HPLC法测定安胎保婴丸中芍药苷的含量
作者：杜海燕 金兆祥 徐晓阳
单位：天津达仁堂制药厂 3000142
关键词：HPLC；安胎保婴丸；芍药苷▲
中草药000113摘 要 采用HPLC法测定了安胎保婴丸中芍药苷的含量。用甲醇-异丙醇-36 %乙酸-水(25∶2∶2∶71)作流动相，ODS柱，能使样品中芍药苷得到较好的分离。芍药苷的平均回收率为99.92 %，RSD为1.15 %。本法简便、准确、稳定、重现性好，且成药中其它组分对测定无干扰，能有效地控制该制剂的质量。
安胎保婴丸是由白芍、菟丝子、桑寄生、白术等十几味中药组成的三类新药，具有补肾安胎、养精生血之功效，用于治疗习惯性流产、先兆流产。方中主药为白芍Paeonia lactiflora Pall.干燥的根，其主要有效成分芍药苷具有镇静、镇痛、解痉、抗炎[1]等作用，因此我们选定白芍中芍药苷作为该制剂的含量测定指标。有关芍药苷的含量测定文献报道很多，如比色法[2]、薄层-紫外分光光度法[4]、HPLC法[5，7]。我们采用HPLC测定了安胎保婴丸中芍药苷的含量，优选了提取、测定条件。该法简便、准确，能够有效地控制该制剂的质量。
, 百拇医药
1 仪器与试剂
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPV-6AV可见-紫外检测器；C-R3A型数据处理机；ODS-5柱(4.6 mm×150 mm)；250型超声波振荡器。
芍药苷购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用)，安胎保婴丸由天津达仁堂制药厂提供，甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：流动相：甲醇-异丙醇-36%乙酸-水(25∶2∶2∶71)，流速0.5 mL/min，检测波长232 nm，纸速2 mm/min，柱温：室温，进样量：均为5 μL。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取芍药苷对照品，用50 %乙醇制成每毫升含芍药苷0.102 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述溶液1，3，5，7，9，11 μL，按上述色谱条件依次进行分析、测定，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标作标准曲线，得回归方程：Y=-1.50×102+3.06×105 X，r=0.999 8，表明芍药苷的进样量在0.102～1.122 μg间，与峰面积呈良好的线性关系。
, 百拇医药
2.3 样品测定：取样品50粒，剪碎，混匀，精称4 g于10 mL离心管中，加入50%乙醇至刻度，超声波提取15 min，离心(3 000 r/min)，取上清液，残渣用50%乙醇再提取2次，合并上清液置50 mL容量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5 μL进样，照上述色谱条件测定，用外标一点法计算，结果见表1。
表1 安胎保婴丸中芍药苷含量测定结果 批号
芍药苷含量(%)
平均值(%)
RSD(%)
940124
0.095
, 百拇医药 0.097
0.096
0.096
1.04
940415
0.096
0.098
0.096
0.097
1.19
941109
0.111
0.113
, 百拇医药
0.110
0.111
1.37
950217
0.110
0.112
0.114
0.112
1.78
950601
0.099
0.102
0.100
, http://www.100md.com
0.100
1.52
2.4 样品的阴性对照试验：按样品处方称取除白芍的中药材适量，按供试品提取方法制成阴性对照，用与样品相同色谱条件测定，同时测定样品，结果见图1。测得阴性对照样品在芍药苷出峰处峰面积为零，证明无干扰，说明该法准确、可靠。
2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液5 μL,重复进样6次，测定其吸收峰面积，RSD=0.97%。
2.6 重复性试验：取同一批样品，精称6份，按样品含量测定方法提取、测定。平均含量为0.110%，RSD=1.35%。
A-芍药苷 B-安胎保婴丸 C-阴性对照
, 百拇医药
图1 样品HPLC图谱
2.7 回收率试验：精密称取已知芍药苷含量为0.11 %的安胎保婴丸样品5份，每份2 g，分别精密加入1.10 mg/mL的芍药苷对照品溶液2 mL。各份均依样品测定项下方法操作，计算回收率。5次测定结果，芍药苷平均回收率为99.02%，RSD为1.15%。
