Apoε4等位基因对非胰岛素依赖型糖尿病患者隐性心肌缺血的影响
作者：向光大 何艳忠
单位：430070 广州军区武汉总医院内分泌科(向光 大)、医学实验中心(何艳忠)
关键词：
中华医学杂志980522 糖尿病(DM)，尤其是Ⅱ型糖尿病(NIDDM)患者冠心病发生率明显高于一般人群。而年龄、性别、高血压和吸烟等传统的危险因子不能单独解释这一差异。最近研究[1，2]发现，Apoε4等位基因有增高NIDDM患者显性冠心病危险性的作用。但对Apoε4是否增高NIDDM患者运动诱发的隐性心肌缺血(SI)的危险性，尚缺乏研究，对此我们进行了探讨。
一、对象与方法
1.对象：选择无心绞痛、心梗、充血性心力衰竭及无需服用降压药物、静息心电图(ECG)正常的NIDDM患者109例，年龄46～68岁，平均55±5岁；男75例，女34例；其中经踏车运动试验筛选，48例为SI(年龄46～67岁，平均56±8岁；男30例，女18例)。对照组50例，均为健康人，年龄45～66岁，平均55±6岁；其中男34例，女16例。NIDDM诊断按WHO标准。SI采用踏车运动试验，运动强度逐渐增加，达到按年龄预计可达到最高心率的85%～90%为目标。ECG改变以ST段水平型或下斜型压低≥0.1 mv(从J点起持续0.08秒为阳性标准)。
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2.方法：禁食12小时后次晨采静脉血。新鲜血标本分离血清后经不同的前处理分别上机测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(酶法)；ApoA1及ApoB(血清透射比浊法)；血糖(葡萄糖氧化酶法)。糖基化血红蛋白(GHb)应用亲和层析法。Lp(a)采用酶联免疫法。LDL-C由公式LDL-C=TC-(HDL-C+TG/5)计算。Apoε基因型检测：Apoε基因位点引物按Wenham等[3]报道进行设计：表1 对照组、NIDDM组及SI组Apoε基因型及等位基因频率分布
组别
例数
Apoε基因型频率(%)
Apoε等位基因频率(%)
ε2/2
, 百拇医药
ε4/2
ε3/2
ε3/3
ε4/3
ε4/4
ε2
ε3
ε4
对照组
50
, 百拇医药
0
2.0
8.0
76.0
12.0
2.0
5.0
86.0
9.0
NIDDM
109
0.9
0
, 百拇医药
13.8
64.2
18.4
2.8
8.0
80.3
11.9
SI
48
0
0
8.3
56.3*
, http://www.100md.com
29.2*
6.3
4.2
75.0
20.8*
与对照组相比* P<0.05
表2 NIDDM患者不同Apoε基因型组间血脂水平(
±s)
组别
例数
TC
, http://www.100md.com
(mmol/L)
LDL-C
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
HDL-C
(mmol/L)
ApoA1
(g/L)
ApoB
(g/L)
Lp(a)
, 百拇医药
(mg/L)
ε2/2ε3/2
16
4.9±1.1
2.3±1.0
2.7±1.6
1.2±0.3
1.2±0.1
1.0±0.3
85± 28△
ε3/3
, http://www.100md.com
70
5.1±0.9
2.6±1.2
2.6±1.2
1.2±0.2
1.1±0.2
1.2±0.2
510±315
ε4/3ε4/4
23
5.7±0.9*
, http://www.100md.com
3.1±1.0*
2.8±1.1
1.2±0.3
1.2±0.1
1.1±0.2
550±201
注：与ε2/3ε3/2组比较* P<0.05；与ε3/3及ε4/3ε4/4组比较△ P<0.05.
