病毒性心肌炎患者自身抗体的检测及其临床意义
作者：王智纯 柳永和 梁日初 舒俊
单位：王智纯(湖南医科大学 附属湘雅医院输血科)；柳永和(医学检验系)；梁日初(附属湘雅医院检验科，中国湖南 长沙 410008)；舒俊(附属湘雅医院检验科，中国湖南 长沙 410008)
关键词：心肌炎/免疫学；病毒性疾病/免疫学；自身抗体/分析
湖南医学000438 [中图分类号] R542.1+1 [文献标识码] B [文章编号] 1001-9421(2000)04-0248-02
病毒性心肌炎(Viral myocarditis,VM)已成为内儿科常见疾病，然而临床诊断尚缺乏可靠手段。鉴于病毒可通过多种不同机制促进自身免疫应答。作者等运用免疫印迹技术，间接荧光抗体法以及快速斑点免疫金渗滤法，对42例VM病 人血清标本分别进行抗(ENA)抗体、抗心肌抗体(ANA)及抗ds-DNA抗体的检测，以探讨它们在病毒性心肌炎诊断中意义。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 研究对象 ①病毒性心肌炎组(观察组)：共42例，为1997年11月至1999年7月期间湘雅医院心内科、儿科住院病人，其中男22例，女20例，年龄5～54
岁，平均(19.8±13.9)岁。VM患者临床诊断符合文献标准[1]。②对照组：共32例，为湘雅医院输血科健康供血者血清，男9例，女23例，年龄24～43岁，平均(32.5±6.2)岁。③冠心病组：共32例，男23例，女9例，年龄42～60岁，平均(48.3±4.8)岁。
1.2 检测项目与方法 上述三组对象均检测下述指标。①抗ENA抗体：采用免疫印迹技术，检测7种自身抗体。试剂盒由深圳恒佳生物工程有限公司提供，按试剂盒操作说明书进行测试。②ANA采用间接免疫萤光抗体法(IF-ANA)，以大鼠肝细胞印片为基质，稀释度大于1：40 以上为阳性。③抗双链DNA抗体，采用快速斑点金渗滤法，试剂盒由福建三强生物化工有限公司提供，按说明书操作。
, 百拇医药
1.3 统计处理 计算各组自身抗体的出现频率，并行χ2检验。
2 结果
2.1 各组自身抗体阳性检出率比较 由附表可知，观察组抗-ENA检出率为69.1%，明显高于对照组的3.1%(P<0.01)和冠心病组的15.6%(P<0.01)。观察组抗-ENA各抗体中以SSB阳性率最高。观察组22例男性患者中19例检出一种或一种以上自身抗体，而20例女性患者中有10例检出抗体；观察组ANA检出率亦明显高于对照组(P<0.01)，但与冠心病组比较差异无显著性(P>0.05)。冠心病组与对照组的抗-ENA抗体和ANA检出率比较差异无显著性(均P>0.05)。三组抗-ds-DNA抗体检测均为阴性。
附表 各组三种自身抗体检测结果比较(例，%) 组别
n
, http://www.100md.com
抗-ENA抗体
ANA
抗-ds-DNA抗体
总阳性
SSA
SSB
Sm
Jo-1
U1RNP
Rib
Scl-70
对照组
32
, 百拇医药
1(3.1)
1(3.1)
0(0)
0(0)
0(0)
1(3.1)
0(0)
0(0)
0(0)
0(0)
冠心病组
32
5(15.6)
, 百拇医药
3(9.4)
0(0)
0(0)
1(3.1)
0(0)
1(3.1)
0(0)
5(15.6)
0(0)
观察组
42
29(69.1)
2(4.8)
, http://www.100md.com
17(40.1)
4(9.5)
6(14.3)
9(21.4)
4(9.5)
3(7.1)
15(35.7)
0(0)
2.2 抗-ENA抗体检测对VM的敏感性与特异性 抗-ENA抗体检测对病毒性心肌炎诊断的敏感性为69.1%[29/(29+13)×100%]，特异性为90.6%[58/(58+6)× 100]，误诊率为9.4%[6/(6+58)×100%]，漏诊率为30.9%[13/(13+29)×100%]。
, http://www.100md.com
3 讨论
本文结果显示VM患者血清中三种抗体明显高于对照组和冠心病组，表明VM患者体内确实存在自身免疫应答，亦产生多种自身抗体，其中以抗-SSB(45.47KD多肽)和抗U1RNP(32KD多肽)最为多见。VM患者中亦可检测到ANA，但与冠心病 组无差异。三组抗-ds-DNA抗体的检测均未见阳性。检测抗-ENA抗体，对VM的诊断敏感性可达69.1%，特异性为90.6%，二者之和达160，具有临床应用价值。