3 讨论
3.1 提取条件的选择：本实验通过对甲醇、50%乙醇、95%乙醇3种不同提取溶媒进行考察，结果50%乙醇的提取率最高，又经超声波提取2，3，4，5次对比实验，结果以50%乙醇为提取溶媒，超声波提取3次，每次15 min，芍药苷的含量最高，且峰形对称，分离度好。
3.2 测定波长的选择：应用紫外分光光度计(UV-2100)测定芍药苷的紫外吸收光谱图，确定在232 nm处有最大吸收，故选择232 nm为检测波长。
, 百拇医药
3.3 流动相的选定：参考文献[6～8]报道的几组流动相系统，均不适合本样品，经反复摸索实验，用甲醇-异丙醇-36%乙酸-水(25∶2∶2∶71)为最佳，芍药苷峰形对称，分离完全。
3.4 稳定性实验：将制备好的供试品溶液进行分析，以后每隔2 h进样一次，重复4次，供试品溶液的吸收面积在8 h内基本无变化。■
杜海燕：Address:Du Haiyan, Darentang Pharmaceutical Factory, Tianjin
杜海燕：女，1990年毕业于沈阳药科大学中药系，并获理学学士学位。现在天津达仁堂制药
厂技术开发科任职，工程师。主要从事中药新药的研制与开发及中成药制剂质量标准的制订
工作。先后参加了本厂4个三类新药的研究与开发以及十几个老产品质量标准的制订等工作。在国内公开刊物上发表论文4篇。
, 百拇医药
参考文献
1，江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海科技出版社，1977：2225
2，中国药品生物制品检定所中药室.药品与生物制品，1976，(3)：226
3，刘玉珍，等.中成药，1993，15(5)：15
4，罗国安，等.中成药研究，1988，(1)：10
5，史 林，等.中草药，1991，22(1)：306
6，杨 威，等.中成药，1994，16(5)：12
7，王春明，等.药物分析杂志，1995，15(2)：53
(1999-2-25 收稿), http://www.100md.com
单位：天津达仁堂制药厂 3000142
关键词：HPLC；安胎保婴丸；芍药苷▲
中草药000113摘 要 采用HPLC法测定了安胎保婴丸中芍药苷的含量。用甲醇-异丙醇-36 %乙酸-水(25∶2∶2∶71)作流动相，ODS柱，能使样品中芍药苷得到较好的分离。芍药苷的平均回收率为99.92 %，RSD为1.15 %。本法简便、准确、稳定、重现性好，且成药中其它组分对测定无干扰，能有效地控制该制剂的质量。
安胎保婴丸是由白芍、菟丝子、桑寄生、白术等十几味中药组成的三类新药，具有补肾安胎、养精生血之功效，用于治疗习惯性流产、先兆流产。方中主药为白芍Paeonia lactiflora Pall.干燥的根，其主要有效成分芍药苷具有镇静、镇痛、解痉、抗炎[1]等作用，因此我们选定白芍中芍药苷作为该制剂的含量测定指标。有关芍药苷的含量测定文献报道很多，如比色法[2]、薄层-紫外分光光度法[4]、HPLC法[5，7]。我们采用HPLC测定了安胎保婴丸中芍药苷的含量，优选了提取、测定条件。该法简便、准确，能够有效地控制该制剂的质量。
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1 仪器与试剂
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPV-6AV可见-紫外检测器；C-R3A型数据处理机；ODS-5柱(4.6 mm×150 mm)；250型超声波振荡器。
芍药苷购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用)，安胎保婴丸由天津达仁堂制药厂提供，甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：流动相：甲醇-异丙醇-36%乙酸-水(25∶2∶2∶71)，流速0.5 mL/min，检测波长232 nm，纸速2 mm/min，柱温：室温，进样量：均为5 μL。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取芍药苷对照品，用50 %乙醇制成每毫升含芍药苷0.102 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述溶液1，3，5，7，9，11 μL，按上述色谱条件依次进行分析、测定，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标作标准曲线，得回归方程：Y=-1.50×102+3.06×105 X，r=0.999 8，表明芍药苷的进样量在0.102～1.122 μg间，与峰面积呈良好的线性关系。
