染色时间长、操作较为复杂，制约了这种技术的广泛应用。我们经复习文献发现2种改进法既可保证染色结果又能缩短染色时间。为了更好地了解和掌握这2种方法，我们作了应用染色实验，并根据条件对原方法稍作修改，现报道如下。
1 材料和方法
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1.1 材料 选择已确诊的10例肿瘤，其中肺类癌3例，甲状腺髓样癌4例，嗜铬细胞瘤3例。标本经常规处理后切片，厚4 μm。切片经Grimelius方法证实有嗜银细胞存在，然后应用下列方法进行实验。
1.2 方法
1.2.1 Staples煮沸法 用煮沸的双蒸馏水50 ml，测定水温在85℃～90℃时加入2 ml 2%的硝酸银(新鲜配制)，当水温降至80℃时放入切片停留3 min，用同时煮沸的双蒸馏水配制还原液，允许冷却至65℃～70℃，切片从银溶液中取出并擦去多余的液体，用热蒸馏水轻洗入还原液中1 min，蒸馏水轻洗后再入银溶液内1 min，热蒸馏水轻洗后再入还原液内直至显色适当为止，充分水洗后脱水、透明、封片。
1.2.2 Garvey染色还原一步法 用30 ml 1.5%对苯二酚水溶液，加入10 ml 5%明胶水溶液，然后加入1.1 ml 1%的硝酸银水溶液，用前混合振动均匀后放入切片，置60℃水浴箱中18～20 min，用无水酒精洗2次或用热水洗2次后，脱水、透明、封片。
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2 结果
煮沸法较Grimelius法显示的结果对比更加清楚，特异性强，阳性结果是在浅黄色背景上染成黑色颗粒。
染色还原一步法的结果与Grimelius法基本一致，但反应时间短。
3 讨论
经多次应用实验，我们体会到这2种方法的共同特点是简单实用、制片迅速、染色结果定位清楚、特异性强等。然而这2种方法也和其它许多方法一样，染色所选择的温度、时间、银溶液的含量以及洗涤的条件对染色结果均有直接影响，要正确应用这2种改良法需注意以下几点。
3.1 温度与时间 在不同的嗜银染色方法中均有不同的温度和染色时间要求，Staples〔1〕改良法要求85℃～90℃双蒸馏水配制银溶液，而染色时间则在60℃～70℃之间为3 min。本方法中应用80℃以上温度缩短染色时间而在60 ℃以下延长染色时间的结果均不很理想，并且还受天气变化的影响。Garvey〔2〕是将染色还原一次性在60℃水浴中孵育大约25 min的方法，其结果与Grimelius 法相似，但产生许多沉淀浮在玻片上，影响对结果的判断。形成这种沉淀可能与染色时间过长及明胶代替乳香胶有关，如果采用微波处理后染色，结果可能会更好。
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3.2 溶液中银的含量对结果的影响 在嗜银染色中银的含量已被许多作者认为是方法能否重复的关键，在Grimelius法中银的是最终含量为0.03%，其结果为棕色，而Pascual法中银的含量为0.5%，结果呈黑色。当0.03%银溶液用在Staples法时，结果不是看不清就是隐约可见，此时若将银的含量提高至0.08%，结果就得到了加强，并且比Grimelius法好，更易于结果的辨认和诊断。在Garvey法中银的含量为0.03%，单纯从结果上看与Grimelius法基本一致。0.03%的银含量也可能是最高含量，如果再提高则析出来的沉淀可能更多，是否通过加快染色时间可以解决这个问题有待进一步实验。
3.3 水洗对染色结果的影响 在嗜银染色后还原前以蒸馏水洗代替单纯吸除切片多余银溶液，可以减少切片黄色背景及保证玻片的洁净无银镜反应产生。在Staples法中洗涤蒸馏水的温度以45℃～50℃为最好，这样既可以减少银颗粒和硫酸钠颗粒的附着，又不会影响第二次作加强染色的温度，这一点在南方的冬天尤为重要。但也要注意过高温度水洗引起的掉片或切片烧伤现象。
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经过实验觉得Staples法只需掌握好配制银溶液的温度、含量及水洗等事项就能使染色时间不超过10 min，并且还能加强染色的重复性，有一定的意义，而Garvey法在未延长染色时间的情况下，虽能染出嗜银细胞，但其结果的真实性值得推敲，有待进一步实验和观察。
作者简介：陈森林，男，42岁，副主任技师
参考文献
1，Staples TC, Grizzle WE. Effect of temperature on argyrophil impregnation: Development of a high temperature rapid argyrophil procedure. Stain Technol, 1987;62(1):41～49
2，Garvay W, Fathi A, Bigelow F et al.A New method for demonstrating argyrophil cells of the pancreas and intestines. Stain Technol, 1989;64(2):87～91
收稿日期：1998-05-04, 百拇医药