p53、增殖细胞核抗原、Ki-67在星形细胞瘤中的表达与分化及预后的关系
作者：康凯夫 杜长春
单位：
关键词：
一 一、材料与方法
1.病例：选用大连医科大学附属一院病理科1992年～1994年66例资料完整的星形细胞瘤石蜡标本。年龄3～78岁，男35例，女31例。其中47例获得3年随访资料。
2.病理指标：组织学类型按WHO标准分类[1]，星形细胞瘤12例、间变性星形细胞瘤34例、多形性胶质母细胞瘤20例。
3.免疫组化：采用LSAB法、枸橼酸-微波抗原修复(YWY781微波仪2档13分、温控92 ℃～98 ℃)。分别作p53单抗DO-7(DAKO公司产品)1∶50稀释，37℃60分钟。增殖细胞核抗原(PCNA)单抗PC-10(DAKO公司产品)1∶40稀释，4℃过夜。Ki-67为鼠抗人单抗、美国Zymed公司工作液(福州迈新生物技术公司提供)，4 ℃过夜。分别作阳性、阴性对照。
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4.阳性结果判断：用双盲法对染色结果进行评估，阳性结果以细胞核内出现棕黄色颗粒、背景不着色为标准。随机计数10个高倍视野1000个肿瘤细胞中阳性细胞数，用标记指数(labeling index, LI)百分率表示。
5.统计学采用方差分析、秩和检验，四格表卡方检验、相关分析、Kaplan-Meier生存曲线及Logrank检验。
二、结果
1.p53、PCNA、Ki-67在星形细胞瘤中表达与组织学类型的关系：表达阳性的肿瘤细胞核内出现棕黄色颗粒，星形细胞瘤阳性细胞呈单个散在或小灶状分布，间变性星形细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤阳性细胞多呈灶状及片状分布。
p53、PCNA、Ki-67的表达与肿瘤组织学类型密切相关， 随着肿瘤分化及恶性程度的增加，LI呈明显递增趋势，有统计学意义(P<0.01)。
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2.p53表达与肿瘤增生活性的关系：p53表达与肿瘤增生活性密切相关，p53表达阳性的肿瘤PCNA LI高于p53阴性的肿瘤，差异有显著性(u=2.34，P<0.01)。p53、PCNA、Ki-67在肿瘤中表达呈正相关(r=0.24，r=0.37，P<0.05)，共同表达率62%。
3.p53、PCNA、Ki-67表达与肿瘤预后的关系：生存曲线结果显示，p53阳性，PCNA、Ki-67 LI高的肿瘤预后差。p53阴性和阳性肿瘤3年生存率分别为 52.9%(9/17例)和 30.0%(9/30例)。PCNA LI 0%～25%和26%～89%的肿瘤3年生存率分别为50.0%(11/22例)和 28.0%(7/25例)。Ki-67 LI 0%～25%和26%～75%的肿瘤3年生存率分别为46.9%(15/32例)和20.0%(3/15例)。随访资料表明：组织学类型与预后密切相关，3年生存率星形细胞瘤75.0%，间变性星形细胞瘤39.1%，多形性胶质母细胞瘤18.6%，差异有显著性(χ2=7.15，P<0.01)。肿瘤部位、大小、治疗方法、年龄、 性别与预后比较未见统计学意义。
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三、讨论
通过对p53-p21/GADD45途径的阐明，进一步证明p53一个重要的功能是作用于细胞周期调控点，当p53基因突变细胞调控异常，可能导致肿瘤的形成[2]。Sidransky等[3]发现，脑胶质瘤的进展与p53突变细胞的克隆增殖有关。在肿瘤发生的早期p53基因突变的细胞数量很少，不足以出现肿瘤高度恶性的表型，随着p53突变细胞数量的不断增加以至于达到足以维持肿瘤高度恶性的表型，使肿瘤由良性转为恶性、由低度恶性转为高度恶性。本组62.1%的肿瘤p53表达阳性，恶性程度高的肿瘤表达增强，但同一类肿瘤或同一肿瘤的不同区域，表达存在差异、反映了肿瘤的异质性，p53高度表达的肿瘤预后差。
PCNA作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白直接参与了细胞增殖过程中DNA复制，其含量和表达程度反映了细胞的增殖活性[4]。Ki-67在细胞周期的G1后期、S期、G2 期和M期细胞核表达，能很好的反映肿瘤增生活性[5]。本组p53、PCNA、Ki-67高表达的肿瘤预后差。
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通过对星形细胞瘤p53、PCNA、Ki-67表达与预后的分析，提示p53在控制细胞增殖和调节细胞分化方面可能起重要作用，PCNA、Ki-67则与细胞增殖数率密切相关，p53表达阳性的肿瘤增殖快。p53、PCNA、Ki-67在肿瘤中共同表达预后较差，三者能很好的反映肿瘤的恶性程度及增殖活性，可以作为判断肿瘤预后一组有价值的参考指标。
参考文献
1Vandenberg SR.Current diagnostic concepts of astrocytic tumors. Neuropathol Experi Nenrol,1992,51:644-657.
2周桥,杨光华. P53研究的一些新进展. 中华病理学杂志, 1995, 24:267-268.
3Sidransky D，Mikkelsen T, Schwechheimer K, et al.Clonal expansion of p53 mutant cells is associated with brain tumour progression. Nature, 1992, 355:846-847.
, 百拇医药
4Morris GF, Mathews MB. Regulation of proliferation cell nuclear antigen during the cell cycle.J Biol Chem, 1989,264:13856-13864.
5Onda K, Davis RL, Shibuya M, et al. Correlation between the bromodeoxyuridine labeling index and the MIB-1 and Ki-67 proliferating cell indices in cerebral gliomas. Cancer,1994,74:1921-1926.