VM的发病机理尚未完全阐明，其涉及到病毒直接溶解心肌细胞，经T细胞介导免疫引起心肌损害及自身免疫影响等多个环节[2，3]。Myerson等[4]在没有任何组织损伤，具有正常形态的心肌中，发现了巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)感染，因而认为心肌细胞的损伤可能不是由于细胞内CMV复制直接造成，而是自身免疫因素所致。自身免疫不一定形成疾病，但过度的自身免疫则是病理性的，可导致组织损伤或器官功能障碍。Schonian[5]亦证实心肌炎和心肌病病人细胞和体液免疫调节功能失调，T细胞抑制功能不足。李武等[6]在VM患者血清中发现抗心肌自身抗体和循环免疫复合物的检出率很高。张五刚及Caforio等[7，8]的研究表明，VM及心肌炎后扩张性心肌病患者血清中可检出ANA，且阳性率明显高于其他心脏病。当然，抗-ENA抗体并非VM特异性抗体，其它一些疾病，尤其是患一些自身免疫性疾病时更易产生。柳永和等[9]报道228例结缔组织病患者自身抗体检测的情况，发现阳性率达71.1%。本组病毒性心肌炎患者则主要表达抗-SSB抗体，达40.1%，这表明虽不同疾病同样产生抗体，但抗体种类各有不同，似可为疾病鉴别提供某些帮助。
, http://www.100md.com
有关VM的诊断，目前临床常用的检测方法耗时费力，敏感性、特异性均较差，尚缺乏理想的诊断方法。病毒分离费时且阳性率不高。临床常用双份血清病毒中和抗体检测，但中和试验工作量大，即使采用微量方法亦较繁琐，而且由于出现心脏症状时，血清中抗体可能已经升高，第2份血清常常没有4倍以上的抗体效价，给诊断带来困难。近年来国外采用分子生物学手段，如点杂交、原位杂交及PCR检测左或右心室、心内膜 活检(EMB)标本中EVS RNA或巨细胞病毒DNA(CMV DNA)作为心肌病毒感染的证据，但标本来源于有创伤性活检，且诊断阳性率并不高，国内各大医院大多未能开展上述病毒学检测。李朗清等[10]认为，由于VM的病理变化特异性不高，临床不能过分依赖EMB这一辅助手段。目前国内外对于VM的诊断尚无特异性很高的检测方法，多数需凭临床医生的经验及除外其他心脏疾病，且受人为因素干扰较大。抗-ENA抗体检测有试剂盒可供选择，操作简便快速，适合于在国内各级医院推广应用。本资料抗-ENA抗体检测对VM的误诊率为9.38%，而漏诊率达30.91%，似嫌较高，但在目前VM缺乏理想诊断手段的情况下，抗-ENA抗体的检测不失为一种可供选择的较好辅助方法。
, http://www.100md.com
[作者简介] 王智纯(1947-)，女，湖南长沙市人，副主任技师，主要从事临床检验及临床输血研究。
[参 考 文 献]
[1] 中华内科杂志编委会.全国心肌炎、心肌病专题座谈会纪要[J].中华内科杂志，1987，26：259.
[2] Herskowitz A,Wolfgram LJ,Rose NR,et al.Coxsackie Virus B3murine myocarditis,a pathologic spectrum of myocarditis in genetically defined inbred strains[J].J Am Coll Cardiol,1987;9:1311.
[3] Kuhl U,Melzmer B,Schafer B,et al.The Ca2+-channel as cardiac autoantigen[J].Eur Heart J,1991,12[suppl D]:99.
, 百拇医药
[4] Myerson D,Hackman RC,Nelson JA,et al.Widespread presence of histologically occult cytomegalovirus[J].Hum Pathol,1984,15:430.
[5] Schonian U,Maisch B,Zytomegaliovirusassouierte Erkrankungen des Herzen[J].Herz,1992,17:85.[6] 李 武，余 枢.病毒性心肌炎和扩张性心肌病组织相容复合物和免疫球蛋白的检测[J].中华心血管病杂志，1994，22(4)：268.
[7] 张王刚.抗心肌抗体对心肌细胞的毒性作用观察[J].中华心血管病杂志，1992，20(1)：7.
[8] Carforio AL.Novel organ-specific circulating cardiac autoantibodies in dilated cardiomyopathy[J].JACC,1990;15:1527
[9] 柳永和，周韵九，金 燕，等.结缔组织病患者抗ENA抗体的检测及其临床意义[J].湖南医科大学学报，1996，21(5)：439-441.
[10] 李清朗，杨英珍.病毒性心肌炎临床诊断的探讨[J].中华内科杂志，1994，12：851.