, 百拇医药
1～ 4. ε3/2个体 1(a8)+，2(c8)+，3(c2)+，4(a2)-
5～ 8. ε4/3个体 5(a8)+，6(c8)-，7(c2)+，8(a2)-
9～12. ε4/2个体 9(a8)+，10(c8)+，11(c2)+，12(a2)+
13～16. ε2/2个体 13(a8)+，14(c8)+，15(c2)+，16(a2)-
, 百拇医药
17～20. ε3/3个体 17(a8)+，18(c8)-，19(c2)+，20(a2)-
21～24. ε4/4个体 21(a8)+，22(c8)-，23(c2)-，24(a2)+
附图 Apoε基因PCR扩增产 物电泳图谱
a2 5′CCCGGCTGGGCGCGGACATGG AGGACGTTC3′
c2 5′CCCGGCTGGGCGCGGACATGG AGGACGTTT3′
, 百拇医药
c8 5′TCCTCCGCGATGCCGATGACC TGCAGAATT3′
a8 5′TCCTCCGCGATGCCGATGACC TGCAGAATC3′
c 5′TGGGCCCGCTCCTGTAGCGGCT GGCCGGCC3′(公共引物)
模板DNA的制备：按Bolla等报道的方法。DNA扩增按常规方法进行。基因型判别按Wenham等[3]的方法。
二、结果
经Hardy-Weinberg定律检验，对照组Apoε基因型频率分布处于遗传平衡之中(P>0.05)。与对照组相比，NIDDM组ε3/3频率(64%)较低，ε4/3(18%)较高，但差异无显著性意义(P>0.05)。Apoε基因PCR扩增结果(见附图)两组等位基因频率分布相似(P>0.05)。SI组ε3/3、ε4/3频率分别为56%、29%，分别低于(ε3/3)、高于(ε4/3)对照组(P<0.05)；ε4为21%，明显高于对照组(P<0.05)，ε3为75%，较对照组(86%)为低(P>0.05)(表1)。NIDDM患者中，ε4/4ε4/3型组TC、LDL-C水平明显高于ε2/2ε3/2型组(P<0.05)，ε2/2ε3/2型组Lp(a)明显低于其它2组(P<0.05)(表2)。各基因型组间年龄、病程、BMI、吸烟、体力活动、空腹血糖、GHb差异无显著意义(P>0.05)(资料未列出)；ε4/3ε4/4型组SI发生率为74%，明显高于ε3/3型组(39%)和ε2/2ε3/2型组(25%)(P<0.01)。
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三、讨论
本研究表明，NIDDM组与正常人Apoε基因型及等位基因频率分布相似。SI组ε4/3、ε4频率增高；NIDDM患者ε4/3ε4/4型组SI发生率最高，从而可以推断，ε4增高NIDDM患者SI的危险性。
携ε4的NIDDM患者并发SI高危性的机制目前尚不清楚。而不同Apoε基因型组间年龄等临床指标相似，提示这些传统的危险因子不能单独解释这种差异。
参考文献
1 Ukkola O, Kervinen K, Salmela PI, et al. Apolipoprotein E phenotype is related to macro- and microangiopathy in patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus. Atherosclerosis, 1993,101：9-15.
2 向光大，杨香玖，丁晓华，等.NIDDM患者不同血管并发症Apoε基因型频率分布的研究.中华医学遗传学杂志，1995，12：197-200.
3 Wenham PR, Newton CR, Price WH. Analysis of apolipoprotein E genotypes by the amplification refractory mutation system. Clin Chem, 1991,37：241-244.
(收稿：1997-07-24 修回：1997-12-05), 百拇医药
单位：430070 广州军区武汉总医院内分泌科(向光 大)、医学实验中心(何艳忠)
关键词：
中华医学杂志980522 糖尿病(DM)，尤其是Ⅱ型糖尿病(NIDDM)患者冠心病发生率明显高于一般人群。而年龄、性别、高血压和吸烟等传统的危险因子不能单独解释这一差异。最近研究[1，2]发现，Apoε4等位基因有增高NIDDM患者显性冠心病危险性的作用。但对Apoε4是否增高NIDDM患者运动诱发的隐性心肌缺血(SI)的危险性，尚缺乏研究，对此我们进行了探讨。
一、对象与方法
1.对象：选择无心绞痛、心梗、充血性心力衰竭及无需服用降压药物、静息心电图(ECG)正常的NIDDM患者109例，年龄46～68岁，平均55±5岁；男75例，女34例；其中经踏车运动试验筛选，48例为SI(年龄46～67岁，平均56±8岁；男30例，女18例)。对照组50例，均为健康人，年龄45～66岁，平均55±6岁；其中男34例，女16例。NIDDM诊断按WHO标准。SI采用踏车运动试验，运动强度逐渐增加，达到按年龄预计可达到最高心率的85%～90%为目标。ECG改变以ST段水平型或下斜型压低≥0.1 mv(从J点起持续0.08秒为阳性标准)。
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2.方法：禁食12小时后次晨采静脉血。新鲜血标本分离血清后经不同的前处理分别上机测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(酶法)；ApoA1及ApoB(血清透射比浊法)；血糖(葡萄糖氧化酶法)。糖基化血红蛋白(GHb)应用亲和层析法。Lp(a)采用酶联免疫法。LDL-C由公式LDL-C=TC-(HDL-C+TG/5)计算。Apoε基因型检测：Apoε基因位点引物按Wenham等[3]报道进行设计：表1 对照组、NIDDM组及SI组Apoε基因型及等位基因频率分布
组别
例数
Apoε基因型频率(%)
Apoε等位基因频率(%)
ε2/2
, 百拇医药
ε4/2
ε3/2
ε3/3
ε4/3
ε4/4
ε2
ε3
ε4
对照组
50
, 百拇医药
0
2.0
8.0
76.0
12.0
2.0
5.0
86.0
9.0
NIDDM
109
0.9
0
, 百拇医药
13.8
64.2
18.4
2.8
8.0
80.3
11.9
SI
48
0
0
8.3
56.3*
, http://www.100md.com
29.2*
6.3
4.2
75.0
20.8*
与对照组相比* P<0.05
表2 NIDDM患者不同Apoε基因型组间血脂水平(
±s)组别
例数
TC
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(mmol/L)
LDL-C
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
HDL-C
(mmol/L)
ApoA1
(g/L)
ApoB
(g/L)
Lp(a)
, 百拇医药
(mg/L)
ε2/2ε3/2
16
4.9±1.1
2.3±1.0
2.7±1.6
1.2±0.3
1.2±0.1
1.0±0.3
85± 28△
ε3/3
, http://www.100md.com
70
5.1±0.9
2.6±1.2
2.6±1.2
1.2±0.2
1.1±0.2
1.2±0.2
510±315
ε4/3ε4/4
23
5.7±0.9*
, http://www.100md.com
3.1±1.0*
2.8±1.1
1.2±0.3
1.2±0.1
1.1±0.2
550±201
注：与ε2/3ε3/2组比较* P<0.05；与ε3/3及ε4/3ε4/4组比较△ P<0.05.