, 百拇医药
2.3 样品测定：取样品50粒，剪碎，混匀，精称4 g于10 mL离心管中，加入50%乙醇至刻度，超声波提取15 min，离心(3 000 r/min)，取上清液，残渣用50%乙醇再提取2次，合并上清液置50 mL容量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5 μL进样，照上述色谱条件测定，用外标一点法计算，结果见表1。
表1 安胎保婴丸中芍药苷含量测定结果 批号
芍药苷含量(%)
平均值(%)
RSD(%)
940124
0.095
, 百拇医药 0.097
0.096
0.096
1.04
940415
0.096
0.098
0.096
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1.19
941109
0.111
0.113
, 百拇医药
0.110
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0.110
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1.78
950601
0.099
0.102
0.100
, http://www.100md.com
0.100
1.52
2.4 样品的阴性对照试验：按样品处方称取除白芍的中药材适量，按供试品提取方法制成阴性对照，用与样品相同色谱条件测定，同时测定样品，结果见图1。测得阴性对照样品在芍药苷出峰处峰面积为零，证明无干扰，说明该法准确、可靠。
2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液5 μL,重复进样6次，测定其吸收峰面积，RSD=0.97%。
2.6 重复性试验：取同一批样品，精称6份，按样品含量测定方法提取、测定。平均含量为0.110%，RSD=1.35%。
A-芍药苷 B-安胎保婴丸 C-阴性对照
, 百拇医药
图1 样品HPLC图谱
2.7 回收率试验：精密称取已知芍药苷含量为0.11 %的安胎保婴丸样品5份，每份2 g，分别精密加入1.10 mg/mL的芍药苷对照品溶液2 mL。各份均依样品测定项下方法操作，计算回收率。5次测定结果，芍药苷平均回收率为99.02%，RSD为1.15%。
3 讨论
3.1 提取条件的选择：本实验通过对甲醇、50%乙醇、95%乙醇3种不同提取溶媒进行考察，结果50%乙醇的提取率最高，又经超声波提取2，3，4，5次对比实验，结果以50%乙醇为提取溶媒，超声波提取3次，每次15 min，芍药苷的含量最高，且峰形对称，分离度好。
3.2 测定波长的选择：应用紫外分光光度计(UV-2100)测定芍药苷的紫外吸收光谱图，确定在232 nm处有最大吸收，故选择232 nm为检测波长。
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3.3 流动相的选定：参考文献[6～8]报道的几组流动相系统，均不适合本样品，经反复摸索实验，用甲醇-异丙醇-36%乙酸-水(25∶2∶2∶71)为最佳，芍药苷峰形对称，分离完全。
3.4 稳定性实验：将制备好的供试品溶液进行分析，以后每隔2 h进样一次，重复4次，供试品溶液的吸收面积在8 h内基本无变化。■
杜海燕：Address:Du Haiyan, Darentang Pharmaceutical Factory, Tianjin
杜海燕：女，1990年毕业于沈阳药科大学中药系，并获理学学士学位。现在天津达仁堂制药
厂技术开发科任职，工程师。主要从事中药新药的研制与开发及中成药制剂质量标准的制订
工作。先后参加了本厂4个三类新药的研究与开发以及十几个老产品质量标准的制订等工作。在国内公开刊物上发表论文4篇。
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参考文献
1，江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海科技出版社，1977：2225
2，中国药品生物制品检定所中药室.药品与生物制品，1976，(3)：226
3，刘玉珍，等.中成药，1993，15(5)：15
4，罗国安，等.中成药研究，1988，(1)：10
5，史 林，等.中草药，1991，22(1)：306
6，杨 威，等.中成药，1994，16(5)：12
7，王春明，等.药物分析杂志，1995，15(2)：53
(1999-2-25 收稿), http://www.100md.com