[收稿日期] 2000-03-21, http://www.100md.com
单位：王智纯(湖南医科大学 附属湘雅医院输血科)；柳永和(医学检验系)；梁日初(附属湘雅医院检验科，中国湖南 长沙 410008)；舒俊(附属湘雅医院检验科，中国湖南 长沙 410008)
关键词：心肌炎/免疫学；病毒性疾病/免疫学；自身抗体/分析
湖南医学000438 [中图分类号] R542.1+1 [文献标识码] B [文章编号] 1001-9421(2000)04-0248-02
病毒性心肌炎(Viral myocarditis,VM)已成为内儿科常见疾病，然而临床诊断尚缺乏可靠手段。鉴于病毒可通过多种不同机制促进自身免疫应答。作者等运用免疫印迹技术，间接荧光抗体法以及快速斑点免疫金渗滤法，对42例VM病 人血清标本分别进行抗(ENA)抗体、抗心肌抗体(ANA)及抗ds-DNA抗体的检测，以探讨它们在病毒性心肌炎诊断中意义。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 研究对象 ①病毒性心肌炎组(观察组)：共42例，为1997年11月至1999年7月期间湘雅医院心内科、儿科住院病人，其中男22例，女20例，年龄5～54
岁，平均(19.8±13.9)岁。VM患者临床诊断符合文献标准[1]。②对照组：共32例，为湘雅医院输血科健康供血者血清，男9例，女23例，年龄24～43岁，平均(32.5±6.2)岁。③冠心病组：共32例，男23例，女9例，年龄42～60岁，平均(48.3±4.8)岁。
1.2 检测项目与方法 上述三组对象均检测下述指标。①抗ENA抗体：采用免疫印迹技术，检测7种自身抗体。试剂盒由深圳恒佳生物工程有限公司提供，按试剂盒操作说明书进行测试。②ANA采用间接免疫萤光抗体法(IF-ANA)，以大鼠肝细胞印片为基质，稀释度大于1：40 以上为阳性。③抗双链DNA抗体，采用快速斑点金渗滤法，试剂盒由福建三强生物化工有限公司提供，按说明书操作。
, 百拇医药
1.3 统计处理 计算各组自身抗体的出现频率，并行χ2检验。
2 结果
2.1 各组自身抗体阳性检出率比较 由附表可知，观察组抗-ENA检出率为69.1%，明显高于对照组的3.1%(P<0.01)和冠心病组的15.6%(P<0.01)。观察组抗-ENA各抗体中以SSB阳性率最高。观察组22例男性患者中19例检出一种或一种以上自身抗体，而20例女性患者中有10例检出抗体；观察组ANA检出率亦明显高于对照组(P<0.01)，但与冠心病组比较差异无显著性(P>0.05)。冠心病组与对照组的抗-ENA抗体和ANA检出率比较差异无显著性(均P>0.05)。三组抗-ds-DNA抗体检测均为阴性。
附表 各组三种自身抗体检测结果比较(例，%) 组别
n
, http://www.100md.com
抗-ENA抗体
ANA
抗-ds-DNA抗体
总阳性
SSA
SSB
Sm
Jo-1
U1RNP
Rib
Scl-70
对照组
32
, 百拇医药
1(3.1)
1(3.1)
0(0)
0(0)
0(0)
1(3.1)
0(0)
0(0)
0(0)
0(0)
冠心病组
32
5(15.6)
, 百拇医药
3(9.4)
0(0)
0(0)
1(3.1)
0(0)
1(3.1)
0(0)
5(15.6)
0(0)
观察组
42
29(69.1)
2(4.8)
, http://www.100md.com
17(40.1)
4(9.5)
6(14.3)
9(21.4)
4(9.5)
3(7.1)
15(35.7)
0(0)
2.2 抗-ENA抗体检测对VM的敏感性与特异性 抗-ENA抗体检测对病毒性心肌炎诊断的敏感性为69.1%[29/(29+13)×100%]，特异性为90.6%[58/(58+6)× 100]，误诊率为9.4%[6/(6+58)×100%]，漏诊率为30.9%[13/(13+29)×100%]。
, http://www.100md.com
3 讨论
本文结果显示VM患者血清中三种抗体明显高于对照组和冠心病组，表明VM患者体内确实存在自身免疫应答，亦产生多种自身抗体，其中以抗-SSB(45.47KD多肽)和抗U1RNP(32KD多肽)最为多见。VM患者中亦可检测到ANA，但与冠心病 组无差异。三组抗-ds-DNA抗体的检测均未见阳性。检测抗-ENA抗体，对VM的诊断敏感性可达69.1%，特异性为90.6%，二者之和达160，具有临床应用价值。