, 百拇医药
1～ 4. ε3/2个体 1(a8)+，2(c8)+，3(c2)+，4(a2)-
5～ 8. ε4/3个体 5(a8)+，6(c8)-，7(c2)+，8(a2)-
9～12. ε4/2个体 9(a8)+，10(c8)+，11(c2)+，12(a2)+
13～16. ε2/2个体 13(a8)+，14(c8)+，15(c2)+，16(a2)-
, 百拇医药
17～20. ε3/3个体 17(a8)+，18(c8)-，19(c2)+，20(a2)-
21～24. ε4/4个体 21(a8)+，22(c8)-，23(c2)-，24(a2)+
附图 Apoε基因PCR扩增产 物电泳图谱
a2 5′CCCGGCTGGGCGCGGACATGG AGGACGTTC3′
c2 5′CCCGGCTGGGCGCGGACATGG AGGACGTTT3′
, 百拇医药
c8 5′TCCTCCGCGATGCCGATGACC TGCAGAATT3′
a8 5′TCCTCCGCGATGCCGATGACC TGCAGAATC3′
c 5′TGGGCCCGCTCCTGTAGCGGCT GGCCGGCC3′(公共引物)
模板DNA的制备：按Bolla等报道的方法。DNA扩增按常规方法进行。基因型判别按Wenham等[3]的方法。
二、结果
经Hardy-Weinberg定律检验，对照组Apoε基因型频率分布处于遗传平衡之中(P>0.05)。与对照组相比，NIDDM组ε3/3频率(64%)较低，ε4/3(18%)较高，但差异无显著性意义(P>0.05)。Apoε基因PCR扩增结果(见附图)两组等位基因频率分布相似(P>0.05)。SI组ε3/3、ε4/3频率分别为56%、29%，分别低于(ε3/3)、高于(ε4/3)对照组(P<0.05)；ε4为21%，明显高于对照组(P<0.05)，ε3为75%，较对照组(86%)为低(P>0.05)(表1)。NIDDM患者中，ε4/4ε4/3型组TC、LDL-C水平明显高于ε2/2ε3/2型组(P<0.05)，ε2/2ε3/2型组Lp(a)明显低于其它2组(P<0.05)(表2)。各基因型组间年龄、病程、BMI、吸烟、体力活动、空腹血糖、GHb差异无显著意义(P>0.05)(资料未列出)；ε4/3ε4/4型组SI发生率为74%，明显高于ε3/3型组(39%)和ε2/2ε3/2型组(25%)(P<0.01)。
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三、讨论
本研究表明，NIDDM组与正常人Apoε基因型及等位基因频率分布相似。SI组ε4/3、ε4频率增高；NIDDM患者ε4/3ε4/4型组SI发生率最高，从而可以推断，ε4增高NIDDM患者SI的危险性。
携ε4的NIDDM患者并发SI高危性的机制目前尚不清楚。而不同Apoε基因型组间年龄等临床指标相似，提示这些传统的危险因子不能单独解释这种差异。
参考文献
1 Ukkola O, Kervinen K, Salmela PI, et al. Apolipoprotein E phenotype is related to macro- and microangiopathy in patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus. Atherosclerosis, 1993,101：9-15.
2 向光大，杨香玖，丁晓华，等.NIDDM患者不同血管并发症Apoε基因型频率分布的研究.中华医学遗传学杂志，1995，12：197-200.
3 Wenham PR, Newton CR, Price WH. Analysis of apolipoprotein E genotypes by the amplification refractory mutation system. Clin Chem, 1991,37：241-244.
(收稿：1997-07-24 修回：1997-12-05), 百拇医药