(收稿：1997-07-31 修回：1998-04-08), 百拇医药
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关键词：
一 一、材料与方法
1.病例：选用大连医科大学附属一院病理科1992年～1994年66例资料完整的星形细胞瘤石蜡标本。年龄3～78岁，男35例，女31例。其中47例获得3年随访资料。
2.病理指标：组织学类型按WHO标准分类[1]，星形细胞瘤12例、间变性星形细胞瘤34例、多形性胶质母细胞瘤20例。
3.免疫组化：采用LSAB法、枸橼酸-微波抗原修复(YWY781微波仪2档13分、温控92 ℃～98 ℃)。分别作p53单抗DO-7(DAKO公司产品)1∶50稀释，37℃60分钟。增殖细胞核抗原(PCNA)单抗PC-10(DAKO公司产品)1∶40稀释，4℃过夜。Ki-67为鼠抗人单抗、美国Zymed公司工作液(福州迈新生物技术公司提供)，4 ℃过夜。分别作阳性、阴性对照。
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4.阳性结果判断：用双盲法对染色结果进行评估，阳性结果以细胞核内出现棕黄色颗粒、背景不着色为标准。随机计数10个高倍视野1000个肿瘤细胞中阳性细胞数，用标记指数(labeling index, LI)百分率表示。
5.统计学采用方差分析、秩和检验，四格表卡方检验、相关分析、Kaplan-Meier生存曲线及Logrank检验。
二、结果
1.p53、PCNA、Ki-67在星形细胞瘤中表达与组织学类型的关系：表达阳性的肿瘤细胞核内出现棕黄色颗粒，星形细胞瘤阳性细胞呈单个散在或小灶状分布，间变性星形细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤阳性细胞多呈灶状及片状分布。
p53、PCNA、Ki-67的表达与肿瘤组织学类型密切相关， 随着肿瘤分化及恶性程度的增加，LI呈明显递增趋势，有统计学意义(P<0.01)。
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2.p53表达与肿瘤增生活性的关系：p53表达与肿瘤增生活性密切相关，p53表达阳性的肿瘤PCNA LI高于p53阴性的肿瘤，差异有显著性(u=2.34，P<0.01)。p53、PCNA、Ki-67在肿瘤中表达呈正相关(r=0.24，r=0.37，P<0.05)，共同表达率62%。
3.p53、PCNA、Ki-67表达与肿瘤预后的关系：生存曲线结果显示，p53阳性，PCNA、Ki-67 LI高的肿瘤预后差。p53阴性和阳性肿瘤3年生存率分别为 52.9%(9/17例)和 30.0%(9/30例)。PCNA LI 0%～25%和26%～89%的肿瘤3年生存率分别为50.0%(11/22例)和 28.0%(7/25例)。Ki-67 LI 0%～25%和26%～75%的肿瘤3年生存率分别为46.9%(15/32例)和20.0%(3/15例)。随访资料表明：组织学类型与预后密切相关，3年生存率星形细胞瘤75.0%，间变性星形细胞瘤39.1%，多形性胶质母细胞瘤18.6%，差异有显著性(χ2=7.15，P<0.01)。肿瘤部位、大小、治疗方法、年龄、 性别与预后比较未见统计学意义。
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三、讨论
通过对p53-p21/GADD45途径的阐明，进一步证明p53一个重要的功能是作用于细胞周期调控点，当p53基因突变细胞调控异常，可能导致肿瘤的形成[2]。Sidransky等[3]发现，脑胶质瘤的进展与p53突变细胞的克隆增殖有关。在肿瘤发生的早期p53基因突变的细胞数量很少，不足以出现肿瘤高度恶性的表型，随着p53突变细胞数量的不断增加以至于达到足以维持肿瘤高度恶性的表型，使肿瘤由良性转为恶性、由低度恶性转为高度恶性。本组62.1%的肿瘤p53表达阳性，恶性程度高的肿瘤表达增强，但同一类肿瘤或同一肿瘤的不同区域，表达存在差异、反映了肿瘤的异质性，p53高度表达的肿瘤预后差。
PCNA作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白直接参与了细胞增殖过程中DNA复制，其含量和表达程度反映了细胞的增殖活性[4]。Ki-67在细胞周期的G1后期、S期、G2 期和M期细胞核表达，能很好的反映肿瘤增生活性[5]。本组p53、PCNA、Ki-67高表达的肿瘤预后差。
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通过对星形细胞瘤p53、PCNA、Ki-67表达与预后的分析，提示p53在控制细胞增殖和调节细胞分化方面可能起重要作用，PCNA、Ki-67则与细胞增殖数率密切相关，p53表达阳性的肿瘤增殖快。p53、PCNA、Ki-67在肿瘤中共同表达预后较差，三者能很好的反映肿瘤的恶性程度及增殖活性，可以作为判断肿瘤预后一组有价值的参考指标。
参考文献
1Vandenberg SR.Current diagnostic concepts of astrocytic tumors. Neuropathol Experi Nenrol,1992,51:644-657.
2周桥,杨光华. P53研究的一些新进展. 中华病理学杂志, 1995, 24:267-268.
3Sidransky D，Mikkelsen T, Schwechheimer K, et al.Clonal expansion of p53 mutant cells is associated with brain tumour progression. Nature, 1992, 355:846-847.
, 百拇医药
4Morris GF, Mathews MB. Regulation of proliferation cell nuclear antigen during the cell cycle.J Biol Chem, 1989,264:13856-13864.
5Onda K, Davis RL, Shibuya M, et al. Correlation between the bromodeoxyuridine labeling index and the MIB-1 and Ki-67 proliferating cell indices in cerebral gliomas. Cancer,1994,74:1921-1926.
(收稿：1997-07-31 修回：1998-04-08), 百拇医药