VM的发病机理尚未完全阐明，其涉及到病毒直接溶解心肌细胞，经T细胞介导免疫引起心肌损害及自身免疫影响等多个环节[2，3]。Myerson等[4]在没有任何组织损伤，具有正常形态的心肌中，发现了巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)感染，因而认为心肌细胞的损伤可能不是由于细胞内CMV复制直接造成，而是自身免疫因素所致。自身免疫不一定形成疾病，但过度的自身免疫则是病理性的，可导致组织损伤或器官功能障碍。Schonian[5]亦证实心肌炎和心肌病病人细胞和体液免疫调节功能失调，T细胞抑制功能不足。李武等[6]在VM患者血清中发现抗心肌自身抗体和循环免疫复合物的检出率很高。张五刚及Caforio等[7，8]的研究表明，VM及心肌炎后扩张性心肌病患者血清中可检出ANA，且阳性率明显高于其他心脏病。当然，抗-ENA抗体并非VM特异性抗体，其它一些疾病，尤其是患一些自身免疫性疾病时更易产生。柳永和等[9]报道228例结缔组织病患者自身抗体检测的情况，发现阳性率达71.1%。本组病毒性心肌炎患者则主要表达抗-SSB抗体，达40.1%，这表明虽不同疾病同样产生抗体，但抗体种类各有不同，似可为疾病鉴别提供某些帮助。
, http://www.100md.com
有关VM的诊断，目前临床常用的检测方法耗时费力，敏感性、特异性均较差，尚缺乏理想的诊断方法。病毒分离费时且阳性率不高。临床常用双份血清病毒中和抗体检测，但中和试验工作量大，即使采用微量方法亦较繁琐，而且由于出现心脏症状时，血清中抗体可能已经升高，第2份血清常常没有4倍以上的抗体效价，给诊断带来困难。近年来国外采用分子生物学手段，如点杂交、原位杂交及PCR检测左或右心室、心内膜 活检(EMB)标本中EVS RNA或巨细胞病毒DNA(CMV DNA)作为心肌病毒感染的证据，但标本来源于有创伤性活检，且诊断阳性率并不高，国内各大医院大多未能开展上述病毒学检测。李朗清等[10]认为，由于VM的病理变化特异性不高，临床不能过分依赖EMB这一辅助手段。目前国内外对于VM的诊断尚无特异性很高的检测方法，多数需凭临床医生的经验及除外其他心脏疾病，且受人为因素干扰较大。抗-ENA抗体检测有试剂盒可供选择，操作简便快速，适合于在国内各级医院推广应用。本资料抗-ENA抗体检测对VM的误诊率为9.38%，而漏诊率达30.91%，似嫌较高，但在目前VM缺乏理想诊断手段的情况下，抗-ENA抗体的检测不失为一种可供选择的较好辅助方法。
, http://www.100md.com
[作者简介] 王智纯(1947-)，女，湖南长沙市人，副主任技师，主要从事临床检验及临床输血研究。
[参 考 文 献]
[1] 中华内科杂志编委会.全国心肌炎、心肌病专题座谈会纪要[J].中华内科杂志，1987，26：259.
[2] Herskowitz A,Wolfgram LJ,Rose NR,et al.Coxsackie Virus B3murine myocarditis,a pathologic spectrum of myocarditis in genetically defined inbred strains[J].J Am Coll Cardiol,1987;9:1311.
[3] Kuhl U,Melzmer B,Schafer B,et al.The Ca2+-channel as cardiac autoantigen[J].Eur Heart J,1991,12[suppl D]:99.
, 百拇医药
[4] Myerson D,Hackman RC,Nelson JA,et al.Widespread presence of histologically occult cytomegalovirus[J].Hum Pathol,1984,15:430.
[5] Schonian U,Maisch B,Zytomegaliovirusassouierte Erkrankungen des Herzen[J].Herz,1992,17:85.[6] 李 武，余 枢.病毒性心肌炎和扩张性心肌病组织相容复合物和免疫球蛋白的检测[J].中华心血管病杂志，1994，22(4)：268.
[7] 张王刚.抗心肌抗体对心肌细胞的毒性作用观察[J].中华心血管病杂志，1992，20(1)：7.
[8] Carforio AL.Novel organ-specific circulating cardiac autoantibodies in dilated cardiomyopathy[J].JACC,1990;15:1527
[9] 柳永和，周韵九，金 燕，等.结缔组织病患者抗ENA抗体的检测及其临床意义[J].湖南医科大学学报，1996，21(5)：439-441.
[10] 李清朗，杨英珍.病毒性心肌炎临床诊断的探讨[J].中华内科杂志，1994，12：851.
[收稿日期] 2000-03-21, http://www.100md.com